曾小華 廖輝軍 劉柏京 樂(lè)冬友

急性胰腺炎(acute pancreatitis，AP)是一種以胰腺局部炎癥和全身炎性反應(yīng)為特征的急性炎癥性疾病，根據(jù)嚴(yán)重程度的不同，可將AP分為輕癥、中癥和重癥AP[1]。輕癥AP最為常見(jiàn)，預(yù)后較佳，但是重癥AP病情多變，常伴有胰腺組織壞死及臟器功能衰竭，嚴(yán)重時(shí)可致死[2]。AP的發(fā)生發(fā)展過(guò)程復(fù)雜，涉及多個(gè)階段和多種基因的調(diào)控。研究表明，胰腺腺泡細(xì)胞的增殖和凋亡與AP的嚴(yán)重程度密切相關(guān)[3]。目前，AP缺乏有效的治療手段。因此，探究影響胰腺腺泡細(xì)胞增殖和凋亡的分子機(jī)制并尋找有效的治療方法具有重要意義。黃連是常用中藥，味甘性寒，具有抗炎、抗菌、抗腫瘤等多種功效[4]，但黃連對(duì)胰腺腺泡細(xì)胞增殖和凋亡的影響及分子機(jī)制還未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。微小RNA(microRNA，miRNA)是一類(lèi)小分子非編碼RNA，參與炎性和免疫疾病、腫瘤、心血管疾病等多種疾病的發(fā)生發(fā)展[5-7]。研究顯示，miR-26-3p在重癥AP中患者血漿中表達(dá)降低[8]，但其對(duì)胰腺腺泡細(xì)胞增殖和凋亡的影響也還未知。本研究利用雨蛙素作用AR42J細(xì)胞建立AP細(xì)胞模型，探討了黃連提取物對(duì)雨蛙素誘導(dǎo)的胰腺腺泡細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其能否通過(guò)調(diào)控miR-26-3p表達(dá)發(fā)揮作用，以期為AP的治療及分子機(jī)制的闡明提供一定的新思路。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞與實(shí)驗(yàn)試劑 大鼠胰腺腺泡AR42J細(xì)胞細(xì)胞(中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù))，黃連飲片(合肥樂(lè)家鋪中藥飲片有限公司)，雨蛙素、四甲基噻唑藍(lán)(methylthiazoletrazolium，MTT)和胰蛋白酶(美國(guó)Sigma公司)，胎牛血清(Fetal Bovine Serum，F(xiàn)BS)和RPMI 1640培養(yǎng)基(美國(guó)Hycolne公司)，LipofectamineTM 2000試劑盒和Trizol試劑(美國(guó)Invitrogen公司)，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和PCR試劑盒(深圳晶美生物工程有限公司)，PCR引物(上海生工生物工程有限公司)，兔抗大鼠P21、半胱天冬酶-3(Caspases-3)單克隆抗體(美國(guó)Santa Cruz公司)，兔抗大鼠髓系細(xì)胞觸發(fā)受體1(triggering receptor expressed on myeloid cells 1，TREM1)單克隆抗體(武漢博士德生物技術(shù)有限公司)，二喹啉甲酸(bicinchoninicacid，BCA)蛋白檢測(cè)試劑盒、膜聯(lián)蛋白V(Annexin V)-異硫氰酸熒光素(FITC)/碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)細(xì)胞凋亡試劑盒和雙熒光素酶活性檢測(cè)試劑盒(上海碧云天生物技術(shù)有限公司)，白細(xì)胞介素6(interleukin-6，IL-6)和腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α，TNF-α)試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 黃連水提物制備：參照文獻(xiàn)方法[9]制備黃連水提物。黃連飲片干燥后稱重，粉碎后，加5倍體積蒸餾水浸泡1 h，水浴2 h，離心。濾渣再加3倍體積蒸餾水，水浴提取1 h，離心。將2次濾液合并，減壓濃縮后冷凍干燥。凍干粉溶于滅菌的去離子水中，0.22 μm過(guò)濾，配置1 g/ml的母液，使用時(shí)培養(yǎng)基稀釋。

