聶 英，孫 明，何彥春，韓慶彥，尚立宏

(1. 民勤縣畜牧獸醫(yī)工作站，甘肅 武威 733399；2. 張掖市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心；3. 甘肅省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心)

雞滑液囊支原體病，又稱雞傳染性滑膜炎，是由雞滑液囊支原體(Mycoplasma Synoviae，MS)引起幼齡雞和火雞的一種傳染病，廣泛分布于世界各地，臨床特征多表現(xiàn)為病雞關(guān)節(jié)腫大、滑液囊及肌腱發(fā)炎以及實(shí)質(zhì)器官的腫大。由于發(fā)病病程緩慢且難以根除，雞群多呈現(xiàn)不同疾病的混合感染，加劇病情的蔓延傳播，常常導(dǎo)致雞群飼料利用率降低，生產(chǎn)發(fā)育遲緩，產(chǎn)蛋量下降，淘汰率增高，已成為制約養(yǎng)禽業(yè)健康發(fā)展的重要因素之一，給世界范圍內(nèi)的家禽養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

雞滑液囊支原體病在澳大利亞、南美洲、亞洲、歐洲和非洲已有多例報(bào)道，但大多數(shù)病例呈區(qū)域性分布，很少有大規(guī)模疫情發(fā)生。在過去的十年中，雞滑液囊支原體病似乎已經(jīng)取代雞毒支原體(Mycoplasma gallisepticum)在家禽中的地位，越來越受到人們的重視，尤其是其亞臨床感染和誘發(fā)雞蛋殼頂端異常(Eggshell apex abnormalities，EAA)和雞減蛋綜合征等多種疾病流行。

迄今為止，河西地區(qū)以促進(jìn)農(nóng)民增收為目標(biāo)，不斷調(diào)整優(yōu)化畜牧養(yǎng)殖結(jié)構(gòu)，做大做強(qiáng)肉雞產(chǎn)業(yè)，但在雞病的防控工作中尚無雞滑膜囊支原體感染的相關(guān)數(shù)據(jù)，發(fā)病率和流行病學(xué)情況不明。本調(diào)查通過酶聯(lián)免疫法(ELISA)和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)對河西地區(qū)雞群進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，旨在提高河西地區(qū)雞養(yǎng)殖場(戶)對雞滑液囊支原體病危害和防控的認(rèn)識(shí)，為禽病的綜合防治奠定基礎(chǔ)和提供參考。

1 材料與方法

1.1 試劑

雞支原體PCR檢測試劑盒購自哈爾濱國生生物科技股份有限公司，雞支原體酶聯(lián)免疫法檢測試劑盒AsurDxTM Mycoplasma synoviae Antibody Test Kit Manual購自Biostone Animal Health LLC(美國)，瓊脂糖、TAE緩沖液為Solarbio公司產(chǎn)品。

1.2 樣品

臨床檢測樣品于2019年8月～2020年4月采自于河西地區(qū)部分縣(區(qū))養(yǎng)殖場和散養(yǎng)戶飼養(yǎng)的蛋雞和肉雞血清樣品以及民勤縣城區(qū)屠宰門店雞跗關(guān)節(jié)組織樣品，所有樣品均采集于健康未免疫雞支原體疫苗的雞群，雞群存欄量介于50～20 000羽的散養(yǎng)戶和養(yǎng)殖場，采樣原則以小群(1 000羽份以下)采樣比例3%～10%，大群(1 000羽份以上)采樣比例0.1%～0.3%。樣品信息詳見表1，病原學(xué)樣品采用雞支原體PCR檢測試劑盒提取基因組DNA，置于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 方法

酶聯(lián)免疫法(ELISA)和PCR方法檢測步驟按照說明書的操作執(zhí)行，陰性、陽性對照同時(shí)成立時(shí)，試驗(yàn)結(jié)果才有效。酶聯(lián)免疫法實(shí)驗(yàn)成立條件為陰性對照PP值<50%，陽性對照OD值≥0.5，樣品百分率正性(PP值)計(jì)算公式=100×樣品OD值/陽性對照OD平均值，評判標(biāo)準(zhǔn)為樣品PP值≥50%為陽性，反之樣品PP值<50%為陰性。PCR檢測方法在25 μL反應(yīng)體系中進(jìn)行：PCR 反應(yīng)液14.5 μL，基因組模板2.5μL，PCR用水8 μL。反應(yīng)程序?yàn)椋?5 ℃預(yù)變性2 min；95 ℃變性30 s，52 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s，35個(gè)循環(huán)；72 ℃再延伸8 min，4 ℃保存。擴(kuò)增結(jié)束后，對PCR產(chǎn)物用1.5%的瓊脂糖凝膠(含8 μL/100 mL的Goldview I 型核酸染色劑)電泳分析，觀察擴(kuò)增結(jié)果。在700 bp位置出現(xiàn)特異性目的條帶時(shí)，判定為雞支原體病原樣品陽性。

2 結(jié)果

2.1 血清學(xué)樣本檢測結(jié)果

969份雞血清樣本ELISA檢測結(jié)果見表1，武威市民勤縣雞群的陽性率為33.70%，張掖市雞群的陽性率為18.71%～32.90%之間，平均感染率為28.38%。

