肖億 侯晴晴 張智 施顯茂 龍中榮 孫興 阮婕

【摘要】 目的 探討熱休克轉(zhuǎn)錄因子1（heat shock transcription factor 1，HSF1）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）在肝癌組織中的表達(dá)以及對(duì)肝癌血管生成的影響。

方法 通過(guò)免疫組化法檢測(cè)HSF1、VEGF在68例肝癌組織中的表達(dá)水平，分析其臨床病理特征。通過(guò)siRNA沉默PLC/PRF5肝癌細(xì)胞HSF1基因表達(dá)。利用小管形成實(shí)驗(yàn)觀察小管形成，ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞VEGF分泌情況，最后通過(guò)WB實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HSF1、pP13K、pAKT、mTOR蛋白的表達(dá)。

結(jié)果 免疫組化實(shí)驗(yàn)提示：HCC組織HSF1、VEGF在肝癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為67.65% （46/68）和66.18% （45/68），均高于癌旁組織的14.71% （10/68）和 19.12% （13/68） ，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。HSF1表達(dá)與HBsAg、肝內(nèi)PVTT/HVTT形成、微血管侵犯、病理分期相關(guān)（P<0.05或0.01），與腫瘤大小等無(wú)關(guān)（P>0.05）。VEGF的表達(dá)與微血管侵犯、肝內(nèi)PVTT/HVTT形成、病理分期相關(guān)（P<0.05或0.01），與 HBsAg、腫瘤分化程度等無(wú)關(guān)（P>0.05）。HSF1表達(dá)和VEGF表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.287，P=0.018）。和Mock/PLC/PRF5組相比，sh/PLC/PRF5組明顯抑制小管形成、VEGF分泌，下調(diào)HSF1、VEGF、pP13K、pAKT、mTOR蛋白的表達(dá)。

結(jié)論 肝癌組織中HSF1和VEGF的表達(dá)可促進(jìn)肝癌腫瘤血管生成，其作用機(jī)制可能和P13K/AKT/mTOR通路有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 肝癌;VEGF;HSF1;臨床病理特征;信號(hào)通路

中圖分類號(hào)：R737.7 ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A ? DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2021.05.004

【Abstract】 Objective To investigate the expressions of heat shock transcription factor 1 （HSF1） and vascular endothelial growth factor （VEGF） in hepatic carcinoma tissues and their effects on angiogenesis.

Methods The expression levels of HSF1 and VEGF in hepatocellular carcinoma tissues in 68 cases were detected by immunohistochemical experiment to analyze their clinicopathological characteristics. HSF1 gene expression of PLC/PRF5 cell was silenced by siRNA. Tubule formation was observed by tubule formation assay， the secretion of VEGF was detected by ELISA， and the expressions of HSF1， pP13k， pAkT and mTOR were detected by WB assay.

Results Immunohistochemical experiment showed that the positive expression rates of HCC tissue HSF1 and VEGF in liver cancer tissues were 67.65% （46/68） and 66.18% （45/68） respectively， which were higher than those in adjacent tissues （14.71% [10/68]and 19.12% [13/68]）， and difference was statistically significant （P < 0.001）. HSF1 expression was correlated with HBsAg， ?intrahepatic PVTT/HVTT formation， microvascular invasion and pathological staging （P < 0.05 or 0.01）， but it was not correlated with tumor size （P > 0.05）. The expression of VEGF was correlated with microvascular invasion， intrahepatic PVTT/HVTT formation and pathological staging （P < 0.05 or 0.01）， but it was not correlated with HBsAg and tumor differentiation （P > 0.05）. The expression of HSF1 was positively correlated with the expression of VEGF （r = 0.287， P = 0.018）. Compared with Mock/PLC/PRF5 group， sh/PLC/PRF5 group could significantly inhibit tubule formation and VEGF secretion and down regulate the expressions of HSF1， VEGF， pP13K， pAKT and mTOR.

Conclusion The expressions of HSF1 and VEGF in liver cancer tissues can promote the angiogenesis of liver cancer tumor， and the mechanism of which may be related to PI3K/AKT/mTOR pathway.

