苑兆和，陳立德，張心慧，趙玉潔

(南京林業(yè)大學(xué)，南方現(xiàn)代林業(yè)協(xié)同創(chuàng)新中心，南京林業(yè)大學(xué)林學(xué)院，江蘇 南京 210037)

近年來，隨著農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整，果樹產(chǎn)業(yè)迅猛發(fā)展[1]，我國已成為果樹產(chǎn)業(yè)第一大國。在我國脫貧攻堅(jiān)進(jìn)程中，以水果、蔬菜、茶葉等園藝作物為主的種植業(yè)成為中西部地區(qū)扶貧的主要產(chǎn)業(yè)[2]，是促進(jìn)鄉(xiāng)村振興的重要支柱產(chǎn)業(yè)之一。果樹是一種重要的經(jīng)濟(jì)作物，其根、莖、葉、花、果實(shí)、種子等，可為人類提供所需營養(yǎng)物質(zhì)，一些果樹還具有醫(yī)藥保健功能[3]。在我國現(xiàn)代果業(yè)的發(fā)展過程中，果樹育種工作仍面臨巨大挑戰(zhàn)：果樹品種單一，果品品質(zhì)降低，砧木育種滯后，全球氣候變化等對果樹產(chǎn)量和品質(zhì)造成嚴(yán)重影響。具體來看：其一，我國消費(fèi)市場上水果種類較為豐富，但品種單一化嚴(yán)重，如我國蘋果產(chǎn)業(yè)中70%是‘富士’品種[4]；其二，在追求高產(chǎn)、耐貯藏等品質(zhì)的過程中，部分犧牲了果實(shí)其他品質(zhì)的質(zhì)量，引起水果原有風(fēng)味發(fā)生明顯改變或喪失，如“桃沒有桃味”“葡萄沒葡萄味”[5]；其三，與栽培品種選育工作相比，果樹砧木育種評價(jià)難度大、周期長，目前缺乏廣適性強(qiáng)、抗性突出、綜合性狀優(yōu)良的砧木品種；其四，受全球氣候變化的影響，果樹病蟲害危害加劇，柑橘黃龍病、香蕉枯萎病、獼猴桃潰瘍病、梨枯梢病等嚴(yán)重危害果樹產(chǎn)業(yè)持續(xù)健康發(fā)展[2]。因此，培育適應(yīng)市場消費(fèi)需求和全球氣候變化的優(yōu)良果樹品種是目前果樹產(chǎn)業(yè)持續(xù)發(fā)展的首要任務(wù)。

我國果樹種質(zhì)資源豐富，擁有大量優(yōu)異基因資源。特別是蘋果、桃、杏、梨、柑橘、獼猴桃、枇杷、楊梅等原產(chǎn)我國的果樹樹種[4, 6-9]遺傳多樣性十分豐富，是果樹育種的重要材料。在不同生態(tài)地區(qū)栽培的地方品種，經(jīng)過自然選擇和人工選擇，攜帶有較多與品質(zhì)及抗性相關(guān)的優(yōu)異基因[10-12]。隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，果樹定向育種可行性增強(qiáng)，該方法能有效克服傳統(tǒng)育種方法的缺點(diǎn)，具有周期短、效率高、定向育種精確度高等優(yōu)勢，還可以打破種間生殖隔離，實(shí)現(xiàn)優(yōu)良基因高效重組[13]。近年來，轉(zhuǎn)基因、基因編輯[14]和分子標(biāo)記輔助育種[15]技術(shù)等分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展迅速，推動(dòng)了果樹育種的現(xiàn)代化發(fā)展。筆者從果樹品質(zhì)育種、抗性育種兩個(gè)方向綜述果樹分子育種進(jìn)展，并在分析現(xiàn)階段不足的基礎(chǔ)上，探討未來果樹育種的發(fā)展方向，以期為未來果樹育種研究提供參考。

1 果實(shí)品質(zhì)育種

果實(shí)品質(zhì)是衡量水果商品性和食用價(jià)值的重要標(biāo)準(zhǔn)。果實(shí)品質(zhì)主要包括外觀品質(zhì)和內(nèi)在品質(zhì)，外觀品質(zhì)包括果實(shí)顏色、果型和大小等，內(nèi)在品質(zhì)包括風(fēng)味、質(zhì)地、香味和功能物質(zhì)等[16-17]。果實(shí)品質(zhì)性狀是復(fù)雜的數(shù)量性狀，遺傳機(jī)制復(fù)雜，受多基因及基因間相互作用的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)調(diào)控[16]。

1.1 果實(shí)外觀品質(zhì)分子育種

1.1.1 果實(shí)色澤

果皮顏色是決定水果品質(zhì)的關(guān)鍵因素?；ㄇ嗨厥怯绊懝麑?shí)顏色最重要的色素，花青素種類和含量的不同使植物呈現(xiàn)紅色、紫色和藍(lán)色等外觀[18-19]。花青素生物合成相關(guān)基因的表達(dá)受到R2R3-MYB與bHLH和WD40-repeat共同調(diào)控[19]。通過調(diào)控花青素合成途徑中的轉(zhuǎn)錄因子，人們已初步了解了影響果皮和果實(shí)顏色的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子(表1)。近年來，在蘋果中已分離并鑒定了MdMYB10、MdMYB1和MdMYBA等轉(zhuǎn)錄因子，其中MdMYB10是調(diào)控蘋果紅肉的關(guān)鍵基因，MdMYB1和MdMYBA是調(diào)控果皮變紅的關(guān)鍵基因[20-22]。此外，研究表明，在VvMYBA1中插入反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子是引起白葡萄品種色素丟失的原因[23]。研究發(fā)現(xiàn)，VvMYB5a主要在葡萄果皮、果肉和種子發(fā)育早期表達(dá)，VvMYB5a在煙草中過表達(dá)誘導(dǎo)了青酶苷和槲皮素等多種酚類化合物的大量積累，這些酚類化合物是花青素和黃酮醇類化合物合成的主要成分[24]。而VvMYB5b在煙草中過表達(dá)則會(huì)引起類黃酮途徑酶基因上調(diào)，影響花青素和原花青素等衍生化合物的積累[25]。桃中MYB10.1和bHLH3雙基因過表達(dá)(或MYB10.3和bHLH3雙基因過表達(dá))通過上調(diào)NtCHS、NtDFR和NtUFGT來激活花青素合成，使黃色果肉中出現(xiàn)紅色斑塊[26]。Yao等[27]通過QTL定位和物理圖譜定位鑒定了與紅皮梨花青素生物合成相關(guān)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子PyMYB114，并在煙草和梨中進(jìn)行了瞬時(shí)轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，該轉(zhuǎn)錄因子能夠促進(jìn)花青素的生物合成。

表1 果實(shí)色澤改良分子育種方法

1.1.2 果型

桃、甜瓜等多數(shù)果實(shí)的形狀受多基因控制。桃果型分為扁平型(S)和非扁平型(s)兩大類，顯性的扁平型被稱為蟠桃。Dirlewanger等[32]檢測到1個(gè)限制性片段長度標(biāo)記(RFLP)PC2和1個(gè)擴(kuò)增片段長度多態(tài)性(AFLP)標(biāo)記與S基因共標(biāo)記。桃第2代遺傳圖譜將S基因定位在第6個(gè)連鎖群，與2個(gè)SSR標(biāo)記MA040a和MA014a以及1個(gè)RFLP標(biāo)記FG25共分離。Dirlewanger等[33]首次報(bào)道了1種新的孟德爾性狀，表現(xiàn)為開花但果實(shí)敗育，該性狀由隱性等位基因Af控制，與控制果實(shí)扁平形狀的顯性等位基因有關(guān)。

1.1.3 果實(shí)大小

引起果實(shí)大小差異的原因有很多，包括遺傳差異、內(nèi)源激素的調(diào)控和環(huán)境因素等[34-35]。目前，與果實(shí)大小相關(guān)的遺傳調(diào)控網(wǎng)絡(luò)尚未有詳細(xì)研究。細(xì)胞色素P450(CYP)家族是最大的植物蛋白家族之一，對果實(shí)大小具有一定的影響。在甜櫻桃中，過表達(dá)PaCYP78A9通過影響中果皮細(xì)胞的增殖和擴(kuò)張來增加果實(shí)大小[36]。NY 54×Emperor Francis和Regina×Lapins圖譜共鑒定到4個(gè)控制櫻桃果實(shí)大小的數(shù)量性狀位點(diǎn)(LG1、LG2、LG3和LG6)[37]，兩個(gè)CNR基因(PavCNR12和PavCNR20)位于LG2和LG6區(qū)間內(nèi)，它們的高表達(dá)抑制了果實(shí)發(fā)育早期的細(xì)胞分裂，特別是PavCNR12的低效率等位基因變異與果實(shí)大小的增加有關(guān)[38]。

