張文偉，黃 忠 ，段亞飛，林黑著 ，江世貴，黃建華

（1. 廣州大學生命科學學院，廣東 廣州 510006； 2. 中國水產(chǎn)科學研究院南海水產(chǎn)研究所/農業(yè)農村部南海漁業(yè)資源開發(fā)利用重點實驗室，廣東 廣州 510300； 3. 中國水產(chǎn)科學研究院南海水產(chǎn)研究所深圳試驗基地，廣東 深圳 518121）

自2000年以來，隨著凡納濱對蝦 (Litopenaeus vannamei) 的引入、推廣和普及，中國對蝦養(yǎng)殖業(yè)迅猛發(fā)展，已成為水產(chǎn)養(yǎng)殖的重要支柱產(chǎn)業(yè)。近年來，近海水域環(huán)境生態(tài)失衡、富營養(yǎng)化、赤潮頻發(fā)、病害滋生給水產(chǎn)養(yǎng)殖帶來巨大損失。環(huán)境微生物和養(yǎng)殖生物之間的相互作用受到越來越多的關注[1-2]。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中，微生物菌群在水環(huán)境物質轉化以及養(yǎng)殖動物健康、營養(yǎng)吸收、病原防御過程中發(fā)揮著重要作用[3-4]。關于養(yǎng)殖對蝦腸道微生物和養(yǎng)殖環(huán)境的關系已有較多的研究報道，如發(fā)病對蝦和健康對蝦腸道微生物與養(yǎng)殖環(huán)境微生物之間的關系[5-9]。而有關對蝦早期發(fā)育階段的幼體微生物和育苗水環(huán)境微生物之間的互作關系，以及對幼苗期與養(yǎng)成期對蝦體內微生物的相關性研究相對較少。

對蝦幼體發(fā)育對水環(huán)境質量要求非常高。近海水環(huán)境的富營養(yǎng)化、有害細菌及其耐藥性的加重，使對蝦育苗病害增多，苗種生產(chǎn)難度增大。海水凈化處理已成為對蝦育苗生產(chǎn)的重要環(huán)節(jié)，直接影響育苗生產(chǎn)的成敗[10]。傳統(tǒng)水處理方法主要采用物理過濾和化學消毒以降低或消除水環(huán)境中的有毒有害物質。邢詒炫等[10]報道砂濾對海水中細菌的去除率為80%～90%，多級砂濾與一級砂濾對細菌的去除率并無顯著差異。因此，絕大多數(shù)育苗場會再使用含氯或其他化學消毒劑對對蝦育苗用水進行消毒殺菌處理。水產(chǎn)消毒劑主要有醛類 [ 甲醛 (HCHO)、戊二醛 (C5H8O2)]、季銨鹽類和鹵素類 (含氯、溴、碘)。研究表明，0.5 mg·L?1有效氯可殺死總菌量的96.1%，1 mg·L?1有效氯可殺死99.1%的細菌[11]。19 mg·L?1甲醛在短時間內對細菌有一定的殺滅、抑制作用，但并不能長效控制育苗水體細菌總數(shù)[10]。二氧化氯 (ClO2)和碘制劑對細菌及芽孢、病毒、真菌等微生物有強大的殺滅作用，且不產(chǎn)生抗藥性，是一種低毒、廣譜殺菌消毒藥物，在水產(chǎn)養(yǎng)殖和育苗中廣泛應用[12]。

近年來，育苗用水的處理工藝越來越復雜化，往往采用物理 (沉淀、過濾) -化學 (消毒) -物理 (紫外殺菌) 等多個復雜處理工藝來提升育苗水質，而這些處理對育苗水環(huán)境微生物菌群的影響，以及后續(xù)對幼體發(fā)育及其體內菌群的影響尚不清楚；此外，幼體不同發(fā)育階段對營養(yǎng)需求和攝食習性的不同，也可能影響幼體及其水環(huán)境菌群結構。因此，本研究采用傳統(tǒng)實驗方法和細菌16S rDNA高通量測序技術，研究了碘 (I2)、二氧化氯、甲醛溶液和漂白粉 [Ca(ClO)2] 4種常用消毒劑對對蝦育苗水質、水環(huán)境和對蝦幼體腸道微生物菌群的影響及育苗效果，以期為凡納濱對蝦育苗水體消毒處理及其菌群調控提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 對蝦育苗實驗和樣品采集

