楊 玲，李紅芳，白宇琛，句榮輝，于雪芝，余文博，溫 凱，沈建忠，王戰(zhàn)輝*

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 動(dòng)物源食品安全北京市實(shí)驗(yàn)室，北京 100193；2.北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院，北京 102442)

嚙齒類(lèi)動(dòng)物不但會(huì)對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成危害，導(dǎo)致經(jīng)濟(jì)損失，還會(huì)攜帶多種疾病，傳播給人類(lèi)及動(dòng)物[1-2]。目前，使用鼠藥是最經(jīng)濟(jì)有效的控制嚙齒類(lèi)動(dòng)物的方式。鼠藥是一類(lèi)對(duì)嚙齒類(lèi)動(dòng)物具有毒殺作用的化合物，國(guó)內(nèi)外鼠藥種類(lèi)繁多，常見(jiàn)的鼠藥有20多種[3-4]。大多數(shù)鼠藥對(duì)人畜均具有較強(qiáng)毒性，由于使用或管理不當(dāng)，近年來(lái)由誤食、二次中毒、自殺及惡意投毒等原因?qū)е碌闹卸臼录Ｓ邪l(fā)生，對(duì)人類(lèi)及非靶標(biāo)動(dòng)物的生命健康產(chǎn)生了嚴(yán)重威脅，同時(shí)造成了嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失和惡劣社會(huì)影響。不同鼠藥的毒性、潛伏期、中毒癥狀以及病理特征等各異，易與一些內(nèi)科疾病混淆，因此建立鼠藥中毒臨床前檢測(cè)方法特別是快速檢測(cè)方法，是確定治療方案和搶救措施中十分關(guān)鍵的一環(huán)，可為鼠藥中毒臨床搶救和治療贏得寶貴時(shí)間，為治療處理提供指導(dǎo)信息。

1 鼠藥分類(lèi)

鼠藥種類(lèi)繁多，根據(jù)藥物性質(zhì)可分為抗凝血?jiǎng)╊?lèi)、致痙攣劑類(lèi)、維生素D類(lèi)、無(wú)機(jī)化合物類(lèi)、有機(jī)磷類(lèi)、有機(jī)氯類(lèi)、代謝毒物類(lèi)及其他殺鼠劑[4-5](表1)。其中，士的寧在19世紀(jì)末和20世紀(jì)初應(yīng)用較多，1988年美國(guó)頒布了禁令以保護(hù)非靶標(biāo)物種。但于2009年又將士的寧歸類(lèi)為限制使用產(chǎn)品[6-7]；溴鼠胺屬于代謝毒物類(lèi)殺鼠劑，經(jīng)美國(guó)環(huán)保局認(rèn)定可用作滅鼠劑[8]；有機(jī)氯、有機(jī)磷類(lèi)殺鼠劑雖然初次滅鼠效果好，但是連續(xù)使用會(huì)致使鼠拒食，降低滅鼠效果[9-10]；維生素D類(lèi)鼠藥安全性較高，是唯一可施用于食品加工場(chǎng)所的一類(lèi)殺鼠劑，但滅鼠時(shí)需要較大藥物劑量，導(dǎo)致滅鼠效率較低[11-14]；鼠特靈、滅鼠優(yōu)、紅海蔥苷、α-萘硫脲等殺鼠劑現(xiàn)已較少使用或已停止使用[15]。致痙攣劑類(lèi)的鼠立死、殺鼠硅、毒鼠強(qiáng)(Tetramethylenedisulfotetramine，TETS)，代謝毒物類(lèi)鼠藥氟乙酰胺(Fluoroacetamide，F(xiàn)AM)和氟乙酸鈉，有機(jī)氯類(lèi)鼠藥異狄氏劑均為劇毒性藥物，全球各國(guó)已明令禁止使用[16-18]。由于FAM和TETS毒性強(qiáng)、殺鼠效果好、合成簡(jiǎn)單等特點(diǎn)，當(dāng)前仍存在違法使用現(xiàn)象，由此導(dǎo)致的自殺及惡意投毒事件時(shí)有發(fā)生?？鼓?jiǎng)╊?lèi)鼠藥(Anticoagulant rodenticides，ARs)與其他鼠藥相比，毒性低、滅鼠效果好，是目前應(yīng)用最為廣泛的一類(lèi)殺鼠劑，根據(jù)其結(jié)構(gòu)可分為兩類(lèi)：香豆素類(lèi)和茚滿二酮類(lèi)[19]?；赥ETS和FAM造成中毒的社會(huì)危害性及ARs廣泛使用性，本文重點(diǎn)針對(duì)FAM、TETS和ARs進(jìn)行了論述。

