張夙萍，張海星，李瑞琦，董亞娟，楊淑琴

(1甘肅省定西市藥品檢驗檢測中心，甘肅 定西；2隴西縣第一人民醫(yī)院，甘肅 隴西)

0 引言

當歸在甘肅、四川、云南等地都有種植，甘肅岷縣附近作為我國當歸的道地產(chǎn)區(qū)已有近千年的歷史，種植的當歸俗稱“岷歸”，品質(zhì)享譽國內(nèi)外，近年來在青海、甘肅河西走廊等地也有大面積種植。當 歸 為 傘 形 科植 物 當 歸的根[1]，藥性甘、辛、溫，有補血活血、潤腸通便、虛寒腹痛、風濕痹痛、跌撲損傷等功效，在臨床使用頻率高，藥用最早始于《神農(nóng)本草經(jīng)》，素有“十方九歸”之說[2]。當歸多糖是從植物當歸原料中提取的水溶性多糖，是當歸的主要活性成分之一，具有調(diào)節(jié)免疫和補血、抗氧化的功能[3]，多糖也可用于輔助治療免疫系統(tǒng)嚴重損傷的腫瘤以及免疫缺損的慢性疾病[4]。本實驗通過對不同種植地不同采挖時期的當歸頭、當歸身和當歸尾的多糖含量進行分析，探討不同地區(qū)采挖不同時期不同部位當歸多糖含量的差異，為當歸的進一步運用提供參考。

1 實驗材料

1.1 試劑

無水葡萄糖對照品(批號:110833-201908，中國食品藥品檢定研究院)，苯酚(分析純，上?；瘜W試劑有限公司，批號：20190410)，無水乙醇（分析純，國藥集團化學試劑有限公司，批號：20190423）、濃硫酸（分析純，北京化工廠，批號：2019年5月30日）。

1.2 儀器

雙通道紫外-可見分光光度計(UV-2700，日本島津)；電子天平(EL204-IC/ML503-02，梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；高速粉碎機(QE-500，浙江屹立工貿(mào)有限公司)；電熱恒溫干燥箱(G2X-GF-MBS-2，上海浦東榮豐科學儀器有限公司)；數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋(HH-6，常州國華電器有限公司)；數(shù)控超聲波清洗器(SB5200-DTD，寧波市新芝超聲儀器有限公司)；循環(huán)水式多用真空泵[SHZ-D（Ⅲ），鞏義市予華儀器有限責任公司]。

1.3 藥材

分別于2019年9、10、11月從甘肅岷縣、民樂，青海省大通縣、云南省沾益縣等地采挖，置通風陰涼處晾曬至干燥。

2 方法與結(jié)果

2.1 線性關系的考察

2.1.1 對照品溶液的制備

取無水葡萄糖對照品適量，于恒溫干燥箱105℃干燥至恒重，精密稱定無水葡萄糖15.01mg，置25ml量瓶中加水制成每1ml中含無水葡萄糖0.6004mg的標準葡萄糖對照品溶液，保存?zhèn)溆谩?/p>

2.1.2 標準曲線的繪制

精 密 量 取 對 照 品1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，分 別置50ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取上述各溶液2ml，置具塞試管中，分別加4%的苯酚溶液1ml，搖勻，迅速加入硫酸7.0ml，同時搖勻，在40℃水浴中準確保溫30min，取出，置冰水浴中5min，取出，以相應的試劑溶液為空白，在490nm波長處測定吸光度，以吸光度（A）為縱坐標，濃度（C）為橫坐標，得回歸方程為Y=6.631x-0.0377（R2=0.9994），在0.02402mg/ml-0.14410mg/ml濃度呈良好的線性關系。

2.2 當歸多糖的含量測定

2.2.1 供試品溶液的制備

分別取當歸樣品粉末（過中國藥典三號篩）各約0.5g，置圓底燒瓶中，加80%乙醇100ml加熱回流1h，抽濾；取濾渣同濾紙加水60ml加熱回流1h，趁熱抽濾，取濾渣連同濾紙再次加水60ml加熱回流1h，趁熱抽濾后合并濾液濃縮定容至100ml量瓶中，搖勻即得。

2.2.2 精密度實驗

取同批當歸藥材樣品約0.5g,按2.2.1方法進行制備,以相應的試劑溶液作為空白,于490nm波長處測定吸光度,重復6次,分別測定其吸光度值，其吸光度平均值為0.586,RSD為0.04%,說明儀器的精密度良好。

2.2.3 重復性實驗

取同一批當歸藥材樣品約0.5g,分別精密稱定,按2.2.1方法進行制備,以相應的試劑溶液作為空白,于490nm波長處測定吸光度,多糖含量平均值為11.59%,RSD為1.4%（n=6）。

2.2.4 穩(wěn)定性實驗

取同批當歸藥材樣品0.5g,按2.2.1方法進行制備,以相應的試劑溶液作為空白,每20min測定1次吸光度,1h后每30min測定1次，吸光度平均值為0.554,RSD為0.04%,說明樣品溶液在2h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.5 當歸多糖的含量測定

精密量取2ml供試品溶液置50ml的容量瓶中，加水至刻度，搖勻，再精密量取溶液2ml于具塞試管中，自“加4%的苯酚溶液1ml”起，依法測定各樣品的吸光度，根據(jù)回歸方程計算，見表1、圖1。

表1 不同產(chǎn)地不同采收期當歸不同部位當歸多糖含量測定結(jié)果

圖1 不同產(chǎn)地不同時期不同部位當歸多糖含量比較

3 討論

本文采用了苯酚-硫酸法利用雙通道紫外分光光度計測定當歸不同部位中的當歸多糖含量，在樣品制備中發(fā)現(xiàn)單次回流與兩次回流當歸多糖含量差異較大，故采用兩次回流提取[5]。結(jié)果顯示，該法靈敏度高，精密度、重現(xiàn)性和回收率好。

由2.2.5可知，同一采收期不同產(chǎn)地的當歸中，當歸多糖含量的平均值中甘肅民樂＞甘肅岷縣＞云南沾益＞青海大通，這也為當?shù)禺敋w生產(chǎn)中當歸多糖的提取提供一定依據(jù)。同一產(chǎn)地不同部位的當歸中，當歸身的多糖含量高于當歸頭和當歸尾。4個不同產(chǎn)地的當歸中，甘肅岷縣、民樂和青海當歸9月底、10月中旬多糖含量差異較小且多糖含量較高，與當?shù)禺敋w采收期相吻合[6]，11月初的多糖含量與其他兩月差異較大且多糖含量較小，所不同的是云南當歸多糖含量差異較小的是10月下旬至11月上中旬，當歸多糖含量也較高，而9月下旬多糖含量與其他兩月差異較大多糖含量相對較低，說明不同產(chǎn)地不同時期采收等對當歸多糖含量影響較大[7,8]。