1.2 果實(shí)內(nèi)在品質(zhì)分子育種

1.2.1 果實(shí)風(fēng)味

果肉酸度是水果感官品質(zhì)的重要組成部分。水果酸度是由于有機(jī)酸的存在，蘋果酸和檸檬酸是大多數(shù)成熟水果的主要有機(jī)酸[39]。目前，研究者通過分析突變體，并借助轉(zhuǎn)基因技術(shù)等方法已分離出一些影響有機(jī)酸含量的基因(表2)[40-47]。Li等[40]在轉(zhuǎn)基因柑橘和擬南芥中通過順時(shí)過表達(dá)方式發(fā)現(xiàn)CitERF13可正調(diào)節(jié)檸檬酸的積累。在蘋果中，轉(zhuǎn)錄因子MdMYB73通過與MdALMT9、MdVHA-A和MdVHP1的啟動(dòng)子直接結(jié)合，激活它們的轉(zhuǎn)錄并增強(qiáng)表達(dá)活性，影響蘋果酸積累及液泡pH；此外，蘋果中，MdCIbHLH1能夠與MdMYB73相互作用，增強(qiáng)其對下游靶基因的活性[41]。除了上述MYB、bHLH和ERF等轉(zhuǎn)錄因子，部分基因也可以通過相互作用影響有機(jī)酸的積累，如通過病毒載體遺傳轉(zhuǎn)化試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在蘋果中，MdSOS2L1可以與MdVHA-B1相互作用，磷酸化MdVHA-B1蛋白，進(jìn)而調(diào)控蘋果酸在蘋果果實(shí)中的積累[42]。

表2 果實(shí)風(fēng)味改良分子育種方法

糖是果實(shí)品質(zhì)和風(fēng)味物質(zhì)形成的基礎(chǔ)原料?？扇苄蕴侵饕ㄕ崽?、果糖和葡萄糖，可為植物生長發(fā)育提供能量，也是重要的信號分子，在調(diào)節(jié)植物代謝過程和防御機(jī)制中起重要作用。果實(shí)糖代謝通常以蔗糖形式進(jìn)入果實(shí)，隨后，在一系列糖代謝酶的作用下轉(zhuǎn)化為果糖和葡萄糖等。目前，研究者已通過分子生物學(xué)技術(shù)分離出一些影響果實(shí)糖含量的基因(表2)，例如酸性轉(zhuǎn)化酶基因(EjVIN)[43]。枇杷EjVIN過表達(dá)可同時(shí)減少果實(shí)己糖和蔗糖含量；此外，一些轉(zhuǎn)錄因子(如CgDREB)[44]的過表達(dá)或抑制，通過調(diào)控下游靶基因的表達(dá)也能影響果實(shí)糖含量的積累。

1.2.2 果實(shí)質(zhì)地

果實(shí)質(zhì)地是果實(shí)品質(zhì)的重要組成部分。在桃中，1對等位基因控制著桃的溶質(zhì)型(M)和不溶質(zhì)型(NM)性狀。Peace等[48]研究發(fā)現(xiàn)基因標(biāo)記endoPG-4或endoPG-5均可在苗期用于區(qū)分離核溶質(zhì)、黏核溶質(zhì)和黏核不溶質(zhì)3種類型桃。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，參與溶質(zhì)/非溶質(zhì)性狀的標(biāo)記(Ppa006839m)和參與黏核/離核性狀的標(biāo)記(Ppa006857m)始終是共分離的[49]。在蘋果和梨基因組連鎖群1上開發(fā)了一個(gè)與果實(shí)硬度有關(guān)的功能標(biāo)記Md-Exp7SSR[50]。果實(shí)成熟時(shí)的軟化與乙烯和生長素等的調(diào)控有關(guān)[51-52]。ZMdPG1是蘋果果實(shí)軟化開裂所必需的，研究發(fā)現(xiàn)1-MCP(1-甲基環(huán)丙烯，C4H6)可以阻斷ZMdPG1的表達(dá)，說明ZMdPG1的表達(dá)受內(nèi)源乙烯介導(dǎo)，擬南芥中過表達(dá)ZMdPG1可導(dǎo)致角果早期開裂[53]。此外，一種硬質(zhì)性桃受隱性單基因控制，成熟期乙烯缺失可導(dǎo)致硬質(zhì)型桃不能軟化，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)成熟時(shí)果實(shí)生長素含量降低，抑制了乙烯合成關(guān)鍵基因PpACS1的轉(zhuǎn)錄[54]。

1.2.3 果實(shí)香味

果香化合物主要由萜類、酯類、醇類、醛類以及部分含硫化合物組成[55]。葡萄中的萜類化合物在其游離狀態(tài)下直接釋放出香氣，當(dāng)光照強(qiáng)度增大時(shí)，VvPLiNer1表達(dá)上調(diào)，引起‘金香玉’葡萄中萜烯類化合物(里那醇)含量增加；而葡萄中VvGT14受光照強(qiáng)度負(fù)調(diào)控，該基因與香葉醇和橙花醇的積累有關(guān)[56]。Lücker等[57]將檸檬中3個(gè)單萜基因在煙草中共表達(dá)，轉(zhuǎn)基因株系中釋放出了檸檬烯、β-蒎烯和γ-萜品烯等芳香物質(zhì)。在甜橙果實(shí)中，過表達(dá)CitAP2.10后，引起CsTPS1表達(dá)上調(diào)，能夠促進(jìn)朱欒倍半萜的合成[58]。LOX酶活性受到抑制時(shí)，會(huì)引起蘋果中酯類物質(zhì)合成底物缺乏，產(chǎn)生具有非正常氣味的蘋果果實(shí)[59]?；騊pFAD2過表達(dá)可顯著增加轉(zhuǎn)基因煙草中亞油酸含量，同時(shí)也顯著改變了葉片組織己醛等香氣物質(zhì)的含量[60]。

1.2.4 果實(shí)功能物質(zhì)

黃酮類化合物如黃酮、黃酮醇和花青素來源于植物苯丙氨酸代謝途徑的幾個(gè)分支，是許多植物重要的紫外線保護(hù)劑，同時(shí)也對人體健康具有重要作用[61-63]。Czemmel等[64]對葡萄R2R3-MYB型轉(zhuǎn)錄因子VvMYBF1進(jìn)行分離鑒定，發(fā)現(xiàn)VvMYBF1是VvFLS1(黃酮醇合成酶)的特異性激活劑，擬南芥myb12突變體中VvMYBF1過表達(dá)可互補(bǔ)其黃酮醇缺乏表型?；騇dNAC9可通過激活MdFLS促進(jìn)紅肉蘋果中黃酮醇的積累[65](表3)。

表3 果實(shí)功能物質(zhì)分子育種方法

類胡蘿卜素在高等植物中可以輔助進(jìn)行光合作用，對人體有益，具有抑制、消除體內(nèi)自由基和減緩衰老等功效[66]。基因CCD1抑制表達(dá)后，紅肉臍橙轉(zhuǎn)基因株系中紫黃質(zhì)、9-順式-紫黃質(zhì)等類胡蘿卜素含量均顯著提高[67]。通過VIGS技術(shù)沉默枇杷果實(shí)PSY基因，發(fā)現(xiàn)總類胡蘿卜素含量降低，表明PSY正調(diào)控枇杷果實(shí)中類胡蘿卜含量[68](表3)。

2 果樹抗性育種

果樹在生長發(fā)育過程中往往會(huì)受到周圍環(huán)境的不良影響，環(huán)境因素包括生物因素和非生物因素。果樹抗性基因參與了多種生物與非生物脅迫調(diào)控，提高了果樹在復(fù)雜環(huán)境中的適應(yīng)能力[69-71]。利用分子育種等技術(shù)可培育抗逆果樹，改善果樹在逆境脅迫下的生長狀況，穩(wěn)定果樹產(chǎn)量品質(zhì)。相關(guān)研究已取得一定進(jìn)展[72-113](表4)。

表4 部分果樹抗性分子育種方法

2.1 分子育種在果樹抗非生物脅迫中的應(yīng)用

2.1.1 在果樹抗干旱脅迫中的應(yīng)用

不論是生長季或休眠期，干旱脅迫均會(huì)對果樹生長發(fā)育起抑制作用，甚至導(dǎo)致果樹冬春季抽條，生長季落果、落葉，死亡等現(xiàn)象[72]。MYB轉(zhuǎn)錄因子在干旱脅迫等非生物脅迫調(diào)控中具有重要作用[73]，研究表明過表達(dá)MYB可顯著提高轉(zhuǎn)基因植株抗旱性[74-77]。杜梨PbrMYB2受干旱誘導(dǎo)表達(dá)，MYB沉默會(huì)引起杜梨株系的干旱敏感性增強(qiáng)、抗旱性降低[78]。蘋果MdSIMYB1基因表達(dá)受干旱誘導(dǎo)，MdSIMYB1過表達(dá)煙草株系根系強(qiáng)壯，抗逆性增強(qiáng)[79]。在長期中度干旱脅迫下，MhYTP1過表達(dá)蘋果株系顯著提高了水分利用效率和生物積累量[80]。為了提高橄欖對逆境的承受能力，Rugini等[81]通過轉(zhuǎn)化滲透壓基因獲得了抗旱性較強(qiáng)的轉(zhuǎn)基因橄欖植株。

