杜潔，李偉，戴偉杰，徐璐，曹庸

桉葉提取物貯藏穩(wěn)定性探究

杜潔，李偉，戴偉杰，徐璐，曹庸

(1. 廣州王老吉大健康產(chǎn)業(yè)有限公司，廣東 廣州 510623；2. 廣東省功能食品活性物重點實驗室，廣東省天然活性物工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州510642)

本文以DPPH?和ABTS?+自由基清除率為評價指標，探究桉葉提取物的貯藏穩(wěn)定性。結(jié)果表明：桉葉提取物具有良好的清除自由基能力，其DPPH?和ABTS?+自由基IC值分別為0.166 mg·mL和0.212 mg·mL。此外，桉葉提取物在避光、避氧、低溫及酸性條件下穩(wěn)定性好，具有更高的抗氧化活性。本文為桉葉提取物加工或保藏過程中抗氧化穩(wěn)定性研究提供依據(jù)，有助于進一步開發(fā)利用桉葉提取物。

桉葉；多酚；貯藏穩(wěn)定性；抗氧化

桉樹()原產(chǎn)地是澳大利亞，是桃金娘科桉樹屬植物的統(tǒng)稱，分布在熱帶、亞熱帶地區(qū)的常綠闊葉林，現(xiàn)廣泛生長于中國、印度、新幾內(nèi)亞等地區(qū)。桉樹常被用于治療發(fā)熱、出血、喉痛和支氣管炎等疾病。有研究指出桉樹各部分(葉、花、果實、樹皮及樹根等)均含有多種活性組分，生物活性主要有抗氧化、抗炎、抗腫瘤等。

桉樹具有生長速度快、木材量大等優(yōu)點，廣東、廣西、四川及福建等地均有大量桉樹人工種植林?？撤ズ蟮蔫駱淙~常被丟棄或集中焚燒，既造成資源浪費又引起環(huán)境污染。部分品種的桉樹葉被用來提煉桉葉油，也有報道關(guān)注其成分分析及功能活性，而桉葉的非揮發(fā)性成分研究較少。本課題組前期從桉樹葉中提取到一種桉葉提取物，含有多酚類、類黃酮、萜類、單寧及類黃酮等成分，具有抗氧化、抗衰老、抗炎等多種生物活性。由于酚類化合物在加工儲藏過程中對外界光、熱等因素敏感性高，其利用率和生物活性均會受到影響。目前，關(guān)于桉葉提取物的提取及生物活性研究報道較多，而其提取物的貯藏穩(wěn)定性報道則較少。本文旨在探究桉葉提取物的貯藏穩(wěn)定性，以期為其保藏方法開發(fā)提供研究基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗試劑

無水乙醇和過硫酸鉀均為分析級；DPPH?和ABTS?+購于美國Sigma公司。

1.1.2 儀器

MK-3酶標儀，Thermo Labsystems公司；AL 104梅特勒電子天平，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；FD-1冷凍干燥機，北京博醫(yī)康技術(shù)公司；R204旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海申生科技有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 桉葉提取物制備

根據(jù)文獻[9]的方法，制備桉葉提取物，其中多酚含量為315.32±23.18 mg·g。

1.2.2 桉葉提取物貯藏穩(wěn)定性試驗

試驗以光照、氧氣、pH值以及溫度為單因素，以DPPH?和ABTS?+清除率為抗氧化評價指標，探究桉葉提取物貯藏穩(wěn)定性。

1.2.2.1 光照試驗

桉葉提取物置于光照箱內(nèi)，于照度4 500±500lx條件下放置15 d，于第0、3、5、10、15 d取樣檢測抗氧化指標，試驗每組3個重復(fù)。

1.2.2.2 氧氣

桉葉提取物暴露空氣中及避光保存15 d，于第0、3、5、10、15 d取樣檢測抗氧化指標，試驗每組3個重復(fù)。

1.2.2.3 pH值

桉葉提取物置于不同pH值體系(1、3、5、7、9、11)下保存15 d，于第0、3、5、10、15 d取樣檢測抗氧化指標，試驗每組3個重復(fù)。

1.2.2.4 溫度試驗

桉葉提取物平鋪于密封、潔凈培養(yǎng)皿中，攤成≤5 mm厚的薄層，在4℃、25℃、60℃條件下放置15 d，于第0、3、5、10、15 d取樣檢測抗氧化指標，試驗每組3個重復(fù)。

