劉曉東，彭利蘭，龍征榮，李桂蘭

（黔東南民族職業(yè)技術(shù)學(xué)院，貴州 凱里 556000）

結(jié)腸是大腸的一部分，是重要的消化和排泄器官，參與體內(nèi)纖維和水分的消化和吸收。杯狀細(xì)胞亦稱杯細(xì)胞，僅見于哺乳動物進(jìn)行黏液分泌的單細(xì)胞腺，主要以單個(gè)散在形式分布在消化道、呼吸道等管道的黏膜上皮及其相關(guān)導(dǎo)管上皮內(nèi)［1］。最新研究表明，小鼠和大鼠結(jié)腸黏膜上皮的動力模型與小腸相似，其杯狀細(xì)胞由位于結(jié)腸腺底部的干細(xì)胞在向表面遷移的過程中增殖，它能分泌黏液，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收［2］。

多年來，人們對不同部位杯狀細(xì)胞的形態(tài)功能及其與疾病的關(guān)系給予了足夠的重視，由于它是重要的免疫相關(guān)細(xì)胞，所分泌的黏液對腸上皮起潤滑保護(hù)作用，且有研究表明杯狀細(xì)胞可能在腸黏膜損傷后的重建過程中起關(guān)鍵作用，因此一定數(shù)量的杯狀細(xì)胞對維持黏膜屏障結(jié)構(gòu)不可或缺［3］。近年研究還發(fā)現(xiàn)，杯狀細(xì)胞可能涉及黏膜修復(fù)、黏膜免疫、腫瘤發(fā)生等多方面生理和病理過程。因此正確掌握常規(guī)狀態(tài)下杯狀細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和數(shù)量變化，對于了解其功能有很大幫助。

1 材料與方法

1.1 主要儀器及試劑 萊卡石蠟切片機(jī)，光學(xué)顯微鏡（OLMPUS），光學(xué)顯微照相儀（Nikon ECLIPSE 50i），數(shù)顯恒溫箱，電子天平；酒精，甲苯，石蠟，蛋白膠，二甲苯，中性樹脂膠，10%福爾馬林，蘇木精，伊紅。

1.2 實(shí)驗(yàn)動物及日糧 健康懷孕雌鼠12 只，購于四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物生理實(shí)驗(yàn)室，日糧組成：玉米、豆餅、豆粕、魚粉、磷酸氫鈣、硫酸銅、各種維生素、微量元素、添加劑等，其配方含量和營養(yǎng)水平符合實(shí)驗(yàn)小鼠的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 方法

1.3.1 動物飼養(yǎng)管理 將12 只健康懷孕雌鼠分籠飼養(yǎng)，溫度控制在18～22 ℃，濕度控制在50%～60%，人為制造晝夜交替。自由飲水，每日喂料兩次，定期更換飲水和墊料，幼鼠于20 日齡斷乳后按雌雄分籠飼養(yǎng)。

1.3.2 結(jié)腸組織HE 染色 隨機(jī)取6、9、13、17、22、28 日齡小白鼠，用電子天平分別稱重，并用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，分析組間個(gè)體差異顯著性。分別將個(gè)體差異不顯著的4只小白鼠頸椎脫臼處死，解剖，完整取出各只小白鼠的結(jié)腸，按常規(guī)取腸組織l～2 節(jié)，用100 mL/L 中性福爾馬林溶液固定。對每組4只小白鼠的結(jié)腸組織進(jìn)行常規(guī)HE染色。

1.3.3 組織學(xué)觀察 在100倍光鏡下觀察結(jié)腸的大體結(jié)構(gòu)，400 倍光鏡下觀察結(jié)腸黏膜、黏膜下層、肌層、漿膜的形態(tài)和分布情況。將每組4只小白鼠的切片分別在400 倍視野中任取3 個(gè)視野，用愛譜圖像處理分析軟件4.0 進(jìn)行杯狀細(xì)胞計(jì)數(shù)，并測量結(jié)腸黏膜和肌層在發(fā)育過程中的厚度。每組的杯狀細(xì)胞計(jì)數(shù)和黏膜、肌層厚度各測量3 次，用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，取平均值，并分析各組間的差異是否顯著，分析杯狀細(xì)胞的數(shù)量變化以及黏膜、肌層厚度的變化，最后把杯狀細(xì)胞的數(shù)量變化通過柱狀圖分析出來。兩組之間差異不顯著用相同字母表示（P＞0.05），差異顯著用不同字母表示（P＜0.05）。

2 結(jié)果

2.1 小鼠結(jié)腸胚后發(fā)育的形態(tài)變化 HE染色后光鏡下觀察可見結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞排列整齊，上皮層和固有層界限清楚，柱狀細(xì)胞呈高柱狀，胞核為橢圓形，靠近細(xì)胞基部，杯狀細(xì)胞呈高腳杯狀，上部膨大，下部細(xì)窄，呈典型的高腳狀，無縱紋緣，僅有一層很薄的細(xì)胞膜散在于柱狀細(xì)胞之間，上皮細(xì)胞輪廓清晰，染色鮮明，呈正常生長更新狀態(tài)。