2.1.2 在果樹抗低溫脅迫中的應(yīng)用

低溫冷害會(huì)引起植物的光合作用、細(xì)胞膜流動(dòng)性及基礎(chǔ)代謝等降低，造成新梢、花芽及葉片的凍害損傷或死亡，嚴(yán)重影響果樹的正常生長發(fā)育及產(chǎn)量[82]。目前，藍(lán)莓抗寒性差與需冷量過高是其栽培推廣的主要限制因素，劉肖[83]篩選出與抗寒性、需冷量性狀相關(guān)的SNP標(biāo)記，并進(jìn)行雜交實(shí)生苗分子標(biāo)記輔助育種，最終篩選出2個(gè)抗寒性突出的雜交優(yōu)株和1個(gè)低需冷量的雜交優(yōu)株，該策略顯著提高了藍(lán)莓優(yōu)良品種選育效率。bHLH基因家族同樣在植物耐寒性中發(fā)揮重要作用，過表達(dá)PtrbHLH可增強(qiáng)檸檬在寒冷或冰凍溫度下的耐寒性，PtrbHLH基因的RNA沉默(RNAi)則會(huì)引起檸檬冷敏感性提高[84]。

2.1.3 在果樹抗高鹽脅迫中的應(yīng)用

土壤鹽漬化會(huì)引起土壤內(nèi)滲透脅迫離子增加，使果樹發(fā)生離子毒害、吸水困難、氧化脅迫等現(xiàn)象，進(jìn)而影響果樹生長和結(jié)果[85]。樊軍鋒等[86]利用mltD/gutD雙價(jià)耐鹽基因轉(zhuǎn)化獼猴桃的研究發(fā)現(xiàn)，與對照株相比，轉(zhuǎn)化株耐鹽性得到顯著提高。孫寧等[87]通過誘變育種獲得蘋果砧木耐鹽變異系，并利用RAPD分子標(biāo)記技術(shù)對耐鹽突變體進(jìn)行分析，從DNA水平上揭示突變體與原品種之間的差異。此外，利用RAPD或AFLP標(biāo)記技術(shù)在柑橘[88]和檸檬[89]中檢測到與抗高鹽顯著相關(guān)的QTLs。DREB轉(zhuǎn)錄因子蛋白通過調(diào)節(jié)一系列下游靶基因的表達(dá)以調(diào)控抗逆反應(yīng)，對新疆野蘋果DREB進(jìn)行功能分析，發(fā)現(xiàn)MsDREBA5和StDREB2都能提高轉(zhuǎn)基因擬南芥的抗高鹽能力[90-91]，因此DREB基因也可能是抗鹽脅迫分子育種中重要的目標(biāo)基因。Yaish等[92]發(fā)現(xiàn)椰棗品種‘Khalas’中一些miRNA在高鹽脅迫下差異表達(dá)，并進(jìn)一步分析確定了在高鹽條件下具有關(guān)鍵作用的miRNA及其靶標(biāo)基因。

2.2 分子育種在果樹抗生物脅迫中的應(yīng)用

2.2.1 在果樹抗病中的應(yīng)用

果樹病害主要由細(xì)菌、真菌等病原微生物或者病毒引起，如由黑腐皮殼菌侵染引起的蘋果腐爛病[93]，由病毒侵染導(dǎo)致柑橘黃龍病和衰退病、葡萄的白粉病和霜霉病等，這些病害對果樹生產(chǎn)影響極大[94]。美國研究者已分離出番木瓜環(huán)斑病病毒外殼蛋白基因(PVR)，并于1992年培育出抗病的番木瓜品種[95]，1997年獲得美國國家環(huán)保局和國家食品與藥品管理局登記，1998年在美國商業(yè)化應(yīng)用[96]。隨后番木瓜環(huán)斑病病毒外殼蛋白基因(PVR)被成功導(dǎo)入歐洲李中，并獲得了抗病歐洲李[97]。李痘疫病毒外殼蛋白基因PPV-CP被成功克隆并構(gòu)建雙元載體，獲得了杏轉(zhuǎn)基因植株，可有效延緩轉(zhuǎn)基因植株病毒病癥狀的出現(xiàn)[98]。MdUGT88F1過表達(dá)蘋果植株中，根皮苷過量生長，促進(jìn)了病原菌的生長，導(dǎo)致植株抗病能力減弱；而MdUGT88F1-RNAi蘋果植株則表現(xiàn)為生長發(fā)育受抑制，抗病能力增強(qiáng)[99]。將歐洲葡萄VrERE基因?qū)氲蕉咸押蜕车仄咸央s交后代的植株中，VrERE活性顯著提高，而對照植株VrERE活性則被外源毒素抑制，表明VrERE基因轉(zhuǎn)化能有效提高葡萄抗毒性[100]。中國野生葡萄STS基因轉(zhuǎn)化到歐洲葡萄后，轉(zhuǎn)基因植株中白藜蘆醇含量與對照相比顯著增加，進(jìn)而提高了轉(zhuǎn)基因植株的抗病性[101]。環(huán)形抗菌肽基因或單獨(dú)線性抗菌肽基因轉(zhuǎn)化到歐洲葡萄后，轉(zhuǎn)基因植株對冠癭病和白粉病抗性均有所提高[102-104]。

將RNA沉默(RNAi)載體(包含李屬壞死環(huán)斑病毒的反向重復(fù)區(qū)域)轉(zhuǎn)化到櫻桃砧木中，可增強(qiáng)櫻桃砧木對病毒的抗性[105]。將柑橘衰退病毒(CTV)的外殼蛋白基因?qū)氲剿岢群湍鞲缢岢戎?，獲得了第一批轉(zhuǎn)基因植株。在甜橙品種菠蘿中首次用成熟組織作為受體，獲得了轉(zhuǎn)化植株[106]。利用綠色熒光蛋白(GFP)作為報(bào)告基因和Xa21基因(從水稻中獲得的Xanthomonas抗性基因)共轉(zhuǎn)導(dǎo)來提高柑橘潰瘍病抗性，得到了9個(gè)摩洛哥蜜橘(Citrassp.)轉(zhuǎn)基因品系中，其中WM-8品系始終耐受潰瘍病[107]。利用SNPs標(biāo)記對歐洲和亞洲梨的種間后代進(jìn)行基因分型并構(gòu)建圖譜，確定了7個(gè)QTLs與3種赤霉病病菌顯著關(guān)聯(lián)，這些位點(diǎn)可用于增強(qiáng)梨抗病性[108]。在梨品種‘Pass Crassane’中過表達(dá)AttacinE基因，獲得了6種火疫病癥狀減輕的遺傳轉(zhuǎn)化品系[109]。

2.2.2 在果樹抗蟲害中的應(yīng)用

蟲害一直是制約農(nóng)業(yè)持續(xù)、穩(wěn)定和健康發(fā)展的主要因素，全世界每年因蟲害造成的損失高達(dá)數(shù)千億元，抗蟲性已被列為全球作物基因工程的主要目標(biāo)之一[110]。迄今為止，發(fā)現(xiàn)并應(yīng)用于提高植物抗蟲性的基因主要有兩類：一類是從細(xì)菌中分離的抗蟲基因，如蘇云金桿菌毒蛋白基因(Bacillusthuringiensis，Bt)、異戊基轉(zhuǎn)移酶基因(Isopentenyl transferase，IPT)；另一類是從植物和動(dòng)物中分離出來的抗蟲基因，如外源凝集素基因(lectin)、蛋白酶抑制劑基因(Proteinasein hibitor，PI)、淀粉酶抑制劑基因(α-Amylase inhibitor，αAI)等。James等[111]將CrylA導(dǎo)入蘋果品種綠袖‘Greensleeves’中，并得到轉(zhuǎn)基因植株，這是首次將有用的外源目標(biāo)基因?qū)牍麡渲小Ｔ诟涕僦?，?yīng)用AFLP標(biāo)記技術(shù)已鑒定了與線蟲抗性顯著關(guān)聯(lián)的多個(gè)QTLs[112]。Yang等[113]成功地將GNA導(dǎo)入柑橘，此研究為柑橘等果樹抗蟲育種研究奠定了基礎(chǔ)。

2.2.3 在應(yīng)對全球氣候變化中的應(yīng)用

氣候條件是決定果樹生長發(fā)育的重要環(huán)境因子，隨著全球氣候變化的加劇，果樹的物候期、需冷量、果實(shí)品質(zhì)和產(chǎn)量等也相應(yīng)地受到影響[114-116]。研究表明，氣候變化直接影響植物物候[117-119]，對果樹而言，物候期變化不僅會(huì)改變果樹的生長周期，同時(shí)還會(huì)改變果樹在生長過程中對光、溫、水資源及其他營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和利用，進(jìn)而對果實(shí)產(chǎn)量和品質(zhì)產(chǎn)生影響[120-122]。目前，國內(nèi)外學(xué)者已開展大量關(guān)于氣候變化對果樹物候期影響的相關(guān)研究[123]。

我國北方地區(qū)大部分果樹品種的低溫需求量均較多，全球氣候變暖導(dǎo)致需冷量不足，使得難以達(dá)到果樹解除休眠所需的低溫，嚴(yán)重影響北方果樹的大面積發(fā)展[124-125]。此外，近幾年隨著保護(hù)地果樹的不斷發(fā)展，短低溫品種的需求更加迫切[126]。研究還發(fā)現(xiàn)，開花植物通過調(diào)節(jié)花色以適應(yīng)生存環(huán)境溫度變化，這暗示全球氣候變暖可能影響開花植物花色[127]。CO2是引起全球氣候變暖的主要溫室氣體之一，生存環(huán)境中CO2濃度增加直接影響植物光合作用等生物過程，進(jìn)而影響植物的生長發(fā)育。在較高的CO2濃度條件下，果樹葉片光合適應(yīng)性隨著二磷酸核酮糖羧化酶蛋白濃度的下降而下調(diào)[128]。在提高CO2濃度條件下，新葉比老葉積累更多淀粉，表明新葉相對于老葉更能適應(yīng)高濃度CO2環(huán)境[129]。適當(dāng)提升CO2濃度可以提高桃產(chǎn)量、維生素C和可溶性糖含量[129]。

