劉宏,駱珅,江正強,楊紹青,劉軍,閆巧娟*

1(中國農(nóng)業(yè)大學 工學院,北京,100083)2(中國農(nóng)業(yè)大學 食品科學與營養(yǎng)工程學院,北京,100083)

瓜爾豆是一年生耐旱的豆科植物，主要用來生產(chǎn)瓜爾膠，廣泛應用于食品、石油等工業(yè)中[1]。瓜爾豆粕是瓜爾膠生產(chǎn)過程中的副產(chǎn)物，含有33%～45%的蛋白質(zhì)，且比大豆粕價格便宜，是一種開發(fā)潛力很大的植物蛋白資源，但由于抗營養(yǎng)因子的存在限制了其在食品等工業(yè)上的應用[2]。豆粕經(jīng)微生物發(fā)酵后，不僅可以去除部分抗營養(yǎng)因子，而且會產(chǎn)生小分子肽類、酚類、黃酮類活性成分，大大地提高其營養(yǎng)價值、活性成分和抗氧化等功能并改善其品質(zhì)[3-7]。盡管利用農(nóng)副產(chǎn)品作為發(fā)酵基質(zhì)進行固體發(fā)酵的研究很多，所用原料大多為大豆粕等大豆加工的副產(chǎn)品，其他農(nóng)副產(chǎn)品如瓜爾豆粕等的研究相對較少，未能充分發(fā)掘其價值。貝萊斯芽孢桿菌作為潛在的發(fā)酵食品發(fā)酵劑，能增加發(fā)酵食品的營養(yǎng)成分和功能活性[8]。CAO等[9]利用貝萊斯芽孢桿菌SN-1發(fā)酵產(chǎn)胞外多糖，可作為天然的抗氧化劑和益生菌應用于食品工業(yè)。LIU等[10]利用貝萊斯芽孢桿菌DP-2發(fā)酵豆粕，抗營養(yǎng)因子大豆抗原蛋白和β-伴大豆球蛋白分別降低了78%和43%，粗蛋白和可溶性蛋白分別增加了13.45%和12.53%。目前尚未見貝萊斯芽孢桿菌發(fā)酵瓜爾豆粕的研究報道。

血栓性疾病嚴重危害人類健康，發(fā)病率和死亡率居各種疾病之首。據(jù)統(tǒng)計，目前全世界每年約有1 700萬患者死于血栓性疾病，且仍呈高發(fā)態(tài)勢[11]。因此，高效溶栓藥物的研制備受關(guān)注。目前臨床上常用的尿激酶、鏈激酶和纖溶酶原激活劑等溶栓藥物存在副作用大、價格昂貴、半衰期短等缺點。相比之下，微生物源纖溶酶，具有可口服、安全、高效、持久和廉價等優(yōu)勢而備受青睞[12]。

本研究利用從中國傳統(tǒng)發(fā)酵食品豆豉中篩選的1株高產(chǎn)纖溶酶的貝萊斯芽孢桿菌CAU263對農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物進行固體發(fā)酵，研究其活性成分、溶栓及抗氧化活性，為瓜爾豆粕的合理利用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

瓜爾豆粕,北京瓜爾潤科技股份有限公司；凝血酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、牛纖維蛋白原、DPPH、Trolox(6-羥基-2,5,7,8-四甲基色烷-2-羧酸)、水溶性維生素E，美國Sigma-Aldrich公司；胰蛋白胨、酵母提取物、瓊脂粉,英國Oxoid公司；其他試劑如無說明均為國產(chǎn)分析純,北京化工廠。貝萊斯芽孢桿菌(Bacillusvelezensis)CAU263為本實驗室自行篩選,保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心,保藏號為CGMCC 20318。

1.2 儀器與設(shè)備

HZQ-F160全溫振蕩培養(yǎng)箱,太倉市豪城實驗儀器制造有限公司；TYAIB立式壓力蒸汽滅菌鍋,寧波久興醫(yī)療器械有限公司；LHS-500L恒溫恒濕培養(yǎng)箱,上海一恒科學儀器有限公司；GL-20B高速冷凍離心機,上海安亭科學儀器廠；LGJ-10真空冷凍干燥機,北京松源華興科技發(fā)展有限公司；TU—1800PC紫外可見分光光度計,北京普析通用儀器設(shè)備有限責任公司；DK-S24恒溫水浴鍋,上海精宏實驗設(shè)備有限公司；Thermo Multiskan FC酶標儀,美國Thermo Fisher Scientific公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 主要培養(yǎng)基