本實驗在中國水產(chǎn)科學研究院南海水產(chǎn)研究所深圳試驗基地進行。實驗海水先經(jīng)砂濾和沉淀，再通過300目以上的棉布濾袋過濾后進入500 L的玻璃鋼實驗桶，實際育苗水體為400 L。實驗共分為5組，即對照組、碘組、二氧化氯組、甲醛組和漂白粉組，每組3個平行，使用劑量參照育苗生產(chǎn)推薦濃度和參考文獻[10–12]。對照組水體不用消毒劑處理；碘組水體使用1 mg·L?1碘消毒；二氧化氯組水體使用3 mg·L?1二氧化氯消毒；甲醛組水體使用25 mL·m?3甲醛溶液消毒；漂白粉組水體使用30 mg·L?1漂白粉消毒。各組水體經(jīng)消毒和曝氣處理48 h后，投入凡納濱對蝦無節(jié)幼體 (購自深圳環(huán)球生物科技有限公司)，幼體初始密度為200尾·L?1。實驗期間，無節(jié)幼體 (N6)或溞狀幼體(Z1)期幼體開始喂食螺旋藻粉和蝦片，并逐步增加蝦元、BP、黑粒等富含蛋白質、脂肪、維生素和礦物質的人工配合飼料。各桶育苗水體連續(xù)曝氣，無水交換，不使用抗生素和其他化學藥物。海水鹽度 30，pH 8.0～8.2，溫度 (30±0.5) ℃，溶解氧質量濃度6.0 mg·L?1以上，均能滿足對蝦幼體發(fā)育需求。

每天取少量幼體用顯微鏡觀察確認發(fā)育情況，并計數(shù)，計算每個發(fā)育期的成活率。在不同消毒劑處理0、48、96 h后，每組取1 L 水體，用0.22 μm濾膜過濾，收集濾膜于無菌凍存管中； 在N6、Z1、糠蝦幼體 (M1) 和仔蝦 (P1) 等關鍵發(fā)育時期，從每個實驗桶隨機采集1 L育苗水體，用0.22 μm濾膜過濾，收集濾膜于無菌凍存管中；此外，使用40目篩絹撈網(wǎng)從每個實驗桶中取幼體1 g，先用干凈過濾海水沖洗，再用75%乙醇對幼體進行體表消毒，最后用無菌海水沖洗3次置于無菌凍存管中。所得濾膜和幼體均于?80 °C保存，用于微生物菌群分析。

1.2 細菌測定方法

在不同消毒劑處理后24和72 h，各實驗組采集10 mL海水，在N6—P1和P5幼體不同發(fā)育時期，從每個實驗桶隨機采集10 mL育苗水體，取0.5 mL，用無菌海水按10、100、1 000倍數(shù)進行稀釋，然后取0.1 mL稀釋水樣滴入到已經(jīng)制備好的2216E和TCBS (Thiosulfate citrate bilesaccharose)培養(yǎng)基上，用滅菌玻璃棒將水樣涂抹均勻至完全被培養(yǎng)基吸收，28 ℃恒溫培養(yǎng)，于72 h 后采用平板計數(shù)法計算弧菌和異養(yǎng)菌數(shù)量。計數(shù)時選取菌落數(shù)30～300之前的平板，每個稀釋度取3個平行樣結果的平均值。