目前，有關(guān)氣候變化與果樹育種的研究，主要集中在氣候變化對果樹生產(chǎn)和品質(zhì)的影響，以及現(xiàn)有果樹品種對氣候變化適應(yīng)能力的比較分析，在蘋果[130]、葡萄[131]、柑橘[132]、椰子[132]、李[133]、扁桃[133]等果樹上已有研究報(bào)道，但利用分子育種技術(shù)來提高果樹氣候變化適應(yīng)能力的研究還鮮見報(bào)道。

3 果樹分子育種的展望

果樹育種以實(shí)現(xiàn)果大豐產(chǎn)、高品質(zhì)、結(jié)果能力強(qiáng)、貯運(yùn)性能強(qiáng)、果實(shí)成熟期長、抗逆性強(qiáng)和適宜機(jī)械化采收等為目標(biāo)[134]。目前，我國果樹品種選育多采用傳統(tǒng)育種方法，難以實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)性狀快速高效的改良選育。分子育種技術(shù)可大幅縮短果樹育種周期，實(shí)現(xiàn)性狀的定向改良。但與水稻、玉米、棉花等大田作物相比，我國果樹分子育種技術(shù)的研究和應(yīng)用較為滯后，加強(qiáng)分子生物學(xué)技術(shù)在果樹育種領(lǐng)域的研究應(yīng)用將是未來果樹育種的重要方向。此外，將分子育種技術(shù)與常規(guī)育種技術(shù)相結(jié)合，可提高育種全程篩選效率，有利于逐步建立經(jīng)濟(jì)、高效的果樹育種體系，為提高果樹育種效率提供技術(shù)支撐。

此外，隨著全球氣候變化的加劇，果樹原有優(yōu)良性狀難以維持。利用分子育種技術(shù)，可提高果樹品種對環(huán)境變化的適應(yīng)能力，然而有關(guān)這方面的研究還鮮有報(bào)道。筆者建議，可將培育低溫需求較小、生長適應(yīng)范圍更廣的品種作為果樹育種的一個(gè)明確目標(biāo)。利用分子生物技術(shù)對果樹品種進(jìn)行定向遺傳改良，這也是增強(qiáng)果樹應(yīng)對氣候變化能力的有效策略之一[135]。

我國是果品生產(chǎn)和消費(fèi)大國，市場潛力大，消費(fèi)需求多樣。未來果樹育種研究和果樹新品種開發(fā)應(yīng)圍繞需求展開，現(xiàn)提出以下4點(diǎn)建議：第一，滿足不同人群和不同用途需求，培育多樣化、個(gè)性化的品種；第二，優(yōu)質(zhì)綠色安全是未來農(nóng)產(chǎn)品的發(fā)展方向，培育抗性好、適應(yīng)輕簡化、機(jī)械化栽培的品種將是未來果樹育種的重要方向；第三，充分利用果樹分子遺傳信息，在基因組、轉(zhuǎn)錄組或系統(tǒng)水平上全面分析基因功能，以揭示果樹生長發(fā)育調(diào)控網(wǎng)絡(luò)、環(huán)境應(yīng)答互作分子網(wǎng)絡(luò)、代謝網(wǎng)絡(luò)等分子機(jī)制，為果樹定向育種提供理論指導(dǎo)；第四，結(jié)合現(xiàn)代生物學(xué)、農(nóng)業(yè)物聯(lián)網(wǎng)等各種技術(shù)，提高育種效率，縮短新品種培育周期[5,136-137]。

參考文獻(xiàn)（reference）：

[1]鄧秀新，束懷瑞，郝玉金，等．果樹學(xué)科百年發(fā)展回顧[J]．農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào)，2018，8(1)：24-34．DENG X X，SHU H R，HAO Y J，et al．Review on the centennial development of pomology in China[J]．J Agric，2018，8(1)：24-34．

[2]鄧秀新．關(guān)于我國水果產(chǎn)業(yè)發(fā)展若干問題的思考[J]．果樹學(xué)報(bào)，2021，38(1)：121-127．DENG X X．Thoughts on the development of China’s fruit industry[J]．J Fruit Sci，2021，38(1)：121-127．DOI:10.13925/j.cnki.gsxb.20200509.

[3]龍興桂，馮殿齊，苑兆和．中國現(xiàn)代果樹栽培[M]．北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2020．LONG X G，F(xiàn)ENG D Q，YUAN Z H．Modern fruit tree cultivation in China[M]．Beijing：Chinese Agriculture Press，2020．

[4]陳學(xué)森，李秀根，毛志泉，等．新種質(zhì)創(chuàng)造支撐果品產(chǎn)業(yè)升級：紅肉蘋果和‘庫爾勒香梨’種質(zhì)資源利用以及‘紅富士’芽變選種案例分析[J]．果樹學(xué)報(bào)，2021，38(1)：128-141．CHEN X S，LI X G，MAO Z Q，et al．Fruit industry upgrading supported by new germplasm creation：case study on the utilization of germplasm resources of red-fleshed apple and ‘Kuerlexiangli’ pear and the sports selection of ‘Red Fuji’[J]．J Fruit Sci，2021，38(1)：128-141．DOI:10.13925/j.cnki.gsxb.20200300.

[5]鄧秀新，王力榮，李紹華，等．果樹育種40年回顧與展望[J]．果樹學(xué)報(bào)，2019，36(4)：514-520．DENG X X，WANG L R，LI S H，et al．Retrospection and prospect of fruit breeding for last four de-cades in China[J]．J Fruit Sci，2019，36(4)：514-520．DOI:10.13925/j.cnki.gsxb.20190094.

[6]YUE J，LIU J，TANG W，et al．Kiwifruit genome database (KGD)：a comprehensive resource for kiwifruit genomics[J]．Hortic Res，2020，7：117．DOI:10.1038/s41438-020-0338-9.

[7]李桂芬，楊向暉，喬燕春，等．枇杷屬植物種間及近緣屬雜交親和性研究[J]．園藝學(xué)報(bào)，2016，43(6)：1069-1078．LI G F，YANG X H，QIAO Y C，et al．Study on interspecific and intergeneric hybridization compatibility ofEriobotryaand related genera[J]．Acta Hortic Sin，2016，43(6)：1069-1078．DOI:10.16420/j.issn.0513-353x.2016-0215.

[8]趙丹，王飛，趙秀明，等．柿屬部分品種雜交親和性以及結(jié)實(shí)性的研究[J]．園藝學(xué)報(bào)，2012，39(11)：2229-2237．ZHAO D，WANG F，ZHAO X M，et al．Studies of cross compatibility and fecundity on part ofDiospyros[J]．Acta Hortic Sin，2012，39(11)：2229-2237．DOI:10.16420/j.issn.0513-353x.2012.11.017.

[9]JIA H M，JIA H J，CAI Q L，et al．The red bayberry genome and genetic basis of sex determination[J]．Plant Biotechnol J，2019，17(2)：397-409．DOI:10.1111/pbi.12985.

[10]高源，劉鳳之，曹玉芬，等．蘋果屬種質(zhì)資源親緣關(guān)系的SSR分析[J]．果樹學(xué)報(bào)，2007，24(2)：129-134．GAO Y，LIU F Z，CAO Y F，et al．Analysis of genetic relationship forMalusgermplasm resources by SSR markers[J]．J Fruit Sci，2007，24(2)：129-134．

[11]韓振誠，潘學(xué)軍，安華明，等．貴州柿屬植物種質(zhì)資源遺傳多樣性的SRAP分析[J]．果樹學(xué)報(bào)，2015，32(5)：751-762．HAN Z C，PAN X J，AN H M，et al．Genetic diversity ofDiospyrosLinn．in Guizhou based on SRAP[J]．J Fruit Sci，2015，32(5)：751-762．DOI:10.13925/j.cnki.gsxb.20150171.

[12]鐘敏，廖光聯(lián)，李章云，等．野生毛花獼猴桃雄花花器性狀及SSR遺傳多樣性研究[J]．果樹學(xué)報(bào)，2018，35(6)：658-667．ZHONG M，LIAO G L，LI Z Y，et al．Genetic diversity of wild male kiwifruit (ActinidiaerianthaBenth．) germplasms based on SSR and morphological markers[J]．J Fruit Sci，2018，35(6)：658-667．DOI:10.13925/j.cnki.gsxb.20170514.

[13]夏溪，奉樹成，張春英．新型分子生物學(xué)技術(shù)在花卉定向育種中的應(yīng)用進(jìn)展[J]．南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2019，43(6)：173-180．XIA X，F(xiàn)ENG S C，ZHANG C Y．Advance in flower directive breeding using new molecular biology techniques[J]．J Nanjing For Univ (Nat Sci Ed)，2019，43(6)：173-180．DOI:10.3969/j.issn.1000-2006.201902014.

