陳 思，杜紅方，陳書琴，王 敏，謝德歡，馮新雨，楊 博，郭玉光*

（1.廣東溢多利生物科技股份有限公司，廣東珠海 519060；2.華南理工大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，廣東廣州 510000）

博落回為罌粟科植物博落回的提取物，功能性成分為血根堿和白屈菜紅堿，具有抑制病原微生物遺傳物質(zhì)的合成和轉(zhuǎn)錄，改變病原微生物細(xì)胞膜通透性等類似抗生素的功能[1]。博落回能夠降低空腸黏膜中誘導(dǎo)型一氧化氮合酶表達(dá)水平，起到抗炎效果[2]；同時能夠增強血清淋巴細(xì)胞的功能進(jìn)而提高機體免疫水平[3]；血根堿能夠顯著增加腸道內(nèi)短鏈脂肪酸含量，而脂肪酸可以降低小腸pH，改善腸道內(nèi)環(huán)境[4]。三丁酸甘油酯在脂肪酶的作用下水解為丁酸和甘油，在腸道修復(fù)和增強腸道功能方面受到關(guān)注。據(jù)報道，三丁酸甘油酯能夠增強腸道ZO-1、claudin-1[5]和occludin[6]基因表達(dá)，加強腸道細(xì)胞間的緊密連接，促進(jìn)腸道黏蛋白分泌[7]，增強腸道免疫屏障作用；同時調(diào)控腸道菌群分布，增加十二指腸和盲腸段有益乳酸菌數(shù)量[8]，降低后腸大腸桿菌和沙門氏菌數(shù)量[9]。

近年來，關(guān)于博落回、三丁酸甘油酯在畜禽養(yǎng)殖中的研究較多，但未見兩者聯(lián)合使用替代抗生素的黃羽肉雞養(yǎng)殖報道。本試驗旨在研究博落回、三丁酸甘油酯聯(lián)合使用替代抗生素對黃羽肉雞生長性能、血清生化指標(biāo)和腸道形態(tài)的影響，為現(xiàn)實替抗提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 抗生素為亞甲基水楊酸桿菌肽，含量為15%，由綠康生化股份有限公司提供。博落回購自湖南美可達(dá)公司，血根堿含量為0.15%。三丁酸甘油酯產(chǎn)品取自廣東溢多利生物科技股份有限公司，其中三丁酸甘油酯含量為35%，其余部分為載體，成分為次粉。

1.2 試驗設(shè)計 挑選健壯、活潑、均勻1 日齡黃羽肉仔雞1 600 羽，隨機分為5 個處理組，每個處理8 個重復(fù)，每重復(fù)40 羽。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，抗生素組在基礎(chǔ)飼糧中添加亞甲基水楊酸桿菌肽 200 g/t，試驗組分別在在基礎(chǔ)飼糧添加博落回400 g/t（博落回組）、三丁酸甘油酯產(chǎn)品1 000 g/t（三丁酸組）、博落回400 g/t+三丁酸甘油酯1 000 g/t（博落回+三丁酸組）。試驗期56 d，分為1～28、29～56 日齡。試驗飼糧組成及營養(yǎng)成分見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗在廣東溢多利生物科技股份有限公司乾務(wù)動物試驗基地的雞舍進(jìn)行。試驗全期采用籠養(yǎng)，自由采食和飲水。進(jìn)雞雛前1 周，將雞舍及設(shè)備進(jìn)行嚴(yán)格清洗和消毒。采用紅外燈和風(fēng)機控溫，第1 周舍溫控制在31～33℃，第2 周舍溫29.5℃，第3 周開始脫溫，每日于14:00 點記錄雞舍溫度。雞舍相對濕度60%～65%。按常規(guī)免疫程序接種雞群，即1 日齡注射新城疫滅活疫苗和新支二聯(lián)苗、法氏囊疫苗滴口，14日齡注射禽流感疫苗。

1.4 測定指標(biāo)及方法

1.4.1 生長性能 試驗期間嚴(yán)格記錄日投料量、余料量、死淘數(shù)。分別在試驗第29 和57 天08:00 以重復(fù)為單位空腹稱重（禁食12 h，僅供飲水），同時稱量各重復(fù)組剩余飼料重。每日觀察雞只健康狀況，淘汰病弱雞，統(tǒng)計死亡率。計算各試驗組各個階段的平均日采食量（ADFΙ）、平均日增重（ADG）、耗料增重比（F/G）和死亡率。

1.4.2 血清生化指標(biāo) 在試驗第57 天，從每個重復(fù)組隨機選取1只接近平均體重、健康的公雞靜脈采血樣10 mL，4 000 r/min 離心15 min，分離血清于2 mL EP 管中。采用放射免疫法測定三碘甲狀腺原氨酸（T3）和甲狀腺素（T4），使用日立7 600 全自動生化儀檢測總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）和尿素氮（UΝ）。采用免疫球蛋白酶聯(lián)免疫反應(yīng)試劑盒檢測血清免疫球蛋白G（ΙgG）和免疫球蛋白M（ΙgM）。試劑盒由南京建成生物工程研究所提供，具體操作按試劑盒說明進(jìn)行。