LB液體培養(yǎng)基(g/L)：酵母提取物5、蛋白胨10、NaCl 10,121 ℃滅菌20 min。

LB固體培養(yǎng)基(g/L)：酵母提取物5、蛋白胨10、NaCl 10、瓊脂20,121 ℃滅菌20 min。

固體發(fā)酵培養(yǎng)基：60 g磨碎過20目篩的農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物裝入1 L三角瓶中,加入60 mL蒸餾水浸潤12 h,121 ℃滅菌20 min。

1.3.2 種子液的制備

挑取保存于LB固體培養(yǎng)基上的貝萊斯芽孢桿菌CAU263單菌落接入裝液量為10 mL的50 mL三角瓶中,37 ℃搖床培養(yǎng)10 h獲得種子液。

1.3.3 固體發(fā)酵方法

將種子液稀釋1 000倍后按農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物質(zhì)量的5%混勻于120 mL無菌水[m(農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物)∶V(水)=1∶2]中,再接至固體發(fā)酵培養(yǎng)基中,在37 ℃、70%的恒溫恒濕培養(yǎng)箱中發(fā)酵48 h。將發(fā)酵結(jié)束的樣品真空冷凍干燥48 h后,磨碎過20目篩,獲得凍干粉樣品。

對照樣品(未發(fā)酵)：用3 mL無菌水代替種子液,其余步驟同上。

原料樣品：原料不經(jīng)任何處理。

1.3.4 單因素發(fā)酵條件優(yōu)化

以纖溶活性為評價指標,逐級優(yōu)化,考察固體發(fā)酵基質(zhì)農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物種類(瓜爾豆粕、豆餅粉、菜籽粕、黃豆粕、棉籽粕、花生粉餅、稻米粕、油茶籽粕、小麥麩皮、燕麥麩皮、玉米芯和豆殼)、蒸煮時間(25、30、35、40、45 min)、加水量[m(固體基質(zhì))∶V(水)=1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5)、接種量(3%、4%、5%、6%、7%,質(zhì)量分數(shù))、發(fā)酵時間(12、24、36、48、60 h)5個因素對纖溶酶產(chǎn)量的影響。

1.3.5 樣品提取液的制備

分別取10 g發(fā)酵、對照及原料凍干粉樣品,加入100 mL水于25 ℃、200 r/min下提取2 h,10 000 r/min離心10 min后,收集上清液待測,水提液樣品質(zhì)量濃度為100 mg/mL。

1.3.6 纖溶活性的測定

纖溶活性測定按照HUY等[13]的纖維蛋白降解法并稍作修改。將0.4 mL 0.72%纖維蛋白原溶液及1.4 mL 50 mmol/L硼砂緩沖液加入離心管中混勻后,放入37 ℃水浴鍋中預熱5 min。加入0.1 mL 20 U/mL凝血酶,混勻后在37 ℃水浴鍋中反應10 min。將樣品水提液稀釋至合適濃度后,加入0.1 mL樣品水提液稀釋液于上述試液中,混勻后在37 ℃下反應60 min,每隔20 min振蕩1次。反應結(jié)束時立刻加入500 μL 0.2 mol/L的三氯乙酸溶液終止反應,然后于10 000 r/min下離心10 min,取上清液在275 nm處測定吸光值。對照處理：先加入500 μL三氯乙酸溶液,后加入0.1 mL樣品水提液,其余步驟同上。纖溶活性的定義：在275 nm下,與樣品對照相比,樣品的吸光值1 min增加0.01所需的酶量相當于1個酶活力單位(FU)。按公式(1)計算：

(1)

式中,X：樣品測定液的纖溶活性,FU/mL,根據(jù)樣品水提液中折合瓜爾豆粕的質(zhì)量,將結(jié)果換算為FU/g DW；Ar：樣品測定液的吸光值；Ac：對照的吸光值；60：反應時間為60 min,以1 min計；0.1：反應的樣品體積是0.1 mL；N：稀釋倍數(shù)。