[14]DING Y，LI H，CHEN L L，et al．Recent advances in genome editing using CRISPR/Cas9[J]．Front Plant Sci，2016，7：703．DOI:10.3389/fpls.2016.00703.

[15]WEI Z Z，SUN Z Z，CUI B B，et al．Transcriptome analysis of coloredCallalily (ZantedeschiarehmanniiEngl．) by Illumina sequencing：de novo assembly，annotation and EST-SSR marker development[J]．Peer J，2016，4：e2378．DOI:10.7717/peerj.2378.

[16]CHEN M X，SUN C，ZHANG K L，et al．SWATH-MS-facilitated proteomic profiling of fruit skin between Fuji apple and a red skin bud sport mutant[J]．BMC Plant Biol，2019，19(1)：445．DOI:10.1186/s12870-019-2018-1.

[17]ZHAO G，LIAN Q，ZHANG Z，et al．A comprehensive genome variation map of melon identifies multiple domestication events and loci influencing agronomic traits[J]．Nat Genet，2019，51(11)：1607-1615．DOI:10.1038/s41588-019-0522-8.

[18]DIXON R A，STEELE C L．Flavonoids and isoflavonoids:a gold mine for metabolic engineering[J]．Trends Plant Sci，1999，4(10)：394-400．DOI:10.1016/s1360-1385(99)01471-5.

[19]PETRONI K，TONELLI C．Recent advances on the regulation of anthocyanin synthesis in reproductive organs[J]．Plant Sci，2011，181(3)：219-229．DOI:10.1016/j.plantsci.2011.05.009.

[20]TAKOS A M，JAFFé F W，JACOB S R，et al．Light-induced expression of aMYBgene regulates anthocyanin biosynthesis in red apples[J]．Plant Physiol，2006，142(3)：1216-1232．DOI:10.1104/pp.106.088104.

[21]ESPLEY R V，HELLENS R P，PUTTERILL J，et al．Red colouration in apple fruit is due to the activity of the MYB transcription factor，MdMYB10[J]．Plant J，2007，49(3)：414-427．DOI:10.1111/j.1365-313x.2006.02964.x.

[22]BAN Y，HONDA C，HATSUYAMA Y，et al．Isolation and functional analysis of aMYBtranscription factor gene that is a key regulator for the development of red coloration in apple skin[J]．Plant Cell Physiol，2007，48(7)：958-970．DOI:10.1093/pcp/pcm066.

[23]KOBAYASHI S．Retrotransposon-induced mutations in grape skin color[J]．Science，2004，304(5673)：982．DOI:10.1126/science.1095011.

[24]DELUC L，BARRIEU F，MARCHIVE C，et al．Characterization of a grapevine R2R3-MYB transcription factor that regulates the phenylpropanoid pathway[J]．Plant Physiol，2006，140(2)：499-511．DOI:10.1104/pp.105.067231.

[25]DELUC L，BOGS J，WALKER A R，et al．The transcription factor VvMYB5b contributes to the regulation of anthocyanin and proanthocyanidin biosynthesis in developing grape berries[J]．Plant Physiol，2008，147(4)：2041-2053．DOI:10.1104/pp.108.118919.

[26]RAHIM M A，BUSATTO N，TRAINOTTI L．Regulation of anthocyanin biosynthesis in peach fruits[J]．Planta，2014，240(5)：913-929．DOI:10.1007/s00425-014-2078-2.

[27]YAO G，MING M，ALLAN A C，et al．Map-based cloning of the pear geneMYB114identifies an interaction with other transcription factors to coordinately regulate fruit anthocyanin biosynthesis[J]．Plant J，2017，92(3)：437-451．DOI:10.1111/tpj.13666.

[28]VIMOLMANGKANG S，HAN Y，WEI G，et al．An apple MYB transcription factor，MdMYB3，is involved in regulation of anthocyanin biosynthesis and flower development[J]．BMC Plant Biol，2013，13：176．DOI:10.1186/1471-2229-13-176.

[29]CHAGNé D，KUI L W，ESPLEY R V，et al．An ancient duplication of apple MYB transcription factors is responsible for novel red fruit-flesh phenotypes[J]．Plant Physiol，2013，161(1)：225-239．DOI:10.1104/pp.112.206771.

[30]SHEN X，ZHAO K，LIU L，et al．A role for PacMYBA in ABA-regulated anthocyanin biosynthesis in red-colored sweet cherry cv．Hong Deng (PrunusaviumL．)[J]．Plant Cell Physiol，2014，55(5)：862-880．DOI:10.1093/pcp/pcu013.

[31]FENG S，WANG Y，YANG S，et al．Anthocyanin biosynthesis in pears is regulated by a R2R3-MYB transcription factor PyMYB10[J]．Planta，2010，232(1)：245-255．DOI:10.1007/s00425-010-1170-5.

[32]DIRLEWANGER E，PRONIER V，PARVERY C，et al．Genetic linkage map of peach [Prunuspersica(L．) Batsch]using morphological and molecular markers[J]．Theor Appl Genet，1998，97(5/6)：888-895．DOI:10.1007/s001220050969.

[33]DIRLEWANGER E，COSSON P，BOUDEHRI K，et al．Development of a second-generation genetic linkage map for peach[Prunuspersica(L．) Batsch]and characterization of morphological traits affecting flower and fruit[J]．Tree Genet Genomes，2006，3(1)：1-13．DOI:10.1007/s11295-006-0053-1.

[34]SU L，BASSA C，AUDRAN C，et al．The auxin Sl-IAA17 transcriptional repressor controls fruit size via the regulation of endoreduplication-related cell expansion[J]．Plant Cell Physiol，2014，55(11)：1969-1976．DOI:10.1093/pcp/pcu124.

[35]TELLO J，TORRES-PéREZ R，GRIMPLET J，et al．Polymorphisms and minihaplotypes in theVvNAC26 gene associate with berry size variation in grapevine[J]．BMC Plant Biol，2015，15：253．DOI:10.1186/s12870-015-0622-2.

[36]QI X L，LIU C L，SONG L L，et al．PaCYP78A9，a cytochrome P450，regulates fruit size in sweet cherry (PrunusaviumL．)[J]．Front Plant Sci，2017，8：2076．DOI:10.3389/fpls.2017.02076.

[37]ROSYARA U R，BINK M C A M，WEG E，et al．Fruit size QTL identification and the prediction of parental QTL genotypes and breeding values in multiple pedigreed populations of sweet cherry[J]．Mol Breed，2013，32(4)：875-887．DOI:10.1007/s11032-013-9916-y.

[38]DE FRANCESCHI P，STEGMEIR T，CABRERA A，et al．Cell number regulator genes inPrunusprovide candidate genes for the control of fruit size in sweet and sour cherry[J]．Mol Breed，2013，32：311-326．DOI:10.1007/s11032-013-9872-6.

[39]ETIENNE A，GéNARD M，LOBIT P，et al．What controls fleshy fruit acidity?A review of malate and citrate accumulation in fruit cells[J]．J Exp Bot，2013，64(6)：1451-1469．DOI:10.1093/jxb/ert035.

[40]LI S J，YIN X R，XIE X L，et al．TheCitrustranscription factor，CitERF13，regulates citric acid accumulation via a protein-protein interaction with the vacuolar proton pump，CitVHA-c4[J]．Sci Rep，2016，6：20151．DOI:10.1038/srep20151.

[41]HU D G，SUN C H，MA Q J，et al．MdMYB1regulates anthocyanin and malate accumulation by directly facilitating their transport into vacuoles in apples[J]．Plant Physiol，2016，170(3)：1315-1330．DOI:10.1104/pp.15.01333.

[42]HU D G，SUN C H，SUN M H，et al．MdSOS2L1 phosphorylates MdVHA-B1 to modulate malate accumulation in response to salinity in apple[J]．Plant Cell Rep，2016，35(3)：705-718．DOI:10.1007/s00299-015-1914-6.

[43]WANG Y P，CHEN J W，F(xiàn)ENG J J，et al．Overexpression of a loquat (EriobotryajaponicaLindl．) vacuolar invertase affects sucrose levels and growth[J]．Plant Cell Tissue Organ Cult (PCTOC)，2015，123(1)：99-108．DOI:10.1007/s11240-015-0817-0.

[44]NISHAWY E，SUN X H，EWAS M，et al．Overexpression ofCitrusgrandisDREB gene in tomato affects fruit size and accumulation of primary metabolites[J]．Sci Hortic，2015，192：460-467．DOI:10.1016/j.scienta.2015.06.035.

[45]LI S J，YIN X R，WANG W L，et al．CitrusCitNAC62 cooperates with CitWRKY1to participate in citric acid degradation via up-regulation of CitAco3[J]．J Exp Bot，2017，68(13)：3419-3426．DOI:10.1093/jxb/erx187.

[46]HU D G，LI Y Y，ZHANG Q Y，et al．The R2R3-MYB transcription factor MdMYB73 is involved in malate accumulation and vacuolar acidification in apple[J]．Plant J，2017，91(3)：443-454．DOI:10.1111/tpj.13579.

