■林 昊 賀海蓮 王靜鴿 張振明 陳凌云 丁保安

（青海大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院，青海西寧810016）

在對禽類的遺傳研究中，禽類通過母體提供給子代的有益部分比哺乳動物高，主要從母體傳入蛋中供給子代營養(yǎng)物質(zhì)（Ban 等，2004）。雞蛋品質(zhì)主要受飼糧營養(yǎng)組成、遺傳、品種、飼養(yǎng)管理、母雞生理狀況等因素影響，并且禽類親代日糧營養(yǎng)影響子代腸道的生長發(fā)育（俸艷萍，2007）。因為胚胎發(fā)育必需的營養(yǎng)成分主要來自母體，母體的營養(yǎng)狀況將決定種蛋內(nèi)營養(yǎng)素的含量，而種蛋營養(yǎng)成分的平衡將會直接影響胚胎能否正常發(fā)育，以及影響到胚胎的存活或子代早期的正常生長發(fā)育，合理的母體營養(yǎng)能保證胚胎期的正常發(fā)育和雛雞的生長（趙素梅等，2007）。

精氨酸是肉雞日糧中第五大限制性氨基酸，由于家禽的體內(nèi)缺乏合成精氨酸的尿素循環(huán)，不能直接合成精氨酸（Murakami 等，2014），并且精氨酸是家禽生長發(fā)育所必需的營養(yǎng)物質(zhì)，精氨酸有著合成蛋白質(zhì)、促進(jìn)生長、羽毛形成等生物功能（Wertman，2012）。

海東雞處于青藏高原地區(qū)，產(chǎn)于青海省海東地區(qū)而得名。海東雞有著耐粗飼、適應(yīng)性強(qiáng)、覓食能力強(qiáng)等特點，適合在高寒生態(tài)環(huán)境養(yǎng)殖。但是針對海東雞母代與子代胚胎期營養(yǎng)代謝和腸道功能研究仍處于空白。鑒于此，本試驗以海東雞為研究對象，為高海拔地區(qū)母代營養(yǎng)對子代生態(tài)適應(yīng)的生物學(xué)機(jī)制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗用精氨酸從河北裕隆祥生物科技有限公司購置（純度≥99%）。

1.2 試驗動物及日糧

試驗動物為165 只體重相近的40 周齡海東雞（來自青海省互助縣松多養(yǎng)雞場），基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 試驗設(shè)計與飼養(yǎng)管理

試驗采用單因素試驗設(shè)計，將165 只種雞（公母比例1∶10）分為5 個組（每組3 個重復(fù)），分別用0.10%、0.30%、0.50%、0.70%和0.90%精氨酸替代麩皮，互為對照組。試驗時間為預(yù)試期14 d，正試期44 d，自由采食和飲水，每日光照為16 h，統(tǒng)計產(chǎn)蛋數(shù)和產(chǎn)蛋重。到第44 d結(jié)料，稱出剩余料。

1.4 樣品采集

1.4.1 血樣的采集

在種雞飼養(yǎng)試驗結(jié)束后，選取由同一批次種蛋孵化7 日齡雛雞作為試驗組，每個重復(fù)隨機(jī)抽取1 只7 日齡雛雞進(jìn)行心臟采血。采集血液約5 mL 在抗凝血管中，進(jìn)行血常規(guī)的測定；采集7～9 mL 的血液于促凝血管中，室溫放置，防止搖晃，然后用高速離心機(jī)3 500 r/min 離心10 min，分離血清于2 mL Eppendorf管中，保存于-80 ℃冰箱待測。血清總膽固醇（TC）、葡萄糖（GLU）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、三酰甘油（TG）、生長激素（GH）、胰島素（INS）含量和胰高血糖素（GC）的含量采用瑞士帝肯IF50型半自動生化分析儀測定，試劑盒購買于江蘇酶標(biāo)生物科技有限公司。

表1 基礎(chǔ)日糧組成與營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4.2 腸道樣品采集

按每個重復(fù)組隨機(jī)選取1 只7 日齡雛雞，采集十二指腸、空腸、回腸腸段。

1.5 數(shù)據(jù)處理

用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計及線性分析，采用單因子方差分析，用Duncan's 法進(jìn)行多重比較，以P＜0.05作為顯著性差異判斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

精氨酸添加水平的線性和二次線性效應(yīng)采用正交多項式進(jìn)行分析，以P＜0.05 作為顯著性差異判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同精氨酸水平母雞日糧對海東母雞生產(chǎn)性能和7 日齡雛雞體重的影響（見表2）

