楊晨晨，徐茜，付娟娟

（1無(wú)錫太湖學(xué)院健康與護(hù)理學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)教研室，無(wú)錫 214064；2新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室，烏魯木齊 830011；3無(wú)錫市第五人民醫(yī)院病理科，無(wú)錫 214000）

食管癌是我國(guó)高發(fā)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率分別居第5位和第4位[1，2]。食管癌病程進(jìn)展很快，較早發(fā)生鄰近組織和遠(yuǎn)端組織的轉(zhuǎn)移以及對(duì)周?chē)M織的侵襲，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移普遍存在，甚至在黏膜下層剛受到侵襲時(shí)就已經(jīng)發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，這也是食管鱗癌總體預(yù)后差的主要原因[3，4]。闡明食管癌發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移的分子調(diào)節(jié)機(jī)制、確定新的早期篩選分子靶點(diǎn)和研發(fā)新的治療藥物具有重要意義。miRNA是內(nèi)源表達(dá)的小型非編碼RNA通過(guò)引起細(xì)胞的降解而負(fù)向調(diào)節(jié)基因表達(dá)目標(biāo)mRNA，抑制這些mRNA的翻譯[5]。miRNA參與重要的細(xì)胞過(guò)程，例如應(yīng)激反應(yīng)，發(fā)育，分化，凋亡和擴(kuò)散[6]。已報(bào)道許多惡性腫瘤中miRNA表達(dá)發(fā)生改變，如乳腺癌[7]、肺癌[8]、肝癌[9]、胃癌[10]、結(jié)腸癌[11]等。越來(lái)越多的研究表明miRNA可以充當(dāng)癌基因或抑癌基因，并且它們通常在腫瘤中失調(diào)。在這方面，致癌的miRNA經(jīng)常上調(diào)，而腫瘤抑制miRNA在腫瘤中下調(diào)。miR-26a在腫瘤方面已有很多研究，但其在腫瘤發(fā)生中的角色仍有爭(zhēng)議，具體體現(xiàn)為miR-26a在肝癌[12]和乳腺癌[13]等腫瘤中表達(dá)水平下調(diào)，其與靶基因結(jié)合可抑制腫瘤生長(zhǎng)。但是在非小細(xì)胞肺癌中[14]，miR-26a呈現(xiàn)過(guò)表達(dá)趨勢(shì)。miR-26a表達(dá)和生物學(xué)功能的不同可能與癌細(xì)胞遺傳背景有關(guān)。我們的前期研究表明[15]，人食管癌組織中miR-26a表達(dá)下調(diào)，從而發(fā)揮抑癌作用。為了進(jìn)一步證實(shí)miR-26a對(duì)在體內(nèi)對(duì)食管癌的作用，本研究通過(guò)建立人食管癌過(guò)表達(dá)和干擾荷瘤裸鼠模型，進(jìn)一步探討miR-26a對(duì)食管癌細(xì)胞體內(nèi)生長(zhǎng)的影響。

材料與方法

1 主要試劑和儀器

TRIzol提取試劑（Invitrogen公司），慢病毒包裝（上海吉?jiǎng)P基因化學(xué)技術(shù)有限公司），miR-26a上下游引物由吉瑪基因股份有限公司合成。原位雜交專(zhuān)用磷酸鹽緩沖液（PBS）粉（武漢博士德生物工程有限公司），0.25%胰蛋白（Gibico BRL，美國(guó)），2×SCC（武漢博士德生物工程有限公司）磷酸緩沖鹽溶液（PBS）（HyClone，美國(guó)），原位雜交試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司）miR-26a探 針[miRCURY LNA Detection Probe，5’-DIG and 3’DIG（hsa-miR-26a-5p）]（Exiqon公司，丹麥），反轉(zhuǎn)錄試劑盒（Thermo公司），實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒（Roch公司），RPMI-1640培養(yǎng)基（Gibico BRL），胎牛血清（Hyclone公司），MTDH一抗、細(xì)胞周期蛋白D1（cyclin D1）、c-myc和β-catenin一抗購(gòu)自Abcam公司，倒置顯微鏡（日本Olympus公司），熒光定量PCR儀（Roch公司），檸檬酸、蘇木素染色液、中性樹(shù)脂凝膠購(gòu)自碧云天生物技術(shù)有限公司，其他試劑如無(wú)水乙醇、95%乙醇等均為國(guó)產(chǎn)分析純。