表1 鼠藥的分類(lèi)[4]Table 1 Categories of rodenticides[4]

2 常見(jiàn)鼠藥中毒概況

據(jù)報(bào)道，我國(guó)每年發(fā)生急性鼠藥中毒達(dá)50 000～70 000人，死亡率為各種傳染病的66.7倍[9,11]。如1996～2005年間，僅江西景德鎮(zhèn)由鼠藥導(dǎo)致的中毒人數(shù)為772人[20]。何婧等[21]調(diào)查了439例鼠藥中毒患者的中毒流行病學(xué)特點(diǎn)，其中誤服和自服患者占比分別為20.72%、79.27%。常見(jiàn)鼠藥中毒概況匯總?cè)缦拢?/p>

2.1 氟乙酰胺(FAM)中毒概況

FAM是我國(guó)禁止使用的神經(jīng)性、劇毒殺鼠劑，具有毒性強(qiáng)、發(fā)病快、無(wú)特效解毒藥等特點(diǎn)，口服半數(shù)致死量(LD50)為2～10 mg/kg，酸性環(huán)境下水解為氟乙酸，在堿性環(huán)境下水解為氟乙酸鈉。FAM可通過(guò)皮膚、呼吸道和消化道進(jìn)入體內(nèi)，影響三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate，ATP)的生成以及中間產(chǎn)物的代謝過(guò)程。FAM阻止三羧酸循環(huán)的過(guò)程可引起高活性氧自由基的激增，ATP生成量減少，細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)松散，電子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，極容易被氧自由基奪去電子，生成的氟乙酸和氟檸檬酸可造成心、腦、肺和肝等的損傷，若不及時(shí)搶救會(huì)引發(fā)死亡[1]。FAM雖然已經(jīng)被禁止生產(chǎn)、銷(xiāo)售和使用，但由于監(jiān)管力度不強(qiáng),加之FAM毒性強(qiáng)、殺鼠效果好、合成簡(jiǎn)單等特點(diǎn)，目前市場(chǎng)上仍有以FAM為主要成分的滅鼠藥銷(xiāo)售。由FAM導(dǎo)致的中毒案例國(guó)內(nèi)外均有報(bào)道，如1995～2019年，中國(guó)有3 000多起中毒事件與FAM有關(guān)；1963年斯馬爾登事件、威爾士的梅瑟蒂德菲爾等中毒事件[22]。FAM造成的食物中毒、自殺和投毒事件層出不窮，表2列舉了國(guó)內(nèi)外的FAM重大中毒事件。

表2 FAM重大中毒事件[1]Table 2 Major poisoning cases of FAM[1]

2.2 毒鼠強(qiáng)(TETS)中毒概況

TETS具有神經(jīng)毒性，其毒性為氰化鉀的100倍，且無(wú)有效解毒藥。TETS不僅對(duì)嚙齒類(lèi)動(dòng)物有毒，而且會(huì)導(dǎo)致人類(lèi)中毒[23]。TETS的急性毒性(LD50)為0.1～0.3 mg/kg體重，其中毒的輕微癥狀表現(xiàn)為頭痛、頭暈和疲勞，嚴(yán)重的臨床特征包括意識(shí)減退、癲癇發(fā)作、尿失禁、昏迷和呼吸衰竭死亡，α2β3γ2被證明是最重要的γ-氨基丁酸A型(GABAA)受體，由GABAA受體阻斷引起的癲癇發(fā)作可持續(xù)數(shù)年[1]。由于TETS劇烈的毒性和穩(wěn)定性，易造成二次中毒。每年在美國(guó)有數(shù)十起中毒事件，但在中國(guó)發(fā)生的中毒人數(shù)最多[24]。據(jù)報(bào)道，全國(guó)每年因TETS等劇毒鼠藥導(dǎo)致的中毒人數(shù)約為7萬(wàn)人，僅2002年利用TETS等劇毒鼠藥投毒作案51起，占全國(guó)重特大投毒案件69%。1991～2010年僅在中國(guó)就發(fā)生了14 000多例TETS中毒事件，其中932例死亡[25]。我國(guó)近20年發(fā)生的TETS中毒事件如表3。

