韋喜梅，廖安翠，陳 霞，黎劍威，黃玉淑，何鳳愿，韋建華，謝 婷

（1.河池市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西河池 547000；2.河池市水產(chǎn)畜牧科教站，廣西河池 547000）

片形吸蟲病是一種重要的但容易被忽視的人獸共患寄生蟲病，是目前影響經(jīng)濟(jì)較嚴(yán)重的家畜寄生蟲病之一[1]。該病能引起急性或慢性肝炎和膽管炎，并伴發(fā)全身性中毒和營(yíng)養(yǎng)障礙，危害相當(dāng)嚴(yán)重，可以引起幼畜和綿羊大批死亡[2]。河池市是廣西壯族自治區(qū)肉羊養(yǎng)殖大市，2018 年、2019 年全市肉羊飼養(yǎng)量分別為140 多萬(wàn)只和160 多萬(wàn)只，位居全區(qū)第一。為了解河池市山羊片形吸蟲的感染和流行情況，2018—2019 年連續(xù)2 年從河池市11 個(gè)縣（區(qū)）采集山羊血清，采用間接ELISA 檢測(cè)方法進(jìn)行片形吸蟲流行情況調(diào)查，以期為全市制定科學(xué)的山羊寄生蟲病防控措施提供參考。

1 材料與方法

1.1 目標(biāo)群

根據(jù)往年統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，河池市60%以上的山羊養(yǎng)殖場(chǎng)存欄在30～200 只范圍內(nèi)，因此本次調(diào)查將河池市轄區(qū)內(nèi)年存欄30 只以上的山羊養(yǎng)殖場(chǎng)作為目標(biāo)群。

1.2 抽樣策略

在完成春季重大動(dòng)物疫病集中免疫（3—5 月）的基礎(chǔ)上，遵循流行病學(xué)調(diào)查抽樣原則，采用先抽群體再抽個(gè)體的策略，按照預(yù)期流行率30%、置信水平95%、可接受誤差5%進(jìn)行抽樣。結(jié)合各縣（區(qū)）實(shí)際，隨機(jī)抽取存欄30 只以上的山羊養(yǎng)殖場(chǎng)1 085 個(gè)。對(duì)場(chǎng)群，按照存欄量的多少，采用系統(tǒng)抽樣法；存欄30～99 只的養(yǎng)殖場(chǎng)抽取5 份樣品，100～199 只的抽取10 份，200～499 只的抽取15 份，500 只以上的抽取20 份。

1.3 樣品采集

采集目標(biāo)群內(nèi)的成年羊常規(guī)全血樣品，每份5 mL。2018—2019 年，共采集7 632 份全血樣品，自然析出血清后于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 主要試劑

大片形吸蟲分泌排泄抗原（ES 抗原）、標(biāo)準(zhǔn)陰陽(yáng)性對(duì)照血清，均由廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院寄生蟲學(xué)教研室提供；兔抗山羊-lgG 酶標(biāo)二抗，購(gòu)自SeraCare Life Sciences 公司；ELISA 包被液、TMB 單組分顯色液、吐溫-20、PBS 磷酸鹽緩沖液、明膠，均購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司。

1.5 間接ELISA 檢測(cè)

參照Chauvin 等[3]的方法進(jìn)行血清檢測(cè)。用0.05 mol/L pH9.6 的碳酸鹽緩沖液，將ES 抗原稀釋至2.5 μg/mL，以100 μL/孔加入酶標(biāo)板，37 ℃包被2.5 h，4 ℃過(guò)夜；PBST 洗板后加入明膠封閉液，150 μL/孔，37 ℃恒溫箱孵育2 h；PBST 洗板后加入1:400 稀釋的待檢血清、陰陽(yáng)性對(duì)照血清各2孔，100 μL/孔，37 ℃孵育1 h；PBST 洗板后加入1:8 000 稀釋的兔抗山羊-lgG 酶標(biāo)二抗100 μL/孔，37 ℃孵育1 h；PBST 洗板后加入TMB 顯色液，顯色10 min 后加終止液終止反應(yīng)，讀取OD450值，計(jì)算血清樣品抗體陽(yáng)性率。

結(jié)果判定：抗體百分度=（待檢血清OD450平均值-標(biāo)準(zhǔn)陰性血清OD450平均值）÷（標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清OD450平均值-標(biāo)準(zhǔn)陰性血清OD450平均值）×100%?？贵w百分度小于10%為陰性，10%～30%為可疑，大于30%為陽(yáng)性。

2 結(jié)果

2.1 全市抽檢情況

2018 年，全市共抽檢103 個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)，抽檢率為74.64%，其中天峨縣、巴馬縣、大化縣抽檢覆蓋了所有鄉(xiāng)鎮(zhèn)，抽檢率為100%；2019 年，全市共抽檢86 個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)，抽檢率為62.32%，其中東蘭縣抽檢率為100%。詳見(jiàn)表1。

