閆燁 張勤 王麗娜 荊浩 呂毅 蘭炯采

紅細(xì)胞血型抗體分為規(guī)則抗體和不規(guī)則抗體，規(guī)則抗體是符合Landsteiner命名法則的血型抗體，不規(guī)則抗體是指不符合ABO血型系統(tǒng)Landsteiner命名法則的血型抗體[1]。此抗體大多為免疫性抗體，一般通過輸血、妊娠、免疫性疾病等途徑產(chǎn)生。不規(guī)則抗體是引起交叉配血困難和溶血性輸血不良反應(yīng)的重要原因[2]。本研究采用不同實驗方法和不同抗原格局篩選細(xì)胞聯(lián)合應(yīng)用，對擬輸血患者行不規(guī)則抗體篩查，預(yù)防不規(guī)則抗體漏檢，以期降低輸血不良反應(yīng)的發(fā)生。

資料與方法

1 一般資料 選取1 200例擬輸血住院患者作為研究對象，其中男160例，女1 040例，年齡范圍7～85歲，平均年齡（43.61±6.57）歲。有輸血史24例，有妊娠史702例。

2 儀器與試劑 TD-A型血型血清學(xué)用離心機、FYQ型免疫微柱孵育器（長春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司）；KA-2200型專用離心機（日本久保田技術(shù)有限公司）；抗人球蛋白檢測卡、2-巰基乙醇（2-Me）（長春博迅生物技術(shù)有限公司）；抗體篩選細(xì)胞2和3、譜細(xì)胞、抗人球蛋白（IgG，C3d）檢測試劑、木瓜酶（上海血液生物醫(yī)藥公司）；抗體篩選細(xì)胞1（長春博迅生物技術(shù)有限公司）；凝聚胺試劑（珠海貝索生物技術(shù)有限公司）；IgM+IgG抗-D（Dominion Bioiogicals Limited）；所用試劑均在有效期內(nèi)使用。

3 方法 用抗人球蛋白檢測卡篩選出血漿抗體陽性標(biāo)本，用譜細(xì)胞鑒定抗體特異性；血漿抗體陰性標(biāo)本用鹽水法、凝聚胺法、抗人球蛋白法、木瓜酶法和不同廠家篩選細(xì)胞再次進行檢測，以便發(fā)現(xiàn)漏檢抗體。

結(jié) 果

1 抗篩結(jié)果陰性標(biāo)本選用兩種不同抗原格局篩選細(xì)胞檢測，抗體篩選細(xì)胞試劑1鹽水法、凝聚胺法、抗人球蛋白法抗體檢測結(jié)果陰性見表1；抗體篩選細(xì)胞試劑2鹽水法、凝聚胺法抗體檢測結(jié)果陰性，抗人球蛋白法抗體檢測結(jié)果陽性見表2，經(jīng)譜細(xì)胞鑒定檢出lea抗體1例見表3。表1和表2標(biāo)本為同一患者血樣。

表1 抗體篩選細(xì)胞試劑1檢測結(jié)果（生產(chǎn)批號20171001）

表2 抗體篩選細(xì)胞試劑2檢測結(jié)果（生產(chǎn)批號20177039）

表3 lea抗體譜細(xì)胞鑒定結(jié)果（生產(chǎn)批號20171205）

2 在鹽水法、凝聚胺法、抗人球蛋白法檢測抗體結(jié)果陰性情況下，加用兩步酶法，以O(shè)型紅細(xì)胞與AB型血漿為陰性對照，以O(shè)型紅細(xì)胞與IgM+IgG抗-D為陽性對照?？贵w篩選細(xì)胞3木瓜酶檢測結(jié)果陽性見表4，經(jīng)譜細(xì)胞鑒定檢出lea抗體1例見表5。備注：表4檢測標(biāo)本與表1和表2不是同一標(biāo)本。

表4 抗體篩選細(xì)胞3檢測結(jié)果（生產(chǎn)批號20177043）

表5 患者抗體鑒定結(jié)果（生產(chǎn)批號 20171205）

3 1 200例病例中不規(guī)則抗體篩查總陽性率為0.75%（9/1 200），其中使用單一試劑檢出陽性率為0.58%（7/1 200），對其余抗篩結(jié)果陰性標(biāo)本選用兩種不同抗原格局篩選細(xì)胞進行進一步檢測，檢出抗體陽性2例，漏檢率為0.17%（2/1 193）。