【Key words】 liver cancer; VEGF; HSF1; clinicopathological characteristic; signal pathway

肝細(xì)胞癌（hepatocellular cancer，HCC）是全球常見惡性腫瘤之一，相關(guān)研究顯示我國(guó)HCC發(fā)病率、病死率約占世界范圍50%，且近年來(lái)呈逐漸上升趨勢(shì)。HCC發(fā)生發(fā)展涉及多個(gè)病理階段、多種分子改變，發(fā)展較快，預(yù)后較差[1]。熱休克轉(zhuǎn)錄因子1（heat shock transcription factor 1，HSF1）通過(guò)編碼蛋白質(zhì)調(diào)控細(xì)胞內(nèi)基因的穩(wěn)態(tài)促進(jìn)蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞增殖和糖代謝，參與HCC發(fā)生發(fā)展[2]。HCC新生血管的形成在促進(jìn)腫瘤增殖、侵襲轉(zhuǎn)移的過(guò)程中發(fā)揮重要的介導(dǎo)作用。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）在HCC中高表達(dá)和不良預(yù)后呈正相關(guān)，這提示抑制HCC血管生成對(duì)患者預(yù)后有著重要意義[3]。但HSF1和VEGF表達(dá)在HCC中的相關(guān)性研究未見文獻(xiàn)報(bào)道。因此，我們首先采用免疫組化法檢測(cè)HCC組織中HSF1、VEGF的表達(dá)變化，并探討其與臨床病理特征的相關(guān)性及臨床意義。接著通過(guò)siRNA沉默PLC/PRF5肝癌細(xì)胞HSF1基因表達(dá)，觀察小管形成、VEGF分泌以及HSF1、VEGF、pP13K、pAKT、mTOR蛋白的表達(dá)，以便更進(jìn)一步明確HSF1和VEGF相互作用對(duì)HCC血管形成的影響。

1 材料與方法

1.1 組織標(biāo)本

收集2015年1 月～2018 年12月廣西醫(yī)科大學(xué)第五附屬醫(yī)院病理科存檔的具有完整資料的68例HCC及癌旁組織標(biāo)本。根據(jù)原發(fā)性肝癌規(guī)范化病理診斷指南[4]，由兩位資深病理醫(yī)師采用雙盲法重新閱片診斷。其中，男性42例，女性26例;年齡28～68歲，平均62歲;瘤直徑≤5 cm者22例，>5 cm者46例;分化程度： 低分化24例，中分化29例，高分化15例;微血管侵犯47例。所有組織置入10%中性福爾馬林中固定。該研究通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)審查及批準(zhǔn)，組織標(biāo)本采集依據(jù)相關(guān)機(jī)構(gòu)指導(dǎo)方針。所有受試者均簽署書面知情同意，遵循醫(yī)院倫理委員會(huì)審核的相關(guān)程序。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）所選病例均為首次發(fā)現(xiàn)，術(shù)前均未行任何抗癌治療。（2）患者的病理資料均完整。（3）均為原發(fā)性HCC。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）轉(zhuǎn)移性HCC患者。（2）無(wú)手術(shù)治療指征HCC患者。（3）合并其他部位惡性腫瘤的HCC患者。

1.3 細(xì)胞和試劑

PLC/PRF5細(xì)胞、HUVEC細(xì)胞購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)。鼠抗VEGF（ab1316） 購(gòu)自Abcam公司，兔抗pAKT（#9614）、mTOR（#2983）;鼠抗HSF1（#12972），pP13K（#17366），鼠二抗（#59997）、兔二抗（#7074）購(gòu)自美國(guó)CST公司，免疫組化試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋公司。

1.4 方法

1.4.1 免疫組化實(shí)驗(yàn)

常規(guī)病理切片，行免疫組化SP 法檢測(cè)HCC及癌旁組織中HSF1、VEGF表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)操作步驟嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明。光學(xué)顯微鏡（OLIPICS電子顯微鏡購(gòu)自上海精密儀器有限公司）下觀察病理切片檢測(cè)組織形態(tài)變化并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。免疫組化結(jié)果判定：HSF1、VEGF的陽(yáng)性表達(dá)呈棕黃色或棕褐色顆粒，主要位于腫瘤細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中，見圖1。陽(yáng)性判斷采用半定量積分法[5]，每張切片隨機(jī)選取8個(gè)高倍視野，按照免疫組化染色反應(yīng)的深度和陽(yáng)性細(xì)胞分別記分，染色深度以多數(shù)細(xì)胞的呈色反應(yīng)作為標(biāo)準(zhǔn)。淺黃色1 分，棕黃色2 分，棕褐色3 分，不著色0 分。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%為0 分，<10%為1 分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分，將這兩項(xiàng)積分相乘，<3為陰性，≥3為陽(yáng)性。

1.4.2 細(xì)胞培養(yǎng)

