馮彥姣，劉小平，張婷婷,2，陳紅印，王孟卿，劉晨曦，李玉艷，張禮生，毛建軍*

（1. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，北京 100193；2. 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，哈爾濱 150040）

大草蛉Chrysopa pallens屬脈翅目Neuroptera草蛉科Chrysopidae，成蟲(chóng)、幼蟲(chóng)均可取食農(nóng)、林、果、蔬上的蚜蟲(chóng)、葉螨、其他昆蟲(chóng)卵及低齡幼蟲(chóng)等多種農(nóng)林害蟲(chóng)[1]，是糧食作物、果蔬等經(jīng)濟(jì)作物害蟲(chóng)的重要捕食性天敵昆蟲(chóng)[2,3]。由于具有分布廣、食量大、食性廣的特征，在害蟲(chóng)的天敵防治中具有非常廣闊的應(yīng)用前景。

卵黃原蛋白（Vitellogenin，Vg）是卵生動(dòng)物卵黃蛋白的前體物質(zhì)[4]，在大部分昆蟲(chóng)中，由性成熟雌蟲(chóng)的脂肪體合成并分泌到血淋巴，運(yùn)輸?shù)铰殉埠蟊话l(fā)育中的卵母細(xì)胞選擇性地?cái)z取，在卵子內(nèi)沉積形成卵黃蛋白，為胚胎發(fā)育提供氨基酸、脂肪、碳水化合物、磷和硫等營(yíng)養(yǎng)和功能性物質(zhì)[5]。隨著研究的深入, 在少部分昆蟲(chóng)雄性中也發(fā)現(xiàn)有Vg的表達(dá)。比如在社會(huì)性昆蟲(chóng)意大利蜜蜂Apis mellifera的表達(dá)模式中發(fā)現(xiàn)，Vg基因不僅在蜂王的脂肪體中轉(zhuǎn)錄表達(dá)，在雄蜂和工蜂的脂肪體和蜂王的卵巢中也能檢測(cè)到該基因[6,7]；在交配過(guò)的米蛾雄性成蟲(chóng)中檢測(cè)到vitellogenin mRNA[8]。此外，在大草蛉的雄蟲(chóng)中也檢測(cè)到了Vg的存在[9]。昆蟲(chóng)卵黃蛋白的研究是近年來(lái)昆蟲(chóng)生理學(xué)和生化學(xué)比較活躍的領(lǐng)域之一[10]，但是對(duì)大草蛉雄蟲(chóng)的卵黃原蛋白的表達(dá)規(guī)律及功能研究還很少有文獻(xiàn)報(bào)道。

本研究基于大草蛉轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)設(shè)計(jì)引物，克隆獲得1個(gè)大草蛉Vg蛋白基因的全長(zhǎng)序列，并采用生物信息學(xué)方法對(duì)其序列進(jìn)行分析；通過(guò)熒光定量PCR方法檢測(cè)大草蛉vitellogenin基因在不同發(fā)育階段、不同組織的表達(dá)特征，以期為深入研究vitellogenin功能奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試?yán)ハx(chóng)：本試驗(yàn)中使用的大草蛉為中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所天敵昆蟲(chóng)組室內(nèi)連續(xù)多代飼養(yǎng)，飼養(yǎng)條件為溫度（25±1）℃，光周期16L:8D，相對(duì)濕度為75%±10%。

試劑：TransScript? One-Step gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix，Trans2K DNA Marker，6×DNA Loading Buffer，北京全式金生物技術(shù)有限公司；感受態(tài)細(xì)胞Trans 5α Chemically Competent Cell，克隆載體pEASY-T1，2x High-Fidelity Master Mix，北京擎科新業(yè)生物技術(shù)有限公司；Go Taq?qPCR Master Mix，promega公司；瓊脂糖，江晨生物公司；質(zhì)粒小提試劑盒，北京天根生化科技有限公司；所有引物合成和DNA測(cè)序，生工生物工程（上海）股份有限公司。