2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

5～8周齡的BALB/c-nu鼠，SPF級(jí)，雌性，體質(zhì)量15～20 g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：11400700086622。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)都經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)研究院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

3 組織標(biāo)本

收集2003—2010年間手術(shù)切除并經(jīng)病理檢查證實(shí)食管鱗癌組織和正常的癌旁組織45對(duì)，食管癌組織及癌旁正常組織切片標(biāo)本均來(lái)自新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院胸外科。所有患者術(shù)前均未接受過(guò)任何系統(tǒng)的放化療等治療，并通過(guò)新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)倫理審查，所有研究標(biāo)本均獲得患者家屬的知情同意。

4 細(xì)胞株與細(xì)胞培養(yǎng)

人食管癌細(xì)胞系Eca109（于1973年從人食管中段鱗癌組織通過(guò)小組織塊原代培養(yǎng)建系而來(lái)的，細(xì)胞形態(tài)呈上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)，用于過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)）、KYSE-450細(xì)胞系（細(xì)胞形態(tài)呈上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)，用于干擾實(shí)驗(yàn)）。所有細(xì)胞培養(yǎng)于含10%（v/v）胎牛血清（FBS）和5 mg/mL青霉素-鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)液中。培養(yǎng)條件為37℃的5%CO2溫箱孵育。

5 RT-PCR檢測(cè)

各細(xì)胞株中miR-26a的表達(dá)采用液氮研磨和TRIzol試劑抽提腫瘤組織中的總RNA，采用TRIzol試劑抽提細(xì)胞中的總RNA，合成cDNA，并進(jìn)行PCR擴(kuò)增。各基因序列引物見(jiàn)表1。

表1 RT-PCR引物序列Tab.1 Sequences of primers for RT-PCR

6 慢病毒轉(zhuǎn)染分組

本研究用干擾和過(guò)表達(dá)miR-26a慢病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞。干擾miR-26a慢病毒轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的分組：miR-26a干擾（miR-26a-INFR）組，以攜帶miR-26a干擾序列的慢病毒感染KYSE-450細(xì)胞；空載體干擾（INFR-Vec）組，干擾空載體慢病毒感染KYSE-450細(xì)胞；干擾空白對(duì)照（INFR-Blk）組，正常培養(yǎng)的KYSE-450細(xì)胞。過(guò)表達(dá)miR-26a慢病毒轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的分組：miR-26a過(guò)表達(dá)（miR-26a-OE）組，攜帶miR-26a過(guò)表達(dá)基因的慢病毒感染Eca109細(xì)胞；空載體過(guò)表達(dá)（OE-Vec）組，過(guò)表達(dá)空載體慢病毒感染Eca109細(xì)胞；過(guò)表達(dá)空白對(duì)照（OE-Blk）組，正常培養(yǎng)的Eca109細(xì)胞。

7 Annexin V-PI法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡

細(xì)胞處理后培養(yǎng)72 h，收集細(xì)胞，用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，1000 r/min離心5 min，洗滌細(xì)胞。然后加入100 μL的1×binding buffer 懸浮細(xì)胞。加入5 μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15 min。上機(jī)前5 min再加入5 μL的PI染色，上機(jī)前補(bǔ)加200 μL的1×binding buffer，流式細(xì)胞儀（貝克曼庫(kù)爾特，型號(hào)：DXflex，美國(guó)）檢測(cè)細(xì)胞凋亡。

