朱寬佑，孫小玉，李 祥，秦朋云

(1.河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院，河南 鄭州 450046；2.鄭州市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技服務(wù)中心，河南 鄭州 450006)

飼用抗生素在畜牧行業(yè)中大量使用，對(duì)幼齡和成年動(dòng)物都具有一定的促生長(zhǎng)和抗疾病作用，但也產(chǎn)生了抗生素的組織殘留、畜禽二重感染和內(nèi)源性感染、免疫力降低和耐藥性等問(wèn)題[1-3]。微生物飼料添加劑具有促生長(zhǎng)、提高機(jī)體免疫和改善腸道微生態(tài)環(huán)境的效應(yīng)，是替代畜禽飼糧中抗生素的理想物質(zhì)[4,5]，其主要作用方式包括增加動(dòng)物體內(nèi)有益菌數(shù)量，改善腸道中微生物菌群的平衡狀態(tài)和提高機(jī)體免疫力[6]。丁酸梭菌能在動(dòng)物腸道定植，促進(jìn)腸道內(nèi)有益菌生長(zhǎng)，維持動(dòng)物健康，提高動(dòng)物生長(zhǎng)繁殖性能，還能產(chǎn)生丁酸和乳酸等短鏈脂肪酸，有助于腸上皮細(xì)胞的再生和修復(fù)[7,8]。凝結(jié)芽孢桿菌可在腸道內(nèi)分泌乳酸，促進(jìn)有益菌生長(zhǎng)，對(duì)多種致病菌具備殺菌作用[9-11]，并能分泌淀粉酶和蛋白酶等酶類(lèi)，促進(jìn)機(jī)體對(duì)養(yǎng)分的消化和吸收[12-14]。釀酒酵母作為有益菌，在進(jìn)入腸道后能消耗胃腸道氧氣，形成厭氧環(huán)境，促進(jìn)有益菌繁殖，改善消化道微生態(tài)平衡，酵母發(fā)酵物由于具有豐富的核苷酸、B族維生素、游離氨基酸和細(xì)胞壁免疫多糖也備受關(guān)注[15,16]。

現(xiàn)代集約化、規(guī)?；B(yǎng)豬生產(chǎn)中，母豬繁殖性能、年提供斷奶仔豬數(shù)、活產(chǎn)仔豬數(shù)、窩產(chǎn)斷奶仔豬數(shù)、發(fā)情間隔是影響豬場(chǎng)生產(chǎn)效益最重要的因素，其中妊娠母豬的自身體況、腸道健康、免疫能力等對(duì)其繁殖性能、分娩狀態(tài)以及豬場(chǎng)經(jīng)濟(jì)效益至關(guān)重要[17]。因此，本實(shí)驗(yàn)在飼料中分別添加丁酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、釀酒酵母發(fā)酵物微生物添加劑，研究其對(duì)妊娠母豬繁殖性能和血清生化指標(biāo)的影響，以期為其在生產(chǎn)實(shí)踐中的合理使用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

丁酸梭菌由河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室提供，有效活菌數(shù)3.0×109CFU/g；凝結(jié)芽孢桿菌由校企合作企業(yè)提供，有效活菌數(shù)5.0×109CFU/g；釀酒酵母發(fā)酵物由校企合作企業(yè)提供，主要指標(biāo)為粗蛋白≥20%、粗灰分≤7%、水分≤12%、甘露聚糖≥0.1%。

1.2 主要儀器及試劑

威爾德3000 v背膘儀購(gòu)自深圳市威爾德醫(yī)療電子有限公司，F(xiàn)A1104型分析天平購(gòu)自上海市安亭電子儀器廠，DHG-9240型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱購(gòu)自上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司，通風(fēng)櫥購(gòu)自杭州威爾凈化設(shè)備有限公司。