1.3.7 抗凝血活性的測定

按照WEI等[14]和劉夢潔等[15]的測定方法并稍作修改。將纖維蛋白原和凝血酶溶于pH 7.2，50 mmol/L Tris-HCl緩沖液(含0.12 mmol/L NaCl),配制成質(zhì)量分數(shù)為0.1%的纖維蛋白原溶液及4 U/mL的凝血酶溶液。分別吸取140 μL 0.1%纖維蛋白原、樣品水提液稀釋液加入96孔板中,放置酶標儀中于405 nm處測定吸光值,5 min后加入30 μL 4 U/mL凝血酶,于37 ℃反應10 min后于405 nm處測定吸光值。陽性對照為用40 μL 10 mg/mL的肝素鈉代替樣品,空白對照為用40 μL Tris-HCl緩沖液代替樣品,其余操作同上。樣品的抗凝血活性按公式(2)計算,并根據(jù)樣品質(zhì)量濃度與抗凝血活性的關(guān)系計算出樣品抗凝血活性IC50值(表示抗凝血活性抑制率為50%時所需的樣品質(zhì)量濃度)。計算公式如下：

(2)

式中,X：某質(zhì)量濃度下樣品測定液的抗凝血活性百分比；A1：反應10 min后空白對照的吸光度；A2：預熱5 min后空白對照的吸光度；A3：反應10 min后樣品測定的吸光度；A4：預熱5 min后樣品待測液的吸光度。

1.3.8 總酚含量的測定

采用福林酚法[16]。將樣品水提液稀釋10倍后用作待測液(10 mg/mL)。以沒食子酸作為標準品制作標準曲線,單位為mg GAE/mL,根據(jù)瓜爾豆粕凍干粉質(zhì)量,將結(jié)果換算為mg GAE/g DW(全文均以干重計)。

1.3.9 總異黃酮含量的測定

參照LI等[17]的方法并稍作修改。將樣品水提液稀釋10倍后用作待測液(10 mg/mL),將100 μL樣品待測液和6 μL質(zhì)量分數(shù)為5%的NaNO2溶液加入96孔板中混合均勻后反應6 min,再加入6 μL質(zhì)量分數(shù)為10%的Al(NO3)3溶液反應6 min,然后加入80 μL質(zhì)量分數(shù)為4%的NaOH溶液終止反應,加入8 μL體積分數(shù)為50%的乙醇將反應體系補足至200 μL,靜置15 min后在510 nm下測定吸光值。以蘆丁為標準品制作標準曲線,單位為mg RE/mL,根據(jù)瓜爾豆粕凍干粉質(zhì)量,將結(jié)果換算為mg RE/g DW(全文均以干重計)。

1.3.10 多肽含量的測定

采用鄰苯二甲醛法[18]。用Gly-Leu二肽作為標準品制作標準曲線,單位為mg/mL,然后根據(jù)瓜爾豆粕凍干粉質(zhì)量,將結(jié)果換算為mg/g DW(全文均以干重計)。

1.3.11 還原糖含量的測定

采用二硝基水楊酸法[19]。以葡萄糖制作標準曲線,還原糖含量根據(jù)瓜爾豆粕凍干粉質(zhì)量,結(jié)果以mg/g DW表示(全文均以干重計)。

1.3.12 DPPH自由基清除能力的測定

將DPPH自由基溶解于無水乙醇中,配制成0.1 mmol/L DPPH溶液。將40 μL的樣品測定液與200 μL的DPPH溶液在96孔板中混合均勻,在暗處避光反應30 min后于517 nm處測定吸光值A(chǔ)1。同時測定40 μL無水乙醇溶液與200 μL DPPH溶液混合后的吸光度A2(陰性對照),及40 μL樣品溶液與200 μL無水乙醇溶液混合后的吸光度A3(陽性對照)[20-21]。按公式(3)計算DPPH自由基清除率：

(3)

以抗氧化劑維生素E(Trolox, TE)為陽性對照，將樣品換算成TE當量來表示抗氧化能力，單位為μmol TE/g DW。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素優(yōu)化貝萊斯芽孢桿菌CAU263固體發(fā)酵產(chǎn)纖溶酶

2.1.1 農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物種類對貝萊斯芽孢桿菌CAU263固體發(fā)酵產(chǎn)纖溶酶的影響

如表1所示,瓜爾豆粕作為固體發(fā)酵基質(zhì)時,產(chǎn)纖溶酶的水平最高,纖溶活性達到117.7 FU/g DW,其次是黃豆粕和豆餅粉,纖溶活性分別達到111.3和110.1 FU/g DW。而以小麥麩皮作為固體發(fā)酵基質(zhì)時,無纖溶活性。因此,選擇瓜爾豆粕作為最適固體發(fā)酵基質(zhì)。

