陳海蘭 劉心建

（山西焦煤運(yùn)城鹽化集團(tuán)有限責(zé)任公司，山西運(yùn)城，044000）

2020年12月，我國(guó)多地陸續(xù)報(bào)道冷鏈物品外包裝新型冠狀病毒（COVID-19）核酸檢測(cè)陽(yáng)性，通過(guò)冷鏈物品引發(fā)的新型冠狀病毒肺炎疫情時(shí)有發(fā)生。為解決全國(guó)疫情防控之急需，研究低溫消毒劑并確保低溫消毒效果成了各消毒劑生產(chǎn)企業(yè)的頭等大事之一。

十二烷基二甲基芐基氯化銨（1227），別名苯扎氯氨、潔而滅等，是一種廣譜、高效的陽(yáng)離子殺菌劑，廣泛應(yīng)用于醫(yī)療、紡織印染和水處理行業(yè)[1]。目前，有關(guān)1227的殺菌性能研究大都在常溫條件下進(jìn)行[2-3]，事實(shí)上低溫狀態(tài)下消毒劑的消毒效果通常具有很大的不確定性[4]。為了解1227在低溫條件下的殺菌效果，筆者在-18℃條件下進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)觀察，以期為從事低溫消毒劑開(kāi)發(fā)的業(yè)內(nèi)同仁提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料和儀器

1227（50%，工業(yè)品），金黃色葡萄球菌（ATCC6538，第5代）和大腸桿菌（8099，第4代），牛血清白蛋白，胰蛋白胨生理鹽水溶液（TPS）稀釋液，中和劑為D/E中和肉湯，營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，平紋棉布片（10 mm×10 mm）。

生物安全柜、培養(yǎng)箱、恒溫器、電冰箱以及其他微生物實(shí)驗(yàn)必備器材等。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

（1）將1227用乙二醇和乙醇稀釋成濃度0.5%的溶液，然后放入-18℃冰箱中備用。

（2）將實(shí)驗(yàn)菌株24 h營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)物，用TPS洗下菌苔，制成菌懸液。用3.0%牛血清白蛋白稀釋，使菌液的濃度約為5×108cfu/mL。取10 μL均勻涂抹于滅菌棉布片上，（36±1）℃恒溫培養(yǎng)箱中干燥后，放入-18℃冰箱中備用。

（3）采用載體浸泡定量殺菌實(shí)驗(yàn)[5]。在無(wú)菌平皿中加入5.0 mL溶液（1），加入菌片（2）并使之浸沒(méi)于液體中。在-18℃條件下作用至設(shè)定時(shí)間（15、30、45 min）后，取出菌片移入含5.0 mL中和劑的試管中。中和作用10 min，混勻，取1.0 mL接種平皿，培養(yǎng)。同時(shí)以稀釋液代替1227溶液，做陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn)。結(jié)果以殺滅對(duì)數(shù)值表示，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取其算術(shù)平均值。

2 結(jié)果與討論

2.1 中和劑鑒定

以金黃色葡萄球菌（ATCC6538）為實(shí)驗(yàn)菌，對(duì)D/E中和肉湯的中和作用進(jìn)行鑒定。實(shí)驗(yàn)分為4組，第1組為中和劑+菌片，第2組為1227溶液+中和劑+菌片，第3組為稀釋液+菌片，第4組為稀釋液+中和劑+培養(yǎng)基。經(jīng)3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 中和劑鑒定實(shí)驗(yàn)結(jié)果

從表1可以看出，3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，每次實(shí)驗(yàn)的第1組、第2組和第3組的實(shí)驗(yàn)菌生長(zhǎng)量均相似，且組間菌落數(shù)誤差率不超過(guò)15%；第4組均無(wú)菌生長(zhǎng)。依據(jù)參考文獻(xiàn)[5]中和劑鑒定實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)規(guī)定，D/E中和肉湯對(duì)1227實(shí)驗(yàn)溶液具有良好的中和作用，中和劑選擇合格。

2.2 殺菌能力

經(jīng)3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，在-18℃條件下，質(zhì)量濃度為0.5%的1227對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌作用15 min，殺滅對(duì)數(shù)值均大于3.0，達(dá)到了《消毒技術(shù)規(guī)范》（2002版）的消毒合格水平[6]，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 1227對(duì)微生物的殺滅效果

3 結(jié)論

中和劑載體定量鑒定，-18℃條件下，D/E中和肉湯可有效中和質(zhì)量濃度為0.5%的1227對(duì)金黃色葡萄球菌的殘留作用，且自身及其中和產(chǎn)物對(duì)培養(yǎng)基無(wú)不良影響，對(duì)實(shí)驗(yàn)菌種的生長(zhǎng)基本無(wú)影響。D/E中和肉湯可做1227實(shí)驗(yàn)溶液對(duì)金黃色葡萄球菌載體浸泡定量殺菌實(shí)驗(yàn)的中和劑。

載體浸泡定量殺菌實(shí)驗(yàn)中，-18℃條件下，質(zhì)量濃度為0.5%的1227對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌作用15 min，殺滅對(duì)數(shù)值均大于3.0，達(dá)到了《消毒技術(shù)規(guī)范》（2002版）的消毒合格水平，表現(xiàn)出了較高的殺菌效率，可以用于低溫消毒劑，在-18℃條件下使用。