PLC/PRF5細(xì)胞置10% FBS DMEM、37℃、5% CO2培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)。HUVEC細(xì)胞置10% FBS DMEM，按 1∶3比例傳代培養(yǎng)，取3～7代的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.4.3 HSF1-siRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染PLC/PRF5細(xì)胞

由蘇州吉瑪基因股份有限公司設(shè)計(jì)合成和純化針對(duì)HSF1基因的特異性siRNA 序列：上游5'-GCACATTCCATGCCCAAGTAT-3'，下游5'- GGCCTCTCGTCTATGCTCC-3'。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的PLC/PRF5 細(xì)胞，胰酶消化，按 1×105個(gè)/孔，接種于5 cm培養(yǎng)皿常規(guī)培養(yǎng)，待細(xì)胞密度達(dá) 75%左右進(jìn)行轉(zhuǎn)染。根據(jù)脂質(zhì)體2000說(shuō)明書轉(zhuǎn)染PLC/PRF5細(xì)胞，分別獲得Mock/PLC/PRF5細(xì)胞（對(duì)照組）和sh/PLC/PRF5細(xì)胞（實(shí)驗(yàn)組）。

1.4.4 Western blot 實(shí)驗(yàn)

Mock/PLC/PRF5和sh/PLC/PRF5細(xì)胞長(zhǎng)至90%密度，胰酶消化離心收集細(xì)胞，每管細(xì)胞加400 μL裂解液（RIPA：PMSF/100∶1），冰上裂解30分鐘，10 000 rpm，離心15分鐘，留上清液。按照BCA試劑測(cè)細(xì)胞總蛋白濃度、制備蛋白樣品。配置10% SDS聚丙烯酰胺凝膠，進(jìn)行穩(wěn)壓電泳、轉(zhuǎn)膜;PVDF膜用5%牛奶室溫封閉液1小時(shí)，TBST洗滌3次，每次5分鐘，加入目的抗體（1∶1000），4℃孵育過(guò)夜，TBST洗滌PVDF膜3次，每次5分鐘，加入對(duì)應(yīng)二抗（1∶2000）室溫孵育2小時(shí)，TBST洗滌PVDF膜3次，每次5分鐘。最后，加入ECL發(fā)光液，曝光、顯影、定影、晾干保存、拍照記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1.4.5 ELISA實(shí)驗(yàn)

收集Mock/PLC/PRF5和sh/PLC/PRF5細(xì)胞培養(yǎng)基，按照ELISA試劑盒檢測(cè)VEGF蛋白表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.4.6 小管形成實(shí)驗(yàn)

Matrigel基質(zhì)膠置于4℃冰箱融化，按照50 μL/孔加入到96孔板，4℃冰箱孵育1小時(shí)。7代內(nèi)的HUVEC細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)，離心收集細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)調(diào)整為2×105/mL，每孔加入50 μL細(xì)胞混懸液。收集Mock/PLC/PRF5和sh/PLC/PRF5細(xì)胞條件培養(yǎng)基，分別加入到96孔板中，每組設(shè)3個(gè)副孔。8小時(shí)后電子顯微鏡下觀察HUVEC細(xì)胞小管形成，并拍照記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組內(nèi)比較采用配對(duì)樣本均數(shù)t檢驗(yàn)，組間比較采用兩獨(dú)立樣本均數(shù)t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用例數(shù)和百分率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，Pearson相關(guān)性分析HSF1與VEGF相關(guān)性，檢驗(yàn)水準(zhǔn)：α=0.05，雙側(cè)檢驗(yàn)。

2 結(jié) ?果

2.1 HSF1與VEGF在HCC組織及癌旁正常組織中的表達(dá)情況

HCC組織HSF1、VEGF在肝癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為67.65% （46/68）和66.18% （45/68），均高于癌旁組織的14.71% （10/68）和 19.12% （13/68），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。HSF1、VEGF蛋白的陽(yáng)性著色表達(dá)于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中，癌旁組織細(xì)胞質(zhì)HSF1未見陽(yáng)性表達(dá)、VEGF弱陽(yáng)性表達(dá);僅在癌旁血管內(nèi)皮細(xì)胞及血管基底膜細(xì)胞中見VEGF表達(dá)（見圖1，表1）。在HCC組織中，HSF1與VEGF的陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.287，P=0.018）。