表3 毒鼠強(qiáng)重大中毒事件[1]Table 3 Major poisoning cases of TETS[1]

2.3 抗凝血鼠藥(ARs)中毒概況

與其他鼠藥相比，ARs相對(duì)毒性低、滅鼠效果好，是使用范圍最廣的一類(lèi)殺鼠劑[19]。ARs在結(jié)構(gòu)上類(lèi)似于維生素K，可以競(jìng)爭(zhēng)性抑制維生素K循環(huán)，使得維生素K無(wú)法生成Vitamin K1H2，阻斷維生素K循環(huán)。而一旦維生素K循環(huán)中斷后則無(wú)法產(chǎn)生活性凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ，導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)凝血功能系統(tǒng)障礙，凝血時(shí)間延長(zhǎng)，造成毛細(xì)血管破裂、皮下出血、牙齦出血、內(nèi)臟出血等癥狀，嚴(yán)重者甚至死亡[2]。唐玲玲[26]對(duì)49例兒童ARs中毒事件進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)兒童中毒病例逐年上升，這可能與香豆素類(lèi)殺鼠藥普遍使用以及監(jiān)管力度缺乏有關(guān)。四川大學(xué)華西醫(yī)院在2008～2016年間共診斷并治療了65名抗凝血?jiǎng)╊?lèi)鼠藥中毒兒童[7]。Yan等[27]報(bào)道的2011～2013年間上海117例鼠藥中毒患者中，主要中毒人群為0～9歲兒童。分析中毒原因可能是由于ARs多為色彩鮮艷的固體拌料，比較吸引兒童注意，從而導(dǎo)致兒童誤服[28]。另外，據(jù)美國(guó)國(guó)家毒物控制中心統(tǒng)計(jì)，1987～2018年間，平均每年由ARs導(dǎo)致的中毒人數(shù)約為11 021人，1987～2002年凝血類(lèi)鼠藥中毒人數(shù)逐漸增加并達(dá)到最高值，2002～2018年中毒人數(shù)持續(xù)下降[29-36](圖1)。其中，誤服鼠藥中毒患者占比約為95%，服毒自殺患者約占2%～4%。按照年齡分布統(tǒng)計(jì)，5歲以下兒童中毒所占比例較高(88%)，成年人中毒所占比例較低(9%)。

圖1 1987～2018年凝血類(lèi)鼠藥中毒統(tǒng)計(jì)Fig.1 Annual reported exposures of ARs from 1987 to 2018

3 鼠藥常用檢測(cè)方法

目前鼠藥的檢測(cè)方法主要有化學(xué)顯色法，基于儀器的分析方法(如液相色譜法、氣相色譜法、紫外分光光度法、離子色譜法)，以及基于抗原抗體的免疫分析方法等。

3.1 化學(xué)顯色法

王大力等[37]基于奈氏試劑法、異羥肟酸鐵反應(yīng)法和氯-碘化鉀淀粉法對(duì)FAM進(jìn)行快速檢測(cè)。FAM與奈氏試劑作用生成黃棕色沉淀，陽(yáng)性率為51.57%；FAM與羥胺在堿性環(huán)境下與三價(jià)鐵離子作用生成紫紅色異羥肟酸絡(luò)合物，陽(yáng)性率為29.27%；FAM與碘化鉀淀粉作用，遇氯后使碘游離而將淀粉變藍(lán)，陽(yáng)性率為31.71%。張洪歌[38]系統(tǒng)比較了市場(chǎng)上常見(jiàn)的FAM快速檢測(cè)產(chǎn)品，優(yōu)化了提取方法。果蔬食材樣品為2 g時(shí)，使用4 mL水作為提取溶劑，通過(guò)含有0.5 g活性炭的過(guò)濾柱過(guò)濾后，回收率較好。對(duì)FAM添加濃度為50.0和100.0 μg/g的果蔬食材進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，發(fā)現(xiàn)4種FAM快檢產(chǎn)品的靈敏度高(達(dá)100%)、準(zhǔn)確性好(94%以上)、適用性強(qiáng)。同時(shí)也對(duì)TETS快速檢測(cè)產(chǎn)品進(jìn)行了比較?；瘜W(xué)顯色法檢測(cè)TETS常用的是變色酸法和鹽酸苯肼法，TETS經(jīng)乙酸乙酯提取，活性炭過(guò)濾后對(duì)食材檢測(cè)有較好的回收率和色素吸附效果，添加5.0和10.0 μg/g的TETS果蔬食材檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)，10種快檢產(chǎn)品中有3種TETS快檢產(chǎn)品靈敏度高(均達(dá)到100%)、準(zhǔn)確性好(準(zhǔn)確度在95%以上)、適用性強(qiáng)。鄭曉娟[39]將TETS用有機(jī)溶劑提取、純化后，用分解劑分解，其兩個(gè)分解產(chǎn)物二甲磺胺和甲醛在一定條件下與顯色劑變色酸和納氏試劑作用后呈顯色反應(yīng)，可檢測(cè)其是否存在。