1.3 細菌總DNA提取及群落結構分析

使用DNA提取試劑盒 (Mo Bio Laboratories,Inc., Carlsbad, CA) 抽提水體濾膜和幼體微生物菌群DNA，并用1.0%瓊脂糖凝膠電泳分析DNA質量。采用正向引物 (CCTACGGRRBGCASCAGKVRVGAAT) 和反向引物 (GGACTACNVGGGTWTCTAATCC) 對細菌16S rDNA基因的V3—V4區(qū)進行PCR擴增。PCR反應體系共20 μL，包含模板 DNA 20 ng、5×FastPfu buffer 4 μL、2.5 mmol·L?1dNTPs 2 μL、5 μmol·L?1正反向引物各0.8 μL、FastPfu 聚合酶 0.4 μL，補充 ddH2O 至總體積20 μL。使用MetaVx?文庫構建試劑盒構建測序文庫，Agilent 2100生物分析儀檢測文庫質量，并且通過Qubit 2.0 Fluorometer檢測文庫濃度。DNA文庫混合后，在Illumina MiSeq平臺進行PE300雙端測序。所得序列經(jīng)過質控、組裝后，使用16S rRNA參考數(shù)據(jù)庫Silva 123進行比對；然后使用QIIME軟件 (1.9.1) 基于RDP classifier (Ribosomal Database Program) 貝葉斯算法對OTU的代表性序列進行物種分類學注釋，并在屬分類水平上分析各組菌群的組成差異。菌群高通量測序分析委托廣州吉瑞基因有限公司完成。

1.4 氨氮與亞硝酸氮質量濃度的測定

每個平行組每天取300 mL育苗水體，經(jīng)0.45 μm濾膜抽濾后，用于氨氮與亞硝酸氮質量濃度測定，分別采用《海洋調查規(guī)范》 (GB/T 12763.4—2007) 中的溴酸鈉氧化法和重氮-偶氮光度法測定。

1.5 數(shù)據(jù)分析

所得數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學分析，P＜0.05表示差異顯著。

2 結果

2.1 水體氨氮和亞硝酸鹽質量濃度變化

使用消毒劑前測定二級過濾海水中的氨氮質量濃度為0.005 mg·L?1，使用不同消毒劑消毒24 h后測定為 0.003～0.006 mg·L?1，不同實驗組間沒有顯著差異 (P＞0.05)。溞狀幼體 (Z1—Z3) 發(fā)育階段，各組水體氨氮質量濃度迅速上升，其中對照組顯著高于各消毒處理組 (P＜0.05)。糠蝦幼體 (M1—M3) 以后，除漂白粉組的氨氮質量濃度有所下降外，對照組和其他消毒劑處理組氨氮質量濃度均在0.10 mg·L?1水平波動，最高組的氨氮質量濃度為0.115 mg·L?1(圖 1-a)。

使用消毒劑前測定過濾海水中的亞硝酸鹽質量濃度為0.005 mg·L?1，使用不同消毒劑消毒24 h后測定為 0.003～0.006 mg·L?1，不同實驗組間無顯著差異 (P＞0.05)。Z2期之前，各組水體亞硝酸鹽質量濃度迅速上升，之后呈緩慢上升趨勢。M3期之前，對照組、碘組和二氧化氯組的亞硝酸鹽質量濃度顯著高于甲醛組和漂白粉組。整個育苗期間，漂白粉組的亞硝酸鹽質量濃度均為最低，而對照組亞硝酸鹽質量濃度最高，P5期升到最高值0.065 mg·L?1(圖 1-b)。

圖1 不同實驗組中水體氨氮和亞硝酸氮質量濃度變化Figure 1 Change in mass concentrations of ammonia nitrogen and nitrite nitrogen in water in different groups

2.2 水體總菌和弧菌數(shù)量變化

使用消毒劑前測定二級過濾海水中的總異養(yǎng)細菌數(shù)量為2.88×105CFU·mL?1，使用不同消毒劑消毒24和72 h [ 無節(jié)幼體 (N) 期]后，測定各組水體中總異養(yǎng)細菌數(shù)量和滅菌效率見表1。甲醛對海水中細菌殺滅最為有效，第24和第72小時滅菌效率分別為94.62%和84.46%；二氧化氯次之，分別為89.24%和68.66%；碘和漂白粉在第24小時滅菌效率分別為74.65%和48.96%，但第72小時兩組細菌總數(shù)與對照組接近。One-way ANOVA分析結果表明，甲醛組和二氧化氯組第24與第72小時細菌總數(shù)顯著低于碘組、漂白粉組和對照組。

表1 不同消毒劑組育苗海水處理24與72 h (無節(jié)幼體期) 水體中總異養(yǎng)細菌數(shù)量及滅菌效率Table 1 Number of heterotrophic bacteria and sterilization efficiency in seawater treated with different disinfectant groups for 24 h and 72 h (N stage)