1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染：復(fù)蘇AR42J細(xì)胞，用含10% FBS的RPMI 1640培養(yǎng)基置于37℃、CO2體積分?jǐn)?shù)5%、濕度97%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每隔2天更換1次培養(yǎng)基。當(dāng)細(xì)胞融合至80%～90%時(shí)，磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline，PBS)清洗細(xì)胞后，加入0.25%胰蛋白酶溶液消化，傳代培養(yǎng)。以每孔1×105個(gè)AR42J細(xì)胞接種于6孔板中，待細(xì)胞融合至60%時(shí)，更換無(wú)血清培養(yǎng)基。參照LipofectamineTM 2000試劑盒操作說(shuō)明，將miR-26a-3p 模擬物mimcs(miR-26a-3p組)及陰性對(duì)照序列(miR-NC組)、miR-26a-3p抑制劑(anti-miR-26a-3p組)及陰性對(duì)照序列(anti-miR-NC組)TREM1過(guò)表達(dá)載體(pcDNA3.0-TREM1組)及陰性對(duì)照序列(pcDNA3.1組)分別轉(zhuǎn)染至AR42J細(xì)胞。轉(zhuǎn)染24 h后，更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)至48 h，收集細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 細(xì)胞分組：①未轉(zhuǎn)染的AR42J細(xì)胞分為對(duì)照組：正常培養(yǎng)；雨蛙素組：含10-8 mol/L[10]雨蛙素的培養(yǎng)基培養(yǎng)8 h；雨蛙素+黃連-L組：含10-8mol/L雨蛙素與2.5 mg/ml[9]黃連的培養(yǎng)基共同培養(yǎng)8 h；雨蛙素+黃連-M組：含10-8mol/L雨蛙素與5.0 mg/ml黃連的培養(yǎng)基共同培養(yǎng)8 h；雨蛙素+黃連-H組：含10-8mol/L雨蛙素與10.0 mg/ml黃連的培養(yǎng)基共同培養(yǎng)8 h。②miR-26a-3p組、miR-NC組AR42J細(xì)胞均采用含10-8mol/L雨蛙素的培養(yǎng)基培養(yǎng)8 h，分別記為雨蛙素+miR-26a-3p組、雨蛙素+miR-NC組。③anti-miR-26a-3p組、anti-miR-NC組、pcDNA3.1-TREM1組、pcDNA3.1組AR42J細(xì)胞均采用含10-8mol/L雨蛙素與100 mg/ml黃連的培養(yǎng)基共同培養(yǎng)8 h，分別記為雨蛙素+黃連-H+anti-miR-26a-3p組、雨蛙素+黃連-H+aanti-miR-NC組、雨蛙素+黃連-H+pcDNA3.1-TREM1組、雨蛙素+黃連-H+pcDNA3.1組。

1.2.4 酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-6和TNF-α水平：AR42J細(xì)胞以每孔2.5×104個(gè)接種于24孔板中。細(xì)胞貼壁后，按照1.2.3分組處理。培養(yǎng)結(jié)束后，收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液。3 500 r/min離心5 min，分別參照IL-6和TNF-α試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)上清中IL-6和TNF-α水平。

1.2.5 MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖：AR42J細(xì)胞以每孔5×103個(gè)接種于96孔板中。細(xì)胞貼壁后，按照1.2.3分組處理。培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入20 μl MTT(5 g/L)，培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育4 h。吸棄培養(yǎng)基，每孔加入150 μl二甲基亞砜，振蕩混勻，于酶標(biāo)儀490 nm處測(cè)定吸光度值(absorbance，A)。細(xì)胞存活率(%)=A實(shí)驗(yàn)組/A對(duì)照組×100%。