3.2 儀器分析方法

3.2.1 液相色譜(液相色譜-質(zhì)譜)法孟慶玉等[40]建立了同時(shí)測(cè)定食物中毒樣本中敵鼠鈉鹽、殺鼠醚和殺鼠靈的高效液相色譜法，以乙腈-乙酸銨(57∶43，體積比)為流動(dòng)相，樣品經(jīng)C18柱分離后，DAD二極管陣列檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，得到固體樣本的檢出限(Limit of detection,LOD)為0.015 μg/g，液體樣本的LOD為0.003 μg/mL，平均加標(biāo)回收率為85%～109.2%。Guan等[41]采用HPLC-MS/MS法測(cè)定血液和尿液中華法令、殺鼠醚、敵鼠(Diphacinone，DPN)、氯敵鼠和溴敵隆的含量，此方法采用大氣壓化學(xué)電離，測(cè)得血液和尿液的檢出限分別為5 ng/mL和2.5 ng/mL。Imran等[42]采用不同萃取方法對(duì)不同樣品進(jìn)行前處理，在熒光或紫外兩種檢測(cè)器模式下，使用HPLC-MS/MS法對(duì)血漿、血清、尿液、肝臟和食物等樣本中的抗凝血類(lèi)鼠藥進(jìn)行了定量分析。王怡君等[43]為應(yīng)對(duì)臨床中毒快檢的需求，建立了干血斑樣本中12種抗凝血鼠藥的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析方法。沈衛(wèi)東等[44]建立了HPLC-MS/MS方法同時(shí)對(duì)FAM和氟乙酸鈉進(jìn)行檢測(cè)，此方法快速、靈敏且不需要衍生化，F(xiàn)AM的LOD僅為10 μg/L，線性范圍為10～500 μg/L，氟乙酸鈉的線性范圍為10～500 μg/L，相關(guān)系數(shù)(R2)均可達(dá)到0.999 9，適用于痕量有毒物質(zhì)的定性和定量檢測(cè)。Owens等[45]建立的HPLC-MS可用于測(cè)定飲料(包括牛奶、果汁、茶、可樂(lè)和水)中摻入的TETS。

3.2.2 氣相色譜(氣相色譜-質(zhì)譜)法Bullard等[46]采用GC測(cè)定樣品中DPN和氯敵鼠的殘留，測(cè)定前將DPN氧化轉(zhuǎn)變成苯甲酮，用電子捕獲器檢測(cè)，血液樣品中檢測(cè)下限為10 ng/mL，奶樣為0.5 ng/mL。陳堅(jiān)等[47]采用GC-MS對(duì)血清中DPN進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定流程為乙酸乙酯-乙醇(2∶1，體積比)對(duì)樣本進(jìn)行萃取，HP-5MS交聯(lián)彈性毛細(xì)管石英柱進(jìn)行分離，氦氣為載氣進(jìn)行質(zhì)譜分析，藥物濃度在0～2.5 mg/L范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好，LOD為4×10-4mg/L。目前，僅河北省和司法部司法鑒定科學(xué)技術(shù)研究所建立了關(guān)于鼠藥中毒樣品、血液和尿液中FAM、TETS測(cè)定的氣相色譜法(DB 13/T 444-2000；SF/Z JD0107003-2010)。Wu等[48]采用GC測(cè)定了TETS，測(cè)得平均回收率為89.8%，LOD為1.00 ng/mL。馬永建等[49]報(bào)道了GC-MS對(duì)中毒樣品中FAM的鑒定，利用FAM的特征離子峰m/z77、44進(jìn)行定性和定量測(cè)定，建立的FAM檢測(cè)方法的線性范圍5～40 g/mL，LOD為2 g/mL，樣品加標(biāo)回收率為52.25%～94.30%。封雷等[50]用GC/FID測(cè)定食品及生物材料中FAM，其LOD為12.5 g/mL，RSD為6.5%～7.9%，回收率為72%～85%。陳國(guó)雄等[51]應(yīng)用升溫毛細(xì)管氣質(zhì)聯(lián)用法建立了快速檢測(cè)TETS和FAM的分析方法，二氯甲烷萃取后回收率為62.3%，采用氣相色譜氮磷檢測(cè)器法對(duì)食品和組織中的TETS進(jìn)行檢測(cè)，其LOD為0.02 ng/mL[52]。Zeng等[53]還建立了氣相色譜/火焰熱離子檢測(cè)器結(jié)合直接浸入式固相微萃取(DI-SPME)測(cè)定人尿中TETS的分析方法，TETS的定量限為0.082 μg/mL。