15%三氯乙酸，蒸餾水，硫酸銅，硫酸鉀，硫酸，甲基紅，95%乙醇，次甲基藍(lán)，硼酸，氫氧化鈉，硫酸銨，鹽酸均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取妊娠80 d的大約克妊娠母豬20頭，隨機(jī)分成4組，每組胎次結(jié)構(gòu)相近，每組5個(gè)重復(fù)，預(yù)試期6 d，試驗(yàn)期為86～107 d。Ⅰ組(對(duì)照組)飼喂基礎(chǔ)日糧；Ⅱ組在基礎(chǔ)日糧中添加20 g/t丁酸梭菌，Ⅲ組在基礎(chǔ)日糧中添加50 g/t凝結(jié)芽孢桿菌；Ⅳ組在基礎(chǔ)日糧中添加5000 g/t釀酒酵母發(fā)酵物。試驗(yàn)基礎(chǔ)飼糧均為河南諸美種豬育種集團(tuán)繁育三場(chǎng)提供的妊娠母豬專(zhuān)用粉狀飼糧，用攪拌機(jī)將不同添加劑與基礎(chǔ)飼糧混合充分后進(jìn)行飼喂，豬群的飼養(yǎng)管理、帶豬消毒、免疫接種等均按豬場(chǎng)正常的操作規(guī)程實(shí)施。

1.4 樣品采集

采集試驗(yàn)開(kāi)始當(dāng)天和妊娠107 d的新鮮糞樣，每頭豬采樣200 g，并迅速保存于-20 ℃冰箱。于妊娠第107 d對(duì)每組3頭母豬進(jìn)行前腔靜脈采血，每頭采15 ml，分兩管裝。血液靜置15 min后，于4 ℃下10000 r/min(離心5 min離心制備血清，血清于-20 ℃保存。

1.5 指標(biāo)測(cè)定與方法

1.5.1 背膘厚

測(cè)定妊娠86 d、107 d的背膘厚度，母豬自然站立時(shí)，測(cè)P2點(diǎn)背膘厚，測(cè)量時(shí)探頭與背部保持垂直，傾斜可能導(dǎo)致測(cè)量錯(cuò)誤。

1.5.2 繁殖性能

測(cè)定總產(chǎn)仔數(shù)、產(chǎn)活仔數(shù)、初生窩重、出生個(gè)體重等。

1.5.3 糞便含水率

稱量瓶烘干至恒重，稱取約20 g糞樣，置于電熱鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)，加熱2～4 h，加蓋取出，在干燥器內(nèi)冷卻0.5 h，稱量后再置于電熱鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)加熱1 h后，在干燥器內(nèi)冷卻0.5 h，稱量，重復(fù)加熱1 h的操作，直至連續(xù)兩次稱量差不超過(guò)0.002 g，即為恒重。

100%

1.5.4 酸溶蛋白

將糞便樣品用三氯乙酸預(yù)處理后，采用凱氏定氮法測(cè)量，半微量蒸餾法蒸餾，鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定，計(jì)算酸溶蛋白含量。

式中V1：樣品消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積/ml；V2：試劑空白消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積/mL；C：鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液當(dāng)量濃度/(mol/L)；0.014：1 N鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL相當(dāng)于氮克數(shù)；6.25：氮換算為蛋白質(zhì)的系數(shù)；M：樣品的質(zhì)量/g；W：樣品的水分含量/%。

1.5.5 血清生化指標(biāo)

血清中的葡萄糖(GLU)、尿素(UREA)、總蛋白(TP)采用美國(guó)貝克曼Cx-4型自動(dòng)生化分析儀測(cè)定、三碘甲腺原氨酸(T3)、四碘甲腺原氨酸等含量(T4)采用DMF-96型10管放射免疫γ計(jì)數(shù)器放免法進(jìn)行測(cè)定，血清生化指標(biāo)均在鄭州頤和醫(yī)院測(cè)定。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用Excel 2019進(jìn)行數(shù)據(jù)整理和預(yù)處理，應(yīng)用SAS 9.3.1版統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，Duncan′s多重比較分析差異顯著性。P<0.01差異極顯著、P<0.05差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 三種添加劑對(duì)妊娠期背膘厚的影響

丁酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌和釀酒酵母發(fā)酵物對(duì)妊娠母豬背膘厚的影響見(jiàn)表1。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組母豬背膘都有增加的趨勢(shì)，其中Ⅱ組、Ⅳ組與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組之間差異不顯著(P>0.05)，Ⅲ組與對(duì)照組相比背膘增加，且差異顯著(P<0.05)。