儀器：基因擴(kuò)增儀ETC811，東勝公司；7500 Real-Time PCR Sys-tem熒光定量PCR儀，美國(guó)Applied Biosystems公司；臺(tái)式離心機(jī)（sigma1-14）；水平電泳儀，北京六一生物有限公司；凝膠成像分析儀 WD-9413B，北京六一儀器廠；NanoDrop 2000超微量分光光度計(jì)，美國(guó)Emplen公司；旋渦震蕩儀QL-901，海林市其林貝爾儀器制造有限公司；微型離心機(jī)Mini-4K，珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器有限公司；電子天平，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；超凈實(shí)驗(yàn)工作臺(tái)HD-1360，哈東聯(lián)公司；立式壓力蒸汽滅菌鍋LS-B5OL-I，江陰濱江醫(yī)療設(shè)備有限公司；微波爐 GalanzP7021TP-6。

培養(yǎng)基：LB（Luria-Bertani，LB）液體培養(yǎng)基：胰蛋白胨10 g、酵母提取物5 g、氯化鈉10 g、蒸餾水1000 mL；LB固體培養(yǎng)基：在LB液體培養(yǎng)基中加入瓊脂15 g。

1.2 大草蛉雄蟲(chóng)總RNA提取和cDNA第一鏈合成

將單頭大草蛉雌蟲(chóng)在液氮中研磨成粉末狀，并迅速加入TENS緩沖液，1頭大草蛉約加緩沖液1800 μL（分裝到離心管中，300 μL/管），37 ℃下保育3～18 h。每管加入85 μL 5 mol/L 的NaCl，旋渦混勻15 s，1400 r/min離心5 min，用70%乙醇洗一次。室溫下干燥沉淀（置于通風(fēng)櫥中，5 min），加入30～40 μL無(wú)菌水溶解。采用紫外微量分光光度計(jì)確定RNA濃度和質(zhì)量，采用凝膠電泳檢測(cè)總RNA的完整性，采用PrimeScript RT Reagent Kit進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，所得cDNA于-20 ℃冰箱中保存，備用。

1.3 大草蛉vitellogenin基因克隆

根據(jù)已知的大草蛉雌蟲(chóng)卵黃原蛋白基因序列（MH400048）的信息，分別設(shè)計(jì) 1對(duì)簡(jiǎn)并引物 A1：5′-TCTTCATTACAGCACTTGGC-3′；B1：5′-ATTCTCGGCTGTATCCTTCA-3′。利用 ORF finder軟件對(duì)其進(jìn)行分析，其具有完整開(kāi)放閱讀框（open reading frame，ORF）。為驗(yàn)證序列的準(zhǔn)確性，用于PCR擴(kuò)增，引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。20 μL擴(kuò)增反應(yīng)體系：2×PrimeSTAR Max Premix 10 μL、ddH2O 7 μL、上下游引物各 1 μL、cDNA 1 μL。PCR 擴(kuò)增反應(yīng)條件：98 ℃變性 30 s，55 ℃退火 5 s，72 ℃延伸1 min，共35個(gè)循環(huán)。對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳檢測(cè)并分離回收，將回收產(chǎn)物連接到pEASY-T1載體，然后轉(zhuǎn)化到大腸桿菌Trans 5α感受態(tài)細(xì)胞中。選取已鑒定為陽(yáng)性克隆的菌液，委托生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行測(cè)序。

1.4 大草蛉卵黃原蛋白基因vitellogenin理化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)

使用ExPASy-ProtParam tool（http://web.expasy.org/protparam）軟件分析vitellogenin基因編碼蛋白的等電點(diǎn)及分子量。使用TMHMM 2.0（http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/）在線軟件對(duì)vitellogenin氨基酸序列的跨膜結(jié)構(gòu)域進(jìn)行預(yù)測(cè)。使用SingalP 3.0軟件進(jìn)行vitellogenin蛋白信號(hào)肽的預(yù)測(cè)。利用DNAMAN軟件進(jìn)行氨基酸序列的多重比對(duì)和親/疏水性分析。

1.5 大草蛉卵黃原蛋白的同源比對(duì)及進(jìn)化樹(shù)分析

從NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中獲得多個(gè)物種的vitellogenin基因，使用ClustalW將大草蛉與獲得的物種vitellogenin序列進(jìn)行同源比對(duì)后，使用軟件Mega 6以鄰接法（neigh-bor-joining，NJ）經(jīng)1000次抽樣分析將部分昆蟲(chóng)vitellogenin基因構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。

