■徐 丹 吉莉莉 徐 超 唐子婷 舒 剛*

（1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，四川成都611130；2.成都大學(xué)肉類加工四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川成都610106）

家禽養(yǎng)殖業(yè)在我國畜牧業(yè)中具有高度規(guī)?；⒓s化、組織化和市場(chǎng)化的特點(diǎn)。規(guī)?；B(yǎng)殖是把雙刃劍，帶來超高經(jīng)濟(jì)收益和養(yǎng)殖效益的同時(shí)動(dòng)物健康也受到嚴(yán)重威脅。所以建立低成本、高效綠色養(yǎng)殖模式以保證動(dòng)物與副產(chǎn)品的質(zhì)量成為了家禽養(yǎng)殖業(yè)的重要任務(wù)，因此飼料添加劑成為了研究熱點(diǎn)。近幾年，為了達(dá)到控制疾病、促進(jìn)生長(zhǎng)的目的，我國飼料界濫用藥物、抗生素等作為飼料添加劑，隨之導(dǎo)致動(dòng)物產(chǎn)生耐藥性、動(dòng)物性產(chǎn)品毒素殘留超標(biāo)和環(huán)境污染等問題。尋找價(jià)廉、高效、無公害和環(huán)保安全促生長(zhǎng)綠色飼料添加劑成為了飼料界的重要任務(wù)。中藥或中藥提取物飼料添加劑可以達(dá)到在養(yǎng)殖過程預(yù)防疾病和保健的目的。

生物堿是最早被研究開發(fā)的一類植物提取物，可對(duì)機(jī)體產(chǎn)生廣泛而強(qiáng)烈的生理影響。白屈菜為罌粟科白屈菜屬植物白屈菜（Chelidonium majus L）的多年生草本。白屈菜全株含有多種重要化學(xué)成分，其中生物堿成分比例最高，目前報(bào)道主要有白屈菜堿、白屈菜紅堿、血根堿和小檗堿等，白屈菜堿為其主要有效生物堿類物質(zhì)成分之一，具有抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、保肝護(hù)腎、抗菌、抗病毒、抗炎、殺蟲等眾多藥理學(xué)價(jià)值。我國多數(shù)山區(qū)及丘陵地帶均有野生白屈菜，白屈菜生物堿資源豐富，開發(fā)利用前景良好。目前國內(nèi)外科研人員雖然對(duì)白屈菜生物堿廣泛關(guān)注并做了大量試驗(yàn)研究其藥理作用，但未見白屈菜堿作為家禽飼料添加劑在動(dòng)物營養(yǎng)方面的試驗(yàn)研究。故本試驗(yàn)考察了白屈菜堿對(duì)雛期蛋雞生長(zhǎng)性能、血清抗氧化功能及免疫性能的影響，為其實(shí)際應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用白屈菜堿（含量為40%，由北京生泰爾生物科技有限公司提供，批號(hào)：20180212）。在試驗(yàn)前期通過預(yù)試驗(yàn)確定白屈菜堿添加量為100 mg/kg 飼料。γ干擾素（IFN-γ）和白介素-2（IL-2）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒，均購自北京索萊寶科技有限公司。

主要試驗(yàn)儀器包括高速冷凍離心機(jī)（賽默飛世爾有限公司）、多功能酶標(biāo)儀、移液槍、恒溫培養(yǎng)箱等。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物和分組設(shè)計(jì)

試驗(yàn)選取200 只狀態(tài)良好、體重均勻的1 日齡健康固始雞（購自河南省信陽市三高農(nóng)牧股份有限公司），隨機(jī)分為2個(gè)組（空白組和白屈菜堿組），每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)25只。空白組飼喂基礎(chǔ)飼糧；白屈菜堿組在基礎(chǔ)日糧中按照100 mg/kg加入白屈菜堿。試驗(yàn)從雛雞1日齡開始，至其28日齡結(jié)束，共計(jì)28 d。

