韓德強，王偉明，劉 彥，付瑋辰，麻繼超

(黑龍江省中醫(yī)藥科學院·黑龍江 哈爾濱 150036)

芪參固表口服液由黃芪、防風、太子參等中藥組成，具有益氣養(yǎng)陰、清熱固表、生津止汗的功效，用于氣陰兩虛型虛人感冒，見心悸氣短，或自汗、惡風乏力等癥者，對免疫功能低下所致的反復感冒具有較好的預防作用，為本院臨床經(jīng)驗方。本方為傳統(tǒng)工藝配制的口服液制劑，為了控制其質量，課題組對口服液的質量標準進行了研究，擬將其開發(fā)成院內制劑，建立防風薄層色譜鑒別方法及黃芪定量方法。結果顯示，方法簡單可操作性強，專屬性和重復性良好，可以控制制劑質量。報道如下。

1 實驗材料

1.1 試藥 芪參固表口服液(批號：200201、200202、200203)：黑龍江省中醫(yī)藥科學院制劑室提供；黃芪甲苷(批號：110781-201717)、防風(批號：120947-201810)、5-O-甲基維斯阿米醇苷(批號111523-201811)：中國食品藥品檢定研究院。乙腈(色譜純)：德國默克；其他試劑均為國產(chǎn)分析純，水為杭州娃哈哈集團有限公司純凈水。

1.2 儀器 安捷倫1100高壓液相色譜儀：美國安捷倫；奧泰2000ES蒸發(fā)光檢測器；BT25S型十萬分之一電子天平：德國賽多利斯；KQ-700VDB雙頻數(shù)控超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；HHS-21-6電熱恒溫水浴鍋：上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠。

2 方法與結果

2.1 防風的薄層色譜鑒別 取本品20 mL，用乙醚20 mL去脂，棄去乙醚液，用水飽和正丁醇20 mL提取，取正丁醇液，用氨試液30 mL洗滌，分取正丁醇液，濃縮至干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液[1]689。取防風對照藥材1 g，加丙酮20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為對照藥材溶液[1]689。再取5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品，加乙醇制成每l mL含l mg的對照品溶液。吸取上述4 種溶液，按(通則0502)試驗，分別于硅膠G薄層板上點樣5 μL，展開劑為三氯甲烷-甲醇(4∶1)，展開晾干后在紫外燈(254 nm)下檢視。結果：供試品色譜中可檢出防風、5-O-甲基維斯阿米醇苷熒光斑點，陰性樣品無干擾。見圖1。

2.2 黃芪甲苷含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：乙腈-水(32∶68)[1]302；蒸發(fā)光檢測器；流速：1.0 mL/min.

1～3.供試品；4.防風；5.5-O-甲基維斯阿米醇苷；6.陰性樣品圖1 防風薄層色譜圖

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取黃芪甲苷對照品12.64 mg，以甲醇溶解并定容至25 mL量瓶中，搖勻，即得(每1 mL中含黃芪甲苷 0.5 056 mg)。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品合劑25 mL，用水飽和正丁醇振搖提取4次，每次40 mL，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2 次，每次40 mL，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水5 mL使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內徑為1.5 cm，柱高為12 cm)，以水50 mL洗脫，棄去水液，再用40%乙醇30 mL洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇80 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得[1]303。

2.2.4 陰性對照品溶液制備 取不含黃芪陰性樣品，按上述方法制成黃芪陰性對照溶液。

2.2.5 專屬性 吸取上述3 種溶液，依次進樣，結果陰性色譜圖在黃芪甲苷色譜的保留時間未見吸收峰。見圖2。

圖2 芪參固表口服液的HPLC色譜圖(A.黃芪甲苷)

2.2.6 線性關系考察 將2.2.2項下配制的對照品溶液制成濃度分別為0.10 112、0.20 224、0.30 336、0.40 448、0.50 560 g·L-1的溶液，分別進樣繪制標準曲線，線性回歸方程為Y=2.4039X+2.1021，r=0.9997。結果，在1.0 112～5.0 560 μg范圍內黃芪甲苷線性關系良好。

2.2.7 精密度 將濃度為0.30 336 g·L-1對照品溶液進樣10 μL，重復6次，計算峰面積RSD為0.49%(n=6)。

2.2.8 穩(wěn)定性 精密量取口服液依照本法制成供試品溶液，每隔4 h(0、4、8、12、16、24 h)進樣1 次,測定24 h內樣品穩(wěn)定性，峰面積的RSD為0.66%(n=6)。

2.2.9 重復性 精密量取同一批次本品口服液，平行條件下分別制成6份供試品，按上述色譜條件注入色譜儀測定含量，計算黃芪甲苷平均含量為0.0 519 g·L-1，RSD=0.48%(n=6)。

2.2.10 回收率 精密量取已知含量同一批次的口服液6份(含量：0.0 519 g·L-1)，每份15 mL，分別精密加入黃芪甲苷對照品溶液，制備供試品溶液，注入液相色譜儀，計算黃芪甲苷含量。結果見表1。

表1 芪參固表口服液中黃芪甲苷的回收率試驗

2.2.11 黃芪甲苷含量 取3批芪參固表口服液(批號：200201、200202、200203)按含量測定方法進樣測定，計算黃芪甲苷含量，3批口服液含黃芪甲苷分別為2.61 mg/瓶，2.80 mg/瓶，2.74 mg/瓶，依據(jù)測定結果，暫定口服液每瓶含黃芪以黃芪甲苷計，不得低于2.00 mg。

3 討論

防風中的主要活性成分包括色原酮、香豆素、揮發(fā)油等，有解熱、鎮(zhèn)痛和抗炎等方面的藥理活性，有很好的化痰鎮(zhèn)咳作用[2]。5-O-甲基維斯阿米醇苷屬于色原酮類化合物，理化性質穩(wěn)定，是防風指標性成分。本品為傳統(tǒng)工藝水煎，因此選擇5-O-甲基維斯阿米醇苷為對照。5-O-甲基維斯阿米醇苷在紫外光燈365 nm下吸收較弱，需噴以三氯化鋁試液才可以檢測到熒光斑點，實驗發(fā)現(xiàn)在254 nm下不需要噴顯色劑亦有較強的吸收，因此選擇的檢測波長為254 nm。

黃芪為方中君藥，具有補氣固表，托毒排膿，利尿，生肌之功效。其有效成分為三萜皂苷類成分，實驗過程中采用對三萜皂苷類成分選擇性較高的D101型大孔吸附樹脂柱來純化供試品，效果較為理想。流動相比較乙腈-水(32∶68)與0.1%甲酸的乙腈-0.1%甲酸溶液梯度洗脫[3]，結果發(fā)現(xiàn)加入甲酸雖然在一定程度上可以改善拖尾，但對基線噪音有一定影響，而且考慮甲酸對C18色譜柱壽命的影響選用乙腈-水(32∶68)為本實驗的流動相。該方法穩(wěn)定可行，可以控制本品的內在質量。