嚴(yán)紅亞，李珂，王傳禹*，張信艷，2，楊紹昌，3

(1.云南省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院，云南 昆明 650224； 2.水富市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，云南 水富 657800；3.雙江縣畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣中心，云南 雙江 677399)

鴨病毒性腸炎(DVE)又名鴨瘟(Duck plague,DP)，是鴨、鵝和天鵝的一種急性、接觸性皰疹病毒感染，其特征是血管損傷、組織出血、消化道黏膜疹性損害、淋巴器官損害、實(shí)質(zhì)器官退行性病變[1]。臨床診斷特征為發(fā)高熱，兩腳發(fā)軟，腹瀉，糞便呈綠色，流淚和頭頸部腫大，故群眾把它叫作“大頭瘟”[2]。雛番鴨細(xì)小病毒病是由番鴨細(xì)小病毒(Muscovyduckparvovirus，MDPV)引起的一種急性或亞急性敗血性傳染病，本病主要侵害出殼后數(shù)日齡至3周齡的雛番鴨，具有傳播快、死亡率高的特點(diǎn)[2]。2008年底以來，我國閩、浙、皖、蘇等地陸續(xù)發(fā)現(xiàn)番鴨、半番鴨、臺灣白改鴨等多個品種雛鴨“短喙、生長不良”的疫病，經(jīng)研究證實(shí)該病病原為新型番鴨細(xì)小病毒(Newgenotypemuscovyduckparvovirus，N-MDPV)[3]。鴨圓環(huán)病毒病(Duck circovirs disease)是由鴨圓環(huán)病毒(DuCV)引起的一種主要侵害免疫系統(tǒng)的疫病，導(dǎo)致鴨群免疫功能下降或免疫抑制等疾病。圓環(huán)病毒感染的鴨群機(jī)體免疫力受抑制，造成鴨群與其他病原菌或病毒的混合感染情形非常復(fù)雜[4]。近兩年，云南省番鴨養(yǎng)殖中疫病防控壓力較大，常出現(xiàn)雛番鴨疾病防治失敗，導(dǎo)致番鴨群死亡率和淘汰率居高不下。本文就一起昆明某鴨場番鴨感染鴨病毒性腸炎(鴨瘟)、新型番鴨細(xì)小病毒、鴨圓環(huán)病毒的診斷作詳細(xì)報(bào)道，以期為臨床診斷及防制提供參考。

1 發(fā)病情況

2020年7月，云南省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院養(yǎng)禽與禽病研究所接診一起來自昆明郊縣的番鴨病例。據(jù)養(yǎng)殖戶介紹：該批番鴨3 200羽，45日齡，開始發(fā)病時(shí)，部分鴨精神沉郁、減料、拉綠色稀便，發(fā)病鴨怕光、流眼淚、眼瞼周圍羽毛濕潤，頭部皮下水腫，翅膀、腿骨容易折斷；該批番鴨出雛時(shí)接種了雛番鴨細(xì)小病毒弱毒活疫苗，之后免疫過禽流感(H5+H7)三價(jià)疫苗，發(fā)病后用阿莫西林等抗生素藥品進(jìn)行拌料、飲水，沒有明顯治療效果，病死鴨數(shù)量急劇上升，近兩天每天死亡300～400只。

2 臨床癥狀與剖檢病變

據(jù)主訴及現(xiàn)場觀察發(fā)現(xiàn)：該批番鴨均勻度較差，大小不一，患病番鴨主要表現(xiàn)為精神萎頓，眼瞼周圍羽毛濕潤，流出澄清或黏稠的分泌物，頭部腫大，兩腳無力，行走緩慢，排黃綠色或灰白色稀糞，并黏附于肛門周圍，頸部、尾部脫毛，個體消瘦。剖檢病死鴨，可見皮膚黏膜和漿膜出血，眼瞼、頭頸皮下膠胨樣浸潤，咽部、上腭黏膜表面有淡黃色的假膜覆蓋，刮落后露出鮮紅色出血性潰瘍，食道黏膜縱行固膜條斑和小出血點(diǎn)，腸黏膜出血、充血，泄殖腔黏膜出血、壞死、結(jié)痂；胰臟表面有少量白色壞死點(diǎn)，脾有壞死點(diǎn)，腎腫大、有小出血點(diǎn)；膽囊腫大，充滿濃稠墨綠色膽汁；其余組織病變不明顯。對該病例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢查確診。

3 實(shí)驗(yàn)室檢測

3.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)

無菌操作取肝臟，接種到血瓊脂培養(yǎng)基及麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上，置于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，結(jié)果未見有細(xì)菌生長。

3.2 病毒核酸的RT-PCR檢測

無菌采集病死鴨肝臟、脾臟、胰腺等組織，常規(guī)方法對組織進(jìn)行研磨，反復(fù)凍融3次后按照基因組DNA/RNA提取試劑盒說明書提取樣品病毒核酸。進(jìn)行禽流感病毒(A型流感病毒M蛋白、NP蛋白)、鴨瘟病毒(DPV)、鴨副粘病毒(DuNDV)、鴨圓環(huán)病毒(DuCV)、新型番鴨細(xì)小病毒(N-MDPV)的RT-PCR檢測。A型禽流感病毒引物的合成參考國家農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[5]、DPV、DuNDV、DuCV、N-MDPV特異性引物由本實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)，昆明碩擎生物科技有限公司合成，引物信息見表1。樣品PCR擴(kuò)增，凝膠電泳檢測、拍照。結(jié)果(圖1)：A型流感病毒M蛋白、NP蛋白核酸陰性、副粘病毒(NDV)核酸陰性、鴨瘟病毒(DPV)核酸陽性、鴨圓環(huán)病毒(DuCV)核酸陽性、新型番鴨細(xì)小病毒(N-MDPV)核酸陽性。