8 裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)前裸鼠需適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，分干擾實(shí)驗(yàn)組和過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)組。干擾miR-26a實(shí)驗(yàn)組包括miR-26a-INFR組（皮下注射感染攜帶miR-26a 干擾序列慢病毒的KYSE-450細(xì)胞）、INFR-Vec組（皮下注射感染干擾空載體慢病毒的KYSE-450細(xì)胞）、INFR-Blk組（皮下注射正常培養(yǎng)的KYSE-450細(xì)胞）；過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)組包括miR-26a-OE組（皮下注射感染miR-26a過(guò)表達(dá)病毒的Eca109細(xì)胞）、OE-VecE組（皮下注射感染過(guò)表達(dá)載體病毒的Eca109細(xì)胞）、OE-Blk組（皮下注射正常培養(yǎng)的Eca109細(xì)胞）。用0.1%臺(tái)盼藍(lán)生理鹽水進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的各組細(xì)胞制成細(xì)胞密度為1×107個(gè)/mL的細(xì)胞懸液，在無(wú)菌條件下，每只裸鼠背部皮下接種細(xì)胞0.2 mL（細(xì)胞數(shù)為2×106個(gè)）。瘤塊長(zhǎng)出后，用游標(biāo)卡尺測(cè)量裸鼠瘤塊長(zhǎng)徑（A）及垂直橫徑（B），按公式V=A×B2/2計(jì)算裸鼠腫瘤體積，接種后28 d，麻醉后照相，用脫頸法處死裸鼠。切取腫瘤組織和肝、肺組織，10%中性甲醛固定，梯度乙醇溶液脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，常規(guī)4 μm連續(xù)切片。

9 原位雜交實(shí)驗(yàn)

將組織芯片常規(guī)脫蠟，用自來(lái)水將水化后的載玻片清洗2遍，蒸餾水清洗3遍，每遍5 min。用3%H2O2室溫處理10 min，蒸餾水洗滌2次。將組織切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶（1 mL 3%檸檬酸+2滴濃縮型胃蛋白酶），37℃消化15 min。PBS（原位雜交專(zhuān)用）洗3次，每次5 min。每張切片加30 μL預(yù)雜交液。用雜交稀釋液microRNA buffer稀釋雙地高辛標(biāo)記的miR-26a探針，濃度為80 μmol/L，每張切片加30 μL，雜交過(guò)夜。2×SSC、0.5×SSC、0.2×SSC雜交液進(jìn)行雜交后洗滌。滴加封閉液，37℃孵育20 min。甩去多余液體，不洗。先將載玻片上標(biāo)本周?chē)姆忾]液擦凈，每張載玻片加80 μL生物素化鼠抗地高辛，室溫孵育120 min。用原位雜交專(zhuān)用PBS洗滌4次，每次5 min。滴加SABC，37℃孵育20 min。用原位雜交專(zhuān)用PBS洗滌3次，每次5 min。DAB顯色，蘇木素復(fù)染10 min，酒精脫水，二甲苯透明，用中性樹(shù)膠封片，顯微鏡下觀(guān)察結(jié)果。每張切片分別隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡視野進(jìn)行觀(guān)察。陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)分如下：0分（無(wú)陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞），1分（＜10%陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞），2分（10～50%陽(yáng)性瘤細(xì)胞）和3分（＞50%陽(yáng)性瘤細(xì)胞）。染色強(qiáng)度根據(jù)以下標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)：0分（無(wú)染色），1分（弱染色=淡黃色），2分（中度染色=黃棕色）和3分（強(qiáng)染色=棕色）。染色指數(shù)（SI）計(jì)算為染色強(qiáng)度得分×陽(yáng)性細(xì)胞比例。SI分?jǐn)?shù)為0、1、2、4、6和9，其中4～9的SI評(píng)分用于定義miR-26a的高表達(dá)，0～2分用來(lái)表示miR-26a的未表達(dá)或低表達(dá)。