6 日齡時(shí)，結(jié)腸黏膜上皮由2～3 層細(xì)胞構(gòu)成，腸腔不明顯，呈裂隙狀，略向腸腔隆起，無明顯指狀絨毛突起，形態(tài)學(xué)上未見典型的杯狀細(xì)胞。9日齡時(shí)，形成明顯的皺褶，黏膜表面覆蓋單層柱狀上皮，近根部為復(fù)層柱狀上皮，見一些杯狀樣、囊狀和梨形的空泡，腸絨毛很短。13 和17 日齡時(shí)明顯看到很多杯狀樣的空泡細(xì)胞形成，22 和28 日齡可見黏膜上皮明顯增厚，空泡樣細(xì)胞密集。

2.2 黏膜和肌層的厚度變化以及杯狀細(xì)胞的數(shù)目變化 從表1可知，隨著日齡的增長，小白鼠結(jié)腸的排泄功能逐漸增強(qiáng)，黏膜和肌層的厚度在不斷增加，6 日齡的黏膜厚度與9 日齡存在顯著差異（P＜0.05），而肌層厚度在這兩日齡不存在顯著差異（P＜0.05）。黏膜厚度和肌層厚度在22日齡增加的幅度最大，與17 日齡存在顯著差異（P＜0.05），在28日齡時(shí)，黏膜厚度是6日齡的近1倍，肌層厚度是6 日齡的2 倍多。同時(shí)，杯狀細(xì)胞的數(shù)量不斷增加，6日齡時(shí)杯狀細(xì)胞的數(shù)目最少，與9日齡的數(shù)目存在顯著差異（P＜0.05）。13日齡時(shí)結(jié)腸杯狀細(xì)胞數(shù)目不斷增多，比6日齡多出1倍。28日齡時(shí)杯狀細(xì)胞的數(shù)目最多，與22日齡相比存在顯著差異（P＜0.05），且28 日齡比22 日齡的數(shù)目多出1倍，比6日齡的數(shù)目多出5倍（P＜0.05）。

表1 結(jié)腸黏膜和肌層的厚度變化以及杯狀細(xì)胞的個(gè)數(shù)變化

3 討論與結(jié)論

小白鼠是目前藥學(xué)、醫(yī)學(xué)及生物學(xué)等科學(xué)研究中常選的實(shí)驗(yàn)動物材料之一，結(jié)腸是自然條件下實(shí)驗(yàn)動物最易感染和產(chǎn)生病變的器官之一，因此研究小白鼠結(jié)腸的胚后發(fā)育很有必要。

有文獻(xiàn)指出，小白鼠于胚胎第11 d 出現(xiàn)盲腸，后腸末端原開口于泄殖腔，隨著泄殖腔的分隔，于第14 d 背部演變?yōu)閱为?dú)的結(jié)腸和直腸，而腸上皮的分化開始于胚胎第15 d，呈現(xiàn)一定規(guī)律的頭尾梯度分化程序，首先是上皮通過細(xì)胞增殖，形成向腸腔的不規(guī)則突起，上皮內(nèi)出現(xiàn)空泡等［4］。哺乳動物腸黏膜上皮是機(jī)體代謝最為活躍的場所，腸黏膜上皮細(xì)胞終身進(jìn)行著不間斷的自我更新，位于腸道隱窩部位的腸黏膜上皮干細(xì)胞保持著旺盛的增殖分化能力，凋亡脫落及受損壞死的細(xì)胞與干細(xì)胞增殖、分化之間保持著動態(tài)平衡。本實(shí)驗(yàn)觀察顯示，在小白鼠1～28日齡的生長發(fā)育過程中，其結(jié)腸的腸黏膜、杯狀細(xì)胞、黏膜下層、肌層、漿膜結(jié)構(gòu)隨著日齡的增長不斷分化完成，6 日齡杯狀細(xì)胞的數(shù)量稀少，9 日齡有所增加，22日齡時(shí)增長緩慢，到28日齡時(shí)排列密集，數(shù)量明顯增多。黏膜和肌層隨日齡的增長不斷增厚，十分明顯。

通過統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)處理后得出小白鼠在6日齡時(shí)杯狀細(xì)胞的數(shù)目最少，與9 日齡的數(shù)目存在顯著差異，13 日齡時(shí)結(jié)腸不斷分化，杯狀細(xì)胞數(shù)目不斷增多，比6 日齡多出1 倍。28 日齡時(shí)杯狀細(xì)胞的數(shù)目最多，與22 日齡相比存在顯著差異，且28日齡比22日齡的數(shù)目多出1倍，比6日齡的數(shù)目多出5倍。28日齡時(shí)杯狀細(xì)胞的結(jié)構(gòu)明顯，數(shù)量密集，可見細(xì)胞內(nèi)含有大量黏液，由于黏液有助于糞便排泄，說明小白鼠在這個(gè)時(shí)間段結(jié)腸已發(fā)育成熟，排泄功能完善。

綜上所述，隨著日齡的增長，結(jié)腸的杯狀細(xì)胞在不斷增多，腸黏膜和上皮厚度在不斷增加，結(jié)腸的排泄功能和腸黏膜屏障功能也在不斷增強(qiáng)。