3.3 臨床樣品PCR產(chǎn)物檢測分析

將被檢樣品N-MDPV和DuCV PCR陽性產(chǎn)物經(jīng)膠回收純化后送昆明碩擎生物科技有限公司測序，所得序列提交 GenBank數(shù)據(jù)庫進(jìn)行Blast比對分析，發(fā)現(xiàn)提交比對序列與GenBank收錄的N-MDPV 序列同源性在83.46%～99.85%，DuCV序列同源性在89.19%～99.33%，DPV序列同源性在85.67%～95.87%。

表1 引物信息

M. DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)(DL2000)；1.樣品DuCV陽性；3.樣品N-MDPV陽性；5.樣品DPV陽性；7.樣品 AIV M蛋白陰性；8.AIV M蛋白陽性對照；10.樣品AIV NP蛋白陰性；11.AIV NP蛋白陽性對照；13.樣品NDV陰性；14.NDV陽性對照；2、4、6、9、12、15.陰性對照。

4 診斷與防治

4.1 診斷

根據(jù)發(fā)病情況、臨床癥狀、剖檢病變及實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果，確診該群番鴨發(fā)病為同時(shí)感染鴨瘟病毒、新型番鴨細(xì)小病毒、鴨圓環(huán)病毒而引起的大批死亡。

4.2 防治措施

(1)消毒與隔離。用10%石灰乳對場地消毒，聚維酮碘和衛(wèi)可(過硫酸氫鉀復(fù)合物粉)輪換使用對鴨舍和周圍環(huán)境、飲水、用具等進(jìn)行消毒；對精神沉郁無法正常采食的病鴨進(jìn)行隔離、淘汰，分開圈養(yǎng)；對病死鴨進(jìn)行無害化處理。

(2)緊急接種。使用鴨瘟弱毒疫苗5頭份對未出現(xiàn)癥狀的鴨群進(jìn)行緊急接種。

(3)抗病毒治療及抗感染。發(fā)病鴨群使用黃芪多糖+氟苯尼考粉+清溫解毒口服液(藥品用量按說明書使用)兌水適量，噴灑到飼料里投喂，1次/d，連用5 d。

4.3 效果觀察

接種疫苗和用藥1周后，死亡病例逐漸減少，存活500余只，但大部分病愈鴨頸部、尾部脫毛，嘴變短，生長發(fā)育受阻，成為僵鴨。

5 討論與體會

鴨瘟是一種急性且高接觸性的傳染疾病，一年四季都有可能發(fā)生，不論是什么品種的飼養(yǎng)鴨，只要發(fā)生此病，都不可避免遭受經(jīng)濟(jì)損失。所以，養(yǎng)殖者不管何時(shí)飼養(yǎng)鴨，都應(yīng)提前做好鴨瘟的預(yù)防免疫工作。番鴨細(xì)小病毒病(俗稱番鴨“三周病”)是引起3周齡內(nèi)雛番鴨的傳染病，本批番鴨已免疫接種了雛番鴨細(xì)小病毒弱毒活疫苗，40多日齡依然出現(xiàn)類雛番鴨“三周病”的癥狀，臨床樣品PCR產(chǎn)物檢測分析，基因組特性符合新型番鴨細(xì)小病毒(N-MDPV)，該病例N-MDPV在流行病學(xué)、臨床特征等方面與文獻(xiàn)[3]一致。說明云南省非自繁自養(yǎng)的水禽養(yǎng)殖場中存在番鴨細(xì)小病毒和新型番鴨細(xì)小病毒的感染，“侏儒癥”是新型番鴨細(xì)小病毒的感染典型特征。目前，DuCV已成為威脅我國養(yǎng)鴨業(yè)的重要免疫抑制性疫病之一，在鴨群中感染十分普遍。臨床上主要表現(xiàn)為免疫器官萎縮和生長受阻等，但N-MDPV也會表現(xiàn)出生長抑制，即“短喙侏儒”，兩者的區(qū)別在于，N-MDPV的發(fā)病日齡一般在1～5周齡，鴨圓環(huán)病毒的發(fā)病日齡較寬泛，且常伴有羽毛脫落[6]。目前，新型番鴨細(xì)小病毒和鴨圓環(huán)病毒暫無特效的生物制品和藥物防治，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和消毒、完善生物安全措施是有效手段。

近年來，隨著規(guī)模化養(yǎng)殖的發(fā)展，飼養(yǎng)密度的增大，危害養(yǎng)鴨業(yè)的疫病越來越多，更趨復(fù)雜。加之飼養(yǎng)條件粗放和管理水平滯后，常出現(xiàn)雛番鴨疾病防治失敗，導(dǎo)致番鴨群大量死亡。番鴨共感染在臨床中較為常見，一般多為某一種病毒+細(xì)菌、某兩種病毒+細(xì)菌感染發(fā)病，該病例檢出3種病毒感染，且這三種病毒的防治均無特效藥，采取緊急接種和抗病毒治療及抗感染等防治措施亦不能有效控制死亡。因此，在番鴨規(guī)?；B(yǎng)殖中嚴(yán)格的生物安全措施對疫病的防控具有重要意義。從防疫規(guī)范的種鴨場進(jìn)苗、對飼養(yǎng)場所進(jìn)行嚴(yán)格消毒、加強(qiáng)飼養(yǎng)管理等基礎(chǔ)工作顯得尤為重要，適時(shí)預(yù)防接種可減少或避免疫病的發(fā)生和流行。