段秉政 王淑蓮 連俊慧 陶琳 高玉云

直接抗人球蛋白試驗又稱Coomb's試驗，通常應(yīng)用于檢測體內(nèi)已被不規(guī)則抗體和（或）補體致敏紅細(xì)胞（RBC）的經(jīng)典實驗[1]。陽性主要是自身抗體或者是免疫復(fù)合物黏附在RBC膜上導(dǎo)致，常應(yīng)用于自身免疫性溶血性貧血（AIHA）、新生兒溶血病、血液病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、腫瘤、藥物誘導(dǎo)引起的一些疾病等檢測，這些疾病多數(shù)需要紅細(xì)胞輸注治療[2]。DAT陽性也是提示患者貧血狀態(tài)受免疫因素影響的主要指標(biāo)之一[3]，本文旨在進(jìn)一步探討DAT，DAT陽性患者抗體類型及抗體強度對輸血治療患者效果的影響程度以及對判斷預(yù)后的指導(dǎo)意義，現(xiàn)將報告如下。

資料與方法

1 研究對象 回顧性分析我院2017年6月～2019年3月經(jīng)微柱凝膠卡實驗方法檢測，60例DAT陽性需輸血的患者（AIHA除外）為觀察對象，其中男26例，女34例；平均年齡為（60.2±8.9）歲；選擇同期住院DAT陰性需輸血住院患者（各種急性出血原發(fā)病未治愈的患者除外）60例做對照，其中男28例，女32例；平均年齡為（61.4±8.6）歲，兩組患者年齡、性別、病程、貧血程度等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

2 儀器和試劑 美國伯樂公司低離子抗人球蛋白（微柱凝膠法）卡、微柱凝膠抗體分型（含IgG/C3d/C3c/IgA/IgM）卡，珠海貝索生物技術(shù)有限公司低離子介質(zhì)（LISS），日本sysmex公司XE-5000血細(xì)胞分析儀及全套試劑，所有試劑均在有效期內(nèi)嚴(yán)格按照說明書檢測并判斷結(jié)果。

3 紅細(xì)胞輸注與檢測方法 觀察組和對照組每次輸注去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞2 U，采集所有患者輸血前和輸血后24 h內(nèi)的血液標(biāo)本，檢測血紅蛋白（Hb）值。

4 DAT陽性標(biāo)本抗體分型試驗 將DAT陽性患者紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌3～6次后，用LISS液配成0.8%～1.0%紅細(xì)胞懸液，取50 μL加入微柱凝膠抗體分型卡中，置于專用離心機（離心力85×g）離心10 min，判定結(jié)果。

5 輸血效果評價指標(biāo) 輸血治療后Hb升高＞80%Hb升高預(yù)期值判斷為顯效，Hb升高＞50%～80%Hb升高預(yù)期值判斷為有效，Hb升高＜50%Hb升高預(yù)期值判斷為無效。Hb預(yù)期值判斷標(biāo)準(zhǔn)[4]如下：

公式中供者 Hb（g/L）數(shù)值由包頭市中心血站提供 ，“輸入量”以全血量為標(biāo)準(zhǔn)，RBC制劑折算為對應(yīng)全血量；“90%”為檢驗誤差。

6 DAT微柱凝膠法陽性反應(yīng)強度的判定 按照微柱凝膠卡的凝集判讀標(biāo)準(zhǔn)判讀。

7 統(tǒng)計學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS23.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用t檢驗；計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1 DAT陽性組和陰性組患者輸注去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞后治療效果 見表1。

2 DAT陽性標(biāo)本抗體及補體分型及凝集強度 見表2。

3 多種抗體組合組和單純IgG組、C3d組患者輸注去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞后治療效果 見表3。

4 不同抗體強度患者輸注去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞后治療效果 見表4。

表1 DAT陽性組和陰性組患者輸注紅細(xì)胞后治療有效率

表2 DAT陽性標(biāo)本抗體及補體分型和凝集強度例數(shù)