討 論

多次輸血或妊娠可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生不規(guī)則抗體致血型鑒定困難、交叉配血不合及輸血反應(yīng)發(fā)生。避免不規(guī)則抗體漏檢在輸血治療中非常重要，尤其是對有多胎史、輸血史的女性或腫瘤患者[3，4]。輸血史、妊娠史是紅細(xì)胞無效輸注的高危因素，漏檢的低效價不規(guī)則抗體也可以引起紅細(xì)胞無效輸注[5]，因此不規(guī)則抗體篩查需要有一套既準(zhǔn)確又敏感的實驗方法，本研究用抗人球蛋白檢測卡篩選出抗體陽性標(biāo)本，用譜細(xì)胞鑒定出抗-lea1例，抗-M 2例，抗-E 1例，抗-D 1例，抗-Jka1例，未確定其特異性1例。將抗體陰性標(biāo)本分別采用鹽水法、凝聚胺法、抗人球蛋白法選用不同抗原格局篩選細(xì)胞進行抗體篩查，經(jīng)譜細(xì)胞鑒定出抗-lea1例；在以上三種方法檢測抗體陰性的情況下，加用木瓜酶法檢測經(jīng)譜細(xì)胞鑒定出抗-lea1例。 1 200例病例中不規(guī)則抗體篩查總陽性率0.75%（9/1 200），抗體漏檢率為0.17%（2/1 193）。

Rh系統(tǒng)是紅細(xì)胞血型系統(tǒng)中最為復(fù)雜、最富有遺傳多態(tài)性的血型系統(tǒng)，Rh系統(tǒng)最易產(chǎn)生血型不規(guī)則抗體，占不規(guī)則抗體的47.06%[7]，是引起新生兒溶血病和免疫性溶血性輸血反應(yīng)最常見的不規(guī)則抗體。Kidd系統(tǒng)抗體不易檢出，抗-Jka常與其他抗體混合存在，且在體內(nèi)產(chǎn)生后消失很快，極易漏檢并可引起速發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)[8，9]。多次輸血產(chǎn)生免疫性抗-Jka和抗-Jkb也可引起嚴(yán)重的遲發(fā)性輸血反應(yīng)[10]。lea抗體通常是“自然發(fā)生的”，多數(shù)為IgM抗體，純粹IgG性質(zhì)的抗體非常少見，很少能通過抗人球蛋白試驗檢出。盡管lea抗體較常見，卻很少引起溶血性輸血反應(yīng)[11]。近年來文獻報道Lewis抗體漏檢率高達28.5%，IgG抗體明顯增多，干擾血型鑒定和交叉配血試驗，影響臨床輸血效果[12]。

不規(guī)則抗體漏檢與所選篩選細(xì)胞的抗原有關(guān)，篩選細(xì)胞不含有抗體對應(yīng)的抗原導(dǎo)致抗體漏檢，在抗體篩選時盡量選擇抗原分布廣適合本地特點的不同抗原格局的抗體篩選細(xì)胞，使抗原互補避免不規(guī)則抗體漏檢。抗體的漏檢與選擇的試驗方法有很大關(guān)系，酶可以破壞紅細(xì)胞膜上的抗原，會造成M、N、S、s、Fya、Fyb等抗原的漏檢。對ABO、P、Lewis、H、I等血型系統(tǒng)影響較小。酶試劑易失活, 不易保存，應(yīng)用中會受干擾，試驗中酶標(biāo)準(zhǔn)化，設(shè)置陰陽性對照可避免假陽性出現(xiàn)。同一患者標(biāo)本血樣表1中l(wèi)ea純合子抗人球蛋白法檢出陰性，而表2中l(wèi)ea雜合子時檢出陽性，考慮有以下原因：①該標(biāo)本血漿Lewis抗體活性弱；抗體不能和具有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞都出現(xiàn)陽性反應(yīng)。②Lewis抗原不是由紅細(xì)胞合成的，來源于血漿中的可溶性Lewis糖脂被動吸附在紅細(xì)胞膜上，表1中l(wèi)ea純合子試劑抗原量可能減少。③試劑儲存中保存液的pH或其他特性也會影響抗原減弱的速度。保存液不同，某些抗體與不同廠家的試劑紅細(xì)胞呈不同的反應(yīng)。本研究在抗篩陰性的情況下，選擇不同抗原格局抗篩細(xì)胞聯(lián)合應(yīng)用，加用木瓜酶提高抗體檢出率能有效避免抗體的漏檢。

綜合上述情況建議：①抗體篩選時選擇不同廠家不同抗原格局的篩選細(xì)胞，使抗原互補。②選擇抗原分布廣適合本地特點的不同抗原格局的抗體篩選細(xì)胞。③選擇靈敏的實驗方法，必要時多種方法聯(lián)合應(yīng)用。④對于低效價的抗體盡量用純合子抗原檢測。

不規(guī)則抗體引起的溶血性輸血反應(yīng)可危及患者的生命安全。輸血是急危重癥患者搶救的關(guān)鍵，對輸血治療患者選擇適合的實驗方法進行抗體篩選和鑒定，對檢出抗體者避開特異性抗原，輸血時選擇紅細(xì)胞上無相應(yīng)抗原的血液輸注，以保障臨床輸血安全。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突