表1 2018—2019 年全市抽檢情況統(tǒng)計(jì)

2.2 全市感染情況

2018—2019 年，共對(duì)河池市11 個(gè)縣（區(qū)）1 085 個(gè)山羊養(yǎng)殖場(chǎng)的7 632 份血清進(jìn)行了檢測(cè)。從血清樣品檢測(cè)情況看，2018 年樣品總體陽(yáng)性率為44.34%，其中金城江區(qū)最高，為66.00%，宜州區(qū)最低，為35.08%；2019 年樣品總體陽(yáng)性率為49.81%，其中金城江區(qū)最高，為60.67%，巴馬縣最低，為21.43%。從養(yǎng)殖場(chǎng)檢測(cè)情況看，2018 年場(chǎng)總體陽(yáng)性率為79.72%，其中金城江區(qū)、羅城縣均為100%；2019 年場(chǎng)總體陽(yáng)性率為93.33%，其中金城江區(qū)、羅城縣、南丹縣、天峨縣、都安縣均為100%。詳見(jiàn)表2。

表2 2018—2019 年山羊感染情況統(tǒng)計(jì)

2.3 重復(fù)抽檢情況

2018—2019 年，共對(duì)39 個(gè)山羊養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行重復(fù)抽檢。2018 年檢測(cè)血清209 份，樣品總體陽(yáng)性率為44.02%；2019 年檢測(cè)血清394 份，總體陽(yáng)性率為50.51%。詳見(jiàn)表3。

表3 2018-2019 年相同養(yǎng)殖場(chǎng)感染情況統(tǒng)計(jì)

3 討論

大量研究顯示，廣西牛群中的片形吸蟲感染情況非常普遍?；艨琢值萚4]報(bào)道，廣西牛群片形吸蟲平均感染率達(dá)69.3%，其中河池市牛感染率為69.1%；王冬英等[5]報(bào)道，廣西水牛片形吸蟲感染率為60%～80%，黃牛為60%左右；陳芳玲等[6]報(bào)道，百色市牛片形吸蟲整體陽(yáng)性率為92.5%；王孝德等[7]報(bào)道，賀州市牛片形吸蟲陽(yáng)性率為86.75%～89.87%。但是，有關(guān)羊片形吸蟲感染情況卻鮮有報(bào)道。本調(diào)查采用間接ELISA 檢測(cè)方法，對(duì)河池市11 個(gè)縣（區(qū)）山羊片形吸蟲感染和流行情況進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)2018 年、2019 年的血清抗體總體陽(yáng)性率分別為44.34%、49.81%，場(chǎng)總體陽(yáng)性率分別為79.72%、93.33%，說(shuō)明河池市山羊片形吸蟲感染也很普遍。

河池市具有典型的喀斯特地貌，山地、丘陵多，所以絕大部分山羊養(yǎng)殖均為半圈養(yǎng)和全放養(yǎng)模式。此外，金城江、宜州、羅城、環(huán)江、東蘭、巴馬、都安7 個(gè)縣（區(qū)）均為山丘水網(wǎng)型的血吸蟲老疫區(qū)，特有的生態(tài)環(huán)境使得淡水螺分布廣泛，放牧的山羊更容易通過(guò)接觸囊蚴而受感染，這應(yīng)是造成這些地區(qū)片形吸蟲高陽(yáng)性率的原因之一。

本次調(diào)查對(duì)39 個(gè)山羊養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行了重復(fù)抽檢，雖然復(fù)檢比例較少，但是從調(diào)查結(jié)果來(lái)看，兩年內(nèi)這些養(yǎng)殖場(chǎng)的片形吸蟲血清抗體陽(yáng)性率均維持在一個(gè)較高的水平，且有略有加重趨勢(shì)，說(shuō)明養(yǎng)殖戶對(duì)于驅(qū)除山羊片形吸蟲的意識(shí)較薄弱。有些養(yǎng)殖戶對(duì)于驅(qū)蟲藥的使用僅僅局限于伊維菌素或阿維菌素，驅(qū)蟲缺少針對(duì)性，這也應(yīng)是造成該地片形吸蟲高陽(yáng)性率的原因之一。

金城江、巴馬、都安3 個(gè)縣（區(qū)）2019 年的總體樣品陽(yáng)性率分別比2018 年減少了18.67%、21.01%和16.66%，這可能與部分養(yǎng)殖戶開(kāi)始注重驅(qū)蟲有關(guān)。但是，金城江、都安2019 年場(chǎng)陽(yáng)性率仍均為100%，這應(yīng)當(dāng)是驅(qū)蟲不徹底的一種提示。

綜上，河池市山羊片形吸蟲感染很普遍，感染程度較嚴(yán)重，因此應(yīng)加強(qiáng)宣傳，提高養(yǎng)殖戶的驅(qū)蟲意識(shí)，并根據(jù)實(shí)際情況制定有效的防治措施。