表1 妊娠母豬的背膘及增量 mm

2.2 三種添加劑對(duì)妊娠母豬繁殖性能的影響

丁酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌和釀酒酵母發(fā)酵物對(duì)妊娠母豬繁殖性能的影響見(jiàn)表2。Ⅱ組出生個(gè)體重較對(duì)照組降低2.01%(P>0.05)，出生窩重與對(duì)照組相比顯著降低26.83%(P<0.05)。Ⅲ組出生個(gè)體重較對(duì)照組降低5.37%(P>0.05)，出生窩重與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。Ⅳ組出生個(gè)體重較對(duì)照組升高14.09%(P>0.05)，出生窩重與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組出生個(gè)體重與對(duì)照組相比均無(wú)顯著差異，Ⅳ組與Ⅲ組相比，出生個(gè)體重增加20.57%，且差異顯著(P<0.05)。死胎數(shù)在Ⅳ組和Ⅱ組之間差異顯著，其他組兩兩之間差異不顯著。在飼料中添加丁酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、釀酒酵母發(fā)酵物對(duì)母豬分娩時(shí)的產(chǎn)程和產(chǎn)活仔數(shù)均無(wú)顯著影響。

表2 妊娠母豬的繁殖性能

2.3 三種添加劑對(duì)妊娠母豬糞便含水率和酸溶蛋白的影響

丁酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌和釀酒酵母發(fā)酵物對(duì)妊娠母豬糞便含水率和酸溶蛋白的影響見(jiàn)表3。妊娠母豬糞便含水率中，Ⅱ組較對(duì)照組有升高趨勢(shì)，但差異不顯著(P>0.05)，Ⅲ組和Ⅳ組較對(duì)照組差異極顯著，Ⅲ組糞便含水率極顯著降低2.11%(P<0.01)，Ⅳ組糞便含水率極顯著增高2.68%(P<0.01)，Ⅲ組較其他各組糞便含水率均極顯著降低。在試驗(yàn)組中，添加釀酒酵母發(fā)酵物對(duì)妊娠母豬糞便含水率有極顯著影響。由表3可知，Ⅳ組糞便中酸溶蛋白含量較對(duì)照組降低49.38%，差異顯著(P<0.05)。Ⅱ組較對(duì)照組提高1.23%，差異不顯著(P>0.05)。Ⅲ組較對(duì)照組降低11.11%，差異不顯著(P>0.05)。

表3 妊娠107 d母豬糞便的含水率和酸溶蛋白 %

2.4 三種添加劑對(duì)妊娠母豬血清生化指標(biāo)的影響

丁酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌和釀酒酵母發(fā)酵物對(duì)妊娠母豬血清生化指標(biāo)的影響見(jiàn)表4。Ⅳ組血清中尿素含量比對(duì)照組尿素含量增加61.23%(P<0.05)。Ⅱ、Ⅲ組尿素含量與對(duì)照組相比有升高趨勢(shì)，但差異不顯著。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組T4(甲狀腺素)含量分別較對(duì)照組無(wú)顯著差異，但Ⅱ組T4含量有升高趨勢(shì)，Ⅲ、Ⅳ組有降低趨勢(shì)，Ⅱ組和Ⅳ組相比差異顯著。與對(duì)照組相比試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組血清中總蛋白、葡萄糖、T3的生化指標(biāo)均無(wú)顯著性差異。

表4 妊娠第107 d母豬的血清生化指標(biāo)