1.6 大草蛉卵黃原蛋白基因的表達(dá)分析

測(cè)定大草蛉成蟲(chóng)羽化不同時(shí)間vitellogenin基因相對(duì)表達(dá)量：分別取羽化后第6、12、18、24、30 d的雄成蟲(chóng)，每個(gè)樣品取樣為雄成蟲(chóng)1頭。

測(cè)定大草蛉成蟲(chóng)不同組織vitellogenin基因相對(duì)表達(dá)量：分別取羽化后第15 d的大草蛉的雌、雄成蟲(chóng)以及雄成蟲(chóng)的頭、胸、腹部位。每個(gè)樣品取樣為雌、雄蟲(chóng)各1頭，頭3個(gè)，胸3個(gè)，腹2個(gè)。所有樣品均設(shè)置3次以上重復(fù)，于液氮中速凍并保存于-80 ℃?zhèn)溆?。根?jù)測(cè)序結(jié)果設(shè)計(jì)定量引物：Q-AF：5′-AAGGAGC CGTATATGATGTTGC-3′；Q-AR：5′-TTTCAGCGGGACTTGTGG-3′，在生工生物工程（上海）股份有限公司合成，并通過(guò)普通PCR優(yōu)化反應(yīng)條件體系。選Actin作為內(nèi)參基因，引物為：AcF：5′-AACTTCCCGAC GGTCAAGTCAT-3′；AcR：5′-TGTTGGCGTACAAGTCCTTACG-3′。采用以 SYBR Green 為染料的熒光標(biāo)記法進(jìn)行定量檢測(cè)。20 μL qPCR體系：2×Fast Start Es-sential DNA Green Master 10 μL、引物各1 μL、模板cDNA 1 μL、ddH2O 7 μL。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性3 min；95 ℃變性10 s，60 ℃退火10 s，72 ℃延伸10 s，共40個(gè)循環(huán)；95 ℃恒溫10 s，65 ℃恒溫60 s，97 ℃持續(xù)1 s制備熔解曲線，37 ℃冷卻30 s。并使用2-△△Ct法[11]計(jì)算vitellogenin基因的相對(duì)表達(dá)量。

1.7 大草蛉卵黃原蛋白的表達(dá)分析

通過(guò)SDS-PAGE檢測(cè)。測(cè)定大草蛉雄成蟲(chóng)不同組織卵黃原蛋白的相對(duì)表達(dá)量：分別取羽化后第15 d的雄成蟲(chóng)及頭、胸、腹部位。每個(gè)樣品取整蟲(chóng)1頭，頭3個(gè)，胸3個(gè)，腹2個(gè)。所有樣品均設(shè)置3次以上重復(fù)，于液氮中速凍并保存于-80 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

使用GraphPad Prism 6.0軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，大草蛉卵黃原蛋白基因mRNA定量測(cè)定數(shù)據(jù)采用ANOVA單因素方差分析，采用Tukey’s HSD法進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 大草蛉卵黃原蛋白基因的克隆與進(jìn)化分析

以大草蛉cDNA為模板進(jìn)行vitellogenin基因的擴(kuò)增，經(jīng)測(cè)序拼接得到產(chǎn)物的大小為5561 bp，其中包含完整開(kāi)放閱讀框（ORF）1501 bp，編碼501個(gè)氨基酸殘基。vitellogenin編碼蛋白含有GLVG 基序、半胱氨酸殘基、DGXR基序、DXXR基序等（圖1），說(shuō)明產(chǎn)物為大草蛉卵黃原蛋白基因。通過(guò)軟件分析可得，其成熟肽的預(yù)測(cè)相對(duì)分子量為206 kD，理論等電點(diǎn)為8.11，其中包含酸性氨基酸殘基（Asp+Glu）189個(gè)，堿性氨基酸殘基（Arg+Lys）194個(gè)。其分子式為C16975H28519N5433O6979S1060，蛋白的不穩(wěn)定系數(shù)為44.00，推測(cè)其為不穩(wěn)定蛋白，且屬于分泌性蛋白。跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)結(jié)果顯示：Vg不存在跨膜螺旋區(qū)，其蛋白親水性總平均值0.874，脂肪指數(shù)為36.06。利用DNAMAN將其與雌蟲(chóng)的Vg1基因序列比較發(fā)現(xiàn)兩者的相似度高達(dá)99.8%，如圖2。