隨著幼體生長發(fā)育，各組水體總菌數(shù)量均不斷升高 (圖2-a)。其中，幼體在Z2期之前，甲醛組和二氧化氯組的總菌數(shù)量顯著低于碘組、漂白粉組和對照組 (P＜0.05)，隨后甲醛組和二氧化氯組總菌數(shù)量明顯升高；P5幼體期，漂白粉組和甲醛組的總菌數(shù)顯著高于其他3組 (P＜0.05)。

幼體在Z2期之前，甲醛組和二氧化氯組的弧菌數(shù)量顯著低于碘組、漂白粉組和對照組 (P＜0.05)；幼體在M2期之前，弧菌數(shù)量一直維持較低水平，之后隨著其發(fā)育生長，各組弧菌數(shù)量急劇上升。P5幼體期，碘組和二氧化氯組弧菌數(shù)量顯著高于漂白粉組、對照組和甲醛組 (P＜0.05，圖2-b)。

圖2 不同實驗組中水體總菌和弧菌數(shù)量變化Figure 2 Changes of total aquatic bacteria and Vibrio in different groups

2.3 水體和幼體菌群結構分析

使用不同消毒劑0、48、96 h后各組水體屬水平菌群組成相對豐度見圖3。使用不同消毒劑0 h后，對照組初始水體主要優(yōu)勢菌屬為東吉科拉屬(Donghicola) 和紅桿菌屬 (Rhodobacteraceae)，分別占43.2%和25.5%；二氧化氯組為紅桿菌屬和Nautella，分別占38.4%和9.3%；碘組為紅桿菌屬、東吉科拉屬和Nautella，分別占27.4%、7.4%和5.8%；甲醛組為假交替單胞菌屬 (Pseudoalteromonas)、交替單胞菌屬 (Alteromonas) 和嗜甲基菌屬 (Methylophaga)，分別占43.6%、34.3%和5.0%；漂白粉組為嗜甲基菌屬和假交替單胞菌屬，分別占83.4%和4.0%。使用消毒劑48 h后，對照組初始水體主要優(yōu)勢菌屬為東吉科拉屬和紅桿菌屬，分別占23.3%和20.9%；二氧化氯組為紅桿菌屬、黃桿菌科未能培養(yǎng)屬和東吉科拉屬，分別占比18.0%、8.4%和8.4%；碘組為紅桿菌屬、Thalassococcus、海命菌屬 (Marivita) 和東吉科拉屬，分別占比41.8%、10.7%、7.4%和7.3%；甲醛組為嗜甲基菌屬、Mesoflavibacter、假交替單胞菌屬和東吉科拉屬，分別占比84.0%、3.7%、2.7%和2.0%；漂白粉組為交替單胞菌屬、Leisingera、Nautella和鹽單胞菌屬 (Halomonas)，分別占比44.0%、20.9%、12.9%和12.2%。使用消毒劑96 h后，對照組初始水體主要優(yōu)勢菌屬為東吉科拉屬、紅桿菌屬和Gammaproteobacteria incertae sedis_unclassified，分別占27.1%、15.5%和5.5%；二氧化氯組為紅桿菌屬、Gammaproteobacteria incertae sedis_unclassified和東吉科拉屬，分別占比30.2%、10.9%和8.7%；碘組為紅桿菌屬、軍團菌屬 (Legionella)、東吉科拉屬、嗜甲基菌屬、Thalassococcus和海命菌屬，分別占比38.2%、13.5%、6.2%、5.4%、3.2%和3.1%；甲醛組為Leisingera、Tropicibacter、嗜甲基菌屬、Mesoflavibacter和東吉科拉屬，分別占比29.6%、23.3%、8.0%、5.9%和4.0%；漂白粉組為Leisingera、Thalassococcus、Nautella、嗜甲基菌屬、紅桿菌屬、黃桿菌屬 (Tenacibaculum)、交替單胞菌屬和鹽單胞菌屬，分別占比24.9%、17.1%、10.2%、9.6%、6.9%、6.2%、5.5%和3.0%。

圖3 不同消毒劑0、48和96 h后各組水體屬水平菌群組成相對豐度Figure 3 Relative abundance of microbial community of hatchery water after 0 h, 48 h and 96 h of different disinfectants groups at genus level