3 討論

3.1 三種添加劑對(duì)母豬繁殖性能的影響

在規(guī)?；a(chǎn)過(guò)程中，母豬的繁殖性能是衡量豬場(chǎng)生產(chǎn)經(jīng)濟(jì)效益的重要指標(biāo)，其中背膘厚是反應(yīng)母豬體況的重要指標(biāo)之一，妊娠期母豬背膘過(guò)厚或過(guò)薄，對(duì)母豬的繁殖性能均有不利影響。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)在飼料中添加丁酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、釀酒酵母發(fā)酵物都有增加107 d妊娠母豬背膘厚的作用，但只有凝結(jié)芽孢桿菌組較對(duì)照組有顯著差異，且丁酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、釀酒酵母發(fā)酵物三個(gè)試驗(yàn)組之間差異不顯著。Cao等[18]研究發(fā)現(xiàn)，妊娠后期90 d日糧添加0.2%丁酸梭菌可顯著縮短母豬分娩產(chǎn)程。馮云龍等[19]研究報(bào)道，在妊娠后期和哺乳期的母豬飼糧中添加丁酸梭菌對(duì)窩產(chǎn)仔數(shù)、窩產(chǎn)活仔數(shù)、弱仔率和死胎率沒(méi)有顯著影響。趙雷等[20]研究復(fù)合丁酸梭菌制劑對(duì)兩個(gè)品種(長(zhǎng)大二元和大長(zhǎng)二元)妊娠母豬生產(chǎn)性能的影響，結(jié)果表明日糧中添加0.2%丁酸梭菌顯著提高了妊娠母豬的生產(chǎn)性能，如產(chǎn)活仔數(shù)、仔豬初生重、21日齡體重等，但對(duì)不同品種的妊娠母豬影響不顯著。陳鵬等[21]研究表明，在基礎(chǔ)妊娠料中添加3 g/kg和5 g/kg酵母培養(yǎng)物，各組的平均窩產(chǎn)仔數(shù)、平均窩健仔數(shù)和仔豬平均出生個(gè)體重均無(wú)顯著差異。任紅立等[17]研究發(fā)現(xiàn)在妊娠后期母豬飼料中添加乳酸菌和酵母菌復(fù)合菌，能夠顯著提高出生窩重和出生個(gè)體重。王倫學(xué)等[22]在妊娠后期母豬料中添加益生菌，發(fā)現(xiàn)益生菌一定程度上可以提高窩產(chǎn)活仔數(shù)、初生重和出生窩重，雖然差異不顯著，但添加益生菌在一定程度上可提高妊娠母豬健康狀況。

本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)活仔數(shù)各組間差異不顯著。丁酸梭菌組的出生窩重較其他組顯著降低，凝結(jié)芽孢桿菌組仔豬出生個(gè)體重和出生窩重有降低趨勢(shì)，但差異不顯著，這與前人研究結(jié)論不一致，這可能與母豬配種時(shí)的受胎率、自身體況、生活環(huán)境和菌種的添加劑量、添加方式等有關(guān)；釀酒酵母發(fā)酵物對(duì)仔豬的出生個(gè)體重和出生窩重有提高的作用，但差異不顯著，相對(duì)其他組釀酒酵母發(fā)酵物對(duì)促進(jìn)母豬的繁殖性能效果較好。

3.2 三種添加劑對(duì)妊娠母豬糞便中含水率和酸溶蛋白含量的影響

規(guī)?；i場(chǎng)普遍存在母豬便秘現(xiàn)象，這是廣大養(yǎng)殖場(chǎng)深感困擾的問(wèn)題之一。增加糞便中的含水率能有效減少便秘現(xiàn)象的發(fā)生。馮云龍等[19]研究表明，在妊娠后期和哺乳期飼糧中添加丁酸梭菌可以降低糞便中大腸桿菌的數(shù)量，且添加量為500～1000 mg/kg時(shí)效果明顯。趙雷等[20]研究發(fā)現(xiàn)，添加0.2%丁酸梭菌，妊娠母豬糞便形態(tài)明顯好于對(duì)照組。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)丁酸梭菌組糞便含水率較對(duì)照組有升高趨勢(shì)，凝結(jié)芽孢桿菌組糞便含水率較其他組極顯著降低(P<0.01)，釀酒酵母發(fā)酵物組糞便含水率較對(duì)照組極顯著升高(P<0.01)，因此飼料中添加釀酒酵母發(fā)酵物可以有效改善母豬便秘，有利于分娩生產(chǎn)。

從糞便中酸溶蛋白的含量能夠判斷出動(dòng)物機(jī)體消化吸收能力的高低，糞便中酸溶蛋白含量越少，說(shuō)明豬糞便中蛋白質(zhì)沉淀就越少，胃腸道消化吸收能力就越好。在本試驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)釀酒酵母發(fā)酵物組糞便酸溶蛋白含量顯著減少，說(shuō)明飼料中添加釀酒酵母發(fā)酵物不僅可以提高糞便含水率，還可以降低糞便中酸溶蛋白的含量，有助于調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，改善飼料的適口性，提高妊娠母豬對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，且效果要比凝結(jié)芽孢桿菌組好。