表1 不同種類農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物對貝萊斯芽孢桿菌CAU263固體發(fā)酵產(chǎn)纖溶酶的影響

近年來,人們對固體發(fā)酵產(chǎn)酶的興趣日益增加,最重要的原因之一是工農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物作為微生物生長基質(zhì)的低成本和適宜性[22]。目前,豆粉、稻米粕、玉米麩皮、葵花籽粕、麥麩等都可以作為有機氮源或碳源來進行固體發(fā)酵產(chǎn)酶和提升營養(yǎng)價值[23]。當固體基質(zhì)為麥麩時比米糠和綠豆皮產(chǎn)纖溶活性更高[24]。PAN等[25]以黃豆粕作為主要發(fā)酵基質(zhì),最終獲得纖溶酶產(chǎn)量達3 787 U/mL。BI等[26]同樣以黃豆粕作為發(fā)酵基質(zhì),經(jīng)過發(fā)酵條件優(yōu)化纖溶酶產(chǎn)量達到1 347.4 IU/g。瓜爾豆粕能促使貝萊斯芽孢桿菌CAU263分泌大量纖溶酶,可能是由于瓜爾豆粕含有高達50%的蛋白質(zhì),還有皂苷、酚類化合物、異黃酮和必需氨基酸組成,含有豐富全面的營養(yǎng)物質(zhì)[27],可有效促進貝萊斯芽孢桿菌CAU263的生長及代謝。因此選擇瓜爾豆粕作為貝萊斯芽孢桿菌CAU263固體發(fā)酵產(chǎn)纖溶酶的最適發(fā)酵基質(zhì)。

2.1.2 蒸煮時間對貝萊斯芽孢桿菌CAU263固體發(fā)酵瓜爾豆粕產(chǎn)纖溶酶的影響

不同蒸煮時間對貝萊斯芽孢桿菌CAU263固體發(fā)酵瓜爾豆粕產(chǎn)纖溶酶的影響如圖1所示。蒸煮時間為40 min時,纖溶活性最高，為192.9 FU/g,因此40 min為最適蒸煮時間。

圖1 不同蒸煮時間對貝萊斯芽孢桿菌CAU263固體發(fā)酵瓜爾豆粕產(chǎn)纖溶酶的影響

在瓜爾豆粕發(fā)酵過程中,不同瓜爾豆粕原料蒸煮時間使得其質(zhì)構(gòu)的變化程度不同,從而使蛋白質(zhì)的變性程度不同。蒸煮不足或過度,發(fā)酵過程中會因為蛋白質(zhì)未變性或過度變性而影響微生物的生長及纖溶酶的產(chǎn)生。而適宜的蒸煮時間會使蛋白質(zhì)適當變性從而能被微生物更充分的利用,達到促進微生物生長及產(chǎn)酶的目的[28]。

2.1.3 加水量對貝萊斯芽孢桿菌CAU263固體發(fā)酵瓜爾豆粕產(chǎn)纖溶酶的影響

加水量對貝萊斯芽孢桿菌CAU263固體發(fā)酵瓜爾豆粕產(chǎn)纖溶酶的影響如圖2所示。

圖2 不同加水量對貝萊斯芽孢桿菌CAU263固體發(fā)酵瓜爾豆粕產(chǎn)纖溶酶的影響

當m(瓜爾豆粕)∶V(水)=1∶2時,纖溶活性最高,達208.8 FU/g。適當?shù)募铀繒黾庸腆w發(fā)酵基質(zhì)中營養(yǎng)物質(zhì)的溶解性,促進微生物的生長[28]。當水分過多時,將會減少固體發(fā)酵基質(zhì)的孔隙率,降低氧的傳遞和散熱[29]。而水分過低時,固體發(fā)酵基質(zhì)膨脹度低,菌體生長代謝受到抑制,導致纖溶酶產(chǎn)量降低[30]。因此選擇m(瓜爾豆粕)∶V(水)=1∶2作為最適加水量。

