王廣成 許艷秋 陳丙坤 謝樹(shù)林 吳春先 高立明

(四川省農(nóng)藥檢定所，四川成都，610041)

1 前言

丁子香酚，又名鄰丁香酚、4-烯丙基-2-甲氧基苯酚等，主要存在于丁香油、肉桂葉油、肉桂皮油、樟腦油和肉豆蔻油等中,作為治療性殺菌劑,丁子香酚具有殺菌譜廣、毒性低的特點(diǎn),能迅速治療多種農(nóng)作物、水果感染的真菌、細(xì)菌性病害[1-3]；香芹酚:，又名2-甲基-5-異丙基苯酚等，廣泛存在于天然植物的精油中，目前主要用作食品添加劑和飼料添加劑等,同時(shí)，香芹酚還用作植物源生物農(nóng)藥,具有殺蟲(chóng)(螨)、殺菌防病及調(diào)節(jié)植物營(yíng)養(yǎng)作用[4-6]。丁子香酚和香芹酚同為植物源生物農(nóng)藥，都具備高效、低毒和環(huán)境友好的特點(diǎn)，作為新型環(huán)保農(nóng)藥有較大使用前景。

目前，國(guó)內(nèi)外關(guān)于在中藥材、獸藥和飼料等中的丁子香酚和香芹酚的氣相色譜或液相色譜分析方法已有相關(guān)報(bào)道[7-12]，但采用程序升溫的氣相色譜內(nèi)標(biāo)法同時(shí)檢測(cè)丁子香酚和香芹酚的質(zhì)量分?jǐn)?shù)的方法未見(jiàn)報(bào)道，因此本文建立了丁子香酚和香芹酚的程序升溫氣相色譜內(nèi)標(biāo)分析方法，為丁子香酚和香芹酚的質(zhì)量檢測(cè)提供了簡(jiǎn)便、有效的分析方法。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器

Agilent7890A氣相色譜儀(帶FID檢測(cè)器和工作站，安捷倫科技(中國(guó))有限公司)；色譜柱：(Agilent DB-1 30m×0.32mm×0.25μm，安捷倫科技(中國(guó))有限公司)。

2.2 試劑和溶液

丁子香酚標(biāo)準(zhǔn)品(98.5%，山東西亞化學(xué)股份有限公司)；香芹酚標(biāo)準(zhǔn)品(98.5%，山東西亞化學(xué)工業(yè)有限公司)；丁子香酚·香芹酚可溶液劑(丁子香酚1.6%，香芹酚0.5%，XX公司生產(chǎn))；磷酸三苯酯(分析純，成都市科龍化工試劑廠)；丙酮(分析純，成都市科隆化學(xué)品有限公司)；內(nèi)標(biāo)溶液配制：稱取磷酸三苯酯0.6g于100 mL容量瓶中，加入丙酮溶解并稀釋至刻度，搖勻備用。

2.3 色譜操作條件

柱溫(程序升溫)：120℃保持2min，以15℃/min升至280℃，保持10min；氣化室溫度：280℃；檢測(cè)器溫度：280℃；載氣(N2)：1.0 mL/min；氫氣(H2)：40mL/min；空氣(Air)：400mL/min；分流比：50∶1；進(jìn)樣體積：1 μL；保留時(shí)間：香芹酚約5.6 min、丁子香酚約6.1 min、磷酸三苯酯約13.1min。典型色譜圖見(jiàn)圖1和圖2。

1-香芹酚(5.638min) 2-丁子香酚(6.146) 3-磷酸三苯酯(13.100min)

1-香芹酚(5.640min) 2-丁子香酚(6.148) 3-磷酸三苯酯(13.100min)

2.4 測(cè)定步驟

2.4.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取丁子香酚標(biāo)樣0.09g(精確到0.0002 g)、香芹酚標(biāo)樣0.03g(精確到0.0002 g)于25.00mL容量瓶中，用移液管準(zhǔn)確添加5.00mL內(nèi)標(biāo)溶液，加入適量丙酮超聲溶解，冷卻至常溫后用丙酮稀釋定容至刻度，備用。

2.4.2 試樣溶液的配制

稱取試樣5.5g(精確至0.0002 g)于25.00 mL容量瓶中，用移液管準(zhǔn)確添加5.00mL內(nèi)標(biāo)溶液，加入適量丙酮超聲溶解，冷卻至常溫后用丙酮稀釋定容至刻度，加入無(wú)水硫酸鈉脫水，取上清液備用。

2.4.3 測(cè)定

在上述色譜條件下，待儀器穩(wěn)定且基線平穩(wěn)后，連續(xù)進(jìn)入多針標(biāo)樣溶液，直至相鄰兩針丁子香酚(香芹酚)與磷酸三苯酯的峰面積比值的相對(duì)變化<1.5%，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的次序進(jìn)行測(cè)定。