2.2 HSF1、VEGF表達(dá)與臨床及病理特征的關(guān)系

HSF1表達(dá)與HBsAg、肝內(nèi)PVTT/HVTT形成、微血管侵犯、病理分期相關(guān)（P<0.05或0.01），與腫瘤大小等無(wú)關(guān)（P>0.05）。VEGF的表達(dá)與微血管侵犯、肝內(nèi)PVTT/HVTT形成、病理分期相關(guān)（P<0.05或0.01），與 HBsAg、腫瘤分化程度等無(wú)關(guān)（P>0.05）。見表2。

2.3 siRNA沉默PLC/PRF5細(xì)胞VEGF、HSF1、pP13K、pAKT、mTOR蛋白表達(dá)

Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示：和Mock/PLC/PRF5組相比，PLC/PRF5細(xì)胞轉(zhuǎn)染siRNA-HSF1質(zhì)粒后，明顯沉默HSF1、VEGF、pP13K、pAKT、mTOR蛋白表達(dá)。

2.4 ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PLC/PRF5細(xì)胞VEGF表達(dá)

ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示：和Mock/PLC/PRF5組相比，PLC/PRF5細(xì)胞轉(zhuǎn)染siRNA-HSF1質(zhì)粒后，明顯抑制VEGF的分泌（P<0.05）。

2.5 小管形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)sh/PLC/PRF5細(xì)胞條件培養(yǎng)基對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞小管形成的影響

小管形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖4所示： Mock/PLC/PRF5細(xì)胞組接種后6小時(shí)，相鄰細(xì)胞逐漸的突起組相比相互連接形成空腔，形成完整的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。對(duì)照組sh/PLC/PRF5細(xì)胞條件培養(yǎng)基明顯抑制內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)，細(xì)胞退化未能誘導(dǎo)小管形成（P<0.05）。

3 討 ?論

HCC屬富血供腫瘤，血管生成被認(rèn)為是其發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟。研究表明，HCC血管密度和腫瘤的不良預(yù)后呈正相關(guān)，這提示抑制HCC血管生成對(duì)患者預(yù)后有著重要意義[6]?？寡苌伤幬锼骼悄崮壳霸谂R床上廣泛應(yīng)用于晚期HCC患者的治療并達(dá)到較為理想的治療效果，但它仍面臨著副反應(yīng)和耐藥性兩大挑戰(zhàn)[7]。雖然目前已有許多關(guān)于HCC血管生成各個(gè)步驟的研究，但對(duì)HCC血管生成的重要事件仍不清楚，無(wú)法實(shí)施精準(zhǔn)靶向治療。因此，深入研究HCC血管生成的分子機(jī)制，尋找新的更為有效的抗HCC血管生成抑制劑，具有非常重要的臨床診療價(jià)值和社會(huì)價(jià)值。

活躍的血管生成能力和轉(zhuǎn)移能力是惡性腫瘤主要特征，對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展至關(guān)重要。腫瘤長(zhǎng)到1～2 mm3，需要新生血管提供營(yíng)養(yǎng)才能維持生長(zhǎng)。新生血管壁的通透性高，腫瘤細(xì)胞可以穿透血管壁發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[8]。可見，血管生成是腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)，抑制腫瘤血管生成有望控制腫瘤的發(fā)生發(fā)展。研究表明許多惡性腫瘤細(xì)胞都具有自分泌VEGF 的能力，且VEGF 可與酪氨酸跨膜受體結(jié)合誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞的分化和成熟，并抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，誘導(dǎo)新生血管生成，增加血管的通透性，促進(jìn)癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移[9～10]，提示VEGF有望作為其生物學(xué)標(biāo)志物。

HSF1是調(diào)控?zé)嵝菘说鞍妆磉_(dá)最關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子，由529個(gè)氨基酸組成，包括DNA結(jié)合域、三聚化結(jié)構(gòu)域、調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域和轉(zhuǎn)錄活化域[11]。HSF1在非應(yīng)激情況下以無(wú)活性單體的形式存在于細(xì)胞質(zhì)中[12];在高溫、缺血、炎癥、氧化等應(yīng)激狀態(tài)下，HSF1轉(zhuǎn)化為三聚體，誘導(dǎo)絲氨酸殘基磷酸化，穿過(guò)核膜轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，通過(guò)和熱休克蛋白基因啟動(dòng)子結(jié)合形成熱休克元件，誘導(dǎo)分子伴侶基因表達(dá)產(chǎn)生熱休克蛋白（heat shock protein，Hsps），參與細(xì)胞分化、血管生成、增殖、凋亡、周期、轉(zhuǎn)移和耐藥[13]。

