張洪宇,芮雅寶,李 軍,陸 通,王燮辰,蒲艷軍,王旭垠,閆 蕾

原發(fā)性肝癌是常見(jiàn)的一種惡性腫瘤，發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，且具有較高病死率，嚴(yán)重威脅患者生命健康、影響患者生活質(zhì)量[1]。原發(fā)性肝癌早期癥狀較為隱匿，潛伏時(shí)間長(zhǎng)，發(fā)現(xiàn)時(shí)通常已屬中晚期，大部分失去最佳手術(shù)治療時(shí)機(jī)。而經(jīng)導(dǎo)管肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)(TACE)成為中晚期肝癌主要治療方法，其在延長(zhǎng)患者生存期、抑制腫瘤生長(zhǎng)等方面有良好療效[2-3]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA)與癌癥發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移關(guān)系緊密，而尚無(wú)有關(guān)長(zhǎng)鏈反義非編碼RNA(lncRNA-ANRIL)與肝癌關(guān)系的報(bào)道[4]。本文通過(guò)分析中晚期肝癌患者TACE治療后外周血中l(wèi)ncRNA-ANRIL的表達(dá)與患者預(yù)后相關(guān)性，以期為改善患者預(yù)后提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料:選擇我院于2015年1月-2019年1月收治的中晚期肝癌患者97例，符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2011版)》[5]診斷標(biāo)準(zhǔn)，且均行TACE術(shù)治療。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)臨床表現(xiàn)、影像學(xué)及病理學(xué)證實(shí)為原發(fā)性肝癌，且TNM分期為Ⅲb-Ⅳ期；②符合TACE術(shù)指征，且臨床資料完整；③獲得知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①轉(zhuǎn)移性肝癌、血管瘤及其他惡性腫瘤者；②TACE術(shù)禁忌者；③術(shù)前合并急慢性感染者或凝血功能障礙者；④精神疾病者；⑤妊娠或哺乳期婦女。納入的97例患者中，男性59例，女性38例；年齡31～78歲，平均年齡(56.73±8.97)歲；體質(zhì)指數(shù)(BMI)22.41±1.28 kg/m2；TNM分期：Ⅲb期56例，Ⅳa期28例，Ⅳb期13例。受試者均經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法:所有患者均行TACE術(shù)治療，具體方法：穿刺點(diǎn)選取患者右側(cè)腹股溝下方韌帶中點(diǎn)下1～2 cm處，以Selding穿刺及時(shí)，經(jīng)肝總動(dòng)脈、腹主動(dòng)脈及股動(dòng)脈將5F導(dǎo)管超選擇至腫瘤供血?jiǎng)用}，固定導(dǎo)管頭端，注入700 mg 5-氟尿嘧啶、40 mg表阿霉素、80 mg順鉑與5～30 mL碘化油乳劑充分混合成化療藥碘化油乳劑，行腫瘤血管栓塞。術(shù)后進(jìn)行常規(guī)營(yíng)養(yǎng)支持、補(bǔ)液等治療。

1.3 預(yù)后評(píng)價(jià):所有患者均隨訪至2020年1月31日，觀察患者總體生存時(shí)間和無(wú)進(jìn)展生存時(shí)間，以死亡或隨訪末為終點(diǎn)，其中以復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和死亡為預(yù)后不良，反之為預(yù)后良好。

1.4 觀察指標(biāo):①觀察術(shù)前、術(shù)后7 d和術(shù)后1個(gè)月肝功能變化，分別于術(shù)前、術(shù)后7 d和術(shù)后1個(gè)月清晨空腹采集3 mL外周靜脈血，離心半徑10 cm，3 000 r/min，離心12 min，取上清液，采用Dxc 800TB全自動(dòng)生化儀測(cè)定肝功能指標(biāo)總膽紅素(TBIL)、直接膽紅素(DBIL)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平。②觀察術(shù)前、術(shù)后7 d和術(shù)后1個(gè)月外周血lncRNA-ANRIL表達(dá)，分別于術(shù)前、術(shù)后7 d和術(shù)后1個(gè)月清晨空腹采集3 mL外周靜脈血，采用一步法總RNA提取試劑Trizol(美國(guó)Invitrogen公司)提取總RNA，且逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量RCR(RT-PCR)。使用primer 6.0軟件設(shè)計(jì)引物，RT-PCR反應(yīng)，95 ℃反應(yīng)30 s，35個(gè)循環(huán)；設(shè)定95 ℃ 10 s、60 ℃ 30 s。采用2-△△Ct計(jì)算相對(duì)表達(dá)量。具體引物見(jiàn)表1。③觀察不同預(yù)后情況外周血中l(wèi)ncRNA-ANRIL表達(dá)水平。④GAPDH是糖酵解反應(yīng)中的一個(gè)酶，其在組織中一般都高水平表達(dá)且表達(dá)量相對(duì)恒定，被用作該實(shí)驗(yàn)操作的標(biāo)準(zhǔn)化內(nèi)參。