1.2.3 桉葉提取物DPPH·和ABTS·+自由基清除率

1.2.3.1 DPPH·清除率

參考王俊亮等方法并做適當(dāng)修改。使用電子天平準確稱量出DPPH 10 mg，加入250 mL容量瓶，以無水乙醇溶解后并定容，配成1×10mol·L的DPPH反應(yīng)液，避光保存。

使用3.8 mL的DPPH反應(yīng)液溶解0.2 mL的樣品溶液，在室溫下密閉靜置。30 min后在517 nm波長下測定吸光度。DPPH清除率按照下列公式計算：

式中：A—0.2 mL樣品溶液+3.8 mL DPPH溶液吸光值；

A—0.2 mL樣品溶液+3.8 mL無水乙醇吸光值；

A—0.2 mL無水乙醇+3.8 mLDPPH溶液吸光值。

1.2.3.2 ABTS自由基清除率

參考王俊亮等方法并做適當(dāng)修改。取10 μL樣品溶液與200 μL ABTS反應(yīng)液混合均勻，在黑暗條件下反應(yīng)，6 min后在734 nm波長下測定吸光度。ABTS清除率按照下列公式計算；

式中：A—200 μL ABTS工作液+10 μL無水乙醇吸光值；

A—200 μL ABTS工作液+10 μL樣品吸光值

1.3 數(shù)據(jù)處理

實驗數(shù)據(jù)采用EXCEL 2010，SPSS 18.0及Graph Pad 5.0軟件進行處理，數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標準差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 桉葉提取物DPPH?和ABTS?+自由基清除率

由圖1可得，隨著桉葉提取物濃度增大，其清除DPPH?和ABTS?+自由基能力越高，并達到平穩(wěn)值。多酚提取物中的酚類物質(zhì)通過提供質(zhì)子或電子達到猝滅自由基的作用，降低自由基對生物體內(nèi)蛋白質(zhì)、DNA等的破壞作用。相似實驗結(jié)果證實了桉葉提取物具有DPPH?和ABTS?+自由基有效的清除能力，清除效果呈濃度依賴性增大，其消除自由基的抗氧化活性與提取物中多酚類物質(zhì)含量有關(guān)。同時，本實驗中桉葉提取物清除DPPH和ABTS自由基的IC值分別為0.166、0.212 mg·mL。為進一步探究桉葉提取物貯藏穩(wěn)定性，實驗IC值對應(yīng)的提取物濃度為初始濃度，研究不同貯藏條件對桉葉提取物抗氧化活性的影響。

圖1 桉葉提取物清除DPPH?(A)和ABTS?+(B)自由基能力

2.2 桉葉提取物貯藏穩(wěn)定性

2.2.1 光照對桉葉提取物抗氧化能力的影響

由圖2可得，在光照條件4 500±500lx下，隨著光照時間逐漸增長，桉葉提取物的DPPH?和ABTS?+清除能力逐步下降；到第15 d時，兩者的下降比例分別為32.29%和20.19%(<0.01)。光照條件會引起桉葉多酚類成分發(fā)生部分氧化或降解，引起抗氧化活性下降。光照顯著影響桉葉提取物抗氧化能力，桉葉提取物貯藏過程中避光貯藏有利于保持其抗氧化活性。

圖2 光照對桉葉提取物清除DPPH?(A)和ABTS?+(B)自由基能力的影響

2.2.2 氧氣對桉葉提取物抗氧化能力的影響

由圖3可知，桉葉提取物避光暴露在空氣中，其抗氧化能力隨著時間逐步下降，其中DPPH?自由基清除率在第5天達到15.36%(<0.05)，且其下降趨勢趨于平緩，第15 d時最大下降了19.00%(<0.01)。桉葉提取物清除ABTS?+能力在第15 d時也下降了17.71%(<0.01)。此外，桉葉提取物暴露在空氣中出現(xiàn)明顯吸潮、結(jié)塊現(xiàn)象，表明桉葉提取物貯藏過程中處于密閉環(huán)境有助于抗氧化性能保持。