討 論

DAT陽性說明患者RBC表面被不完全抗體和/或補體致敏，大部分DAT陽性患者因體內(nèi)RBC破壞速度快于機體造血速度而存在一定程度貧血[5]，輸注血液一般可以改善機體缺氧狀況，而患者輸注血液后Hb升高是RBC輸注臨床治療效果評價的重要指標(biāo)之一。本研究可見，雖然觀察組的輸血總有效率為75%，但是64.44%患者屬于輸注部分有效，可見大部分DAT陽性患者輸血效果不佳，其中個別DAT患者輸注RBC后，其Hb不升反而有所下降，甚至出現(xiàn)嚴(yán)重反應(yīng)和貧血加重的后果，因此對于DAT陽性患者輸血前應(yīng)嚴(yán)格評估輸血指征。

從DAT陽性標(biāo)本抗體和補體分型來看，IgG/C3d等復(fù)合型占61.67%，單純IgG組占20%、單純C3d組占18.33%與既往報道[6]基本一致。已有研究表明抗體和補體類型與患者疾病輕重有關(guān)，IgG+C3溶血最嚴(yán)重，單純IgG其次，單純C3d最輕[7，8]。我們研究發(fā)現(xiàn)DAT抗體和補體種類較多，其中IgG/C3d占26.67%，IgG/IgM/C3d占15.00%，IgG/C3d/IgA/IgM占8.33%，IgG/IgM/C3d/C3c占6.67%，IgG/C3d/C3c/IgA/ IgM占5.00%。這些復(fù)合型抗體患者輸血后有效率明顯低于單純IgG和單純C3d患者，表明患者RBC上C3d的“附著”作用加上IgG的促進(jìn)“攝入”，不僅導(dǎo)致自身紅細(xì)胞的破壞也使輸入的RBC很快被破壞清除，因此不能有效改善貧血癥狀；其中IgG/IgM/

表3 多種抗體組和單純IgG組、C3d組患者輸注去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞后治療有效率

表4 不同抗體強度患者輸注去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞后治療有效率

C3d，IgG/C3d/IgA/IgM，IgG/IgM/C3d/C3c，IgG/C3d/C3c/IgA/IgM復(fù)合抗體組輸注RBC后效果最差，可能是因為IgM活化補體、破壞RBC的程度比“IgG更強”[8]；而單純IgG型多為繼發(fā)性因素導(dǎo)致，通過運用吸收放散試驗去掉自身抗體干擾后，選擇不規(guī)則抗體對應(yīng)抗原陰性的血液輸注有效率明顯；C3d陽性一般以冷凝集素為主，是否能夠破壞紅細(xì)胞取決于患者免疫狀態(tài)[9]，本研究可見單純C3d陽性患者輸血效果在DAT陽性非AIHA患者中輸血效果最佳?？谷饲虻鞍追中驮囼灥脑\斷價值優(yōu)于廣譜抗人球蛋白試驗[10]，本文研究可見進(jìn)一步檢測抗人球蛋白抗體和補體類型，有助于了解患者的溶血機制并預(yù)判輸血效果。

不同抗體強度之間比較發(fā)現(xiàn)，DAT陽性患者輸血效果隨著抗體強度的增強輸血有效率逐漸降低，DAT強度4+組輸血顯效率明顯低于2+組和1+組，說明檢測抗體強度對預(yù)測輸血療效具有一定價值。

DAT陽性患者的確存在不同程度無效輸血等風(fēng)險，DAT陽性影響輸血效果，且輸血效果還與抗體和補體類型及抗體效價存在一定關(guān)系，所以應(yīng)重視對輸血患者進(jìn)行DAT，DAT陽性分型試驗及抗體效價的檢測，在臨床輸血治療過程中只有致力于去除引起DAT陽性的原因并有效降低DAT陽性強度或消除陽性因素后，才能保障輸血效果。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突