表1 具體引物

2 結(jié)果

2.1 術(shù)前、術(shù)后7 d和術(shù)后1個(gè)月肝功能變化比較:術(shù)前血清TBIL、DBIL、AST和ALT水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；術(shù)后7 d和術(shù)后1個(gè)月血清TBIL、DBIL、AST和ALT水平較術(shù)前升高，而術(shù)后1個(gè)月低于術(shù)后7 d(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 術(shù)前、術(shù)后7 d和術(shù)后1個(gè)月肝功能變化比較

2.2 術(shù)前、術(shù)后7 d和術(shù)后1個(gè)月外周血lncRNA-ANRIL表達(dá)比較:術(shù)前外周血lncRNA-ANRIL表達(dá)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；術(shù)后7 d和術(shù)后1個(gè)月外周血lncRNA-ANRIL表達(dá)較術(shù)前降低，且術(shù)后1個(gè)月低于術(shù)后7 d(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 術(shù)前、術(shù)后7d和術(shù)后1個(gè)月外周血lncRNA-ANRIL表達(dá)比較

2.3 預(yù)后情況:所有患者均隨訪至2020年1月31日，隨訪12～60個(gè)月。平均總生存期為38.83個(gè)月(見(jiàn)圖1，目錄后)。根據(jù)預(yù)后情況分為預(yù)后良好組52例(53.61%)與預(yù)后不良組45例(46.39%)。

2.4 不同預(yù)后情況外周血lncRNA-ANRIL表達(dá)比較:預(yù)后良好組外周血lncRNA-ANRIL表達(dá)低于預(yù)后不良組(P<0.05)，見(jiàn)表4。

表4 不同預(yù)后情況外周血lncRNA-ANRIL表達(dá)比較

3 討論

正常肝臟組織主要由門靜脈供血，占75%以上；肝癌主要由其所在的肝葉動(dòng)脈供血，占95%左右。因此，選擇性阻斷肝動(dòng)脈可使腫瘤組織缺血、壞死。腫瘤生長(zhǎng)過(guò)大或多發(fā)、跨葉時(shí)通常需接受多支供血，有時(shí)也會(huì)由于主要供血?jiǎng)用}被栓塞而通過(guò)側(cè)支循環(huán)供血。故而，臨床上采用經(jīng)肝動(dòng)脈治療能夠在區(qū)域范圍內(nèi)將肝癌細(xì)胞有效殺滅且對(duì)非瘤肝組織影響較小[6]。TACE作為一種介入姑息治療手段，將化療藥物主要通過(guò)介入方法直接注入腫瘤供血?jiǎng)用}中，并應(yīng)用碘化油乳化進(jìn)行栓塞，使肝動(dòng)脈供血阻斷，維持腫瘤病灶局部較高藥物濃度，從而促進(jìn)腫瘤病灶縮小和腫瘤細(xì)胞壞死[7]。本文研究表明，術(shù)后7d和術(shù)后1個(gè)月血清TBIL、DBIL、AST和ALT水平較術(shù)前升高而術(shù)后1個(gè)月低于術(shù)后7d，提示TACE治療后，可短暫導(dǎo)致患者肝功能損害，且逐漸出現(xiàn)好轉(zhuǎn)，認(rèn)為TACE導(dǎo)致肝功能損害的機(jī)制可能是由于TACE治療腫瘤同時(shí)造成非腫瘤組織缺血缺氧及缺血后再灌注損傷，導(dǎo)致自由基介導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷；且應(yīng)用大劑量化療藥物灌注入肝臟中，從而使部分化療藥物進(jìn)入癌變組織旁的非癌區(qū)難以避免，不同程度殺傷正常肝細(xì)胞。隨著近年來(lái)臨床上微導(dǎo)管的使用，TACE對(duì)肝功能損傷明顯減輕。

lncRNA成為近年來(lái)研究熱點(diǎn)，主要是長(zhǎng)度200個(gè)堿基且不具備編碼蛋白功能的一類RNA分子。研究表明，許多l(xiāng)ncRNA在多種腫瘤發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮作用[8-10]。lncRNA已被證實(shí)在肝癌、胃癌等消化系統(tǒng)腫瘤中診斷價(jià)值較大。Ma等[11]學(xué)者研究報(bào)道顯示，ANRIL能夠通過(guò)街道上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生，促進(jìn)肝癌轉(zhuǎn)移。Lan等[12]學(xué)者研究報(bào)道顯示，ANRIL能夠通過(guò)表皮生長(zhǎng)因子受體依賴性信號(hào)通過(guò)，促進(jìn)胃癌侵襲-轉(zhuǎn)移級(jí)聯(lián)反應(yīng)及促進(jìn)胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)，且胃癌組織中ANRIL表達(dá)高于正常組織。本文研究表明，術(shù)后7d和術(shù)后1個(gè)月外周血lncRNA-ANRIL表達(dá)較術(shù)前降低，且術(shù)后1個(gè)月低于術(shù)后7d，預(yù)后良好組外周血lncRNA-ANRIL表達(dá)低于預(yù)后不良組，提示TACE治療后可下調(diào)外周血lncRNA-ANRIL表達(dá)，且與預(yù)后密切相關(guān)。

綜上所述，中晚期肝癌患者TACE治療后外周血lncRNA-ANRIL表達(dá)降低，且與預(yù)后密切相關(guān)，預(yù)后越差lncRNA-ANRIL表達(dá)越高。