石異 喻勇 佘寧

摘要：為優(yōu)選雙黃連注射液最佳滅菌條件，采用《中華人民共和國獸藥典》2015版中滅菌法下濕熱滅菌法中3種滅菌程序對雙黃連注射液進行滅菌，運用高效液相色譜法、中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2012.0版本）對3批雙黃連注射液的3種有效成分含量、指紋圖譜相似度進行比較。結果表明，在濕熱滅菌法下，雙黃連注射液采用121 ℃×30 min滅菌程序滅菌效果最佳。

關鍵詞：雙黃連注射液;滅菌程序;比較

中圖分類號：S859.5? ? ? ? 文獻標識碼：A? ? ? ? 文章編號：1007-273X（2021）02-0007-02

雙黃連注射液是獸藥中常用的中成藥制劑。其含有新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、連翹脂苷A、黃芩苷和黃芩素等多種成分[1]，這些成分大多含有苷健、酯健等結構[2]，在高溫濕熱滅菌條件下易發(fā)生水解或氧化反應，使雙黃連注射液的有效成分發(fā)生變化，從而使其質量降低。因此，為了保障雙黃連注射液的質量，研究滅菌溫度和滅菌時間對雙黃連注射液質量的影響是非常必要的。

目前生產上常用的滅菌方法有濕熱滅菌法、干熱滅菌法和氣體滅菌法等。而濕熱滅菌法由于滅菌能力強，是目前應用最廣泛的滅菌方法。根據《中華人民共和國獸藥典》（2015年版）滅菌法中相關要求，濕熱滅菌法通常采用121 ℃×15 min、121 ℃×30 min及116 ℃×40 min 3種程序。

雙黃連注射液主要活性成分是黃芩苷、綠原酸和連翹苷[3]。指紋譜圖可以快速、準確地測定雙黃連注射液中綠原酸、黃芩苷和連翹苷等有效成分的含量[1，4]。所以，本試驗采用濕熱滅菌法，在滅菌程序已驗證，F(xiàn)0≥8的基礎上，比較在121 ℃×15 min、121 ℃×30 min及116 ℃×40 min 3種滅菌程序下雙黃連注射液的3種有效成分含量及指紋圖譜相似度。通過試驗數據得出雙黃連注射液的最佳滅菌工藝，以期為雙黃連注射液的質量保證提供科學依據。

1 儀器與試劑

SPD-20A型高效液相色譜儀[島津企業(yè)管理（中國）有限公司]，320-S型pH計、AE-240型電子分析天平[梅特勒-托利多國際貿易（上海）有限公司]，YXQ.WF-Z型滅菌柜（廣州市科洋醫(yī)療設備有限公司），中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2012.0版本）

對照品：綠原酸、黃芩苷、連翹苷（中國獸藥藥品監(jiān)察所），雙黃連注射液若干（四川齊全紅動物藥業(yè)有限公司），其余試劑均為分析純。

2 試驗方法

2.1 生產工藝

將黃芩飲片加適量水煎煮3次，第1次2 h，第2次、第3次各1 h，合并煎液，過濾，濾液濃縮并在80 ℃時加入2 mol/L鹽酸溶液調節(jié)pH至1.0～2.0，保溫30 min，靜置12 h，濾過;沉淀加6～8倍量水，攪拌，用40%氫氧化鈉溶液調節(jié)pH至7.0，加等量乙醇，攪拌使溶解，濾過;濾液用2 mol/L鹽酸溶液調節(jié)pH至2.0，60 ℃保溫30 min，靜置12 h，濾過;沉淀用乙醇洗凈，調節(jié)pH至7.0，回收乙醇。金銀花、連翹加適量溫水浸泡30 min，煎煮2次，每次1.5 h，合并煎液，濾過;濾液濃縮至相對密度為1.20～1.25（70～80 ℃），冷卻至40 ℃時緩慢加入乙醇，使含醇量達75%，充分攪勻，靜置12 h，濾取上清液，殘渣加75%乙醇適量，攪勻，靜置12 h，濾過，合并乙醇液，回收乙醇至無醇味，加入上述黃芩提取物，并加水適量，用40%氫氧化鈉溶液調節(jié)pH至7.0，攪勻，冷藏（4～8 ℃）72 h，濾過，濾液調節(jié)pH至7.0，加水至1 000 mL，攪勻，靜置12 h，濾過，灌封，滅菌，即得。

2.2 滅菌工藝

采用濕熱滅菌法，比較在121 ℃×15 min、121 ℃×30 min及116 ℃×40 min 3種滅菌程序下3批雙黃連注射液的3種有效成分含量及指紋圖譜相似度。

3 結果與分析

不同滅菌程序下3批雙黃連注射液3種有效成分含量、指紋圖譜相似度見表1。由表1可見，在116 ℃×40 min的滅菌程序下，雙黃連注射液綠原酸的含量最高，這是由于綠原酸受熱會水解。121 ℃×30 min的滅菌程序下，雙黃連注射液的指紋圖譜相似度最高。

4 結論

試驗按照《中華人民共和國獸藥典》2015版中濕熱滅菌法測定在121 ℃×15 min、121 ℃×30 min及116 ℃×40 min 3種滅菌程序下3批雙黃連注射液的3種有效成分含量。結果表明，在濕熱滅菌法下，雙黃連注射液采用121 ℃×30 min滅菌程序滅菌效果最好，雙黃連注射液的指紋圖譜相似度最高。

由于《中華人民共和國獸藥典》（2015版）滅菌法中規(guī)定：濕熱滅菌法除了可以采用121 ℃×15 min、121 ℃×30 min及116 ℃×40 min 3種滅菌程序外，還可以采用其他的溫度和時間參數。但無論采用何種滅菌溫度和時間參數，都必須證明所采用的滅菌工藝和監(jiān)控措施在日常運行過程中能確保物品滅菌后的SAL≤10-6。本試驗只驗證了滅菌法中121 ℃×15 min、121 ℃×30 min及116 ℃×40 min 3種滅菌程序。在這3種程序中，121 ℃×30 min滅菌程序對雙黃連注射液影響程度最小。

參考文獻：

[1] 王艷偉，宋立言，代雪平，等.雙黃連注射液HPLC指紋圖譜研究[J].中成藥，2011，33（9）：1461-1464.

[2] 吳立軍.天然藥物化學[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2007.

[3] 林仙軍. 中獸藥雙黃連注射液鑒偽技術研究[D].杭州：浙江大學，2016.

[4] 李 楠，杜怡婷，馬 鑫，等.雙黃連色譜指紋圖譜和譜效關系研究進展[J/OL].首都師范大學學報（自然科學版）：1-13[2020-12-09].