馮得財(cái)，鐘惠婷，劉少杰，鄒 偉，黃宇康△

廣東省惠州市中心人民醫(yī)院：1.乳腺外科；2.病理科，廣東惠州 516000

三陰性乳腺癌是指乳腺癌病理組織檢查結(jié)果顯示雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、人表皮生長因子受體-2(HER-2)均為陰性的乳腺癌[1]。研究表明，三陰性乳腺癌患者發(fā)生腫瘤侵襲、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的風(fēng)險明顯高于其他類型乳腺癌患者，預(yù)后較差[2]。因此，為提高三陰性乳腺癌患者治療有效率、更準(zhǔn)確地預(yù)測患者預(yù)后，近年來三陰性乳腺癌敏感的生物標(biāo)志物已成為臨床研究熱點(diǎn)。程序性死亡配體-1(PD-L1)是一種在多種腫瘤細(xì)胞表面均可表達(dá)的負(fù)性共刺激蛋白，它是程序性死亡分子1(PD1)的配體，具有抑制T淋巴細(xì)胞活性的作用[3]。但目前對于其在三陰性乳腺癌中的臨床研究仍較少。另外，基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)也是一種與多種腫瘤發(fā)生侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的分子，目前抑制MMP-9活性的藥物研究得比較多[4]。骨橋蛋白(OPN)是一種在人體中廣泛分布的糖蛋白，與腫瘤發(fā)展進(jìn)程有關(guān)。由此推測OPN與MMP-9可能與三陰性乳腺癌發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。本研究對三陰性乳腺癌患者乳腺腫瘤組織OPN、MMP-9、PD-L1表達(dá)情況進(jìn)行檢測，探討三者之間的相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年3月至2019年6月本院收治的74例三陰性乳腺癌患者作為研究組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)病理組織學(xué)檢查，符合原發(fā)性乳腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；(2)入組前未接受過任何放化療及其他抗腫瘤治療；(3)病理組織學(xué)檢查ER、PR、HER-2陰性；(4)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他部位腫瘤；(2)嚴(yán)重心、肝、腎功能障礙。另選擇同期收治的41例單純?nèi)橄僭錾颊咦鳛閷φ战M。對照組患者年齡27～65歲，平均(51.25±4.38)歲；絕經(jīng)情況：絕經(jīng)28例，未絕經(jīng)13例。研究組患者年齡29～63歲，平均(51.40±4.45)歲；絕經(jīng)情況：絕經(jīng)50例，未絕經(jīng)24例。兩組患者年齡、絕經(jīng)情況比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究獲本院倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者及家屬自愿簽署知情同意書。

1.2方法 兩組均通過病理組織學(xué)檢查留取乳腺腫瘤組織標(biāo)本或乳腺增生標(biāo)本，常規(guī)石蠟包埋后切片。采用免疫組織化學(xué)染色法檢測標(biāo)本中OPN、MMP-9、PD-L1表達(dá)情況，步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。一抗均購自博士德生物工程有限公司。采用雙盲法，由兩名不知道患者病理結(jié)果的病理醫(yī)師進(jìn)行評估。PD-L1陽性表達(dá)于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)，MMP-9與OPN陽性表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)。根據(jù)細(xì)胞著色程度及陽性細(xì)胞數(shù)積分之和進(jìn)行評定：鏡下觀察到細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)著棕黃色或黃褐色為陽性細(xì)胞。無任何著色積0分，著淡黃色積1分，著棕黃色積2分、著深棕黃色積3分。高倍鏡下10個視野中陽性細(xì)胞數(shù)<5%積0分、5%～25%積1分、>25%～50%積2分、>50%積3分。積分之和≤1為陰性、>1為陽性。

1.3觀察指標(biāo) (1)兩組OPN、MMP-9、PD-L1陽性表達(dá)率；(2)研究組中不同病理特征患者OPN、MMP-9、PD-L1陽性表達(dá)率；(3)研究組患者OPN、MMP-9、PD-L1之間的相關(guān)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1兩組OPN、MMP-9、PD-L1陽性表達(dá)率比較 研究組OPN、MMP-9、PD-L1陽性表達(dá)率明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組OPN、MMP-9、PD-L1陽性表達(dá)率比較[n(%)]

2.2研究組中不同病理特征患者OPN、MMP-9、PD-L1陽性表達(dá)率比較 不同腫瘤最大徑、TNM分期、病理組織分級患者的MMP-9和PD-L1陽性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況患者的OPN、MMP-9、PD-L1陽性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；不同腫瘤侵犯血管/神經(jīng)情況患者的MMP-9陽性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；不同年齡、絕經(jīng)情況、家族史患者的OPN、MMP-9、PD-L1陽性表達(dá)率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 研究組中不同病理特征患者OPN、MMP-9、PD-L1陽性表達(dá)率比較[n(%)]

續(xù)表2 研究組中不同病理特征患者OPN、MMP-9、PD-L1陽性表達(dá)率比較[n(%)]

2.3研究組患者OPN、MMP-9、PD-L1之間的相關(guān)性 相關(guān)性分析顯示，OPN、MMP-9及PD-L1之間均呈正相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 研究組患者OPN、MMP-9、PD-L1之間的相關(guān)性