[47]YAO Y X，LI M，ZHAI H，et al．Isolation and characterization of an apple cytosolic malate dehydrogenase gene reveal its function in malate synthesis[J]．J Plant Physiol，2011，168(5)：474-480．DOI:10.1016/j.jplph.2010.08.008.

[48]PEACE C P，CRISOSTO C H，GRADZIEL T M．Endopolygalacturonase：a candidate gene for freestone and melting fleshin peach[J]．Mol Breed，2005，16(1)：21-31．DOI:10.1007/s11032-005-0828-3.

[49]MORGUTTI S，NEGRINI N，GHIANI A，et al．Endopolygalacturonasegene polymorphisms：asset of the locus in different peach accessions[J]．Am J Plant Sci，2017，8(4)：941-957．DOI:10.4236/ajps.2017.84063.

[50]COSTA F，WEG W E，STELLA S，et al．Map position and functional allelic diversity of Md-Exp7，a new putative expansin gene associated with fruit softening in apple (Malus×domesticaBorkh．) and pear (Pyruscommunis)[J]．Tree Genet Genomes，2008，4(3)：575-586．DOI:10.1007/s11295-008-0133-5.

[51]TATSUKI M，NAKAJIMA N，F(xiàn)UJII H，et al．Increased levels of IAA are required for system 2 ethylene synthesis causing fruit softening in peach (PrunuspersicaL．Batsch)[J]．J Exp Bot，2013，64(4)：1049-1059．DOI:10.1093/jxb/ers381.

[52]張宗營．‘泰山早霞’蘋果(MalusdomesticaBorkh．)果實(shí)成熟軟化相關(guān)基因的分離與功能鑒定[D]．泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2016．ZHANG Z Y．Isolation and function characterization of genes associated with fruit ripening and softening in ‘Taishanzaoxia’ apple(MalusdomesticaBorkh．)[D]．Taian：Shandong Agricultural University，2016．

[53]LI M，ZHANG Y，ZHANG Z，et al．Hypersensitive ethylene signaling and ZMdPG1 expression lead to fruit softening and dehiscence[J]．PLoS One，2013，8(3)：e58745．DOI:10.1371/journal.pone.0058745.

[54]HAYAMA H，TATSUKI M，ITO A，et al．Ethylene and fruit softe-ning in the stony hard mutation in peach[J]．Postharvest Biol Technol，2006，41(1)：16-21．DOI:10.1016/j.postharvbio.2006.03.006.

[56]ZHANG E P，CHAI F M，ZHANG H H，et al．Effects of sunlight exclusion on the profiles of monoterpene biosynthesis and accumulation in grape exocarp and mesocarp[J]．Food Chem，2017，237：379-389．DOI:10.1016/j.foodchem.2017.05.127.

[57]LüCKER J，SCHWAB W，VAN HAUTUM B，et al．Increased and altered fragrance of tobacco plants after metabolic engineering using three monoterpene synthases from lemon[J]．Plant Physiol，2004，134(1)：510-519．DOI:10.1104/pp.103.030189.

[58]SHEN S L，YIN X R，ZHANG B，et al．CitAP2.10 activation of the terpene synthase CsTPS1 is associated with the synthesis of (+)-valencene in ‘Newhall’ orange[J]．J Exp Bot，2016，67(14)：4105-4115．DOI:10.1093/jxb/erw189.

[60]王嬌嬌，黃玉吉，張波，等．桃果實(shí)PpFAD2基因的功能研究[C]//中國園藝學(xué)會(huì).2015年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集．廈門，2015：27．

[61]JAAKOLA L．New insights into the regulation of anthocyanin biosynthesis in fruits[J]．Trends Plant Sci，2013，18(9)：477-483．DOI:10.1016/j.tplants.2013.06.003.

[62]GAFRIKOVA M，GALOVA E，SEVCOVICOVA A，et al．Extract fromArmoraciarusticanaand its flavonoid components protect human lymphocytes against oxidative damage induced by hydrogen peroxide[J]．Molecules，2014，19(3)：3160-3172．DOI:10.3390/molecules19033160.

[63]BATRA P，SHARMA A K．Anti-cancer potential of flavonoids：recent trends and future perspectives[J]．3 Biotech，2013，3(6)：439-459．DOI:10.1007/s13205-013-0117-5.

[64]CZEMMEL S，STRACKE R，WEISSHAAR B，et al．The grapevine R2R3-MYB transcription factor VvMYBF1regulates flavonol synthesis in developing grape berries[J]．Plant Physiol，2009，151(3)：1513-1530．DOI:10.1104/pp.109.142059.

[65]孫慶國，姜生輝，房鴻成，等．蘋果MdNAC9的克隆及其調(diào)控黃酮醇合成功能的鑒定[J]．園藝學(xué)報(bào)，2019，46(11)：2073-2081．SUN Q G，JIANG S H，F(xiàn)ANG H C，et al．Cloning ofMdNAC9 and functional of its regulation on flavonol synthesis[J]．Acta Hortic Sin，2019，46(11)：2073-2081．DOI:10.16420/j.issn.0513-353x.2018-1070.

[66]ZAKAR T，LACZKO-DOBOS H，TOTH T N，et al．Carotenoids assist in cyanobacterial photosystem II assembly and function[J]．Front Plant Sci，2016，7：295．DOI:10.3389/fpls.2016.00295.

[67]張印，萬勇，張婷，等．柑橘愈傷組織RNAi沉默CCD1基因?qū)ζ漕惡}卜素積累的影響[J]．園藝學(xué)報(bào)，2020，47(10)：1982-1990．ZHANG Y，WAN Y，ZHANG T，et al．RNAi-mediated suppression ofCCD1 gene impacts carotenoid accumulation in citrus calli[J]．Acta Hortic Sin，2020，47(10)：1982-1990．DOI:10.16420/j.issn.0513-353x.2019-1007.

[68]洪敏，石絲，何珊珊，等．VIGS誘導(dǎo)PSY基因沉默對枇杷果實(shí)類胡蘿卜素積累的影響[J]．分子植物育種，2018，16(6)：1792-1797．HONG M，SHI S，HE S S，et al．Effects of VIGS inducedPSYgene silencing on carotenoid accumulation in fruit ofEriobotryajaponicaLindl[J]．Mol Plant Breed，2018，16(6)：1792-1797．DOI:10.13271/j.mpb.016.001792.

[69]WEI T，DENG K J，LIU D Q，et al．Ectopic expression of DREB transcription factor，AtDREB1A，confers tolerance to drought in transgenicSalviamiltiorrhiza[J]．Plant Cell Physiol，2016，57(8)：1593-1609．DOI:10.1093/pcp/pcw084.

[70]NISHAWY E，SUN X H，EWAS M，et al．Over expression ofCitrusgrandisDREB gene in tomato affects fruit size and accumulation of primary metabolites[J]．Sci Hortic，2015，192：460-467．DOI:10.1016/j.scienta.2015.06.035.

[71]裴慶利，王春連，劉丕慶，等．分子標(biāo)記輔助選擇在水稻抗病蟲基因聚合上的應(yīng)用[J]．中國水稻科學(xué)，2011(2)：119-129．PEI Q L，WANG C L，LIU P Q，et al．Marker-assisted selection for pyramiding disease and insect resistance genes in rice[J]．Chin J Rice Sci，2011，25(2)：119-129．

[72]李君霞，代書桃，陳宇翔，等．MYB轉(zhuǎn)錄因子在植物抗旱基因工程中的應(yīng)用進(jìn)展[J]．河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2020，49(11)：1-9．LI J X，DAI S T，CHEN Y X，et al．Progress on application of MYB transcription factor in plant drought tolerance genetic engineering[J]．J Henan Agric Sci，2020，49(11)：1-9．DOI:10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.11.001.

[73]GUBLER F，KALLA R，ROBERTS J K，et al．Gibberellin-regulated expression of amybgene in barley aleurone cells：evidence for Myb transactivation of a high-pI alpha-amylase gene promoter[J]．Plant Cell，1995，7(11)：1879-1891．DOI:10.1105/tpc.7.11.1879.

[74]LI M J，QIAO Y，LI Y Q，et al．A R2R3-MYB transcription factor gene in common wheat (namely TaMYBsm1) involved in enhancement of drought tolerance in transgenicArabidopsis[J]．J Plant Res，2016，129(6)：1097-1107．DOI:10.1007/s10265-016-0857-5.

[75]QIN Y X，WANG M C，TIAN Y C，et al．Over-expression of TaMYB33 encoding a novel wheat MYB transcription factor increases salt and drought tolerance inArabidopsis[J]．Mol Biol Rep，2012，39(6)：7183-7192．DOI:10.1007/s11033-012-1550-y.

[76]ZHANG L，ZHAO G，XIA C，et al．A wheat R2R3-MYB gene，TaMYB30-B，improves drought stress tolerance in transgenicArabidopsis[J]．J Exp Bot，2012，63(16)：5873-5885．DOI:10.1093/jxb/ers237.

[77]YU Y T，WU Z，LU K，et al．Overexpression of the MYB37 transcription factor enhances abscisic acid sensitivity，and improves both drought tolerance and seed productivity inArabidopsisthaliana[J]．Plant Mol Biol，2016，90(3)：267-279．DOI:10.1007/s11103-015-0411-1.