圖1 大草蛉部分vitellogenin序列及其推導(dǎo)的氨基酸序列Fig. 1 Partial vitellogenin gene sequence and its derived amino acid sequence

圖2 大草蛉雄蟲(chóng)部分vitellogenin序列與雌蟲(chóng)Vg1的比對(duì)Fig. 2 Comparison of partial vitellogenin sequence between Chrysopa pallens males and females Vg1 gene

利用NCBI對(duì)大草蛉雄蟲(chóng)Vg基因序列進(jìn)行同源檢索，并選取了半翅目、網(wǎng)翅目、鞘翅目、膜翅目、鱗翅目的23個(gè)代表性昆蟲(chóng)的基因序列。BLAST比對(duì)結(jié)果表明，雄蟲(chóng)卵黃原蛋白基因序列與騷擾錐蝽Triatoma infestans（GenBank登錄號(hào)：AIA09041）的相似性最高，為32.75%，與其他昆蟲(chóng)vitellogenin基因一致性不太高?；谀こ崮俊⑶食崮康?3種vitellogenin氨基酸序列，以鄰接法構(gòu)建的進(jìn)化樹(shù)結(jié)果顯示，vitellogenin分別聚為4支，大草蛉vitellogenin與網(wǎng)翅目的德國(guó)小蠊、馬德拉蜚蠊先聚合，其次與半翅目的大田鱉、騷擾錐蝽、赤須盲蝽、褐飛虱、琉璃葉蟬聚為一支；而鞘翅目的異色瓢蟲(chóng)、大猿葉甲、黃粉蟲(chóng)、疣狀天牛、棉鈴象甲以及水椰八角鐵甲聚為一支；膜翅目的麗蚜小蜂、蝶蛹金小蜂、日本瘤姬蜂、角額壁蜂聚為一支，鱗翅目的舞毒蛾、斜紋夜蛾、稻縱卷葉螟、野桑蠶及家蠶則聚為一支。vitellogenin聚類(lèi)結(jié)果能較好地反映昆蟲(chóng)間的親緣關(guān)系。

2.2 vitellogenin基因表達(dá)分析

2.2.1 大草蛉雄蟲(chóng)不同發(fā)育階段vitellogenin基因的表達(dá)分析 大草蛉vitellogenin基因表達(dá)不具有明顯的發(fā)育階段特異性，在羽化后第6 d表達(dá)量最低，但是之后的表達(dá)水平基本呈現(xiàn)穩(wěn)定趨勢(shì)，差異不大，這一結(jié)果與前面研究人員的結(jié)果是相吻合的[13]。

圖3 基于vitellogenin氨基酸序列以鄰接法構(gòu)建大草蛉和其相近昆蟲(chóng)的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig. 3 Phylogenetic tree of vitellogenin from Chrysopa pallens and related different insect species by using neighbor-joining method.

2.2.2 大草蛉雄蟲(chóng)不同組織vitellogenin基因的表達(dá)分析 大草蛉雄蟲(chóng)vitellogenin基因的表達(dá)具有組織特異性。vitellogenin基因的表達(dá)量在雄蟲(chóng)的腹部最高，其表達(dá)量分別為頭部表達(dá)量的3.51倍（F1,4＝99438，P＜0.01），為胸部表達(dá)量的 2.64倍（F1,4＝949.778，P＜0.01）（圖 4）。雄蟲(chóng)頭部和胸部的 vitellogenin表達(dá)量沒(méi)有顯著差異，表達(dá)豐度基本相當(dāng)。但是雌成蟲(chóng)中的表達(dá)量均顯著高于雄蟲(chóng)及各組織部位的表達(dá)量。