1.2.6 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡：AR42J細(xì)胞以每孔2.5×104個(gè)接種于24孔板中。細(xì)胞貼壁后，按照1.2.3分組處理。培養(yǎng)結(jié)束后，吸棄培養(yǎng)基，加入適量預(yù)冷的PBS清洗細(xì)胞，吸棄PBS。加入胰蛋白酶消化，收集細(xì)胞。取1.0×106個(gè)細(xì)胞，加入400 μl結(jié)合緩沖液，輕輕吹打混懸細(xì)胞后，加入10 μl Annexin V-FITC，室溫避光孵育10 min。然后加入5 μl PI，室溫避光孵育5 min。最后再加入100 μl結(jié)合緩沖液，渦旋混勻后上流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

1.2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time quantitative PCR，RT-qPCR)檢測(cè)細(xì)胞中miR-26a-3p和TREM1 mRNA表達(dá)水平：收集各組細(xì)胞，PBS清洗后，加入Trizol試劑提取細(xì)胞中總RNA。微量核酸儀檢測(cè)RNA的濃度進(jìn)行定量后，參照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)，將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板，行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增條件：95℃10 min，95℃10 s，60℃30 s，72℃30 s，共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)。引物序列：miR-26a-3p上游5’-GTAGCGCGATGCCGAACGTG-3’，下游5’-GCGTGAACGGCCGTGACG-3’；TREM1上游5’-CGTGTGAAACGCTGCAGAGC-3’；下游5’-CAGGCTGCGTGAAGAACGT-3’；U6上游5’-GAACGTGCCGGGCGTGCAG-3’，下游5’-GGTGAACGCCGTGGACGCC-3’；GAPDH上游5’-TGAACGGGAAGCTCACTGG-3’，下游5’-TCCACCACCCTGT TGCTGTA-3’。miR-26a-3p以U6為內(nèi)參，TREM1以GAPDH為內(nèi)參，采用2-△△Ct法計(jì)算miR-26a-3p和TREM1 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平。

1.2.8 蛋白印跡(Western Blot)法檢測(cè)細(xì)胞中P21、Caspases-3和TREM1蛋白表達(dá)水平：收集各組細(xì)胞，PBS清洗后，加入RIPA蛋白裂解液提取細(xì)胞中總蛋白，BCA法測(cè)定蛋白濃度對(duì)蛋白定量后，取適量蛋白溶液，100 ℃煮沸5 min。蛋白變性后行十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，每孔蛋白上樣量30 μg。電泳后，濕轉(zhuǎn)至聚偏乙烯二氟膜，置于5%脫脂奶粉中封閉2 h。分別加入P21(稀釋比1∶600)、Caspases-3(稀釋比1∶400)、TREM1(稀釋比1∶400)抗體，4 ℃孵育過(guò)夜。洗膜后，加入辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的二抗(稀釋比1∶200)，37℃孵育1 h。加入ELC顯影液，避光顯影，凝膠成像系統(tǒng)曝光拍照。

1.2.9 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證miR-26a-3p和TREM1靶向關(guān)系：生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)顯示，TREM1的3’非翻譯區(qū)(3’untranslated region，3’UTR)存在與miR-26a-3p結(jié)合的核苷酸序列。PCR擴(kuò)增含miR-26a-3p結(jié)合位點(diǎn)的TREM1的3’UTR序列，構(gòu)建TREM1野生型質(zhì)粒(WT-TREM1)。并利用基因定點(diǎn)突變技術(shù)將結(jié)合位點(diǎn)突變，構(gòu)建TREM1突變型質(zhì)粒(MUT-TREM1)。AR42J細(xì)胞接種于6孔板中，融合至60%時(shí)，分別共轉(zhuǎn)染TREM1-WT、TREM1-MUT與miR-26a-3p mimic、陰性對(duì)照。轉(zhuǎn)染24 h后，收集細(xì)胞，檢測(cè)各組熒光素酶活性。具體操作參照雙熒光素酶活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)，結(jié)果以熒光蟲(chóng)活性/海腎熒光強(qiáng)度比值表示。