[78]LI K，XING C，YAO Z，et al．PbrMYB21，a novel MYB protein ofPyrusbetulaefolia，functions in drought tolerance and modulates polyamine levels by regulating arginine decarboxylase gene[J]．Plant Biotechnol J，2017，15(9)：1186-1203．DOI:10.1111/pbi.12708.

[79]SHUKLA P S，GUPTA K，AGARWAL P，et al．Overexpression of a novel SbMYB15 fromSalicorniabrachiata confers salinity and dehydration tolerance by reduced oxidative damage and improved photosynthesis in transgenic tobacco[J]．Planta，2015，242(6)：1291-1308．DOI:10.1007/s00425-015-2366-5.

[80]GUO T L，WANG N，XUE Y C，et al．Overexpression of the RNA binding protein MhYTP1 in transgenic apple enhances drought tolerance and WUE by improving ABA level under drought condition[J]．Plant Sci，2019，280：397-407．DOI:10.1016/j.plantsci.2018.11.018.

[81]RUGINI E，DE PACE C．Olive breeding with classical and modern approaches Olive Tree Genome，2016：163-193．DOI:10.1007/978-3-319-48887-5_10.

[82]烏鳳章，王賀新，徐國輝，等．木本植物低溫脅迫生理及分子機(jī)制研究進(jìn)展[J]．林業(yè)科學(xué)，2015，51(7)：116-128．WU F Z，WANG H X，XU G H，et al．Research progress on the physiological and molecular mechanisms of woody plants under low temperature stress[J]．Sci Silvae Sin，2015，51(7)：116-128．

[83]劉肖．藍(lán)莓抗寒性、需冷量SNP分析與分子輔助育種研究[D]．北京：北京林業(yè)大學(xué)，2013．LIU X．Study on molecular marker-assisted breeding with single nucleotide polymorphisms linked to cold hardiness and chilling requirement in blueberry[D]．Beijing：Beijing Forestry University，2013．

[84]HUANG X S，WANG W，ZHANG Q，et al．A basic helix-loop-helix transcription factor，PtrbHLH，ofPoncirustrifoliataconfers cold tolerance and modulates peroxidase-mediated scavenging of hydrogen peroxide[J]．Plant Physiol，2013，162(2)：1178-1194．DOI:10.1104/pp.112.210740.

[85]LIU C Y，YAN M，HUANG X B, et al．Effects of NaCl stress on growth and ion homeostasis in pomegranate tissues[J]．Eur J Hortic Sci，2020，85(1)：42-50．DOI:10.17660/ejhs.2020/85.1.5.

[86]樊軍鋒，李嘉瑞，韓一凡，等．mtlD/gutD雙價(jià)耐鹽基因轉(zhuǎn)化秦美獼猴桃的研究[J]．西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2002，30(3)：53-58．FAN J F，LI J R，HAN Y F，et al．Studies on transformation ofmtlD/gutDsalt-resistant gene to Kiwifruit(Qin-mei)[J]．J Northwest Sci-Tech Univ Agric For，2002，30(3)：53-58． DOI:10.13207/j.cnki.jnwafu.2002.03.014.

[87]孫寧，孫建設(shè)，李增裕．蘋果砧木耐鹽突變體的篩選鑒定及RAPD分析[J]．河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，27(5)：37-40．SUN N，SUN J S，LI Z Y．Salt tolerant mutant screening and RAPD analysis studies on apple rootstock[J]．J Agric Univ Hebei，2004，27(5)：37-40．

[88]MOORE G A，GUY C L，TOZLU I，et al．Mapping quantitative trait loci for salt tolerance and cold tolerance inCitrusgrandis(L．) osb．×Poncirustrifoliata(L．) raf．hybrid populations[J]．Acta Hortic，2000(535)：37-46．DOI:10.17660/actahortic.2000.535.3.

[89]TOZLU I，GUY C L，MOORE G A．QTL analysis of Na+and Cl-accumulation related traits in an intergeneric BC1progeny ofCitrusandPoncirusunder saline and nonsaline environments[J]．Genome，1999，42(4)：692-705．DOI:10.1139/g99-003.

[90]ZHAO K，SHEN X，YUAN H，et al．Isolation and characterization of dehydration-responsive element-binding factor 2C (MsDREB2C) fromMalussieversiiRoem[J]．Plant Cell Physiol，2013，54(9)：1415-1430．DOI:10.1093/pcp/pct087.

[91]BOUAZIZ D，PIRRELLO J，BEN AMOR H，et al．Ectopic expression of dehydration responsive element binding proteins (StDREB2) confers higher tolerance to salt stress in potato[J]．Plant Physiol Biochem，2012，60：98-108．DOI:10.1016/j.plaphy.2012.07.029.

[92]YAISH M W，SUNKAR R，ZHENG Y，et al．A genome-wide identification of the miRNAome in response to salinity stress in date palm (PhoenixdactyliferaL．)[J]．Front Plant Sci，2015，6：946．DOI:10.3389/fpls.2015.00946.

[93]郭寶強(qiáng)．蘋果樹腐爛病防治技術(shù)要點(diǎn)[J]．農(nóng)業(yè)工程技術(shù)，2019，39(35)：48．GUO B Q．Key points of controlling apple tree rot disease[J]．Agric Eng Technol，2019，39(35)：48．DOI:10.16815/j.cnki.11-5436/s.2019.35.036.

[94]蔣迪，徐昌杰，陳大明，等．柑橘轉(zhuǎn)基因研究的現(xiàn)狀及展望[J]．果樹學(xué)報(bào)，2002，19(1)：48-52．JIANG D，XU C J，CHEN D M，et al．Status and prospect of research inCitrustransgene[J]．J Fruit Sci，2002，19(1)：48-52．DOI:10.13925/j.cnki.gsxb.2002.01.013.

[95]FITCH M M M，MANSHARDT R M，GONSALVES D，et al．Virus resistant papaya plants derived from tissues bombarded with the coat protein gene of papaya ringspot virus[J]．Bio/Technology，1992，10(11)：1466-1472．DOI:10.1038/nbt1192-1466.

[96]李亞新．首例商品化的轉(zhuǎn)基因果樹：番木瓜[J]．園藝學(xué)報(bào)，2000，27(1)：51．LI Y X．The first commercialized genetically modified fruit tree: papaya[J]．Acta Hortic Sin，2000，27(1)：51．

[97]SCORZA R,CORDTS J M,MANTE S,et al. Agrobacterium-media-ted transformation of plum (PrunusdomesticaL.) with the papaya ringspot virus coat protein gene[J]. HortScience, 1991,26(6): 786-786.

[99]ZHOU K，HU L，LI Y，et al．MdUGT88F1-mediated phloridzin biosynthesis regulates apple development andValsacanker resis-tance[J]．Plant Physiol，2019，180(4)：2290-2305．DOI:10.1104/pp.19.00494.

[100]LEGRAND V，DALMAYRAC S，LATCHé A，et al．Constitutive expression ofVr-EREgene in transformed grapevines confers enhanced resistance to eutypine，a toxin fromEutypalata[J]．Plant Sci，2003，164(5)：809-814．DOI:10.1016/S0168-9452(03)00069-4.

[101]FAN C H，PU N，WANG X P，et al．Agrobacterium-mediated genetic transformation of grapevine (VitisviniferaL．) with a novel stilbene synthase gene from Chinese wildVitispseudoreticulata[J]．Plant Cell Tissue Organ Cult，2008，92(2)：197-206．DOI:10.1007/s11240-007-9324-2.

[102]VIDAL J R，KIKKERT J R，DONZELLI B D，et al．Biolistic transformation of grapevine using minimal gene cassette technology[J]．Plant Cell Rep，2006，25(8)：807-814．DOI:10.1007/s00299-006-0132-7.

[103]VIDAL J R，KIKKERT J R，MALNOY M A，et al．Evaluation of transgenic ‘Chardonnay’ (Vitisvinifera) containing Magainin genes for resistance to crown gall and powdery mildew[J]．Transgenic Res，2006，15(1)：69-82．DOI:10.1007/s11248-005-4423-5.

[104]VIDAL J R，KIKKERT J R，WALLACE P G，et al．High-efficiency biolistic co-transformation and regeneration of ‘Chardonnay’ (VitisviniferaL．) containing npt-II and antimicrobial peptide genes[J]．Plant Cell Rep，2003，22(4)：252-260．DOI:10.1007/s00299-003-0682-x.

[105]SONG G Q，SINK K C，WALWORTH A E，et al．Engineering cherry rootstocks with resistance toPrunusnecrotic ring spot virus through RNAi-mediated silencing[J]．Plant Biotechnol J，2013，11(6)：702-708．DOI:10.1111/pbi.12060.

[106]MACHADO M A，CRISTOFANI-YALY M，BASTIANEL M．Breeding，genetic and genomic ofCitrusfor disease resistance[J]．Rev Bras Frutic，2011，33(spe1)：158-172．DOI:10.1590/s0100-29452011000500019.

[107]OMAR A A，MURATA M M，EL-SHAMY H A，et al．Enhanced resistance to citrus canker in transgenic mandarin expressing Xa21 from rice[J]．Transgenic Res，2018，27(2)：179-191．DOI:10.1007/s11248-018-0065-2.