表2 不同精氨酸水平母雞日糧對海東雞母雞生產(chǎn)性能和7日齡雛雞體重的影響

由表2 可知，母雞日糧精氨酸水平對母雞產(chǎn)蛋率、料蛋比和7 日齡雛雞體重有顯著影響（P＜0.05）。產(chǎn)蛋率0.30%組顯著高于與0.50%組（P＜0.05），其他各組間沒有顯著差異（P＞0.05）；料蛋比0.70%組顯著高于0.10%組和0.30%組，0.50%組和0.90組顯著高于0.30%組（P＜0.05），其他各組間差異不顯著（P＞0.05）；7 日齡雛雞體重0.10%組顯著高于0.70%組和0.90%組，0.30%組和0.50%組顯著高于0.90%組（P＜0.05），而其他各組間沒有顯著差異（P＞0.05）。海東雞產(chǎn)蛋率隨精氨酸添加水平升高呈線性降低（P＞0.05），雛雞體重隨精氨酸添加水平升高呈線性降低（P＜0.05）。

2.2 不同精氨酸水平母雞日糧對7 日齡雛雞腸道的影響（見表3～表4）

由表3可知，雖然母雞日糧中添加不同梯度的精氨酸對7 日齡雛雞十二指腸重量、空腸重量和長度、回腸重量和長度無顯著影響（P＞0.05），但十二指腸的長度有顯著的變化，0.50%組和0.70%組顯著高于0.90%組（P＜0.05）。

表3 不同精氨酸水平母雞日糧對7日齡雛雞腸道重量及長度的影響

表4 不同精氨酸水平母雞日糧對7日齡雛雞腸道絨毛長度和隱窩深度的影響（μm）

由表4 可知，母雞日糧添加0.50%精氨酸對子代十二指腸絨毛長度、十二指腸隱窩深度、空腸絨毛長度、回腸隱窩深度和回腸絨毛長度有明顯影響（P＜0.05）。0.50%組十二指腸絨毛長度顯著高于0.10%、0.30%組和0.90%組（P＜0.05），0.50%組和0.70%組無顯著差異（P＞0.05）；0.50%、0.70%組和0.90%組十二指腸隱窩深度顯著高于0.10%組和0.30%組（P＜0.05），其余各組間差異不顯著（P＞0.05）；0.30%、0.50%組和0.70%組在空腸絨毛長度上明顯高于0.10%組和0.90%組，0.90%組顯著高于0.10%組（P＜0.05），其余各組間差異不顯著（P＞0.05）；在空腸隱窩深度上，0.70%組顯著高于0.10%、0.30%組和0.90%組，0.10%組和0.50%組顯著高于0.30%組和0.90%組（P＜0.05），其余各組間差異不顯著（P＞0.05）；0.30%、0.50%組在回腸絨毛長度上顯著高于0.10%組和0.70%組（P＜0.05），其余各組間差異不顯著（P＞0.05）；0.50%組和0.90%組在回腸隱窩深度上顯著高于0.10%、0.30%組和0.70%組，0.10%組和0.70%組顯著高于0.30%組（P＜0.05），其余各組間差異不顯著（P＞0.05）。回腸的絨毛長度和隱窩深度隨精氨酸添加水平升高呈線性升高；十二指腸絨毛長度表現(xiàn)出顯著的二次劑量依賴關(guān)系（P=0.007），回歸方程分為y=-134.319x2+150.464x+666.764(R2=0.066)，經(jīng)計算得出，添加量為0.56%時，十二指腸絨毛長度達(dá)到最大值。十二指腸隱窩深度表現(xiàn)出顯著顯著的一次線性（P=0.026）或顯著的二次劑量依賴關(guān)系（P＜0.001），回歸方程分別為y=49.764x+89.978(R2=0.111)；y=-29.364x2+49.764x+89.978（R2=0.124）經(jīng)計算得出，添加量為0.84%時，十二指腸隱窩深度達(dá)到最大值。空腸絨毛長度表現(xiàn)出顯著的二次劑量依賴關(guān)系（P=0.012），回歸方程為y=-270.592x2+316.423x+582.413（R2=0.264）計算得出，添加量為0.58%時，空腸絨毛長度達(dá)到最大值。