表1 臨床樣品檢測結(jié)果統(tǒng)計(jì)表

2.2 病原學(xué)樣本檢測結(jié)果

18份雞跗關(guān)節(jié)組織樣品PCR檢測結(jié)果見表1和圖1，武威市民勤縣城區(qū)屠宰門店出售的肉雞樣品中陽性檢出率為38.89%。

圖1 雞滑液囊性支原體的 PCR 擴(kuò)增檢測結(jié)果

3 討論

自20世紀(jì)50年代雞滑液囊支原體病首次在美國報(bào)道以來，越來越多的研究人員開始認(rèn)識(shí)到該病在家禽中的重要性。近年來，國內(nèi)外雞支原體發(fā)病率呈上升趨勢，嚴(yán)重影響了養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展，已成為制約養(yǎng)禽業(yè)健康發(fā)展的重要因素之一。引起雞支原體的病因主要為敗血性支原體和滑液囊支原體，滑液囊支原體以侵害禽類的滑液囊為主，表現(xiàn)癥狀常因感染的菌株不同而略顯差異，青年雞長勢緩慢，開產(chǎn)期延長，產(chǎn)蛋雞異性蛋如沙皮蛋、畸形蛋和破蛋的比率增加，肉雞滑膜受侵害后多導(dǎo)致行走不便。2017年，國內(nèi)首次證實(shí)養(yǎng)殖場各年齡段中國地方雞品種均存在大規(guī)模的雞滑液囊支原體感染流行。3周齡雛雞可同時(shí)攜帶母源抗體和病原，肉雞抗體產(chǎn)生的時(shí)間和臨床發(fā)病率情況受疫苗抗體水平的影響很大。雞滑液囊支原體感染的疾病潛伏期通常為11～21 d，但垂直傳播的時(shí)間僅為6 d，如何能有效防控滑液囊支原體引起的腿病和呼吸道問題，已成為業(yè)內(nèi)人士的關(guān)注焦點(diǎn)。

2019年山東省平度市某養(yǎng)殖場雞發(fā)生滑液囊支原體病導(dǎo)致病雞淘汰率達(dá)10%，產(chǎn)蛋量下降5%～10%。本文通過酶聯(lián)免疫法(ELISA)和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測方法對河西地區(qū)雞群進(jìn)行雞滑液囊支原體病的流行病學(xué)調(diào)查，武威市民勤縣雞群的陽性率為33.70%，張掖市雞群的陽性率為18.71%～32.90%之間，河西地區(qū)雞群的血清學(xué)平均感染率為28.38%，病原學(xué)平均感染率為38.89%。通過問卷調(diào)查，出現(xiàn)屠宰門店病原學(xué)陽性率過高的原因多是門店傾向于收購散養(yǎng)戶飼養(yǎng)的肉雞，加之散養(yǎng)戶在雞群育雛過程中常常忽視對雞群的管護(hù)和對雞支原體病的藥物預(yù)防。通過以上流行病學(xué)調(diào)查，雞滑液囊支原體在河西地區(qū)雞群中廣泛存在并流行，這就要求防疫工作者和養(yǎng)殖戶必須采取有效的防控措施來控制傳播。

加強(qiáng)對雞滑液囊支原體病的防控，養(yǎng)殖戶不僅要做好雞場生物安全措施，還得制定科學(xué)合理的消毒方案，通過種源凈化和優(yōu)化飼養(yǎng)管理。由于本病可以經(jīng)蛋垂直傳播，也可水平傳播，既可以單獨(dú)發(fā)生，又可以并發(fā)或繼發(fā)于其他雞病，加重病情，引入后不易清除，加上母源傳播及病原在環(huán)境大量存在的情況，雞群多存在免疫抑制，疫苗的保護(hù)效果不佳，業(yè)內(nèi)人士多推薦采用藥物預(yù)防和治療相結(jié)合的防控措施，必須做好養(yǎng)殖場飼養(yǎng)管理工作，降低飼養(yǎng)密度，采用“全進(jìn)全出”模式，建立無支原體病雞群，及時(shí)淘汰陽性雞群，病雞可使用對支原體敏感的抗生素或大環(huán)內(nèi)酯類抗生素進(jìn)行對癥治療。建議養(yǎng)殖場應(yīng)做好綜合防控措施，適時(shí)提高發(fā)育期雞的母源抗體水平，有效控制發(fā)育窗口期雞滑液囊支原體的活性，可能是預(yù)防雞滑液囊支原體感染的有效策略之一。

4 結(jié)論

文章采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測方法對河西地區(qū)的雞養(yǎng)殖場和屠宰門店進(jìn)行雞支原體病原的流行病學(xué)調(diào)查和實(shí)驗(yàn)，涉及到的市縣均有病原檢出，血清學(xué)平均感染率為28.38%，病原學(xué)平均感染率為38.89%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明雞滑液囊支原體在河西地區(qū)雞群中廣泛存在并流行，這就要求防疫工作者和養(yǎng)殖戶必須采取有效的防控措施來控制傳播。