盛 莉， 王 琳， 何周桃， 陳鄧林， 楊生輝， 李向璐， 李 賽

海南省人民醫(yī)院(海南醫(yī)學(xué)院附屬海南醫(yī)院)1.腫瘤內(nèi)一科；2.消化內(nèi)科，海南 海口 570311

肝硬化是各種慢性肝病發(fā)展的晚期，以肝彌漫性炎癥、彌漫性纖維化、假小葉、再生結(jié)節(jié)等為特征，酒精性肝硬化、肝炎后肝硬化是我國肝硬化發(fā)生的主要類型[1]。酒精性肝硬化的發(fā)病率呈逐年增加趨勢(shì)，且治療效果較差，其中，約15%酒精性肝硬化可發(fā)展為肝癌[2]。因此，盡早評(píng)估酒精性肝硬化的病情變化，采用合理的治療措施，對(duì)降低肝癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，改善患者預(yù)后具有重要意義。肌肉生長(zhǎng)抑素是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)超家族成員之一，其主要生物學(xué)功能為調(diào)節(jié)肌細(xì)胞的生長(zhǎng)與分化。有研究顯示，肝硬化患者血清肌肉生長(zhǎng)抑素水平升高與高氨血癥和蛋白質(zhì)合成受損有關(guān)，亦與肝硬化患者存活率降低密切相關(guān)[3]。有研究證實(shí)，終末期肝病患者血清肌肉生長(zhǎng)抑素水平明顯升高，其水平升高與患者的存活率較差密切相關(guān)[4]。多配體蛋白聚糖-1是跨膜硫酸乙酰肝素蛋白聚糖家族的成員，其可特異性結(jié)合一些有生物活性的小分子物質(zhì)，參與細(xì)胞生長(zhǎng)的調(diào)控、分化及遷移等[5]。王少強(qiáng)等[6]研究發(fā)現(xiàn)，多配體蛋白聚糖-1參與肺腺癌的發(fā)生、發(fā)展，可作為肺腺癌的獨(dú)立預(yù)后預(yù)測(cè)因子。本研究旨在探討血清肌肉生長(zhǎng)抑素、多配體蛋白聚糖-1對(duì)酒精性肝硬化患者肝癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)及其預(yù)后的評(píng)估價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取自2015年1月至2017年12月收治的159例酒精性肝硬化患者為研究對(duì)象。根據(jù)患者肝癌發(fā)生情況分為肝癌組(n=68)與非肝癌組(n=91)。另選取同期體檢60例健康志愿者納入健康組。肝癌組：男性41例，女性27例；年齡范圍32～75歲，年齡(58.69±10.32)歲；體質(zhì)量指數(shù)(body mass index， BMI)范圍20～26 kg/m2，BMI為(24.56±2.11)kg/m2。非肝癌組：男性56例，女性35例；年齡范圍30～79歲，年齡(57.14±9.03)歲；BMI范圍19～26 kg/m2，BMI為(23.81±1.75)kg/m2。健康組：男性30例，女性30例；年齡范圍28～75歲，年齡(55.92±8.46)歲；BMI范圍18～25 kg/m2，BMI為(23.54±1.91)kg/m2。3組受試者在年齡、性別等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合2010年修訂《酒精性肝病診療指南》中酒精性肝硬化的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]，肝癌組患者經(jīng)影像學(xué)和病理組織活檢等確診為肝癌且符合原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2017 年版)[8]；(2)入院前均未行肝介入或手術(shù)等治療；(3)臨床及隨訪資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)病毒性及其他類型的肝硬化患者；(2)合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤病史；(3)合并嚴(yán)重心肺腎等器官功能障礙者；(4)合并血液系統(tǒng)及自身免疫系統(tǒng)疾病者；(5)妊娠及哺乳期女性；(6)隨訪丟失或不配合者。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者或家屬均簽署知情同意書。

1.2 研究方法 患者均于入院24 h內(nèi)，空腹?fàn)顟B(tài)下抽取靜脈血5 ml，經(jīng)3 500 r/min離心15 min，取上清液，置于-80℃冰箱中保存待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清肌肉生長(zhǎng)抑素、多配體蛋白聚糖-1水平，試劑盒分別購自上海將來實(shí)業(yè)股份有限公司和上海瓦蘭生物科技有限公司。甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)檢測(cè)采用瑞士羅氏E601電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)及配套試劑。所有操作均根據(jù)試劑盒和相關(guān)儀器說明書進(jìn)行。采用門診、電話等方式對(duì)所有肝癌患者進(jìn)行2年的隨訪。隨訪時(shí)間從患者行手術(shù)、化療等治療措施的第2天開始，至患者死亡或隨訪時(shí)間到達(dá)為止，隨訪截至2019年12月30日。根據(jù)肝癌患者隨訪期間的生存情況，分為存活組(n=31)與死亡組(n=37)。