2.2.3 pH值對桉葉提取物抗氧化能力的影響

由圖4可知，隨著貯藏天數(shù)增加，不同pH值對桉葉提取物自由基消除能力都呈下降趨勢，其中在酸性條件下桉葉提取物的抗氧化活性較為穩(wěn)定，顯著優(yōu)于堿性條件。當(dāng)處于弱堿性或者堿性時，其清除DPPH?和ABTS?自由基能力隨著時間增長顯著下降，當(dāng)pH值為11時，最大下降80.44%和67.70%(<0.01)。多酚類物質(zhì)在堿性環(huán)境下較易降解，顯著影響抗氧化能力，這也說明桉葉提取物在酸性環(huán)境下更有利于保存。這是因為多酚含有大量酸類物質(zhì)，在酸性條件下穩(wěn)定性好。相似研究也指出穇子多酚在堿性下不穩(wěn)定，而酸性條件下更加穩(wěn)定。

圖3 氧氣對桉葉提取物清除DPPH?(A)和ABTS?+(B)自由基能力的影響

圖4 不同pH對桉葉提取物清除DPPH?(A)和ABTS?+(B)自由基能力的影響

2.2.4 溫度對桉葉提取物抗氧化能力的影響

由圖5可知，隨著貯藏天數(shù)延長，桉葉提取物在4℃和25℃下抗氧化活性仍保持較高水平，而60℃條件下抗氧化活性損失顯著。其中，桉葉提取物保存在4℃和25℃條件下略有降低(>0.05)，但抗氧化能力保留較好。60℃條件下放置3 d后，桉葉提取物抗氧化能力發(fā)生顯著下降；15 d時，其清除DPPH?和ABTS?自由基能力分別達到27.06%和27.03%(<0.01)。溫度升高后多酚發(fā)生明顯的氧化或降解，引起抗氧化活性下降。研究結(jié)果表明，桉葉提取物貯藏在低溫或常溫中抗氧化效果保持較高水平。

圖5 溫度對桉葉提取物清除DPPH?(A)和ABTS?+(B)自由基能力的影響

3 結(jié)論

桉葉提取物具有良好的抗氧化能力，其清除DPPH和ABTS自由基的IC值分別為0.166和0.212 mg·mL，桉葉提取物的抗氧化能力主要源于其高含量的多酚類物質(zhì)。研究結(jié)果表明桉葉提取物貯藏在避光、避氧、低溫及酸性條件下能最大程度保持高抗氧化活性，在強堿條件和光照條件下，桉樹提取物抗氧化能力顯著降低。

本文為桉葉提取物貯藏條件篩選提供了一定的研究基礎(chǔ)，保障了桉葉提取物的質(zhì)量品質(zhì)，為后續(xù)開展桉葉提取物生物活性或應(yīng)用研究提供重要的物質(zhì)基礎(chǔ)條件。但本研究也存在一定的局限性，如貯藏時間不夠、酚類物質(zhì)變化及抗氧化評價單一等問題，有待后續(xù)研究改進。

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Study on Storage Stability ofLeaf Extract

DU Jie, LI Wei, DAI Weijie, XU Lu, CAO Yong

(1.510623)

Storage stability ofleaf extract was explored in this study based on indicators of DPPH? and ABTS?+ free radical scavenging rates. The results showed thatleaf extract has good free radical scavenging ability, and its ICvalues of DPPH? and ABTS?+ free radical scavenging rates are 0.166 mg·mLand 0.212 mg·mL, respectively. In addition,leaf extract that is stored in dark, oxygen-free, low temperature and acidic conditions has higher antioxidant activity. This article provides a basis for the antioxidant stability ofleaf extract during processing and storage, and will benefit further development and utilization ofleaf extracts.

leaf; polyphenols; storage stability; antioxidant

10.13987/j.cnki.askj.2021.02.010

TS202

A

國家重點研發(fā)計劃課題“植物多酚高值化利用關(guān)鍵技術(shù)研究”(2016YFD0600806)

杜潔(1990— )，男，工程師，主要從事食品加工研究，E-mail：dflytoch@163.com

曹庸(1966— )，男，教授，主要從事功能食品活性物研究，E-mail：caoyong2181@scau.edu.cn