2 結(jié)果

2.1 黃連提取物對(duì)AP細(xì)胞中IL-6和TNF-α表達(dá)的影響 與對(duì)照組比較，雨蛙素組AR42J細(xì)胞IL-6和TNF-α水平升高(P<0.05)。與雨蛙素組比較，雨蛙素+黃連-L組、雨蛙素+黃連-M組和雨蛙素+黃連-H組AR42J細(xì)胞IL-6和TNF-α水平降低(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 黃連提取物對(duì)AP細(xì)胞中miR-26a-3p、IL-6、TNF-α表達(dá)的影響

2.2 黃連提取物對(duì)AP細(xì)胞增殖和凋亡的影響 與對(duì)照組比較，雨蛙素組AR42J細(xì)胞存活率降低(P<0.05)，凋亡率、P21、Caspase-3蛋白水平升高(P<0.05)。與雨蛙素組比較，雨蛙素+黃連-L組、雨蛙素+黃連-M組和雨蛙素+黃連-H組AR42J細(xì)胞存活率降低(P<0.05)，凋亡率、P21、Caspase-3蛋白水平升高(P<0.05)。見(jiàn)表2，圖1、2。

表2 黃連提取物對(duì)AP細(xì)胞增殖、凋亡的影響

圖1 黃連提取物對(duì)AP細(xì)胞凋亡的影響

圖2 黃連提取物對(duì)急性胰腺炎細(xì)胞增殖、凋亡蛋白表達(dá)的影響

2.3 黃連提取物對(duì)急性胰腺炎細(xì)胞miR-26a-3p表達(dá)的影響 與對(duì)照組比較，雨蛙素組AR42J細(xì)胞miR-26a-3p水平降低(P<0.05)。與雨蛙素組比較，雨蛙素+黃連-L組、雨蛙素+黃連-M組和雨蛙素+黃連-H組AR42J細(xì)胞miR-26a-3p水平升高(P<0.05)。見(jiàn)表3。

2.4 過(guò)表達(dá)miR-26a-3p對(duì)急性胰腺炎細(xì)胞增殖、凋亡及IL-6和TNF-α表達(dá)的影響 與雨蛙素+miR-NC組比較，雨蛙素+miR-26a-3p組AR42J細(xì)胞存活率降低(P<0.05)，凋亡率、P21、Caspase-3蛋白水平升高(P<0.05)，IL-6和TNF-α水平降低(P<0.05)。見(jiàn)圖3、4，表3。

圖3 過(guò)表達(dá)miR-26a-3p對(duì)急性胰腺炎細(xì)胞凋亡的影響

圖4 過(guò)表達(dá)miR-26a-3p對(duì)急性胰腺炎細(xì)胞增殖凋亡蛋白表達(dá)的影響

表3 過(guò)表達(dá)miR-26a-3p對(duì)急性胰腺炎細(xì)胞增殖凋亡及IL-6、TNF-α表達(dá)的影響

2.5 抑制miR-26a-3p能逆轉(zhuǎn)黃連提取物對(duì)AP細(xì)胞增殖凋亡及IL-6、TNF-α表達(dá)的影響 與雨蛙素+黃連-H+anti-miR-NC組比較，雨蛙素+黃連-H+anti-miR-26a-3p組AR42J細(xì)胞存活率升高(P<0.05)，凋亡率、P21、Caspase-3蛋白水平降低(P<0.05)，IL-6和TNF-α水平升高(P<0.05)。見(jiàn)圖5、6,表4。