3.2.3 紫外分光光度法谷日旭等[54]應(yīng)用紫外分光光度法測(cè)定中毒樣品中DPN含量，通過(guò)紫外吸收光譜法進(jìn)行定性分析，確定為陽(yáng)性后再用雙波長(zhǎng)紫外分光光度法進(jìn)行定量分析，測(cè)得小米湯樣和小麥面粉樣的加標(biāo)回收率分別為94.6%和93.3%，RSD分別為3.8%和4.7%。紫外分光光度法具有操作簡(jiǎn)單、分析速度快等特點(diǎn)，但DPN在286 nm處的紫外吸收很大，不同樣品在此處也有不同程度的本底吸收，因此容易出現(xiàn)假陽(yáng)性和測(cè)定結(jié)果偏高的現(xiàn)象。王群等[55]在硫靛法檢驗(yàn)FAM傳統(tǒng)方法的基礎(chǔ)上，使用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)基于硫靛反應(yīng)檢驗(yàn)FAM，靈敏度為2 μg/mL，較傳統(tǒng)硫靛法提高了10倍。

3.2.4 離子色譜法沈平等[56]將FAM與熱的氫氧化鈉反應(yīng)生成易離解的氟乙酸鹽，采用離子色譜法分析FAM，其線性范圍為0.1～10 mg/L，回歸系數(shù)(r)為0.999 6，方法的回收率為90.1%～98.2%，日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.94%～2.53%。王燕軍等[57]建立了離子色譜法檢驗(yàn)生物檢材中的FAM，分析結(jié)果表明生物檢材中FAM的回收率大于90%，氟乙酸鈉和氟離子的線性范圍分別為20～500 ng/g和1 ng/g～1 μg/g，檢出限分別為10 ng/g和1 ng/g，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于1%。采用離子色譜法能減少衍生化步驟，實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中FAM的直接檢測(cè)，但靈敏度不如液相色譜法和氣相色譜法。

上述儀器分析方法是測(cè)定樣本中鼠藥化合物的常用方法，具有準(zhǔn)確度和靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)，但儀器設(shè)備操作復(fù)雜、檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)、樣本前處理復(fù)雜，不適合大批量樣本的快速篩查。

3.3 免疫分析法

儀器檢測(cè)技術(shù)雖然靈敏，但不具有快速和高通量的特征。免疫層析技術(shù)具有操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)短、不依賴大型儀器等優(yōu)點(diǎn)?；诳乖?抗體特異性相互作用的免疫分析方法具有快速、易用、成本低等優(yōu)點(diǎn)，在毒物臨床診斷中具有廣闊的應(yīng)用前景，是一種快速篩選食品中有害化合物的主流技術(shù)[58]。免疫檢測(cè)技術(shù)主要包括酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)[59]和側(cè)流層析免疫分析法(LFIA)[60]等，已在分析化學(xué)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。但關(guān)于用免疫分析法測(cè)定樣本中FAM、TETS和ARs的研究較少，且均為傳統(tǒng)的ELISA和LFIA。

