溫麗玲，梁佩賢，余玉婷，卓創(chuàng)近，招淑文

廣東省佛山市中心血站，廣東佛山 528000

獲得性免疫缺陷綜合征是由人類免疫缺陷病毒(HIV)感染所導致的以免疫系統(tǒng)功能缺陷為特征的致命性疾病。輸血是HIV傳播的重要途徑之一，采供血機構(gòu)開展HIV抗原抗體等檢測后，輸血安全性有了較大的提高，但由于酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測窗口期漏檢、病毒變異、試劑的靈敏度低、免疫靜默感染和人工失誤等原因[1]，仍然存在輸血傳播HIV的殘余風險。本血站在進行常規(guī)血液篩查時發(fā)現(xiàn)，某獻血者的ELISA檢測各項指標均為陰性，6人份混樣核酸檢測(NAT)結(jié)果為HIV-RNA反應(yīng)性，在征得獻血者的知情同意后，先后進行了4次追蹤檢測，免疫印跡法由早期的陰性、不確定到后期確認為HIV-1抗體陽性，最終確證該獻血者為1例低濃度HIV窗口期獻血者，現(xiàn)將該獻血者的追蹤檢測情況報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 無償獻血者，男，50歲，工人，離異。2018年4月22日在本站捐獻機采血小板2個治療量。采用真空管留取獻血者靜脈血3管，分別用于核酸檢測、ELISA檢測和單采血小板捐獻前的血型、血常規(guī)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測，用于核酸檢測的標本管4 h內(nèi)離心，保存于2～8 ℃冰箱。

1.2儀器與試劑 ELISA檢測采用全自動酶免加樣儀(Microlab STAR 8CH，瑞士Hamilton公司)；全自動酶免后處理器(FAME 24/20，瑞士Hammer公司)；核酸定性檢測采用Cobas′s 201核酸血液篩查系統(tǒng)(瑞士羅氏公司)；核酸定量檢測采用CAP/CTM 96全自動病毒載量檢測系統(tǒng)(瑞士羅氏公司)；免疫印跡法使用Tecan PROFIBLOTT48 非溫控全自動蛋白印跡儀；抗-HIV ELISA檢測試劑盒(北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司)；HIV-Ag/Ab ELISA檢測試劑盒(美國伯樂公司)；MPX v2.0-HIV(1+2型)PCR熒光法核酸檢測試劑盒(瑞士羅氏公司)；核酸定量檢測試劑Roche COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 test，version 2.0(瑞士羅氏公司)；HIV抗體確認采用HIV 1+2型抗體檢測試劑盒(免疫印跡法，新加坡安倍生物醫(yī)學亞太私人有限公司)。

1.3方法

1.3.1檢測策略 血液標本進行一遍國產(chǎn)試劑、一遍進口試劑的ELISA檢測，對于檢測結(jié)果為雙試劑陰性和單試劑反應(yīng)性的標本，進行瑞士羅氏MPX v2.0 HIV(1+2型)PCR熒光法核酸檢測，按照羅氏核酸檢測系統(tǒng)要求，為6人份混檢模式。對有反應(yīng)性的6混樣標本進行拆分，拆分后判斷標本有無反應(yīng)性；對于檢測雙試劑反應(yīng)性的標本送佛山市疾病預(yù)防控制中心進行確認試驗。

1.3.2獻血者HIV陽性確認 對ELISA雙試劑反應(yīng)性、ELISA雙試劑無反應(yīng)性或者ELISA單試劑反應(yīng)性而核酸定性有反應(yīng)性的標本送佛山市疾病預(yù)防控制中心進行HIV抗體確認試驗。

1.3.3獻血者追蹤檢測 在征得獻血者知情同意后,于初次獻血后每間隔一周隨訪追蹤和采集標本，并對每次采集的標本進行HIV抗原/抗體ELISA檢測和核酸的定性、定量檢測及HIV確證試驗。