在幼體各發(fā)育階段，從育苗水體和對蝦幼體中共鑒定出237個菌屬，其中水體優(yōu)勢菌屬有50種，而幼體優(yōu)勢菌屬有33種。不同處理組不同發(fā)育期育苗水體的主要優(yōu)勢菌屬差異很大，尤其是N6期和Z1期細菌屬種類多，差異大 (圖4)。N6期育苗水體中主要優(yōu)勢菌屬為OM43_clade、食烷菌屬(Alcanivorax)、AEGEAN-169_marine_group、岸生菌屬 (Litoricola)、Porticoccus、赤桿菌屬 (Erythrobacter)、交替赤桿菌屬 (Altererythrobacter)、Lutimaribacter、黃桿菌屬、Coxiella、水棲菌屬 (Enhydrobacter)、Muricauda、Phaeodactylibacter、NS3a_marine_group、Salinihabitans、嗜甲基菌屬和泥灘微菌屬 (Gilvibacter)。與N6期比Z1期育苗水體中增加了東吉科拉屬、紅菌屬 (Rhodobium)、嗜冷桿菌屬 (Psychrobacter)、動性桿菌屬 (Planomicrobium)、念株菌屬 (Candidatus-Aquiluna) 和埃希氏桿菌屬 (Escherichia-Shigella) 幾種優(yōu)勢菌屬。隨著幼體發(fā)育，M1和P1期不同處理組優(yōu)勢菌屬種類基本一致，但不同菌的豐度存在差異。M1期育苗水體中主要優(yōu)勢菌屬為東吉科拉屬、黏著桿菌屬(Cohaesibacter)、Phaeodactylibacter、海命菌屬、Maritalea、魯杰氏菌屬 (Ruegeria)、Winogradskyella和念株菌屬，而P1期育苗水體中主要優(yōu)勢菌屬為弧菌屬 (Vibrio)、念株菌屬、NS3a_marine_group、海命菌屬、食烷菌屬、假交替單胞菌屬、OM43_clade、Marinomonas、Aureimarina、嗜冷桿菌屬、黏著桿菌屬和Phaeodactylibacter。

圖4 不同實驗組育苗水體屬水平菌群組成相對豐度Figure 4 Relative abundance of microbial community of hatchery water in different groups at genus level

隨著幼體生長發(fā)育，不同時期的優(yōu)勢菌屬變化較大，主要為弧菌屬、不動桿菌屬 (Acinetobacter) 、動性桿菌屬、微桿菌屬 (Exiguobacterium) 、嗜冷桿菌屬、嗜甲基菌屬和魯杰氏菌屬 (圖5)。其中，N6期幼體不同組間優(yōu)勢菌屬差異較大，埃希氏桿菌屬和鹽單胞菌屬是二氧化氯組主要優(yōu)勢菌屬，Blastomonas、Gemmatirosa和埃希氏桿菌屬是漂白粉組主要優(yōu)勢菌屬，嗜甲基菌屬、埃希氏桿菌屬、嗜冷桿菌屬和魯杰氏菌屬是甲醛組主要優(yōu)勢菌屬。Z1期幼體主要優(yōu)勢菌屬為動性桿菌屬、微桿菌屬、嗜冷桿菌屬；M1期各組幼體最占優(yōu)勢屬是弧菌屬、不動桿菌屬、微桿菌屬；P1期幼體內較為優(yōu)勢屬為魯杰氏菌屬、埃希氏桿菌屬、黏著桿菌屬和弧菌屬。

圖5 不同實驗組幼體屬水平菌群組成相對豐度Figure 5 Relative abundance of microbial community of larvae in different groups at genus level

2.4 幼體成活率

在幼體各發(fā)育階段，甲醛組均有較高的成活率，其中Z1—Z3期成活率接近90%，P5期最終成活率為44.44%，顯著高于其他組 (P＜0.05)；其次是漂白粉組，成活率高于對照、碘和二氧化氯組，但無顯著差異 (P＞0.05，圖6)。

圖6 不同實驗組幼體不同時期的成活率Figure 6 Survival rates of L. vannamei larvae at different developmental stages