DU等[14]利用脂質(zhì)體將過(guò)表達(dá)和沉默miR-199b-5p的質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染小鼠內(nèi)皮細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)miR-199b-5p組明顯抑制內(nèi)皮細(xì)胞侵襲和小管形成，同時(shí)下調(diào)HSF1和VEGF蛋白的表達(dá)。KUBO等[15]研究發(fā)現(xiàn)，HSF1敲除后的小鼠缺血組織VEGF、SDF-1、MVD均明顯少于野生型小鼠，同時(shí)伴有骨髓干/祖細(xì)胞的減少，具體分子機(jī)制未明確。以上研究結(jié)果提示HSF1和VEGF相互作用具有促進(jìn)血管新生的作用，可能是抑制血管生成靶點(diǎn)之一。

本研究發(fā)現(xiàn)，肝癌組織中的HSF1、VEGF蛋白表達(dá)陽(yáng)性率均明顯高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且HSF1與VEGF的陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān)。盧鵬[16]回顧性分析40例原發(fā)性肝癌組織的免疫組化結(jié)果，發(fā)現(xiàn)癌組織中的HSF1陽(yáng)性表達(dá)水平為 62.5%（25/40），癌旁組織陽(yáng)性率為 35%（14/40）。馬薇等人[17]通過(guò)免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)94 例肝癌組織中VEGF 蛋白，癌組織陽(yáng)性表達(dá)率為65.96%，癌旁組織陽(yáng)性表達(dá)率為19.15%。這與本研究的結(jié)論較為一致。

近年來(lái)對(duì)分子生物學(xué)的研究正在逐步深入，腫瘤相關(guān)基因信號(hào)通路成為研究熱點(diǎn)。與肝癌有關(guān)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有：Ras/Raf/MEK信號(hào)通路、酪氨酸激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、Notch信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、PDK/AKT信號(hào)通路、核轉(zhuǎn)錄因子kappaB（NF-κB）通路、Wnt通路和Hedgehog（Hh）信號(hào)通路等。其中P13K/Akt（phosphatidylinositol3 kinase-protein kinase B，P13K/Akt）信號(hào)通路在細(xì)胞中廣泛存在，與肝癌細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)、分化、凋亡等密切相關(guān)[18]。研究發(fā)現(xiàn)，VEGF受體包括VEGF-1（Flt-1），VEGF-2（KDR）和VEGF-3（Flt-4），屬于跨膜酪氨酸激酶受體，分布在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面，通過(guò)特異性與VEGF結(jié)合，激發(fā)下游P13K/Akt/mTOR信號(hào)通路引起細(xì)胞內(nèi)酶聯(lián)反應(yīng)，促進(jìn)肝癌血管生成[19]。本研究發(fā)現(xiàn)，沉默PLC/PRF5肝癌細(xì)胞HSF1基因表達(dá)明顯抑制小管形成、VEGF分泌，下調(diào)HSF1、VEGF、pP13K、pAKT、mTOR蛋白的表達(dá)。此外，研究表明RET基因過(guò)表達(dá)可激活P13K/Akt/mTOR信號(hào)通路，進(jìn)一步誘導(dǎo)HSF1的表達(dá)，誘導(dǎo)血管生成，促進(jìn)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化[20]，這與本研究的結(jié)論較為一致。

綜上所述，在臨床及病理特點(diǎn)的關(guān)系方面，HSF1、VEGF 表達(dá)陽(yáng)性者在Ⅲ期、肝內(nèi)PVTT/HVTT形成、微血管形成方面比例較高，且在HCC組織中HSF1與VEGF的陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān)。沉默PLC/PRF5肝癌細(xì)胞HSF1基因表達(dá)明顯抑制小管形成、VEGF分泌，下調(diào)HSF1、VEGF、pP13K、pAKT、mTOR蛋白的表達(dá)，提示HSF1可能通過(guò)VEGF調(diào)控P13K/Akt/mTOR信號(hào)通路參與了肝癌的血管生成，但本研究?jī)H局限于初步研究，具體的分子機(jī)制還需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，為以血管生成為靶點(diǎn)的靶向治療提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

參 考 文 獻(xiàn)

[1]TIAN Z Q，HOU X J，LIU W T，et al.Macrophages and hepatocellular carcinoma[J].Cell Biosci，2019，9：79.

[2]LIU H T，HUANG D N，LI M M，et al.HSF1：a mediator in metabolic alteration of hepatocellular carcinoma cells in cross-talking with tumor-associated macrophages[J].Am J Transl Res，2019，11（8）：5054-5064.