3.3 三種添加劑對(duì)妊娠母豬血清生化指標(biāo)的影響

血清生化指標(biāo)在一定程度上可以反映出機(jī)體的生理功能和代謝狀況，根據(jù)血清生化指標(biāo)能夠判斷出動(dòng)物機(jī)體生產(chǎn)性能和健康狀況是否出現(xiàn)異常?？偟鞍缀磕芊从吵鰴C(jī)體蛋白質(zhì)代謝情況，表明氨基酸蛋白質(zhì)吸收利用率和組織蛋白質(zhì)沉淀多少以及肝臟蛋白質(zhì)合成代謝的能力[23]。尿素是蛋白質(zhì)代謝終產(chǎn)物之一，它組成了血液中大部分非蛋白氮，血清中尿素含量多少能夠反映出腎臟功能的好壞[24]。葡萄糖是動(dòng)物體維持生命活動(dòng)的直接供能物質(zhì)，在正常范圍內(nèi)含量升高能提高動(dòng)物機(jī)體的免疫能力，減少不良應(yīng)激反應(yīng)。甲狀腺激素(T3、T4)能增加動(dòng)物體內(nèi)各種組織的代謝活動(dòng)，提高代謝率[25]。Meng等[26]研究認(rèn)為在生長(zhǎng)育肥豬的飼糧中添加丁酸梭菌和枯草芽孢桿菌能夠顯著提高育肥豬腸道內(nèi)氮的表觀消化率，顯著改善育肥豬的生長(zhǎng)性能。孫玲玲等[24]研究發(fā)現(xiàn)雛鵝飼料中添加丁酸梭菌，血清尿素氮、總蛋白含量低于對(duì)照組。賈聰慧等[23]在肉雞的研究中發(fā)現(xiàn)丁酸梭菌可顯著提高血清總蛋白含量。鄭有秀等[27]在斷奶仔豬的試驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn),丁酸梭菌可以提高TP，降低尿素。趙娜等[13]在肉雞的研究中發(fā)現(xiàn),添加凝結(jié)芽孢桿菌可以顯著提高TP含量。林麗花等[28]研究發(fā)現(xiàn),在黃羽肉雞飼料中添加凝結(jié)芽孢桿菌可降低血清尿素氮含量。董佳琦[25]等發(fā)現(xiàn)在哺乳母豬添加一定含量復(fù)合益生菌(乳酸菌1.0×108CFU/g、酵母菌8×107CFU/g)，可顯著提高哺乳母豬血清GLU、T3含量，對(duì)血清UN、TP、T4、白蛋白與球蛋白之比(A/G)無(wú)顯著影響。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，添加丁酸梭菌可提高TP、尿素、GLU、T3、T4的含量，但差異不顯著。飼料中添加凝結(jié)芽孢桿菌可降低TP、T4含量，提高尿素、GLU、T3含量，飼料中添加釀酒酵母發(fā)酵物可顯著提高尿素含量，但對(duì)妊娠母豬血清TP、GLU、T3、T4的含量無(wú)顯著影響。三個(gè)試驗(yàn)組妊娠母豬血清中尿素含量均有升高的趨勢(shì)，但只有釀酒酵母發(fā)酵物組差異顯著，這可能是由于蛋白質(zhì)代謝減弱而引起尿素含量升高，也可能是由于三種添加劑在一定程度上造成的妊娠母豬腎臟功能減弱而引起尿素含量增高，具體原因有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

(1)飼料中添加20 g/t丁酸梭菌(菌落含量：3.0×109CFU/g)，對(duì)妊娠母豬的繁殖性能和血清生化指標(biāo)沒(méi)有顯著影響；

(2)飼料中添加50 g/t凝結(jié)芽孢桿菌(菌種含量：5.0×109CFU/g)有助于母豬妊娠后期背膘增長(zhǎng)，但對(duì)母豬繁殖性能的影響不如釀酒酵母發(fā)酵物組效果好；

(3)飼料中添加5000 g/t釀酒酵母發(fā)酵物有助于改善妊娠母豬腸道微生物菌群，極顯著增高糞便中的含水率，減少便秘的發(fā)生，提高母豬繁殖性能和仔豬的出生個(gè)體重、出生窩重，顯著降低酸溶蛋白含量，提高消化吸收能力。