1.4.3 腸道形態(tài) 在試驗第57 天，從每個重復(fù)組隨機選取1 只接近平均體重、健康的公雞處死后解剖取十二指腸、空腸、回腸統(tǒng)一位置的腸道片段2 cm，取出后用生理鹽水反復(fù)沖洗，將沖洗干凈的腸段貯存于10%中性福爾馬林緩沖液中固定，24 h 后采用蘇木精-伊紅（HE）染色，制成石蠟切片，在每個切片上選取5 個典型視野（絨毛完整且走向平直），分析計算絨毛高度（VH）、隱窩深度（CD）和絨毛高度/隱窩深度（VH/CD）。

1.5 統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)經(jīng)過Excel 處理后，利用ΙBM SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析（One-Way AΝOVA），差異顯著時采用Duncan's 方法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P＜0.05 為差異顯著，0.05＜P＜0.1 為存在差異趨勢。

2 結(jié)果

2.1 博落回與三丁酸甘油酯聯(lián)用替代抗生素對不同階段黃羽肉雞生長性能的影響 如表2 所示，1～28 日齡，與對照組相比，博落回+三丁酸組FBW 和ADG 提高（P＜0.05），博落回+三丁酸組、抗生素組和博落回組F/G 降低（P＜0.05）；與抗生素組相比，博落回組和三丁酸甘油酯組FBW、ADG 和F/G 均無顯著差異。

表2 博落回和三丁酸甘油酯對黃羽肉雞生長性能的影響

29～56 日齡，與抗生素組相比，博落回+三丁酸組的FBW 和ADG 提高（P＜0.05），F(xiàn)/G 和ADFΙ 差異不顯著；與對照組相比，博落回+三丁酸組FBW 和ADG提高（P＜0.05），F(xiàn)/G 和 ADFΙ 差異不顯著；除博落回+三丁酸組外，其他組FBW、ADG 和F/G 均不顯著。

1～56 日齡，博落回+三丁酸組的ADG、FBW 和F/G 與抗生素組均無顯著差異，均優(yōu)于對照組（P＜0.05）；博落回組、三丁酸組ADG、F/G 與抗生素組無顯著差異。

2.2 博落回與三丁酸甘油酯聯(lián)用替代抗生素對黃羽肉雞血液生化指標(biāo)的影響 如表3 所示，與抗生素組相比，三丁酸組血清中TP、GLB 含量提高（P＜0.05）；博落回組、三丁酸組、博落回+三丁酸組和對照組血清UΝ降低（P＜0.05），博落回組和博落回+三丁酸組ΙgG 提高（P＜0.05）。與對照組相比，博落回+三丁酸組T3含量提高（P＜0.05）。

表3 博落回和三丁酸甘油酯對黃羽肉雞血清生化指標(biāo)的影響

2.3 博落回與三丁酸甘油酯聯(lián)用替代抗生素對黃羽肉雞腸道形態(tài)的影響 由圖1 可知，抗生素組和博落回+三丁酸組十二指腸絨毛細(xì)長，絨毛間間距明顯，無明顯細(xì)胞脫落和絨毛損傷；對照組空腸絨毛前端結(jié)構(gòu)斷裂，絨毛變短，腫脹增粗；抗生素組、三丁酸組和博落回+三丁酸組回腸黏膜結(jié)構(gòu)完整，層次清晰，腸絨毛排列整齊，絨毛間及隱窩之間界限分明，腸道絨毛結(jié)構(gòu)優(yōu)于其他組。

圖1 博落回和三丁酸甘油酯對黃羽肉雞腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

由表4 可知，與對照組相比，抗生素組和博落回+三丁酸組的十二指腸VH 和VH/CD、空腸VH 升高（P＜0.05）；博落回+三丁酸組空腸VH/CD 升高（P＜0.05）；三丁酸組十二指腸VH 升高（P＜0.05）。與抗生素組相比，博落回組十二指腸VH 和空腸VH/CD 下降（P＜0.05）。

表4 博落回和三丁酸甘油酯對黃羽肉雞腸道形態(tài)的影響

3 討論

3.1 博落回和三丁酸甘油酯對黃羽肉雞生產(chǎn)性能的影響飼料中添加博落回和三丁酸甘油酯能夠替代抗生素起到促生長效果，如滿意等[10]和胡麗貴等[11]研究表明，添加博落回提取物對斷奶仔豬和黃羽肉雞均具有促生長效果，且效果優(yōu)于抗生素組（土霉素、抗敵素和黃霉素）。博落回的促生長效果的機制為血根堿能夠抑制膽堿酯酶活性、刺激唾液分泌等作用，提高動物采食量[12-13]；博落回具有抗炎作用，能夠通過介導(dǎo)腸組織黏膜相關(guān)信號通路，修復(fù)和改善黏膜和絨毛，促進(jìn)腸道健康，促進(jìn)腸上皮細(xì)胞的增殖和分化，從而提高對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收[14-15]。朱榮生等[16]研究發(fā)現(xiàn)，添加三丁酸甘油酯能夠提高斷奶仔豬的生產(chǎn)性能，且促生長效果優(yōu)于添加桿菌肽鋅的抗生素組。其作用機理可能是其產(chǎn)物丁酸在腸道中的促進(jìn)黏膜成長和益菌效果[17]。與過往研究不同，本研究中，添加博落回和三丁酸甘油酯的生長性能較對照組有所提高，但均未達(dá)到抗生素組水平，單一添加博落回或三丁酸甘油酯未達(dá)到理想的替代抗生素作用。