3 討論

3.1 消毒劑對育苗水體細菌、水質及幼體成活率的影響

消毒劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中發(fā)揮著重要作用，能凈化和穩(wěn)定水質，維護水產(chǎn)養(yǎng)殖動物良好的生長環(huán)境，殺滅或消除環(huán)境病原微生物，防止疾病的發(fā)生[12]。本研究中，不同消毒劑殺菌效果不同，對育苗早期水體的總菌和弧菌數(shù)量影響較大。24和72 h滅菌效率由高到低分別為甲醛、二氧化氯、碘、漂白粉，其中甲醛和二氧化氯滅菌具有長效性和穩(wěn)定性，而碘和漂白粉72 h總菌數(shù)量與對照組相近。二氧化氯有效氯含量是氯的2.63 倍，殺滅異養(yǎng)菌所需的濃度僅為液氯的一半[13]。溞狀幼體階段，甲醛和二氧化氯組水體的總菌和弧菌數(shù)量低于對照組、漂白粉和碘組，表明甲醛和二氧化氯殺菌效果較好。隨著幼體發(fā)育，育苗水體總菌和弧菌數(shù)量上升，各組中碘組的總菌數(shù)最低而弧菌數(shù)量最高，甲醛組的弧菌數(shù)最低。

消毒劑除了殺菌和控制有害藻類作用外，還能增氧并分解水體中的有害物質，降低亞硝酸鹽等有害物濃度，有效改善水質[12-13]。本研究中，使用不同消毒劑前后氨氮和亞硝酸鹽質量濃度無顯著差異；除仔蝦階段碘和二氧化氯組水體氨氮濃度高于對照組外，其余2種消毒劑組育苗水體氨氮和亞硝酸濃度均低于對照組，漂白粉組最低，本實驗也證實使用4種消毒劑可改善育苗水體水質。

幼體不同發(fā)育階段，甲醛組幼體成活率最高，其次是漂白粉組。這與甲醛組水體弧菌數(shù)量少及較低的亞硝酸鹽濃度有關，且與漂白粉組水體氨氮和亞硝酸濃度低相關。崔子予等[14]認為保持凡納濱對蝦育苗水體的弧菌數(shù)量穩(wěn)定，對增加水體穩(wěn)定性，提高對蝦育苗成活率具有意義。

3.2 消毒劑對育苗水體和幼體微生物菌落結構的影響

本研究中，在育苗水體和幼體中鑒定出微生物屬種237種，不同處理組的主要優(yōu)勢菌屬與楊碩[15]報道凡納濱對蝦腸道中的優(yōu)勢菌屬結果相似。4種消毒劑對早期 (N6—Z1) 階段育苗水體中的優(yōu)勢菌屬種類和豐度影響均較大，使用不同消毒劑0、48、96 h后各組優(yōu)勢細菌屬種類和優(yōu)勢度 (百分比)不同。0和48 h后，對照組、碘和二氧化氯組優(yōu)勢菌為東吉科拉屬和紅桿菌屬，而甲醛和漂白粉組優(yōu)勢菌為假交替單胞菌屬、交替單胞菌屬和嗜甲基菌屬。隨著消毒時間延長，96 h后不同實驗組水體優(yōu)勢細菌屬種類趨近，優(yōu)勢種類的數(shù)量增加但豐度降低。M1和P1期各組水體的優(yōu)勢菌屬種類相似，以東吉科拉屬、OM43_clade、弧菌屬、黏著桿菌屬、Phaeodactylibacter、念珠菌屬 (Candidatus-Cquiluna) 和埃希氏桿菌屬等為主，只是各組不同菌屬的豐度存在差異。