2.5 計(jì)算

將測(cè)得的兩針試樣溶液以及試樣前后兩針丁子香酚(香芹酚)標(biāo)樣峰面積和內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值分別進(jìn)行平均，試樣中丁子香酚(香芹酚)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω按下式計(jì)算：

式中：r1——標(biāo)樣溶液中丁子香酚(香芹酚)峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比值的平均值；

r2——試樣溶液中丁子香酚(香芹酚)峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比值的平均值；

m1——稱取丁子香酚(香芹酚)標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

m2——稱取試樣的質(zhì)量，g；

ω1——標(biāo)樣中丁子香酚(香芹酚)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

3 結(jié)果與討論

3.1 內(nèi)標(biāo)溶液的選擇

為了準(zhǔn)確測(cè)定香芹酚、丁子香酚的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，需要選擇一合適內(nèi)標(biāo)物，本文使用癸二酸二丁酯、磷酸三苯酯、鄰苯二甲酸二丁酯等多種常用的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行試驗(yàn)，樣品在7—10min有雜質(zhì)干擾，其中鄰苯二甲酸二丁酯、癸二酸二丁酯與待測(cè)樣品中的雜質(zhì)出峰位置重疊，干擾其含量的測(cè)定，磷酸三苯酯的保留時(shí)間為13.1min，在待測(cè)物質(zhì)后面，與樣品中的有效成分分離良好，且沒(méi)有雜質(zhì)干擾，樣品各組分雜質(zhì)能達(dá)到較好的分離，峰形對(duì)稱。通過(guò)對(duì)相同條件下的出峰情況的比較，確定磷酸三苯酯為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)。

3.2 分析方法的線性相關(guān)性

分別稱取98.5%丁子香酚標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.0224g、0.0647g、0.0829g、0.1028g、0.1974 g于25.00mL容量瓶中，準(zhǔn)確添加內(nèi)標(biāo)溶液5.00 mL(磷酸三苯酯質(zhì)量濃度為6.074mg/mL)，用丙酮溶解并稀釋定容。按上述色譜操作方法測(cè)定，以丁子香酚與磷酸三苯酯的質(zhì)量比為橫坐標(biāo)，峰面積之比為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到丁子香酚的線性方程為y=0.9247x-0.0008，R2=0.9998。結(jié)果見(jiàn)表1和圖3。

圖3 丁子香酚分析方法的線性相關(guān)性圖

表1 分析方法的線性相關(guān)性試驗(yàn)結(jié)果

分別稱取98.5%香芹酚標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.0196、0.0286、0.0327、0.0373、0.0572g于25.00 mL容量瓶中，準(zhǔn)確添加內(nèi)標(biāo)溶液5.00 mL(磷酸三苯酯質(zhì)量濃度為6.074mg/mL)，用丙酮溶解并稀釋定容。同樣條件下對(duì)香芹酚進(jìn)行測(cè)定，以香芹酚與磷酸三苯酯的質(zhì)量比為橫坐標(biāo)，峰面積之比為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到香芹酚的線性方程為y=1.1298x-0.0251，R2=0.9998。結(jié)果見(jiàn)表2和圖4。

表2 分析方法的線性相關(guān)性試驗(yàn)結(jié)果

圖4 香芹酚分析方法的線性相關(guān)性圖

3.3 分析方法的精密度

對(duì)同一份含有丁子香酚和香芹酚可溶液劑試樣采用上述方法進(jìn)行5次平行分析測(cè)定，測(cè)得試樣中丁子香酚平均含量為1.63%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.0152，變異系數(shù)為0.93%；香芹酚平均含量為0.558%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00445，變異系數(shù)為0.79%，經(jīng)由Horwitz公式檢驗(yàn)，方法的精密度結(jié)果符合要求，數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。

表3 分析方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果

3.4 分析方法的準(zhǔn)確度

于25.00 mL的容量瓶中稱取適量已知含量的丁子香酚和香芹酚可溶液劑為本底，平行稱取5份，分別加入一定量的丁子香酚標(biāo)樣和5.00mL香芹酚標(biāo)準(zhǔn)溶液(2.82mg/mL、2.74mg/mL)，準(zhǔn)確加入5.00 mL內(nèi)標(biāo)溶液，用丙酮稀釋定容，無(wú)水硫酸鈉脫水，取上清液備用。按上述色譜條件對(duì)丁子香酚(香芹酚)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)進(jìn)行測(cè)定并計(jì)算回收率。實(shí)驗(yàn)獲得了丁子香酚的平均回收率為99.99%，香芹酚的平均回收率為100.25%，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

4 結(jié)論

本文通過(guò)對(duì)氣相色譜分析條件的選擇與優(yōu)化，建立了丁子香酚和香芹酚可溶液劑的程序升溫氣相色譜內(nèi)標(biāo)分析方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：本方法對(duì)丁子香酚和香芹酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定的準(zhǔn)確度和精密度高、線性關(guān)系良好，并且操作簡(jiǎn)便、效率高，可以作為丁子香酚和香芹酚復(fù)配制劑的有效分析方法。