2 結(jié)果

2.1 3組受試者血清肌肉生長(zhǎng)抑素、多配體蛋白聚糖-1水平比較 健康組血清肌肉生長(zhǎng)抑素、多配體蛋白聚糖-1水平均低于非肝癌組和肝癌組，非肝癌組血清肌肉生長(zhǎng)抑素、多配體蛋白聚糖-1水平均低于肝癌組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組受試者血清肌肉生長(zhǎng)抑素、多配體蛋白聚糖-1水平比較

2.2 相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，肝癌患者血清肌肉生長(zhǎng)抑素與AFP呈正相關(guān)(r=0.495,P<0.05)，肝癌患者血清多配體蛋白聚糖-1與AFP呈正相關(guān)(r=0.433，P<0.05)。

2.3 不同預(yù)后患者血清肌肉生長(zhǎng)抑素、多配體蛋白聚糖-1水平比較 死亡組患者血清肌肉生長(zhǎng)抑素、多配體蛋白聚糖-1水平均高于存活組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同預(yù)后患者血清肌肉生長(zhǎng)抑素、多配體蛋白聚糖-1水平比較

2.4 影響酒精性肝硬化轉(zhuǎn)肝癌患者預(yù)后的多因素Logistic回歸分析 多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，血清AFP、肌肉生長(zhǎng)抑素、多配體蛋白聚糖-1是影響酒精性肝硬化轉(zhuǎn)肝癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表3。

表3 影響酒精性肝硬化轉(zhuǎn)肝癌患者預(yù)后的多因素Logistic回歸分析

2.5 血清肌肉生長(zhǎng)抑素、多配體蛋白聚糖-1水平評(píng)估酒精性肝硬化轉(zhuǎn)肝癌患者預(yù)后價(jià)值 ROC曲線顯示，血清肌肉生長(zhǎng)抑素預(yù)測(cè)患者預(yù)后的曲線下面積為0.804，敏感度和特異度分別為0.702、0.810；多配體蛋白聚糖-1預(yù)測(cè)患者預(yù)后的曲線下面積為0.829，敏感度和特異度分別為0.723、0.751；聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)患者預(yù)后的曲線下面積為0.910，敏感度和特異度分別為0.788、0.879。見表4、圖1。