[3]YAO Y，WANG T Q，LIU Y J，et al.Co-delivery of sorafenib and VEGF-siRNA via pH-sensitive liposomes for the synergistic treatment of hepatocellular carcinoma[J].Artif Cells Nanomed Biotechnol，2019，47（1）：1374-1383.

[4]中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)肝癌專業(yè)委員會(huì)，中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)肝癌學(xué)組，中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)病理專業(yè)委員會(huì)，等. 原發(fā)性肝癌規(guī)范化病理診斷指南（2015年版）[J].中華肝膽外科雜志，2015，21（3）：145-151.

[5]俞武生，盧春麗，王在國(guó)，等.VEGF和MVD在術(shù)前接受過(guò)肝動(dòng)脈栓塞化療的肝癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].中華普通外科學(xué)文獻(xiàn)（電子版），2010，4（4）：323-327.

[6]GONG X L，QIN S K.Study progression of anti-angiogenetic therapy and its combination with other agents for the treatment of advanced hepatocellular carcinoma[J].Hepatobiliary Surg Nutr，2018，7（6）：466-474.

[7]ABDEL-RAHMAN O，LAMARCA A.Development of sorafenib-related side effects in patients diagnosed with advanced hepatocellular carcinoma treated with sorafenib：a systematic-review and meta-analysis of the impact on survival[J].Expert Rev Gastroenterol Hepatol，2017，11（1）：75-83.

[8]RAMJIAWAN R R，GRIFFIOEN A W，DANG D D.Anti-angiogenesis for cancer revisited：Is there a role for combinations with immunotherapy？[J].Angiogenesis，2017，20（2）：185-204.

[9]MAWALLA B，YUAN X，LUO X，et al.Treatment outcome of anti-angiogenesis through VEGF-pathway in the management of gastric cancer：a systematic review of phase II and III clinical trials[J].BMC Res Notes，2018，11（1）：21.

[10]WANG B，LEE C W，WITT A，et al.Heat shock factor 1 induces cancer stem cell phenotype in breast cancer cell lines[J].Breast Cancer Res Treat，2015，153（1）：57-66.

[11]CARPENTER R L，SIRKISOON S，ZHU D Q，et al.Combined inhibition of AKT and HSF1 suppresses breast cancer stem cells and tumor growth[J].Oncotarget，2017，8（43）：73947-73963.

[12]BARNA J，CSERMELY P，VELLAI T.Roles of heat shock factor 1 beyond the heat shock response[J].Cell Mol Life Sci，2018，75（16）：2897-2916.

[13]DAYALAN NAIDU S，DINKOVA-KOSTOVA A T.Regulation of the mammalian heat shock factor 1[J].Febs J，2017，284（11）：1606-1627.

[14]DU P Z，DAI F J，CHANG Y W，et al.Role of miR-199b-5p in regulating angiogenesis in mouse myocardial microvascular endothelial cells through HSF1/VEGF pathway[J].Environ Toxicol Pharmacol，2016，47：142-148.

[15]KUBO M，LI T S，KURAZUMI H，et al.Heat shock factor 1 contributes to ischemia-induced angiogenesis by regulating the mobilization and recruitment of bone marrow stem/progenitor cells[J].PLoS One，2012，7（5）：e37934.

[16]盧鵬.熱休克轉(zhuǎn)錄因子1在人肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義[D].西安：第四軍醫(yī)大學(xué)，2012.

[17]馬薇，張書勤，魏柏，等.HDGF、VEGF與肝腫瘤組織MVD水平的關(guān)系及對(duì)肝癌病人預(yù)后的影響[J].蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2018，43（2）：178-180.

[18]YE R F，DAI N G，HE Q K，et al.Comprehensive anti-tumor effect of Brusatol through inhibition of cell viability and promotion of apoptosis caused by autophagy via the PI3K/Akt/mTOR pathway in hepatocellular carcinoma[J].Biomedecine Pharmacother，2018，105：962-973.

[19]JUNG K H，CHOI M J，HONG S，et al.HS-116，a novel phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor induces apoptosis and suppresses angiogenesis of hepatocellular carcinoma through inhibition of the PI3K/AKT/mTOR pathway[J].Cancer Lett，2012，316（2）：187-195.

[20]VYDRA N，TOMA A，WIDLAK W.Pleiotropic role of HSF1 in neoplastic transformation[J].Curr Cancer Drug Targets，2014，14（2）：144-155.

（收稿日期：2020-12-09 修回日期：2021-04-12）

（編輯：梁明佩）