2.1.4 接種量對貝萊斯芽孢桿菌CAU263固體發(fā)酵瓜爾豆粕產(chǎn)纖溶酶的影響

由圖3可知,接種量為5%時發(fā)酵瓜爾豆粕的纖溶活性最高,為230.2 FU/g。當接種量過少時,菌體生長慢且利用固體發(fā)酵基質(zhì)不足,從而所產(chǎn)的酶量較少；接種量過多時,培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)不能滿足菌體生長需要且容易形成白色菌膜等粘稠物質(zhì),不利于微生物的生長代謝,致使產(chǎn)酶量下降[31]。因此選擇5%為最適接種量。

圖3 不同接種量對貝萊斯芽孢桿菌CAU263固體發(fā)酵瓜爾豆粕產(chǎn)纖溶酶的影響

2.1.5 發(fā)酵時間對貝萊斯芽孢桿菌CAU263固體發(fā)酵瓜爾豆粕產(chǎn)纖溶酶的影響

發(fā)酵時間對貝萊斯芽孢桿菌CAU263固體發(fā)酵瓜爾豆粕產(chǎn)纖溶酶的影響結(jié)果如圖4所示。

圖4 不同發(fā)酵時間對貝萊斯芽孢桿菌CAU263固體發(fā)酵瓜爾豆粕產(chǎn)纖溶酶的影響

發(fā)酵瓜爾豆粕的纖溶活性在發(fā)酵12～48 h時持續(xù)增加,發(fā)酵48 h時達到最高,為231.6 FU/g。之后隨著發(fā)酵時間的增加,發(fā)酵瓜爾豆粕的纖溶活性逐漸下降。

在發(fā)酵前期,隨著發(fā)酵時間的延長,貝萊斯芽孢桿菌CAU263與瓜爾豆粕表面接觸的時間延長,其吸收利用原料中營養(yǎng)物質(zhì)產(chǎn)酶的時間就越長,發(fā)酵效果就越好。而發(fā)酵后期,隨著發(fā)酵時間延長,過量的細菌使培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)不能足量供應,甚至因缺氧等原因而受損或死亡。對纖溶酶的產(chǎn)生造成不利影響[32]。

2.2 貝萊斯芽孢桿菌CAU263固體發(fā)酵瓜爾豆粕活性成分評價

對最適產(chǎn)酶發(fā)酵條件下制備的發(fā)酵瓜爾豆粕活性成分(總酚、總異黃酮、還原糖和多肽)分析結(jié)果如表2所示。瓜爾豆粕原料及對照的總酚含量分別為2.4和1.9 mg GAE/g,發(fā)酵后總酚含量增加到9.4 mg GAE/g,比原料及對照分別提高了2.9和3.9倍。瓜爾豆粕原料的總異黃酮含量為11.5 mg RE/g,對照及發(fā)酵瓜爾豆粕的總黃酮含量分別為8.2和5.6 mg RE/g,比原料分別下降了28.7%和51.3%。原料、對照和發(fā)酵瓜爾豆粕的還原糖含量相近,分別為133.7、124.8和126.8 mg/g。瓜爾豆粕原料及對照的多肽含量相近,分別為22.1和22.6 mg/g,發(fā)酵瓜爾豆粕的多肽含量為189.5 mg/g,比原料及對照分別提高了7.6和7.4倍。

表2 貝萊斯芽孢桿菌CAU263固體發(fā)酵瓜爾豆粕活性成分變化

XU等[33]評估了不同發(fā)酵豆制品中的活性成分。結(jié)果表明,酚類物質(zhì)含量顯著增加,總異黃酮類物質(zhì)含量下降。在發(fā)酵過程中,微生物所產(chǎn)的蛋白酶會適度水解原料中的大分子蛋白質(zhì),從而產(chǎn)生較多的肽類物質(zhì),可能含有Tyr和Trp等具有較強抗氧化活性的氨基酸,再者發(fā)酵后產(chǎn)生了更多的酚類物質(zhì),這些抗氧化肽和酚類化合物可以提高發(fā)酵樣品的抗氧化能力,幫助保護身體免受自由基的攻擊,進一步降低許多慢性疾病的風險,如癌癥和心血管疾病[34]。