圖1 血清肌肉生長(zhǎng)抑素、多配體蛋白聚糖-1預(yù)測(cè)酒精性肝硬化轉(zhuǎn)肝癌患者預(yù)后的ROC曲線

表4 血清肌肉生長(zhǎng)抑素、多配體蛋白聚糖-1預(yù)測(cè)酒精性肝硬化轉(zhuǎn)肝癌患者預(yù)后評(píng)估價(jià)值

3 討論

肝癌是臨床上較常見的惡性腫瘤之一，其具有發(fā)病率、病死率高及預(yù)后差等特點(diǎn)[9-10]。肝癌患者早期癥狀較為隱匿，大部分患者就診時(shí)已處于中晚期，臨床療效不佳，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和生存預(yù)后。肌肉生長(zhǎng)抑素是一種高度保守的蛋白質(zhì)，主要在骨骼肌中表達(dá)，并可通過結(jié)合其受體形成受體復(fù)合物，激活Smad 2/3/4復(fù)合物并調(diào)節(jié)其靶基因的表達(dá)水平，如MyoD和編碼其他成肌調(diào)節(jié)因子；亦可調(diào)節(jié)p38絲裂原激活蛋白(mitogen activated protein kinase，MAPK)、Erk1/2、Akt、Wnt和c-Jun N端激酶信號(hào)通路，參與各種生理過程。Wanda等[11]研究發(fā)現(xiàn)，肌肉生長(zhǎng)抑素通過c-Jun N端激酶激活肝星狀細(xì)胞，從而加重肝纖維化。肌肉生長(zhǎng)抑素在體外亦可誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系(A549)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenchymal transition，EMT)，EMT過程的異?；罨诙喾N腫瘤的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中至關(guān)重要[12-13]。有研究發(fā)現(xiàn)，肌肉生長(zhǎng)抑素在不同腫瘤組織中表達(dá)顯著增加[14]。Kim等[15]研究發(fā)現(xiàn)，肝癌患者血清肌肉生長(zhǎng)抑素水平明顯高于酒精性肝硬化患者，血清肌肉生長(zhǎng)抑素水平對(duì)預(yù)測(cè)酒精性肝硬化患者肝癌的發(fā)生有較高價(jià)值。多配體蛋白聚糖-1是細(xì)胞質(zhì)膜和細(xì)胞間質(zhì)的重要組成部分，是一種跨膜蛋白聚糖，其可將一系列細(xì)胞外配體與其共價(jià)連接的硫酸肝素側(cè)鏈結(jié)合，以介導(dǎo)細(xì)胞-外基質(zhì)、細(xì)胞-細(xì)胞粘附，維持上皮形態(tài)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性和完整性，影響腫瘤細(xì)胞遷移，并通過共受體調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移過程[16]。多配體蛋白聚糖-1亦是Wnt/p-catenin信號(hào)通路重要的調(diào)節(jié)分子，Wnt信號(hào)通路可影響肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cells，HSC)的活化，阻斷Wnt信號(hào)通路可抑制HSC的增殖，誘導(dǎo)其凋亡[17]。同時(shí)，多配體蛋白聚糖-1亦是在肝細(xì)胞中表達(dá)的蛋白聚糖，參與肝細(xì)胞的增殖、遷移和粘附。有研究顯示，肝硬化患者血清多配體蛋白聚糖-1的濃度明顯升高，其濃度增加與疾病的嚴(yán)重程度有關(guān)[18]。Nault等[19]研究顯示，血清多配體蛋白聚糖-1升高是酒精性肝硬化轉(zhuǎn)肝癌患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

本研究結(jié)果顯示，健康組血清肌肉生長(zhǎng)抑素、多配體蛋白聚糖-1水平均低于非肝癌組和肝癌組，非肝癌組血清肌肉生長(zhǎng)抑素、多配體蛋白聚糖-1水平均低于肝癌組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這提示血清肌肉生長(zhǎng)抑素、多配體蛋白聚糖-1可能參與酒精性肝硬化患者肝癌發(fā)生的病變過程。AFP是診斷肝癌的典型標(biāo)志物,并在肝癌病情評(píng)估中應(yīng)用廣泛。本研究中，相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血清肌肉生長(zhǎng)抑素、多配體蛋白聚糖-1分別與AFP呈正相關(guān)，說明其水平升高與患者肝癌發(fā)生具有明顯相關(guān)性。本研究結(jié)果顯示，酒精性肝硬化轉(zhuǎn)肝癌患者死亡組血清肌肉生長(zhǎng)抑素、多配體蛋白聚糖-1水平高于存活組，血清肌肉生長(zhǎng)抑素、多配體蛋白聚糖-1是影響酒精性肝硬化轉(zhuǎn)肝癌患者預(yù)后的重要危險(xiǎn)因素。這提示血清肌肉生長(zhǎng)抑素、多配體蛋白聚糖-1水平與肝癌患者的生存預(yù)后密切相關(guān)，其水平越高，患者死亡風(fēng)險(xiǎn)越大。本研究中，ROC曲線結(jié)果顯示，血清肌肉生長(zhǎng)抑素、多配體蛋白聚糖-1及兩項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)酒精性肝硬化轉(zhuǎn)肝癌患者預(yù)后的曲線下面積分別為0.804、0.829、0.910。這提示，血清肌肉生長(zhǎng)抑素、多配體蛋白聚糖-1聯(lián)合檢測(cè)對(duì)評(píng)估患者的預(yù)后有較高臨床價(jià)值，有利于指導(dǎo)患者臨床治療，改善預(yù)后。

綜上所述，血清肌肉生長(zhǎng)抑素、多配體蛋白聚糖-1升高與酒精性肝硬化患者肝癌的發(fā)生有關(guān)，其水平升高是影響肝癌患者預(yù)后的重要危險(xiǎn)因素，兩項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)可作為評(píng)估肝癌患者預(yù)后的輔助指標(biāo)。但本研究亦存在不足，納入樣本數(shù)較少，有待今后擴(kuò)大樣本量，進(jìn)一步進(jìn)行驗(yàn)證。