苑鳳婷，孫 斌

（黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動物科技學(xué)院，黑龍江大慶 163319）

GMA 全名叫做甲基丙烯酸縮水甘油酯，又稱甲基丙烯酸-2，3-環(huán)氧丙基酯，無色，呈透明狀，難融于水，易融于許多應(yīng)用范圍廣的有機(jī)溶劑中。優(yōu)良的性能使GMA 大量應(yīng)用于我們的衣食住行、生活起居中。這些化學(xué)物質(zhì)的使用不僅大大提高了材料的美觀程度，而且增加利用度和使用壽命。但是，相關(guān)問題也隨即產(chǎn)生，人類的健康水平在時代的發(fā)展上亮起了紅燈。各種惡性疾病的發(fā)生發(fā)展引起了人們的高度關(guān)注，科學(xué)研究證實(shí)，人類惡性疾病發(fā)生率增多與化學(xué)物質(zhì)的使用率加大有極大的關(guān)系。

然而究竟是什么化學(xué)物質(zhì)導(dǎo)致機(jī)體的高病變性？能否進(jìn)行人為控制，進(jìn)行定向?qū)嶒?yàn)? 有害物質(zhì)主要侵害機(jī)體的那些器官？機(jī)體對其的代謝能力是否能提高？將是此研究主要關(guān)注的問題。

對此我們設(shè)計(jì)了此次實(shí)驗(yàn)，GMA 致裸鼠細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化病理學(xué)診斷。具體實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為化學(xué)物質(zhì)GMA對動物機(jī)體的影響[1]。

本次實(shí)驗(yàn)涉及到實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的制作與染色觀察，雌雄二組的實(shí)驗(yàn)標(biāo)本要分別標(biāo)記觀察。得出實(shí)驗(yàn)結(jié)果后要總結(jié)實(shí)驗(yàn)過程，與對照組進(jìn)行比對，確保實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物

把裸鼠分為實(shí)驗(yàn)組與對照組，實(shí)驗(yàn)組分為雌雄2 組，共3 組，每組6 只，共18 只。選取SPF 級別21 ～30 d 的裸鼠，重15 ～19 g。

1.1.2 試驗(yàn)藥物及試劑

GMA、中性福爾馬林固定液、酒精、二甲苯、石蠟、蜂蠟、蘇木精染液、伊紅酒精染液、鹽酸酒精染液、甘油蛋白粘片劑、中性樹膠、卡諾固定液。

1.1.3 儀器耗材

蠟杯、酒精燈、解剖剪、培養(yǎng)皿、鑷子、單片刀片、包埋盒、染色缸 、載玻片、蓋玻片、顯微鏡、溫度計(jì)、水浴鍋。儀器設(shè)備見表1。

表1 儀器設(shè)備

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動物的接種

試驗(yàn)材料埋在后背和腋部皮下。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)動物變化

接種后的實(shí)驗(yàn)動物在SPF 環(huán)境下繼續(xù)飼養(yǎng)，2 ～3 周后腫塊就可以形成[2]。眼觀形態(tài)為菜花樣，邊緣高突，切面呈灰白色，粗顆粒狀，表面有壞死[3]。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)動物的剖檢

固定：由于裸鼠的個體較小，采取簡單固定。

器材：小剪刀，鑷子，手術(shù)刀

用頸椎脫臼法處死小鼠后放在小磁盤中，采取被側(cè)臥位。以恥骨前緣到劍狀軟骨做縱向切線，再以劍狀軟骨到腰兩側(cè)區(qū)剪開皮膚以及富強(qiáng).側(cè)向翻轉(zhuǎn)小鼠后，整個腹腔就都打開了。以劍狀軟骨至下頜剪開皮膚后，把皮向左右剝開，然后暴露胸腔，從胸腔兩側(cè)背部剪掉肋骨以及肌肉，整個胸腔器官暴漏出來。依此取出檢測所需標(biāo)本腦、心、肝、脾、肺、腎及腫塊組織。切取的組織塊要方便固定。