圖4 vitellogenin基因在大草蛉雄蟲(chóng)羽化后不同天數(shù)的相對(duì)表達(dá)量Fig. 4 Relative expression of vitellogenin mRNA in male in different days after emergence

2.2.3 不同組織 vitellogenin的表達(dá)分析 對(duì)大草蛉雄成蟲(chóng)各組織部位的卵黃蛋白進(jìn)行提純與 SDS-PAGE電泳分析后發(fā)現(xiàn), 其整蟲(chóng)和腹部的卵黃蛋白分別由約165和46 kD左右的大小亞基組成，但是雄蟲(chóng)的頭部和胸部的卵黃原蛋白只有小亞基的部分，沒(méi)有檢測(cè)到大亞基。

圖5 大草蛉vitellogenin基因在雌雄成蟲(chóng)及不同組織中的相對(duì)表達(dá)量Fig. 5 Relative expression of vitellogenin mRNA in female and male adults and different tissues

圖6 大草蛉vitellogenin蛋白在雌成蟲(chóng)及不同組織中的表達(dá)Fig. 6 Expression of vitellogenin protein in female adult and different tissues

3 討論

本研究根據(jù)大草蛉雌蟲(chóng)的卵黃原蛋白序列信息數(shù)據(jù)設(shè)計(jì)了雄蟲(chóng) Vg的基因引物，成功克隆了雄蟲(chóng) Vg基因的部分cDNA序列。經(jīng)變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢驗(yàn)了其表達(dá)，大草蛉雄蟲(chóng)卵黃原蛋白由約165 kD和44 kD大小的兩個(gè)亞基組成，與陶淑霞等[13]的研究結(jié)果一致。根據(jù)蛋白氨基酸序列特征分析，Vg具有卵黃原蛋白的典型保守特征，包含GL/ICG 基序、DGXR基序、半胱氨酸殘基等結(jié)構(gòu)域，研究表明GL/ICG基序和半胱氨酸殘基在昆蟲(chóng)胚胎形成過(guò)程中發(fā)揮功能性作用[17,18]。D、E、P、Y等氨基酸殘基在C-末端高度保守。此外，GL/ICG基序是鑒定卵黃原蛋白基因的依據(jù)[19]。這與天蠶、中華蜜蜂、小菜蛾、橢圓食粉螨等昆蟲(chóng)Vg的研究結(jié)果一致[12-16]，且本研究的系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果顯示，親緣關(guān)系較近的昆蟲(chóng)Vg發(fā)育樹(shù)的位置也較近，與傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)分類(lèi)的結(jié)果是一致的。

RT-qPCR結(jié)果表明，雄成蟲(chóng)Vg在不同發(fā)育階段的表達(dá)不具有顯著性差異，表達(dá)初期Vg表達(dá)量最少，之后的表達(dá)趨勢(shì)趨于穩(wěn)定，這種趨勢(shì)和已報(bào)道的大草蛉雌蟲(chóng)中先增加后逐步下降的趨勢(shì)完全不同[10]。羽化初期Vg基因的表達(dá)量較低可能由于該時(shí)期各神經(jīng)、生殖等系統(tǒng)尚未發(fā)育完全，因此其功能也不能完全發(fā)揮。大草蛉雄蟲(chóng)Vg基因在頭、胸和腹部的轉(zhuǎn)錄表達(dá)結(jié)果顯示，Vg基因均可以在大草蛉雄蟲(chóng)的頭、胸和腹部表達(dá)，其中頭部表達(dá)豐度最低，其次是胸部，而腹部的表達(dá)量最高，極顯著高于頭部和胸部。這一結(jié)果與中華蜜蜂工蜂中的Vg基因表達(dá)結(jié)果是一致的[20]。但是，大草蛉雌蟲(chóng)Vg基因的mRNA表達(dá)豐度是顯著高于雄蟲(chóng)及其各組織的。SDS-PAGE結(jié)果顯示，大草蛉雄成蟲(chóng)整蟲(chóng)和腹部的卵黃蛋白均由165和46 kD的大小亞基組成，與大草蛉卵和雌蟲(chóng)Vg蛋白一樣，屬于第1類(lèi)型表達(dá)模式，而頭部和胸部的Vg蛋白只含有小亞基，與果蠅、家蠅等高等雙翅目昆蟲(chóng)的Vg蛋白一樣，屬于第3類(lèi)型表達(dá)模式[11]。Vg是一種雌性蛋白，由雌性脂肪體合成。為揭示雄蟲(chóng)Vg蛋白的合成部位，后續(xù)還需要分別從雄蟲(chóng)的脂肪體、睪丸、血淋巴等器官或組織提取蛋白以進(jìn)行鑒定。