3 討 論

三陰性乳腺癌患者因缺乏ER、PR、HER-2，體內(nèi)的激素受體及HER-2治療的靶點(diǎn)也相應(yīng)缺乏，患者對常規(guī)內(nèi)分泌治療藥物不敏感，治療后復(fù)發(fā)率也較高。腫瘤治療的目的主要是提高免疫系統(tǒng)殺傷靶細(xì)胞的能力，從而抑制癌細(xì)胞無限增殖。免疫系統(tǒng)中免疫細(xì)胞的激活需抗原與共刺激分子共同作用[6]，三陰性乳腺癌患者免疫力低下，推測是由于能激活免疫細(xì)胞的共刺激分子的作用被抑制，導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞無法正?；罨?、殺傷腫瘤細(xì)胞[7]。

近年來抗PD-L1藥物已在多種腫瘤治療中得到應(yīng)用：付鵬等[8]報道，PD-L1/PD1抗體在治療非小細(xì)胞肺癌時的有效性較化療方案更有優(yōu)勢。林莉等[9]研究表示，PD-L1/PD1抗體在治療B細(xì)胞淋巴瘤中具有較好療效。PD-L1可與T淋巴細(xì)胞表面的PD1結(jié)合，產(chǎn)生一種負(fù)調(diào)節(jié)信號，直接抑制T淋巴細(xì)胞的活化，使機(jī)體免疫功能降低，腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸[10]?；谶@一理論，本研究檢測了三陰性乳腺癌組織中PD-L1的表達(dá)情況，探討PD-L1在三陰性乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。MMP-9屬于基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)家族，能水解細(xì)胞外基質(zhì)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲、轉(zhuǎn)移，MMP-9抑制藥物已在多種腫瘤的治療中被證實(shí)有較好的應(yīng)用價值[11]。當(dāng)乳腺癌繼續(xù)進(jìn)展，腫瘤組織會逐漸向遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移，如常見的骨轉(zhuǎn)移[12]。OPN作為一種骨基質(zhì)糖蛋白，其可促進(jìn)破骨細(xì)胞對骨質(zhì)的吸收，進(jìn)而造成異常骨基質(zhì)吸收，在乳腺腫瘤細(xì)胞發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移過程中起潛在的促進(jìn)作用[13]。OPN在早晚期腫瘤、肉芽腫炎癥等病變組織中均可發(fā)揮重要作用。從OPN結(jié)構(gòu)分析，其具有3個MMP酶切位點(diǎn)[14]，這意味著MMP可能與OPN之間存在某種相互作用機(jī)制。馮婉雯等[15]研究發(fā)現(xiàn)，OPN、MMP-9表達(dá)水平與宮頸癌預(yù)后密切相關(guān)。

本研究對單純?nèi)橄僭錾叭幮匀橄侔┗颊卟±斫M織標(biāo)本中PD-L1、MMP-9、OPN陽性表達(dá)率的檢測結(jié)果顯示，研究組患者OPN、MMP-9、PD-L1陽性表達(dá)率明顯較高，這一結(jié)果與OPN、MMP-9、PD-L1與多種腫瘤發(fā)生、發(fā)展有關(guān)的理論相符。本研究繼續(xù)對不同臨床病理特征三陰性乳腺癌患者的OPN、MMP-9、PD-L1陽性表達(dá)率進(jìn)行分析后，發(fā)現(xiàn)不同年齡、絕經(jīng)情況及家族史患者的OPN、MMP-9、PD-L1陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。MMP-9在腫瘤最大徑>20 mm、TNM分期Ⅱ～Ⅲ期、病理組織分級Ⅱ～Ⅲ級、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤侵犯血管/神經(jīng)患者中的陽性表達(dá)率均明顯高于同組其他患者(P<0.05)。這表示MMP-9不僅在多數(shù)三陰性乳腺癌患者中高表達(dá)，并且其高表達(dá)情況與患者本身腫瘤進(jìn)展程度有關(guān)。腫瘤最大徑>20 mm表示患者腫瘤增殖快，TNM分期Ⅱ～Ⅲ期及病理組織分級Ⅱ～Ⅲ級表示患者腫瘤已逐漸發(fā)展至中晚期，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或腫瘤侵犯血管/神經(jīng)表示患者腫瘤發(fā)生遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移的風(fēng)險越高。以上結(jié)果表明MMP-9與三陰性乳腺癌患者腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移、侵襲密切相關(guān)。PD-L1在腫瘤最大徑>20 mm、TNM分期Ⅲ期、病理組織分級Ⅲ級、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的陽性表達(dá)率均明顯高于同組其他患者(P<0.05)。其在不同病理特征患者中的高表達(dá)情況與MMP-9類似，推測二者可能具有相互促進(jìn)作用。本研究中OPN僅在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中陽性表達(dá)率較高。分析原因：可能是由于本研究中OPN表達(dá)情況受樣本量限制，導(dǎo)致其在不同病理特征患者之間無法體現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究中相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，PD-L1表達(dá)水平與MMP-9、OPN呈正相關(guān)，OPN表達(dá)水平與MMP-9也呈正相關(guān)，表明三陰性乳腺癌患者PD-L1表達(dá)水平升高能使MMP-9及OPN也升高。但三者之間作用機(jī)制尚不完全明確。

綜上所述，OPN、MMP-9、PD-L1在三陰性乳腺癌組織中高表達(dá)，且其陽性表達(dá)率可能與腫瘤最大徑、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及侵襲狀態(tài)等有關(guān)。通過檢測3種分子的表達(dá)情況，可對三陰性乳腺癌患者發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、侵襲的風(fēng)險進(jìn)行評估，從而為患者后續(xù)治療提供參考。