1.3 檢測方法

1.3.1 送檢材料

福爾馬林液固定組織標(biāo)本。

制備：組織塊長寬均為1.5 cm，厚為0.4 cm，用10%福爾馬林固定4 h。

1.3.2 制作切片

常規(guī)病理組織學(xué)制片，石蠟包埋，切片厚5 μm，H.E.染色，光鏡觀察。

1.3.3 圖像采集

光學(xué)顯微鏡觀測，用TD2000 真彩色病理圖像分析系統(tǒng)采集圖像。

1.4 檢測要求

對動物腫塊的組織來源及惡性程度進(jìn)行檢查；

對動物各臟器進(jìn)行病理組織學(xué)檢查；

提供詳細(xì)的病理看片記錄。

2 結(jié)果

圖1 3組裸鼠腦部組織切片（H-E 染色×100，A為雌性，B為雄性，C為對照組）

雌雄2 組無組間差異，腦部結(jié)構(gòu)清晰、完整，無明顯病變。大腦皮質(zhì)各層細(xì)胞排列整齊，分層較明顯；小腦白質(zhì)和灰質(zhì)分界清晰，普肯野細(xì)胞層結(jié)構(gòu)正常；無瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。

2.1.2 腎

雌雄2 組無組間差異；腎小球結(jié)構(gòu)完整，腎小管管腔無擴(kuò)張；腎間質(zhì)有出血現(xiàn)象，有少量炎性細(xì)胞浸潤。

2.1.3 肝

雌雄2 組無組間差異；肝臟結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞以中央靜脈為中心，向四周呈放射狀排列；肝細(xì)胞大小一致呈多邊型，核較大呈圓形或橢圓形，胞漿均勻染色。竇狀隙有少量淤血[4]。

2.1.4 脾臟

雌雄2 組無組間差異；脾臟結(jié)構(gòu)完整，其間有巨細(xì)胞（細(xì)胞體積大、胞漿豐富，核多 ，排列呈馬蹄形）和巨噬細(xì)胞浸潤，與瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移無關(guān)，可能與貧血、炎癥有關(guān)。

2.1.5 肺

雌雄2 組無組間差異；肺泡壁結(jié)構(gòu)基本完整，肺泡內(nèi)無異物滲出；除了有局部有淤血、水腫外，無其它病變。

2.2 腫塊組織的病理學(xué)檢測

邊緣組織出血、水腫，有炎癥細(xì)胞浸潤，瘤細(xì)胞與上皮組織交織、分界不清；腫塊惡性程度比較嚴(yán)重。

3 討論

制作完切片進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)雌雄2 組無組間差異，與對照組也無明顯差異。通過鏡下觀察，裸鼠各臟器組織除脾臟外，形態(tài)結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞排列整齊，沒有出現(xiàn)明顯的炎性細(xì)胞浸潤等異?，F(xiàn)象，沒有瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[5]。說明瘤細(xì)胞沒有侵害到相關(guān)臟器。

鏡下觀察脾臟結(jié)構(gòu)完整，出現(xiàn)大量的巨噬細(xì)胞的浸潤，病變明顯。實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，這可能與其它臟器組織和腫塊組織出血、貧血有關(guān)，而與瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移無關(guān)[6]。

腫塊組織低倍鏡下，與對照組差異明顯。細(xì)胞呈片狀、局灶性增生，局部有出血。高倍鏡下，細(xì)胞大小、深淺不一呈卵圓形、圓錐形或梭性，胞漿豐富、染色質(zhì)顆粒較粗、核仁明顯，可見明顯的核分裂相，退變的細(xì)胞呈水泡樣變性。間質(zhì)為紅染膠原纖維束、粗大均質(zhì)。雌雄2 組無組間差異，按照惡性程度評分標(biāo)準(zhǔn)，雌性為3.5 分，雄性為4 分。腫塊惡性程度比較嚴(yán)重。腫塊組織的瘤細(xì)胞分化不一致、呈片狀局灶性增生，核仁明顯、可見明顯的核分裂相。綜合分析，腫塊組織屬惡性上皮瘤。

4 結(jié)論

GMA 能夠?qū)е聶C(jī)體產(chǎn)生病變，且病變明顯，實(shí)驗(yàn)成立。