OM43_clade屬β-變形菌綱嗜甲基菌科，在全球海洋環(huán)境和其他水生環(huán)境中C1化合物的代謝中發(fā)揮著重要作用[16]。赤桿菌屬屬α-變形菌綱、赤桿菌科，在土壤、熱泉、海水中廣泛分布，部分菌株具有細菌葉綠素a，營好氧異養(yǎng)生長兼具光合作用功能，在全球海洋碳循環(huán)和能量代謝過程中起重要作用[17]。交替赤桿菌屬 (Altererythrobacter) 主要來源于海洋環(huán)境，具有生物降解、產(chǎn)類胡蘿卜素、產(chǎn)細胞毒素和產(chǎn)酶等功能[17]。泥灘微菌屬屬于擬桿菌門黃桿菌綱，具有硝酸鹽還原功能。Phaeodactylibacter、芽孢桿菌屬 (Bacillus) 和鹽單胞菌屬是三疣梭子蟹 (Portunus trituberculatus) 養(yǎng)殖水體優(yōu)勢屬，在有機質降解和氮磷循環(huán)方面發(fā)揮著重要作用[18]。東吉科拉屬和Roseibacterium通常在水生環(huán)境中占主導地位，并促進氮化合物的降解[19-20]。黃桿菌屬是一種黏附能力較強的細菌，可能影響幼體的活力和蛻皮而導致其成活率下降，其豐度受水體中有機物含量影響。研究發(fā)現(xiàn)，對蝦育苗成活率低的育苗池水體的優(yōu)勢菌為假單胞菌和弧菌[21]。本研究中對照組和二氧化氯組水體中的黃桿菌屬、弧菌屬和假交替單胞菌屬為主要優(yōu)勢菌屬，豐度高于其他組，這可能與其幼體較低的成活率有關。

凡納濱對蝦幼體中的優(yōu)勢菌屬以鹽單胞菌屬、弧菌屬、不動桿菌屬、動性桿菌屬、芽孢桿菌屬、微桿菌屬、嗜冷桿菌屬、嗜甲基菌屬和魯杰氏菌屬為主，本研究結果表明育苗水體和幼體微生物群落存在顯著差異?；【荶1期對照組和二氧化氯組的第三優(yōu)勢菌，除漂白粉組外，弧菌屬是M1期各組幼體內最占優(yōu)勢的菌屬。蝦的腸道和周圍環(huán)境的弧菌、假單胞菌和黃桿菌等可能是降低幼體成活率的細菌性病原體。既往研究報道，弧菌過量可改變蝦類健康狀況，引起疾病[22]。研究表明，導致凡納濱對蝦“早期死亡綜合征”(Early mortality syndrome, EMS) 的病原可能是攜帶有毒性質粒的副溶血弧菌 (V. parahaemolyticus) 的特異變種[23-24]?；【呛Ｑ蟓h(huán)境和對蝦腸道的優(yōu)勢菌群，除部分種類為致病菌外，另一些種類則具有硝酸鹽異化作用，對水體中有機物的降解具有重要意義[25]。不動桿菌屬和嗜冷桿菌屬均屬變形菌門γ-變形菌綱，主要分布于水體和環(huán)境中，前者也分布于人的皮膚、咽部、胃、腸道，是人類條件致病菌，而后者具有強耐酸性，主要分布于動物和人類胃腸道內，可引起腸道炎癥。已有研究證實變形菌屬是蝦類腸道菌群的主導[26-27]。郁維娜等[28]研究發(fā)現(xiàn)養(yǎng)殖凡納濱對蝦患病蝦腸道中的γ-變形菌綱的相對豐度顯著高于健康蝦腸道樣品，而α-變形菌綱的相對豐度顯著低于健康蝦腸道樣品。楊坤杰等[29]發(fā)現(xiàn)在健康幼蝦腸道中α-變形菌綱豐度較高，而在患病幼蝦中γ-變形菌綱和擬桿菌門豐度較高。微桿菌屬屬于厚壁菌門芽孢桿菌綱，分布廣泛，生存環(huán)境多樣，具有分解復雜有機物、轉化重金屬、促生長等極具實用價值的功能[30]。芽孢桿菌屬具有強抑制有害菌能力，并能產(chǎn)生拮抗物質如抗生素和細菌素，抑制致病菌的生長；同時產(chǎn)生多種消化酶幫助宿主消化吸收營養(yǎng)物質，從而起到防治疾病的效果，已經(jīng)成為改善凡納濱對蝦健康狀況的益生菌[31]。而Z1期甲醛組幼體的動性桿菌屬和芽孢桿菌屬豐度高于其他4組，這可能與甲醛組幼體有較高的成活率有關。