10 免疫組織化學(xué)染色

采用免疫組織化學(xué)（IHC）法檢測(cè)各組裸鼠腫瘤組織中Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白（c-myc、cyclin D1和β-catenin）表達(dá)水平。以4 μm厚度切片制作每只裸鼠瘤塊的石蠟切片，采用免疫組織化學(xué)S-P法檢測(cè)各組裸鼠瘤塊組織中c-myc、cyclin D1和β-catenin表達(dá)，抗c-myc、cyclin D1和β-catenin一抗?jié)舛确謩e為1:100、1:200、1:200。DAB顯色后，中性樹(shù)膠封片，光鏡下每片隨機(jī)選取不同的5個(gè)視野，采集圖像，根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度評(píng)分為5級(jí)，無(wú)陽(yáng)性著色（陰性）計(jì)0分，高倍鏡下隱約可見(jiàn)淡黃色（可疑弱陽(yáng)性）計(jì)1分，低倍鏡下隱約可見(jiàn)高倍鏡下明確可見(jiàn)淡黃色（弱陽(yáng)性）計(jì)2分，低倍鏡下可見(jiàn)棕黃色(陽(yáng)性）計(jì)3分，低倍鏡下可見(jiàn)棕褐色（強(qiáng)陽(yáng)性）計(jì)4分；根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)為4級(jí)，≤25%計(jì)1分，26%～50%計(jì)2分，51%～75%計(jì)3分，＞75%計(jì)4分，將兩項(xiàng)評(píng)分相乘得出最終評(píng)分結(jié)果。

11 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件（IBM Corp.， Armonk， NY）對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。所有值均表示為（平均值±標(biāo)準(zhǔn)差）表示，各組均數(shù)通過(guò)方差齊性檢驗(yàn)，3組間比較采用單因素方差分析，方差齊時(shí)組內(nèi)兩兩比較采用LSD法，方差不齊時(shí)采用Dunnett法，使用GraphPad 5.0（GraphPad Software，Inc.，La Jolla，CA，USA）軟件進(jìn)行繪圖。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 食管癌組織中miR-26a低表達(dá)

通過(guò)RT-PCR檢測(cè)45對(duì)食管癌和正常組織中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)相對(duì)于食管癌旁組織，miR-26a在食管癌組織中的表達(dá)顯著降低（圖1）。

圖1 miR-26a在食管癌組織中表達(dá)水平的RT-PCR檢測(cè)與統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。Cancer，癌組織；Paracancer， 癌旁組織；*P＜0.05Fig. 1 RT-PCR detection and statistical analysis of expression of miR-26a in esophageal cancer. Cancer， cancerous tissue; Paracancer， paracancerous tissue; *P＜0.05

2 miR-26a對(duì)ESCC細(xì)胞凋亡不產(chǎn)生影響

Annexin V-PI法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示：轉(zhuǎn)染miR-26a干擾慢病毒和轉(zhuǎn)染miR-26a過(guò)表達(dá)慢病毒72 h后，各組細(xì)胞凋亡率無(wú)明顯差異（圖2），即改變miR-26a表達(dá)水平對(duì)ESCC細(xì)胞凋亡無(wú)明顯影響。

圖2 改變miR-26a表達(dá)對(duì)ESCC細(xì)胞凋亡影響的流式細(xì)胞術(shù)分析Fig. 2 Flow cytometry assay for the effect of changing miR-26a expression on cell apoptosis of ESCC cells

3 miR-26a抑制裸鼠成瘤

生理鹽水組未成瘤，過(guò)表達(dá)miR-26a細(xì)胞和干擾miR-26a細(xì)胞皮下注射裸鼠后，1.5～2周后均形成大小不等的皮下瘤（圖3）。轉(zhuǎn)染miR-26a干擾和過(guò)表達(dá)慢病毒后的細(xì)胞裸鼠皮下注射后，miR-26a-OE組的瘤體體積明顯小于相應(yīng)對(duì)照組（14 d：P=0.042；21 d：P=0.039）。miR-26a-INFR組的瘤體體積明顯高于相應(yīng)對(duì)照組（14 d：P=0.042；21 d：P=0.039）。經(jīng)測(cè)量各組裸鼠體質(zhì)量發(fā)現(xiàn)，在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)miR-26a過(guò)表達(dá)慢病毒轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的裸鼠的平均體質(zhì)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。在miR-26a干擾慢病毒轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的各組裸鼠中，miR-26a-OE組裸鼠體質(zhì)量較其他3組有下降趨勢(shì)，但差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