表4 抑制miR-26a-3p能逆轉(zhuǎn)黃連提取物對(duì)AP細(xì)胞增殖凋亡及IL-6、TNF-α表達(dá)的影響

圖5 抑制miR-26a-3p能逆轉(zhuǎn)黃連提取物對(duì)急性胰腺炎細(xì)胞凋亡的影響

2.6 miR-26a-3p靶向調(diào)控TREM1的表達(dá) 生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)顯示，TREM1的3’UTR存在與miR-26a-3p結(jié)合的連續(xù)位點(diǎn)。與miR-NC組比較，miR-26a-3p組共轉(zhuǎn)染W(wǎng)T-TREM1的熒光素酶活性降低(P<0.05)，而共轉(zhuǎn)染MUT-TREM1的熒光素酶活性無(wú)明顯變化(P>0.05)。miR-26a-3p組TREM1 mRNA水平低于miR-NC組(P<0.05)，anti-miR-26a-3p組TREM1 mRNA水平高于anti-miR-NC組(P<0.05)。這說(shuō)明miR-26a-3p靶向負(fù)調(diào)控TREM1的表達(dá)。見(jiàn)圖7，表5、6。

圖6 抑制miR-26a-3p能逆轉(zhuǎn)黃連提取物對(duì)急性胰腺炎細(xì)胞增殖凋亡蛋白表達(dá)的影響

圖7 miR-26a-3p靶向TREM1

表5 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)

表6 miR-26a-3p調(diào)控TREM1的表達(dá)

2.7 過(guò)表達(dá)TREM1能逆轉(zhuǎn)黃連提取物對(duì)急性胰腺炎細(xì)胞增殖凋亡及IL-6、TNF-α表達(dá)的影響 與雨蛙素+黃連-H+pcDNA3.1組比較，雨蛙素+黃連-H+pcDNA3.1-TREM1組AR42J細(xì)胞存活率升高(P<0.05)，凋亡率、P21、Caspase-3蛋白水平降低(P<0.05)，IL-6和TNF-α水平升高(P<0.05)。見(jiàn)圖8、9,表7。

圖8 過(guò)表達(dá)TREM1能逆轉(zhuǎn)黃連提取物對(duì)急性胰腺炎細(xì)胞凋亡的影響

圖9 過(guò)表達(dá)TREM1能逆轉(zhuǎn)黃連提取物對(duì)急性胰腺炎細(xì)胞增殖凋亡蛋白表達(dá)的影響

表7 過(guò)表達(dá)TREM1能逆轉(zhuǎn)黃連提取物對(duì)AP細(xì)胞增殖凋亡及IL-6、TNF-α表達(dá)的影響

3 討論

AR42J細(xì)胞來(lái)自于大鼠胰腺腺泡細(xì)胞瘤，由于其易培養(yǎng)、刺激反應(yīng)大且轉(zhuǎn)染效率高，常用于AP細(xì)胞模型的建立[11]。雨蛙素是一種生物活性多肽，可刺激膽囊收縮及胰酶分泌，促進(jìn)胰腺腺泡細(xì)胞凋亡，損傷組織[12]。本研究顯示，雨蛙素處理后，AR42J細(xì)胞IL-6和TNF-α分泌水平明顯增加，提示模型建立成功。

田立群等[13]研究顯示，黃連降脂合劑可抑制動(dòng)脈粥樣硬化(AS)大鼠血管組織細(xì)胞間黏附分子-1和核因子-κB的表達(dá)，改善AS大鼠血脂水平，發(fā)揮抗AS作用。韓春楊等[9]研究顯示，黃連水提液可抑制脂多糖誘導(dǎo)的大鼠肝細(xì)胞凋亡，減少I(mǎi)L-6和TNF-α等炎性因子的釋放，保護(hù)肝損傷。本研究顯示，黃連提取物可降低雨蛙素誘導(dǎo)的AR42J細(xì)胞IL-6和TNF-α分泌，提示黃連提取物可通過(guò)降低炎性反應(yīng)保護(hù)胰腺腺泡細(xì)胞損傷。細(xì)胞的增殖和凋亡在AP發(fā)生發(fā)展中起重要作用。本研究顯示，雨蛙素可降低AR42J細(xì)胞活性，并誘導(dǎo)AR42J細(xì)胞凋亡，而黃連提取物可抑制受損的AR42J細(xì)胞增殖，促進(jìn)受損的AR42J細(xì)胞凋亡。P21是一種細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子，其表達(dá)升高可抑制細(xì)胞增殖[14]。Caspase-3是caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)控蛋白，參與細(xì)胞凋亡，是細(xì)胞凋亡執(zhí)行蛋白[15]。本研究顯示，黃連提取物可促進(jìn)雨蛙素誘導(dǎo)的AR42J細(xì)胞P21和Caspase-3蛋白表達(dá)，提示黃連提取物通過(guò)調(diào)控P21和Caspase-3蛋白表達(dá)影響雨蛙素誘導(dǎo)的AR42J細(xì)胞增殖和凋亡。