1.3 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)方式采用3 層疊層式籠養(yǎng)，自由飲清潔水，自由采食粉料，保持雞舍清潔衛(wèi)生和空氣流通。育雛期每天8:00 和22:00 飼喂5 次逐漸過渡到每天飼喂3 次，同一組人員飼養(yǎng)，其他按正常飼養(yǎng)管理進(jìn)行。

免疫程序：第7 d，新城疫傳染性支氣管炎二聯(lián)苗，二倍量滴鼻點(diǎn)眼；第12 d，法氏囊多價(jià)苗，二倍量飲水；第19 d，新城疫Ⅳ系，二倍量飲水。基礎(chǔ)日糧及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧及營養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4 日常觀察

觀察并記錄各試驗(yàn)組雞只每日精神活動(dòng)狀態(tài)、采食飲水情況和糞便形態(tài)顏色，并記錄病亡情況。

1.5 生長(zhǎng)性能測(cè)定

分別于試驗(yàn)第1、14 d和第28 d以重復(fù)為單位對(duì)雞只進(jìn)行空腹稱質(zhì)量，記錄試驗(yàn)初、末重，每天準(zhǔn)確記錄每重復(fù)雛雞采食量，計(jì)算各重復(fù)雞只平均日采食量、平均日增中和料重比。

平均日采食量（g）=采食量總和/試驗(yàn)天數(shù)

平均日增重（g）=（試驗(yàn)?zāi)┚?試驗(yàn)初均重）/試驗(yàn)天數(shù)

料重比=平均日采食量/平均日增重

1.6 免疫臟器指數(shù)測(cè)定

分別于試驗(yàn)第14 d和第28 d，每組每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取5 只雞，解剖并分離脾臟、法氏囊、胸腺，剝離周圍脂肪后用濾紙吸干水分后稱重。計(jì)算器官指數(shù)。

器官指數(shù)（g/kg）=免疫器官重（g）/體重（kg）

1.7 血清中IFN-γ含量和IL-2含量測(cè)定

分別在第14、28 d 時(shí)，每組隨機(jī)抽取10 只雞，翅靜脈采血2 mL，置于無抗凝劑的采血管中，靜置2 h，3 500 r/min 離心10 min，4 ℃分離血清后置于-20 ℃中保存。酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定血清中IFN-γ和IL-2的含量。

1.8 血清抗氧化指標(biāo)

分別在試驗(yàn)第14、28 d，每組每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取5 只雞，翅靜脈采血1 mL，置于無抗凝劑的采血管中，靜置2 h，3 000 r/min 離心10 min，分離血清，置于-20 ℃保存?zhèn)溆?。按照試劑盒（南京建成生物工程研究所）說明書檢測(cè)總超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽過氧化氫酶（GSH）含量和總抗氧化能力（T-AOC）。

1.9 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)利用SPSS19.0 進(jìn)行方差分析，Duncan's法進(jìn)行多重比較，數(shù)據(jù)以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 一般觀察

整個(gè)試驗(yàn)過程未見雞只出現(xiàn)死亡或食欲不振、精神萎靡，所有雞只采食和飲水正常。

2.2 白屈菜堿對(duì)雛雞生長(zhǎng)性能的影響(見表2)

由表2可知，14 d時(shí)白屈菜堿組平均體重高于空白組，但是差異不顯著（P＞0.05）；28 d 白屈菜堿組平均體重顯著性高于空白組（P＜0.05）。1～14 d 及15～28 d兩組平均日增重差異不顯著（P＞0.05），但白屈菜堿組有增長(zhǎng)趨勢(shì)；1～28 d白屈菜堿組平均日增重顯著高于空白組（P＜0.05）。1～28 d及15～28 d白屈菜堿組料重比顯著低于空白組（P＜0.05）。

表2 白屈菜堿對(duì)雛雞生長(zhǎng)性能的影響

2.3 白屈菜堿對(duì)雛雞免疫器官指數(shù)的影響(見表3)

由表3 可知，14 d 脾臟指數(shù)及28 d 法氏囊指數(shù)、胸腺指數(shù)兩組間均無顯著差異（P＞0.05），但白屈菜堿組有提高趨勢(shì)。14 d白屈菜堿組法氏囊指數(shù)、胸腺指數(shù)均顯著高于空白組（P＜0.05）。28 d 白屈菜堿組脾臟指數(shù)顯著高于空白組（P＜0.05）。