2.3 不同精氨酸水平母雞日糧對7 日齡雛雞血清生化指標(biāo)的影響（見表5）

由表5 可知，母雞日糧添加0.30%精氨酸對雛雞TG、TC、HDL、GLU 和INS 有 顯著影響（P＜0.05）。0.70%組的TG 含量顯著高于其余各組（P＜0.05），0.50%組TG 含量顯著高于0.30%組和0.90%組（P＜0.05），0.90%組TG 含量顯著高于0.30%組（P＜0.05），其余各組間差異不顯著（P＞0.05）；TC 含量每個組之間都有顯著差異，其中0.70%組TC 含量最高，0.10%組含量最少（P＜0.05）；LDL 含量0.30%組顯著高于0.50%組和0.70%組（P＜0.05），其他各組間差異不顯著（P＞0.05）；HDL 含量0.30%組顯著高于0.10%、0.50%組和0.70%組（P＜0.05），0.90%組HDL含量顯著大于0.10%組和0.70%組（P＜0.05），0.50%組HDL含量顯著大于0.10%和0.70%組（P＜0.05），0.10%組HDL含量顯著大于0.70%組（P＜0.05），其余各組間差異不顯著（P＞0.05）；GLU 含量0.30%組顯著高于其他各組（P＜0.05），0.10%、0.50%組和0.70%組差異不顯著（P＞0.05），GH 含量0.30%組顯著高于0.50%和0.70%組（P＜0.05），其他各組間差異不顯著（P＞0.05）；INS含量0.10%組顯著高于0.30%組和0.70%組（P＜0.05），GC含量0.10%組顯著高于0.50%、0.70%組和0.90%組（P＜0.05），0.10%組和0.30%組無顯著性差異（P＞0.05），0.50%、0.70%組和0.90%組無顯著性差異（P＞0.05）；各組TC含量表現(xiàn)出顯著的一次線性（P=0.028）或顯著的二次劑量依賴關(guān)系（P=0.015），回歸方程分別為y=156.275x+701.559（R2=0.321）；y=-501.028x2+657.303x+616.384（R2=0.506）經(jīng)計算得出，添加量為0.655 9%時，TC 含量達(dá)到最大值。各組GLU 表現(xiàn)出顯著的一次線性（P=0.006）或顯著的二次劑量依賴關(guān)系（P＜0.001），回歸方程分別為y=-1.105x+5.396（R2=0.455）；y=-3.597x2+2.491x+4.785（R2=0.724），經(jīng)計算得出，添加量為0.346 2%時，葡萄糖含量達(dá)到最大。各組GC 含量表現(xiàn)出顯著的一次線性（P＜0.001）或顯著的二次劑量依賴關(guān)系（P＜0.001），回歸方程分別為y=-1.3x+5.434（R2=0.752）；y=0.05x2-0.486x+12.26（R2=0.755）經(jīng)計算得出，添加量為4.86%時，TG 含量達(dá)到最大。

表5 不同精氨酸水平母雞日糧對7日齡雛雞血清生化指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 母雞日糧中添加不同梯度精氨酸對母雞生產(chǎn)性能和子代雛雞體重影響

精氨酸對動物的生產(chǎn)性能的影響主要體現(xiàn)在對采食的影響，袁超（2016）在精氨酸對蛋雞采食研究中發(fā)現(xiàn)，飼料中添加一定水平的精氨酸可提高蛋雞的料蛋比，合適的精氨酸水平有著高采食量、產(chǎn)蛋率和低的料蛋比，本試驗與袁超（2016）研究結(jié)果基本一致，母雞日糧添加0.30%精氨酸對提高母雞生產(chǎn)性能效果顯著，并有較高的產(chǎn)蛋率。雛雞剛出殼時，對碳水化合物以及氨基酸的利用功能尚不發(fā)達(dá)，母體營養(yǎng)與胚胎發(fā)育環(huán)境對雞出生后的攝食、生長、能量平衡等均具有影響（Youssef 等，2016），合理的精氨酸水平能對種雞生產(chǎn)性能、繁殖性能、免疫反應(yīng)和基因表達(dá)有明顯的影響（Lazier 等，1994），并且能增強(qiáng)抗氧化性能，對雛雞的生長發(fā)育起到重要的作用（李國俊，2019），本試驗中添加0.10%精氨酸能顯著增加子代雛雞的體重。動物機(jī)體精氨酸主要有3個來源：一是來源于飼料，其中飼料中大約有40%的精氨酸在小腸內(nèi)直接分解消化，這也是精氨酸的主要來源；二是來源于與機(jī)體的蛋白質(zhì)周轉(zhuǎn)代謝；三是來源于機(jī)體內(nèi)的尿素循環(huán)（袁超，2016），由于家禽的體內(nèi)缺乏合成精氨酸的尿素循環(huán)，不能合成精氨酸，需要在日糧中添加精氨酸（Murakami等，2014）。