本研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，博落回和三丁酸甘油酯聯(lián)用產(chǎn)生的促生長效果優(yōu)于單一添加博落回或三丁酸甘油酯，并略優(yōu)于抗生素組。其原因可能是博落回和三丁甘油酯聯(lián)用時，表現(xiàn)在促腸道生長、抗炎和益菌上有協(xié)同作用。

3.2 博落回和三丁酸甘油酯對黃羽肉雞血清生化指標(biāo)的影響 血清生化指標(biāo)是反映機體生理狀態(tài)的重要指標(biāo)，血清TP 和UΝ 反映機體對飼料蛋白的吸收和利用效率，TP 高、BUΝ 低說明對蛋白質(zhì)的合成和利用率高，血清GLB 是衡量機體抗應(yīng)激能力的重要指標(biāo)，其數(shù)值與抗應(yīng)激能力呈正相關(guān)[18]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，血清TP 和GLB 在一定范圍內(nèi)提升會提高機體的抗病力，增強機體免疫力[19]。ΙgG、ΙgM 是由骨髓來源B 淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的2 種免疫球蛋白，能夠參與機體體液免疫，其在血清中的含量能夠反映出機體免疫力的強弱[20]。

朱榮生等[18]研究表明，飼糧中添加0.2% 三丁酸甘油酯和核苷酸提高了仔豬血清中TP 和ΙgA、ΙgG、ΙgM 含量。張勇等[21]研究表明，0.1%三丁酸甘油酯或牛至油對斷奶仔豬血清TP、ΙgA、ΙgG、ΙgM 均無影響。本研究中，飼糧中添加1%三丁酸甘油酯提高了肉雞56日齡血清TP 含量，表明三丁酸甘油酯可以調(diào)節(jié)機體內(nèi)蛋白質(zhì)的代謝，增強機體免疫能力。胡貴麗等[11]研究表明，飼糧中添加10、20 mg/kg 博落回能夠可顯著降低肉雞血清UΝ 含量，與抗生素組效果相同。本研究中博落回和三丁酸甘油酯的聯(lián)用降低了血清中UΝ 含量，這表明博落回和三丁酸甘油酯聯(lián)用能夠提高機體對飼料蛋白質(zhì)的消化吸收和利用，進(jìn)而減少血液中的氮沉積。

3.3 博落回和三丁酸甘油酯對黃羽肉雞腸道黏膜形態(tài)的影響 小腸作為機體消化、吸收的主要場所，常常作為衡量動物腸道健康的重要標(biāo)識，而小腸黏膜形態(tài)的完整性是保證動物消化吸收功能的基礎(chǔ)。小腸絨毛高度越高，小腸的吸收面積就越大，隱窩越深，消化吸收功能就越低，VH/CD 越大，消化吸收能力就越強[22]。Chen等[23]研究表明，仔豬飼糧中添加50 mg/kg 的博落回（血根堿濃度＞1.5%）能夠顯著降低空腸CD，提高回腸VH，提高VH/CD。彭麗莎等[24]研究表明，飼糧中添加0.2%三丁酸甘油酯使肉雞十二指腸和空腸VH 顯著增長，CD 有降低趨勢。類似的，Panda 等[25]研究表明，添加0.2%～0.6% 丁酸鹽能夠顯著改善十二指腸的腸道形態(tài)。三丁酸甘油酯改善腸道形態(tài)的機理可能是能夠通過促進(jìn)腸黏膜ZOs 基因的表達(dá)，維持細(xì)胞間的緊密連接[26]。本試驗中，博落回組和博落回+三丁酸甘油酯組的十二指腸VH 顯著提高，博落回+三丁酸甘油酯組十二指腸、空腸VH/CD 顯著高于對照組，與抗生素組無顯著差異。說明三丁酸甘油酯和博落回能夠有效替代亞甲基水楊酸桿菌肽，改善腸道形態(tài)，促進(jìn)腸道健康。

4 結(jié)論

本試驗結(jié)果顯示，飼糧添加博落回和三丁酸甘油酯能提高黃羽肉雞生長性能，且前期效果優(yōu)于后期；飼糧添加博落回和三丁酸甘油酯能夠增強機體免疫功能、顯著改善空腸腸道形態(tài)，其作用效果與亞甲基水楊酸桿菌肽相當(dāng)。