2.4 白屈菜堿對(duì)雛雞血清中IFN-γ含量和IL-2含量的影響(見表4)

表4 白屈菜堿對(duì)雛雞期血清IFN-γ和IL-2的影響（pg/mL）

由表4可知，14 d及28 d白屈菜堿組血清中IL-2含量均顯著性高于空白組（P＜0.05）。對(duì)于14 d及28 d血清IFN-γ含量，各組之間無顯著性差異（P＞0.05），但白屈菜堿組相對(duì)較高。

2.5 白屈菜堿對(duì)雛雞血清抗氧化指標(biāo)的影響(見表5)

由表5 可知，兩組血清T-SOD 含量在整個(gè)試驗(yàn)期間均無顯著差異（P＞0.05）。28 d 白屈菜堿組血清GSH 值顯著性高于空白組（P＜0.05）。14 d 及28 d白屈菜堿組血清T-AOC 含量均顯著高于空白組（P＜0.05）。

表5 白屈菜堿對(duì)雛雞血清抗氧化指標(biāo)的影響(U/mL)

3 討論

3.1 白屈菜堿對(duì)固始雞育雛期生長(zhǎng)性能的影響

何夏陽在研究苯并啡啶類生物堿時(shí)發(fā)現(xiàn)，在28日齡斷奶仔豬日糧中添加血根堿和白屈菜紅堿混合物能提高試驗(yàn)豬的飼料轉(zhuǎn)化率。饒華等在豬飼料中添加血根堿，發(fā)現(xiàn)斷奶仔豬采食量、平均日增重及飼料營養(yǎng)吸收消化效率都得到了顯著提高。Sharma 等研究發(fā)現(xiàn)在火雞飼料中添加1.5%血根堿時(shí)可提高火雞日增重、平均日采食量，表明血根堿能提高飼料轉(zhuǎn)化率。本試驗(yàn)結(jié)果與前人研究結(jié)果一致，所有時(shí)間段白屈菜堿組的平均體重、平均日增重都優(yōu)于空白組，表明白屈菜堿能提高蛋雛雞生長(zhǎng)性能。有研究表明，苯并啡啶類生物堿能不可逆抑制動(dòng)物胃腸道內(nèi)芳香族氨基酸脫羥酶，減少芳香族氨基酸降解，提高了動(dòng)物機(jī)體小腸對(duì)色氨酸、苯丙氨酸的利用效率，促進(jìn)蛋白質(zhì)代謝，從而促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育，這可能是白屈菜堿促進(jìn)育雛期固始雞生長(zhǎng)發(fā)育的機(jī)理。

3.2 白屈菜堿對(duì)固始雞育雛期免疫器官指數(shù)的影響

近年來，我國研究人員對(duì)植物生物堿的研究取得了很多成果。生物堿是堿性含氮化合物，廣泛存在于生物體內(nèi)，具有生物來源廣、化學(xué)結(jié)構(gòu)多樣、多種生物活性等特點(diǎn)。禽類主要的免疫器官包括胸腺、脾臟、法氏囊，對(duì)機(jī)體的免疫機(jī)能起著至關(guān)重要的作用。脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)及胸腺指數(shù)是反映家禽免疫功能的重要指標(biāo)，其指數(shù)升高提示器官的免疫水平提高。倪耀娣等研究發(fā)現(xiàn)天然生物堿甜菜堿對(duì)肉雞免疫功能有顯著的提高作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明，14 d白屈菜堿組法氏囊指數(shù)、胸腺指數(shù)均顯著高于空白組，28 d 白屈菜堿組脾臟指數(shù)顯著高于空白組。本試驗(yàn)結(jié)果表明，白屈菜堿能在一定程度上提高育雛期固始雞的免疫臟器指數(shù)，促進(jìn)免疫器官生長(zhǎng)發(fā)育。