AP的發(fā)生發(fā)展受到miRNA的調(diào)控。如王曉華等[16]研究顯示，miR-181a-5p表達(dá)通過(guò)靶向上調(diào)PIAS1表達(dá)降低TNF-α和IL-6表達(dá)及細(xì)胞凋亡，參與AP的發(fā)病過(guò)程。目前研究表明，miR-26-3p在重癥急性胰腺炎中患者血漿中表達(dá)降低，但其對(duì)胰腺腺泡細(xì)胞增殖和凋亡的影響還未知。本研究顯示，雨蛙素可降低AR42J細(xì)胞中miR-26-3p表達(dá)水平，而黃連提取物可提高雨蛙素誘導(dǎo)的AR42J細(xì)胞中miR-26-3p表達(dá)，提示miR-26-3p參與AP發(fā)生發(fā)展，且黃連提取物可能通過(guò)調(diào)控miR-26-3p表達(dá)影響AR42J細(xì)胞的增殖和凋亡。通過(guò)轉(zhuǎn)染miR-26-3p mimics至AR42J細(xì)胞，結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá)miR-26-3p可抑制雨蛙素誘導(dǎo)的AR42J細(xì)胞增殖，并促進(jìn)細(xì)胞凋亡，而抑制miR-26-3p表達(dá)降低了黃連提取物對(duì)雨蛙素誘導(dǎo)的AR42J細(xì)胞增殖和凋亡及炎性因子IL-6和TNF-α的分泌，進(jìn)一步說(shuō)明了黃連提取物通過(guò)上調(diào)細(xì)胞中miR-26-3p表達(dá)影響雨蛙素誘導(dǎo)的AR42J細(xì)胞增殖、凋亡和炎性反應(yīng)。

雙熒光素酶活性及RT-qPCR檢測(cè)證實(shí)了miR-26-3p在AR42J細(xì)胞中靶向負(fù)調(diào)控TREM1表達(dá)。TREM1屬于免疫球蛋白超家族受體，介導(dǎo)炎性反應(yīng)，可促進(jìn)單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞中TNF-α和IL-1的表達(dá)[17]。研究顯示，重癥AP大鼠胰腺組織TREM-1表達(dá)顯著增加，且和疾病嚴(yán)重程度相關(guān)，TREM-1在重癥AP發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用[18]。本研究顯示，過(guò)表達(dá)TREM1后，黃連提取物對(duì)雨蛙素誘導(dǎo)的AR42J細(xì)胞增殖、凋亡和炎性因子IL-6和TNF-α分泌的影響降低，進(jìn)一步表明黃連提取物通過(guò)上調(diào)miR-26-3p表達(dá)，進(jìn)而下調(diào)TREM1表達(dá)抑制受損的AR42J細(xì)胞，并促進(jìn)受損細(xì)胞凋亡，且降低炎性反應(yīng)。

綜上所述，黃連提取物可抑制受損的AR42J細(xì)胞增殖和炎性反應(yīng)，并促進(jìn)受損的細(xì)胞凋亡，其可能通過(guò)上調(diào)細(xì)胞中miR-26-3p表達(dá)，進(jìn)而下調(diào)TREM1表達(dá)發(fā)揮作用。但本研究尚存在不足之處，僅在細(xì)胞層面進(jìn)行了初步探討，接下來(lái)將通過(guò)魔物模型實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步深入探討黃連提取物對(duì)AP的治療作用及作用機(jī)制。