3.2 母雞日糧中添加不同梯度精氨酸對子代雛雞腸道發(fā)育的影響

母雞日糧的不同水平精氨酸能引起3日齡到14日齡雛雞腸道基因表達(dá)的變化（Duan 等，2015）。而雛雞腸道的早期發(fā)育和脂類物質(zhì)的消化吸收與種雞日糧營養(yǎng)成分有關(guān)，造成雛雞從出殼后早期腸道基因表達(dá)不同與雛雞腸道的早期發(fā)育和脂類物質(zhì)的消化吸收有關(guān)（Rebel 等，2006）。母體日糧影響雛雞腸道的基因表達(dá)，從而影響雛雞的新陳代謝、營養(yǎng)物質(zhì)的消化與吸收、腸道形態(tài)發(fā)育和腸道免疫系統(tǒng)的形成（Ogura 等，2005）。禽類在孵化后不久腸道就會發(fā)生劇烈的變化，腸道器官的重量增加的更快，孵化后的雛雞腸道生長具有較高的優(yōu)先權(quán)，而每個腸道的重量和長度發(fā)育的時間是不一樣的，其中十二指腸發(fā)育比空腸、回腸和盲腸較早，與Uni 等（1999）研究結(jié)果一致，本試驗在種雞日糧中添加0.70%精氨酸的7 日齡雛雞的十二指腸長度發(fā)育較好。

3.3 母雞日糧中添加不同梯度精氨酸對子代雛雞腸道絨毛長度和隱窩深度的影響

良好的腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)是動物養(yǎng)分吸收和正常發(fā)育所需的必要條件，腸道的隱窩深度和絨毛長度是衡量腸道吸收生理功能的重要指標(biāo)，腸道絨毛是吸收營養(yǎng)物質(zhì)的主要部位，隱窩深度反映絨毛完整結(jié)構(gòu)，隱窩深度越深，絨毛的吸收功能越完善，反之，隱窩深度越淺，絨毛的吸收功能欠缺（張玉仙等，2014）。本試驗結(jié)果表明，在母雞日糧添加0.50%的精氨酸能顯著改善絨毛長度和隱窩深度，這與俸祥仁等（2019）研究一致。研究表明，精氨酸能夠改善使十二指腸、空腸、回腸腸道的絨毛長度和隱窩深度，從而提高雛雞腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收功能。

3.4 母雞日糧中添加不同梯度精氨酸對子代雛雞血清生化指標(biāo)的影響

血液中TG、TC、HDL含量和LDL含量主要是反映機(jī)體脂質(zhì)代謝水平的指標(biāo)，血液中TC 的主要合成轉(zhuǎn)運(yùn)體是HDL 和LDL，對TG 在機(jī)體平衡起到重要的作用。本試驗中添加0.30%的精氨酸血清TG 含量最低，并且LDL 和HDL 含量高于其他試驗組，精氨酸能夠降低血液中TG 的含量，促進(jìn)脂肪代謝，加快TG 的分解與利用，為雛雞早期發(fā)育提供更多能量，這與高天（2017）的研究基本一致。禽類GLU 的主要作用是起到氧化功能，也是氨基酸和維生素C等營養(yǎng)物質(zhì)合成的前提（Braue等，2008）。Ding等（2016）研究表明，GH 能促進(jìn)脂肪的分解和促進(jìn)氨基酸合成蛋白質(zhì)，并且精氨酸具有調(diào)節(jié)脂肪的作用。與上述試驗結(jié)果一致，本試驗中添加0.30%精氨酸7 日齡雛雞血清生化指標(biāo)有著最高的葡萄糖和生長激素含量。

4 結(jié)論

母雞日糧中不同水平精氨酸影響不同，其中添加0.10%精氨酸（即日糧精氨酸水平為0.96%）能增強(qiáng)子代雛雞體重；從生產(chǎn)性能、腸道指標(biāo)以及血清生化指標(biāo)來看，母雞日糧中添加0.30%和0.50%精氨酸（即日糧精氨酸水平為1.16%和1.36%）對海東雞子代雛雞腸道形態(tài)和血清生化指標(biāo)影響改善最佳。