3.3 白屈菜堿對(duì)固始雞育雛期血液免疫指標(biāo)的影響

機(jī)體血液生理指標(biāo)處于不斷變化卻又相對(duì)恒定的狀態(tài)，血液中任何有形成分的病理性改變都會(huì)影響到機(jī)體各部分健康狀況。IL-2能增強(qiáng)T細(xì)胞的殺傷活性，在動(dòng)物體內(nèi)能增強(qiáng)抗原誘導(dǎo)的TC活性，甚至可以輔助誘導(dǎo)抗原和半抗原直接在祼鼠體內(nèi)產(chǎn)生。IL-2可促進(jìn)NK 細(xì)胞的增殖，維持NK 細(xì)胞長(zhǎng)期生長(zhǎng)，對(duì)原發(fā)性及轉(zhuǎn)移性腫瘤，均有明顯抵抗作用。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，14 d及28 d空白組IL-2含量均顯著低于白屈菜堿組，說明白屈菜堿能提高IL-2的含量。IFN-γ具有增加抗原遞呈的作用，可促進(jìn)CD4+T細(xì)胞聚集于病變部位，可起到抗感染作用。本試驗(yàn)結(jié)果顯示白屈菜堿組血清IFN-γ含量相較于空白組具有增長(zhǎng)趨勢(shì)，說明白屈菜堿具有提高機(jī)體抗感染性能的潛力，推測(cè)可能與白屈菜堿提高機(jī)體免疫力的作用相關(guān)。

3.4 白屈菜堿對(duì)固始雞育雛期血清抗氧化指標(biāo)的影響

生物機(jī)體在正常生命代謝過程中會(huì)產(chǎn)生氧自由基，氧自由基具有強(qiáng)烈的細(xì)胞殺傷力，造成一系列的毒性反應(yīng)從而導(dǎo)致細(xì)胞功能受損。脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物能夠使膜蛋白構(gòu)象發(fā)生改變，影響膜蛋白活性，進(jìn)而影響細(xì)胞的各種功能。GSH 是一種含γ-酰胺鍵和巰基的三肽，易與自由基結(jié)合，具有抗氧化作用和整合解毒作用，故能參加機(jī)體生物轉(zhuǎn)化，把機(jī)體內(nèi)有害的毒物轉(zhuǎn)化為無害的物質(zhì)，排泄出體外。本試驗(yàn)結(jié)果表明，28 d 時(shí)白屈菜堿組GSH 含量顯著高于空白組，說明白屈菜堿能提高育雛期固始雞血清GSH 含量，具有提高機(jī)體抗氧化功能的潛力。 T-AOC 的大小可反映機(jī)體抗氧化系統(tǒng)對(duì)外來刺激的代償能力以及機(jī)體自由基代謝強(qiáng)弱。本試驗(yàn)結(jié)果表明，14 d 時(shí)白屈菜堿組T-AOC 含量顯著高于空白組，且在整個(gè)試驗(yàn)階段，白屈菜堿組T-AOC 含量顯著高于空白組，說明在育雛前期添加白屈菜堿有助于提高雛肉雞抗氧化性能，從而增強(qiáng)雞在育雛前期抵抗氧化應(yīng)激的能力。

4 結(jié)論

在本試驗(yàn)條件下，白屈菜堿能在一定程度上通過提高育雛期固始雞飼料轉(zhuǎn)化率及免疫器官生長(zhǎng)發(fā)育，調(diào)節(jié)血液相關(guān)細(xì)胞因子的分泌，改善育雛期固始雞的免疫性能及提高育雛期固始雞生長(zhǎng)性能。在抗氧化性能方面，在育雛前期在日糧中添加白屈菜堿有助于增強(qiáng)固始雞的抗氧能力，從而增強(qiáng)機(jī)體抗氧化應(yīng)激機(jī)能。綜上所述，白屈菜堿對(duì)育雛期固始雞的生長(zhǎng)、免疫及血清抗氧化性能均有積極的促進(jìn)作用，相關(guān)作用機(jī)制等仍需進(jìn)一步試驗(yàn)來深入研究。