圖3 改變miR-26a表達(dá)水平對(duì)裸鼠成瘤的影響Fig. 3 Effect of changing miR-26a expression on tumorigenesis in nude mice

原位雜交檢測(cè)顯示， miR-26a-INFR組的miR-26a表達(dá)水平較INFR-Vec組和INFR-Blk組明顯降低，腫瘤組織胞質(zhì)及胞核可見(jiàn)棕黃色顆粒沉著；miR-26a-OE組的miR-26a較OE-Vec組和OE-Blk組明顯增高（圖4，表2）。

圖4 裸鼠瘤體miR-26a表達(dá)的原位雜交檢測(cè)。比例尺，50 μmFig. 4 In situ hybridization examination of miR-26a expression in nude mouse tumor. Scale bar， 50 μm

表2 裸鼠瘤體miR-26a表達(dá)水平比較Tab. 2 Comparison of miR-26a expression levels in nude mouse tumor tissue

4 miR-26a下調(diào)Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白c-myc、cyclin D1和β-catenin水平

免疫組織化學(xué)S-P法檢測(cè)各組裸鼠瘤組織中cmyc、cyclin D1和β-catenin水 平 顯 示，miR-26a-INFR組c-myc、cyclin D1和β-catenin水平顯著高于INFR-Vec組和INFR-Blk組，miR-26a-OE組cmyc、cyclin D1和β-catenin水平顯著低于OE-Vec組和OE-Blk組（圖5，表3），由此提示miR-26a可下調(diào)Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白c-myc、cyclin D1和β-catenin水平。

圖5 miR-26a對(duì)裸鼠瘤組織中Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白c-myc、cyclin D1和β-catenin水平影響的免疫組織化學(xué)檢測(cè)。比例尺，50 μmFig. 5 Immunohistochemical examination for the effect of miR-26a on levels of Wnt/β-catenin signaling pathway-associated proteins， c-myc， cyclin D1 and β-catenin， in nude mouse tumor tissues. Scale bar， 50 μm

表3 裸鼠瘤組織中c-myc、cyclin D1和β-catenin水平比較Tab. 3 Comparison of levels of c-myc， cyclin D1and β-catenin in nude mouse tumor tissues

討 論

miR-26a在腫瘤方面已有很多研究，但其在腫瘤發(fā)生中的角色仍有爭(zhēng)議，例如：miR-26a在各前列腺癌組織中的表達(dá)明顯升高，其在前列腺癌組織中的腫瘤促進(jìn)作用[16]。Coronel-Hernández等[17]報(bào)道，在結(jié)腸癌中，miR-26a對(duì)PTEN的負(fù)調(diào)控直接影響AKT磷酸化水平。miR-26a直接下調(diào)PTEN，而mir-26a過(guò)度表達(dá)的細(xì)胞具有更高的增殖和遷移率。這些研究提示miR-26a能促進(jìn)結(jié)腸癌的發(fā)展。Liu等[18]在非小細(xì)胞肺癌中的研究顯示，miR-26a在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移腫瘤組織中的表達(dá)水平高于原發(fā)性腫瘤組織。miR-26a的異位表達(dá)顯著增強(qiáng)了肺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力，表明miR-26a可能是轉(zhuǎn)移性肺癌患者的潛在治療候選物。以上表明miR-26a在前列腺癌、結(jié)腸癌、非小細(xì)胞肺癌中呈現(xiàn)過(guò)表達(dá)的趨勢(shì)。另有研究顯示，miR-26a在肝癌[19]和乳腺癌[20]等腫瘤中表達(dá)水平下調(diào)，其與靶基因結(jié)合可抑制腫瘤生長(zhǎng)。miR-26a的表達(dá)失調(diào)參與了多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移，miR-26a在不同的腫瘤和不同的組織學(xué)類(lèi)型中發(fā)揮著不同的作用，凸顯其功能的復(fù)雜程度。