在大部分昆蟲(chóng)中Vg是在昆蟲(chóng)的脂肪體中合成的，在對(duì)社會(huì)性昆蟲(chóng)意大利蜜蜂的表達(dá)模式研究中也發(fā)現(xiàn)，Vg不僅在蜂王的脂肪體中轉(zhuǎn)錄表達(dá)，在雄蜂和工蜂的脂肪體和蜂王的卵巢中也均能檢測(cè)到[21]。卵黃原蛋白是合成卵黃蛋白的前體物質(zhì)，與卵黃的生成密切相關(guān)，在生殖調(diào)控中有著非常重要的作用。Moriyama等[22]發(fā)現(xiàn)在臭蟲(chóng)中Vg基因被干擾后，它體內(nèi)相關(guān)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在從脂肪體到卵母細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中受阻，從而抑制了產(chǎn)卵；在棉鈴象甲中，Vg的表達(dá)被沉默后，雖然不影響象甲的產(chǎn)卵量，但會(huì)顯著降低有效卵的產(chǎn)生[23]。這些結(jié)果均說(shuō)明，Vg基因無(wú)論是直接影響產(chǎn)卵還是間接影響孵化，都在昆蟲(chóng)繁殖中起到不可忽視的作用。有報(bào)道稱(chēng)，在社會(huì)性昆蟲(chóng)蜜蜂中，Vg不僅與生殖行為相關(guān)，還有一些特殊的功能，比如還可以幫助蜜蜂適應(yīng)氣候、延長(zhǎng)壽命和轉(zhuǎn)化食物，通過(guò)清除自由基，減少氧化應(yīng)激，從而延長(zhǎng)工蜂和蜂王的壽命。此外，卵黃原蛋白還與蜜蜂的氣候適應(yīng)、生殖競(jìng)爭(zhēng)等相關(guān)[24-27]。還有報(bào)道發(fā)現(xiàn)，蜜蜂卵黃原蛋白的合成受到保幼激素和蛻皮激素等的嚴(yán)格調(diào)控[28]。卵黃原蛋白基因是編碼卵黃原蛋白的結(jié)構(gòu)基因，是大草蛉最重要的功能基因之一[29]。截止目前，對(duì)于大草蛉雄蟲(chóng)卵黃原蛋白基因表達(dá)調(diào)控的研究未見(jiàn)報(bào)道。其功能以及基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制是怎么樣的呢？這些課題都亟待深入研究。尤其是在天敵昆蟲(chóng)應(yīng)用越來(lái)越廣泛的今天，卵黃原蛋白基因的研究對(duì)大草蛉的擴(kuò)繁提供基礎(chǔ)，為開(kāi)發(fā)實(shí)際應(yīng)用大草蛉這一資源昆蟲(chóng)提供支持。

本研究對(duì)大草蛉雄蟲(chóng)的卵黃原蛋白Vg基因進(jìn)行了克隆，分析了該序列與其他昆蟲(chóng)卵黃原蛋白之間的進(jìn)化關(guān)系，并完成了在不同發(fā)育階段、不同組織的表達(dá)規(guī)律的測(cè)定，確定了Vg的基本性質(zhì)，對(duì)比其他昆蟲(chóng)卵黃原蛋白基因的研究，推測(cè)Vg基因?qū)ι郴顒?dòng)和行為的調(diào)節(jié)起重要作用。這些結(jié)果豐富了對(duì)雄蟲(chóng)卵黃原蛋白基因的認(rèn)知，并為進(jìn)一步探索雄蟲(chóng)卵黃原蛋白基因?qū)ζ渖车刃袨榈恼{(diào)控機(jī)制提供了理論基礎(chǔ)。