LFIA是一種將免疫技術(shù)和色譜層析技術(shù)相結(jié)合的快速檢測(cè)技術(shù)，具有操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)短、不依賴大型儀器的優(yōu)點(diǎn)。金納米顆粒(AuNPs)是LFIA最常用的信號(hào)探針，目前基于新型標(biāo)記探針的LFIA可有效地提高檢測(cè)靈敏度[61]。Li等[2,62]開(kāi)發(fā)了一種通用型半抗原的設(shè)計(jì)策略，合成了ARs半抗原，制備出可識(shí)別12種ARs的廣譜識(shí)別性抗體。以量子點(diǎn)微球?yàn)樾盘?hào)探針開(kāi)發(fā)了快速、靈敏、準(zhǔn)確、可靠的熒光LFIA，該方法可用于人血清、尿液及食物樣本中8種ARs的定量與定性測(cè)定。與常規(guī)ELISA相比，檢出限顯著降低(10倍)，并與UPLC-MS/MS的相關(guān)性良好，在臨床檢測(cè)中具有良好的應(yīng)用前景。華法林(WAR)除了用作殺鼠劑，還可以用作人口服抗凝藥物。有研究建立了檢測(cè)血液中WAR(人口服抗凝藥物)的免疫分析方法，并將其用于WAR藥物的濃度監(jiān)控。如Dorman等[63]基于膠體金的檢測(cè)試紙條建立了可特異性測(cè)定犬血清中WAR的分析方法，Cut-off值為9.9 μg/L。Satoh等[64]將醋硝香豆素的硝基還原為氨基作為半抗原，制備抗WAR抗體，建立了放射性免疫分析法，該方法的半數(shù)抑制濃度(IC50)為10 ng/mL。O'Kennedy等[65-66]用同樣的方法合成WAR半抗原并制備了抗WAR抗體，建立了基于抗體的表面等離振子共振方法測(cè)定血漿中WAR，方法的線性范圍為4～250 ng/mL。

酶聯(lián)免疫技術(shù)是基于抗原-抗體特異性反應(yīng)及酶的高效催化作用構(gòu)建的快速檢測(cè)技術(shù)，具有靈敏度高、準(zhǔn)確度好的優(yōu)點(diǎn)。隨著基因工程技術(shù)及納米科技的快速發(fā)展，基于熒光、化學(xué)發(fā)光信號(hào)等的高靈敏度的ELISA被開(kāi)發(fā)并用于食品中有害化合物的快速檢測(cè)。Marco等[67]以WAR和醋硝香豆素為原料，采用羧甲基羥胺法和硝基還原法合成3種WAR半抗原，基于混合酸酐法合成完全抗原，制備抗WAR多克隆抗體，建立了ELISA檢測(cè)血漿樣本中WAR的方法，LOD為0.48 μg/L，線性范圍為1.65～41.8 μg/L。Jackson、Li等[68-69]分別采用羧甲基羥胺法合成DPN半抗原，制備抗DPN特異性抗體，其中，Jackson建立的ELISA在緩沖液中的線性范圍為10～320 μg/L，Li等建立的icELISA方法對(duì)血漿、尿液和肝臟中DPN的LOD分別為0.28 μg/L、0.32 μg/L、0.55 μg/kg。Yang等[1,70]首次成功地合成了FAM半抗原并制備了5株mAb 1B6、2C11、3F1、4E10和5D11，其中mAb 5D11與異源包被原FAM1-BSA配對(duì)時(shí)識(shí)別FAM，IC50值為97 μg/mL，且與其他9種功能和結(jié)構(gòu)類(lèi)似物無(wú)明顯的交叉反應(yīng)，所獲得的mAb 5D11抗體有望作為FAM中毒的快速診斷試劑和臨床治療的解毒藥。另外還建立了FAM的膠體金免疫層析分析方法，Cut-off值為500 μg/mL；建立了TETS的ELISA法，LOD為0.1 ng/mL。免疫層析法操作便捷，有望用于中毒患者的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)，以及用于指導(dǎo)患者后續(xù)的治療工作，還有望成為有效的解毒藥。

4 展 望

針對(duì)鼠藥，科研人員已經(jīng)開(kāi)發(fā)出大量實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)和現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)技術(shù)，這些檢測(cè)技術(shù)各具優(yōu)勢(shì)，但也存在不足，概括為：(1)儀器分析方法是測(cè)定樣本中鼠藥的常用方法，具有準(zhǔn)確度高、靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)，可用于快速篩查結(jié)果的進(jìn)一步確證，但儀器設(shè)備操作復(fù)雜、檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)、樣本前處理復(fù)雜，不適合樣本的快速篩查。(2)基于抗原-抗體特異性相互作用的免疫分析方法具有快速、易用、成本低等優(yōu)點(diǎn)，在毒物臨床診斷中具有廣闊的應(yīng)用前景。(3)有些鼠藥具有特效解毒藥，但有些鼠藥則沒(méi)有。免疫分析法不僅可作為一種快速檢測(cè)手段，其所采用的抗體還可能成為一種有效的解毒藥。