[108]WON K，BASTIAANSE H，KIM Y K，et al．Genetic mapping of polygenic scab (Venturiapirina) resistance in an interspecific pear family[J]．Mol Breed，2014，34(4)：2179-2189．DOI:10.1007/s11032-014-0172-6.

[109]REYNOIRD J P，MOURGUES F，NORELLI J，et al．First evidence for improved resistance to fire blight in transgenic pear expressing the attacin E gene fromHyalophoracecropia[J]．Plant Sci，1999，149(1)：23-31．DOI:10.1016/S0168-9452(99)00139-9.

[110]李夢桃，李圣彥，汪海，等．轉(zhuǎn)cry2Ah-vp基因玉米的抗蟲性鑒定[J]．植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2020，47(1)：74-83．LI M T，LI S Y，WANG H，et al．Identification of insect resistance in the transgenic maize harboringcry2Ah-vpgene[J]．J Plant Prot，2020，47(1)：74-83．DOI:10.13802/j.cnki.zwbhxb.2020.2019043.

[111]JAMES D J,PASSEY A J,WEBSTER A D,et al. Transgenic apples and strawberries: advances in transformation,introduction of genes for insect resistance and field studies of tissue cultured plants[J]. Acta Hortic, 1993,336: 179-184. DOI: 10.17660/ActaHortic.1993.336.22.

[112]LING P，DUNCAN L W，DENG Z，et al．Inheritance ofCitrusnematode resistance and its linkage with molecular markers[J]．Theor Appl Genet，2000，100(7)：1010-1017．DOI:10.1007/s001220051382.

[113]YANG Z N，INGELBRECHT I L，LOUZADA E，et al．Agrobacterium-mediated transformation of the commercially important grapefruit cultivar Rio Red (CitrusparadisiMacf．)[J]．Plant Cell Rep，2000，19(12)：1203-1211．DOI:10.1007/s002990000257.

[115]CECCARELLI S，GRANDO S，MAATOUGUI M，et al．Plant breeding and climate changes[J]．J Agric Sci，2010，148(6)：627-637．DOI:10.1017/s0021859610000651.

[116]OLESEN J E，B?RGESEN C D，ELSGAARD L，et al．Changes in time of sowing，flowering and maturity of cereals in Europe under climate change[J]．Food Addit Contam：Part A，2012，29(10)：1527-1542．DOI:10.1080/19440049.2012.712060.

[117]CAMPOY J A，RUIZ D，EGEA J．Dormancy in temperate fruit trees in a global warming context：a review[J]．Sci Hortic，2011，130(2)：357-372．DOI:10.1016/j.scienta.2011.07.011.

[118]蔡榕碩，付迪．全球變暖背景下中國東部氣候變遷及其對物候的影響[J]．大氣科學(xué)，2018，42(4)：729-740．CAI R S，F(xiàn)U D．The pace of climate change and its impacts on phenology in eastern China[J]．Chin J Atmos Sci，2018，42(4)：729-740．

[119]鄭景云，葛全勝，郝志新，等．過去150年長三角地區(qū)的春季物候變化[J]．地理學(xué)報(bào)，2012，67(1)：45-52．ZHENG J Y，GE Q S，HAO Z X，et al．Changes of spring phenodate in Yangtze River Delta region in the past 150 years[J]．Acta Geogr Sin，2012，67(1)：45-52．

[120]TAO F L，YOKOZAWA M，XU Y L，et al．Climate changes and trends in phenology and yields of field crops in China，1981-2000[J]．Agric For Meteorol，2006，138(1/2/3/4)：82-92．DOI:10.1016/j.agrformet.2006.03.014.

[121]郭建平．氣候變化對中國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的影響研究進(jìn)展[J]．應(yīng)用氣象學(xué)報(bào)，2015，26(1)：1-11．GUO J P．Advances in impacts of climate change on agricultural production in China[J]．J Appl Meteorol Sci，2015，26(1)：1-11．

[122]劉玉潔，陳巧敏，葛全勝，等．氣候變化背景下1981—2010中國小麥物候變化時(shí)空分異[J]．中國科學(xué)：地球科學(xué)，2018，48(7)：888-898．LIU Y J，CHEN Q M，GE Q S，et al．Spatiotemporal differentiation of changes in wheat phenology in China under climate change from 1981 to 2010[J]．Sci Sin (Terrae)，2018，48(7)：888-898．

[123]LEGAVE J M，BLANKE M，CHRISTEN D，et al．A comprehensive overview of the spatial and temporal variability of apple bud dormancy release and blooming phenology in western Europe[J]．Int J Biometeorol，2013，57(2)：317-331．DOI:10.1007/s00484-012-0551-9.

[124]王力榮，朱更瑞，左覃元，等．短低溫桃和油桃育種進(jìn)展[J]．果樹科學(xué)，2000，17(1)：57-62．WANG L R，ZHU G R，ZUO Q Y，et al．Reviews of low chilling peach and nectarine breeding[J]．J Fruit Sci，2000，17(1)：57-62． DOI:10.13925/j.cnki.gsxb.2000.01.014.

[125]趙鋒，劉威生，劉寧，等．我國杏種質(zhì)資源及遺傳育種研究新進(jìn)展[J]．果樹學(xué)報(bào)，2005，22(6)：687-690. ZHAO F，LIU W S，LIU N，et al．Reviews of the apricot germplasm resources and genetic breeding in China[J]．J Fruit Sci，2005，22(6)：687-690.

[126]郁香荷，劉威生，劉寧，等．杏溫室栽培品種選擇及配套技術(shù)研究[J]．果樹學(xué)報(bào)，2004，21(1)：76-78．YU X H，LIU W S，LIU N，et al．Varieties and techniques of cultivation of apricot in greenhouse[J]．J Fruit Sci，2004，21(1)：76-78．

[127]KOSKI M H，MACQUEEN D，ASHMAN T L．Floral pigmentation has responded rapidly to global change in ozone and temperature[J]．Curr Biol，2020，30(22)：4425-4431．DOI:10.1016/j.cub.2020.08.077.

[128]VU J C V，NEWMAN Y C，ALLEN L H Jr，et al．Photosynthetic acclimation of young sweet orange trees to elevated growth CO2and temperature[J]．J Plant Physiol，2002，159(2)：147-157．DOI:10.1078/0176-1617-00689.

[129]侯新村，李憲利，高東升，等．CO2施肥對桃樹暗呼吸和光呼吸的影響[J]．果樹學(xué)報(bào)，2005，22(5)：466-469．HOU X C，LI X L，GAO D S，et al．Effect of CO2enrichment on respiration and photorespiration of peach trees[J]．J Fruit Sci，2005，22(5)：466-469．

[130]EL YAACOUBI A，EL JAOUHARI N，BOURIOUG M，et al．Potential vulnerability of moroccan apple orchard to climate change-induced phenological perturbations：effects on yields and fruit quality[J]．Int J Biometeorol，2020，64(3)：377-387．DOI:10.1007/s00484-019-01821-y.

[131]BIGARD A，BERHE D T，MAODDI E，et al．VitisviniferaL．fruit diversity to breed varieties anticipating climate changes[J]．Front Plant Sci，2018，9：455．DOI:10.3389/fpls.2018.00455.

[132]Al-KHAYRI J M,JAIN S M,JOHNSON D V. Advances in plant breeding strategies: fruits[M]. Spr Int Publing AG, 2018.

[133]GITEA M A,GITEA D,TIT D M,et al. Orchard management under the effects of climate change: implications for apple,plum,and almond growing[J]. Environ Sci Pollut Res, 2019,26: 9908-9915. DOI: 10.1007/s11356-019-04214-1.

[134]李明，劉聰利，齊希梁，等．中國甜櫻桃產(chǎn)業(yè)的品種現(xiàn)狀、需求特點(diǎn)與未來育種目標(biāo)[J]．落葉果樹，2019，51(3)：5-7．LI M，LIU C L，QI X L，et al．Current situation,demand characteristics and future breeding objectives of sweet cherry industry in China[J]．Deciduous Fruits，2019，51(3)：5-7．DOI:10.13855/j.cnki.lygs.2019.03.002.

[135]彭穎姝，高捍東，苑兆和．全球氣候變化對溫帶果樹的影響[J]．中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào)，2018，20(7)：1-10．PENG Y S，GAO H D，YUAN Z H．Impact of global climate change on temperate fruit tree[J]．J Agric Sci Technol，2018，20(7)：1-10．DOI:10.13304/j.nykjdb.2017.0463.

[136]束懷瑞．關(guān)于蘋果產(chǎn)業(yè)新動(dòng)能的幾點(diǎn)思考[J]．落葉果樹，2018，50(2)：1-2．SHU H R．Some thoughts on the new momentum of the apple industry[J]．Deciduous Fruits，2018，50(2)：1-2．DOI:10.13855/j.cnki.lygs.2018.02.001.

[137]馮軼，許雪峰，張新忠，等．蘋果矮化砧木致矮機(jī)理的研究進(jìn)展[J]．園藝學(xué)報(bào)，2018，45(9)：1633-1641．FENG Y，XU X F，ZHANG X Z，et al．Progress of dwarfing mechanism of apple rootstock[J]．Acta Hortic Sin，2018，45(9)：1633-1641．DOI:10.16420/j.issn.0513-353x.2018-0384.