2.3 貝萊斯芽孢桿菌CAU263固體發(fā)酵瓜爾豆粕的功能活性

對最適產(chǎn)酶發(fā)酵條件下制備的發(fā)酵瓜爾豆粕功能活性(纖溶活性、抗凝血活性和DPPH自由基清除能力)分析結(jié)果如表3所示。從表3可知,瓜爾豆粕原料及對照無纖溶活性和抗凝血活性,發(fā)酵瓜爾豆粕的纖溶活性為231.3 FU/g,抗凝血活性IC50為0.28 mg/mL。瓜爾豆粕原料的DPPH自由基清除能力為22.1 μmol TE/g,對照樣品的DPPH自由基清除能力為13.1 μmol TE/g,與原料相比下降了41%,可能是受高溫高壓滅菌處理的影響,損失了部分抗氧化活性物質(zhì)。發(fā)酵后瓜爾豆粕的DPPH自由基清除能力為33.0 μmol TE/g,與原料及對照相比,分別提高了49.1%和152.7%。

表3 貝萊斯芽孢桿菌CAU263固體發(fā)酵瓜爾豆粕的功能活性

目前,國內(nèi)外學者在提高發(fā)酵豆制品的溶栓能力方面做出了很多努力,主要包括高產(chǎn)纖溶酶菌株的篩選及發(fā)酵條件的優(yōu)化。劉夢潔等[15]用枯草芽孢桿菌MJ-1制備了具有較高納豆激酶活性的黃豆納豆(90.2 FU/g),其提取物質(zhì)量濃度在3 mg/mL時的抗凝血活性可達91%。LEE等[35]通過篩選菌株得到1株高產(chǎn)纖溶酶的枯草芽孢桿菌,優(yōu)化發(fā)酵條件后使木豆納豆的纖溶活性達到53.0 FU/g,經(jīng)動物實驗發(fā)現(xiàn),木豆納豆的水提物顯著改善了自發(fā)性高血壓大鼠的收縮壓和舒張壓,具有改善心血管疾病的潛力。FENG等[32]同樣采用枯草芽孢桿菌發(fā)酵木豆,纖溶活性達53.0 FU/g。吳珊等[36]利用高產(chǎn)纖溶酶的解淀粉芽孢桿菌CAUNDJ118制備發(fā)酵豆腐,其纖溶活性達86.1 FU/g,抗凝血活性IC50為0.17 mg/mL。WEI等[14]采用解淀粉芽孢桿菌LSSE-62發(fā)酵鷹嘴豆,在最優(yōu)發(fā)酵條件下纖溶活性達39.2 FU/g,且發(fā)酵鷹嘴豆的抗凝血活性和抗氧化活性較未發(fā)酵均有提升。目前已報道的產(chǎn)纖溶酶的發(fā)酵豆制品主要采用枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌作為發(fā)酵劑,纖溶活性大多在20～80 FU/g,溶栓能力高低差異較大,本研究采用貝萊斯芽孢桿菌發(fā)酵瓜爾豆粕,不僅菌種新穎,且在纖溶活性上領(lǐng)先于目前報道的同類產(chǎn)品。另外,發(fā)酵瓜爾豆粕的抗氧化能力可能來自于含量較高的總酚和多肽類物質(zhì),XU等[33]測定了27種豆豉、豆醬、納豆等發(fā)酵豆制品的抗氧化活性發(fā)現(xiàn),不同類型的發(fā)酵豆制品的DPPH自由基清除能力不同,其中黃豆醬類的DPPH自由基清除能力在1.9～20.6 μmol TE/g之間,豆豉類在2.7～23.1 μmol TE/g,納豆類在2.6～4.5 μmol TE/g。本研究的發(fā)酵瓜爾豆粕具有較高的DPPH自由基清除能力。

3 結(jié)論

本文利用高產(chǎn)纖溶酶的菌株貝萊斯芽孢桿菌CAU263進行固體發(fā)酵,采用單因素試驗優(yōu)化得到了產(chǎn)纖溶酶的最適發(fā)酵條件,即固體發(fā)酵基質(zhì)為瓜爾豆粕、蒸煮時間40 min、加水量[m(瓜爾豆粕)∶V(水)]=1∶2、接種量5%、發(fā)酵時間48 h。在最適發(fā)酵條件下對其活性成分、溶栓及抗氧化活性進行分析。其中,發(fā)酵瓜爾豆粕的總酚及多肽含量比瓜爾豆粕原料和未發(fā)酵瓜爾豆粕顯著提高,同時,顯著提高了纖溶活性、抗凝血活性及抗氧化活性。結(jié)果表明,貝萊斯芽孢桿菌CAU263固體發(fā)酵瓜爾豆粕顯著提高瓜爾豆粕的營養(yǎng)價值和功能活性。