為了進(jìn)一步證實(shí)研究miR-26a對(duì)食管癌發(fā)生發(fā)展中的作用，本研究通過(guò)模擬食管癌在體內(nèi)的生長(zhǎng)情況，采用裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)，用過(guò)表達(dá)或者干擾miR-26a的食管癌細(xì)胞，皮下注射裸鼠。28 d內(nèi)，除生理鹽水組外，其它各組裸鼠均成瘤。miR-26a過(guò)表達(dá)組裸鼠瘤體體積明顯較過(guò)表達(dá)空載體對(duì)照組和過(guò)表達(dá)空白對(duì)照組小，miR-26a干擾組裸鼠瘤體體積明顯較干擾空載體對(duì)照組和干擾空白對(duì)照組大，提示miR-26a在食管癌裸鼠體內(nèi)有抑制食管癌生長(zhǎng)的作用。原位雜交檢測(cè)各組裸鼠瘤體中miR-26a的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，miR-26a過(guò)表達(dá)組miR-26a表達(dá)量高于過(guò)表達(dá)空載體組和過(guò)表達(dá)空白對(duì)照組，miR-26a干擾組miR-26a表達(dá)量明顯較干擾空載體對(duì)照組組和干擾空白對(duì)照組低，證明干擾或過(guò)表達(dá)的miR-26a裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭苽涑晒Α?/p>

Wnt/β-catenin信號(hào)通路作為一種在進(jìn)化中高度保守的信號(hào)通路，在細(xì)胞增殖、分化及黏附等多種細(xì)胞生物學(xué)行為中發(fā)揮重要作用，并且在成熟細(xì)胞的多種生理進(jìn)程中也起到至關(guān)重要的影響作用。Wnt/β-catenin信號(hào)通路的異常調(diào)節(jié)可導(dǎo)致多種疾病，Wnt/β-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在人類(lèi)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，以該通路分子作為抗腫瘤治療靶點(diǎn)已引起眾多腫瘤和藥物研究者的極大興趣。Huang等[21]研究顯示，miR-29a的過(guò)表達(dá)可以抑制Wnt/β-catenin途徑的活性，同時(shí)，Wnt/β-catenin途徑的激活劑LiCl可以逆轉(zhuǎn)miR-29a過(guò)表達(dá)誘導(dǎo)的抗腫瘤作用。Nie等[22]研究發(fā)現(xiàn)，miR-125b在人三陰性乳腺癌(TNBC)組織和細(xì)胞系中高表達(dá)，抑制miR-125b表達(dá)可抑制細(xì)胞內(nèi)Wnt/β-catenin途徑和EMT的活性，從而抑制MDA-MB-468 TNBC細(xì)胞的增殖和遷移。

目前研究已發(fā)現(xiàn)食管癌中Wnt/β-catenin信號(hào)通路異常激活，且在食管癌發(fā)生和進(jìn)展中發(fā)揮重要作用[23-25]。但miR-26a是否調(diào)節(jié)Wnt/β-catenin信號(hào)通路影響食管癌細(xì)胞生物學(xué)特性尚不清楚。我們前期的研究通過(guò)細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)證明了miR-26a抑制食管癌增殖、侵襲、遷移移。荷瘤實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)干擾miR-26a后，cyclin D1、c-myc和β-catenin水平升高，過(guò)表達(dá)miR-26a使cyclin D1、c-myc和β-catenin水平下調(diào)，表明miR-26a能夠抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路的激活。由此我們認(rèn)為，miR-26a可能通過(guò)抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路阻礙人食管癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移能力，miR-26a對(duì)食管癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響可能與抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路的激活有關(guān)。