1.3.4T淋巴細胞計數(shù)檢測 在HIV抗體確認檢測不確定時，對隨訪標本進行T淋巴細胞計數(shù)檢測。

2 結(jié) 果

獻血者追蹤檢測 對獻血者采取間隔一周隨訪，追蹤隨訪結(jié)果。獻血者從獻血初次檢測ELISA雙試劑陰性、NAT陽性、病毒載量為48 copy/mL，1周后隨訪，進口4代試劑HIV-Ag/Ab轉(zhuǎn)為陽性、病毒載量迅速上升至1.15×106copy/mL；2周后隨訪，國產(chǎn)4代試劑HIV Ag/Ab轉(zhuǎn)為陽性、病毒載量上升至>1.00×107copy/mL；3周后隨訪，病毒載量開始下降，免疫印跡法確證試驗出現(xiàn)了不確定條帶；4周后隨訪，免疫印跡法確證試驗判為陽性。見表1。

表1 獻血者追蹤檢測結(jié)果

3 討 論

本病例是本站自開展獻血者血液NAT工作以來，首次出現(xiàn)NAT陽性、HIV-Ag/Ab陰性的HIV感染窗口期獻血者，并連續(xù)對該獻血者進行的一次追蹤隨訪，最終免疫印跡法確證試驗為陽性。對獻血者進行了連續(xù)跟蹤隨訪，確認其為HIV窗口期感染者，此過程符合HIV感染者體內(nèi)病毒和抗體的變化規(guī)律；其感染標志物的檢出次序，NAT>進口4代ELISA>國產(chǎn)4代ELISA>免疫印跡法，也與研究報道一致[2]。有研究顯示，HIV抗體和抗原檢出時間最短為第19天，使用NAT能縮短至第3天[3]。NAT可將病毒抗體或抗原陰性的慢性攜帶者及病毒株發(fā)生變異的感染者檢測出來，除了大幅度縮短血液篩查的窗口期外，也彌補了血清學方法的不足，有效降低了經(jīng)輸血傳播HIV的殘余風險，提升了輸血的安全性[4-7]。

血站在檢測HIV抗原抗體的基礎(chǔ)上全面開展HIV-RNA檢測，4代ELISA試劑可以同時檢測HIV的抗原和抗體[8]，采供血機構(gòu)HIV感染標志物的檢測應(yīng)采用NAT和4代ELISA試劑同步檢測的模式，一方面可縮短ELISA檢測“窗口期”對血液安全的影響，另一方面還可避免因病毒滴度降低、病毒感染株核酸序列變異及標本采集、保存、運輸不當?shù)仍斐傻腘AT假陰性結(jié)果。表1顯示，在檢測本例標本時，進口4代HIV-Ag/Ab試劑的靈敏度更優(yōu)于國產(chǎn)試劑，有報道認為HIV-Ag/Ab 4代試劑中國產(chǎn)試劑與進口試劑比較，在批間精密度和最低檢出量上尚存在差距[9]。因此，采供血機構(gòu)在選用4代ELISA試劑時，要盡可能使用一次進口試劑，一次國產(chǎn)試劑，即選用“NAT+4代ELISA進口試劑+4代ELISA國產(chǎn)試劑”檢測模式可有效降低輸血傳播HIV殘余風險。

表1顯示，獻血后21 d追蹤隨訪，CD4+T淋巴細胞數(shù)量明顯減少，CD4+T淋巴細胞是HIV損害的主要靶細胞，HIV可引起CD4+T淋巴細胞進行性丟失與功能受限；CD8+T淋巴細胞出現(xiàn)反應(yīng)性升高，并發(fā)揮著重要的抑制病毒復(fù)制的作用[10]；CD4+/CD8+比值下降，當比值<0.20時，HIV感染者機會性感染率會明顯增加[11]，提示該獻血者應(yīng)該要盡快接受正規(guī)治療，進而防止疾病的2代傳播。

目前NAT技術(shù)已經(jīng)大大縮短了HIV檢測的窗口期，但仍然沒有完全消除窗口期的檢測方法。因此，血站在獻血前宣傳時，應(yīng)鼓勵有高危行為的獻血者延遲獻血，實施獻血后主動自我排除，即保密性棄血[12]，同時，也只有確保核酸檢測標本的質(zhì)量才能最大限度保證低濃度標本的檢出。