程夢(mèng)娟，耿曉桐，龔海燕*，謝彩俠*，張 娟，陳志紅，杜 宇，雷敬衛(wèi)

1河南中醫(yī)藥大學(xué)；2河南省中藥質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)工程技術(shù)研究中心，鄭州 450046；3信陽農(nóng)林學(xué)院，信陽 464000

荊芥為唇形科一年生草本植物荊芥(SchizonepetatenuifoliaBriq.)的干燥地上部分，荊芥穗為唇形科植物荊芥(SchizonepetatenuifoliaBriq.)的干燥花穗[1]。荊芥及荊芥穗主產(chǎn)于江蘇、河北、江西、湖南、湖北等地[1,2]。荊芥與荊芥穗味辛，性微溫，歸肺、肝經(jīng)，為臨床常用的發(fā)汗解表藥。2015版《中國藥典》中以揮發(fā)油含量作為評(píng)價(jià)荊芥和荊芥穗兩種飲片質(zhì)量的一個(gè)指標(biāo)，規(guī)定荊芥飲片中揮發(fā)油含量不得低于0.003 0 mL/g，荊芥穗飲片中揮發(fā)油含量不得低于0.004 0 mL/g[1]。揮發(fā)油含量的高低直接影響著荊芥與荊芥穗飲片質(zhì)量?jī)?yōu)劣及其藥理藥效，但由于荊芥產(chǎn)地較多、種質(zhì)資源豐富，市場(chǎng)上荊芥、荊芥穗質(zhì)量差異較大[2,3]，影響臨床用藥的安全性與有效性。

荊芥與荊芥穗作為臨床常用解表藥，2015版《中國藥典》對(duì)其功能主治記載皆為：“解表散風(fēng)，透疹，消瘡。用于感冒、頭痛、麻疹、風(fēng)疹、瘡瘍初起?！苯?jīng)查閱現(xiàn)有資料得知荊芥穗芳香氣烈，質(zhì)輕，效用較荊芥強(qiáng)，生用荊芥穗取輕宣升散之性，以解表祛風(fēng)，多見于治療產(chǎn)后感冒、早產(chǎn)或難產(chǎn)的方劑中[4,5]。荊芥與荊芥穗的臨床使用藥理藥效差異與其揮發(fā)油總含量及種類密切相關(guān)，目前關(guān)于荊芥與荊芥穗的研究主要側(cè)重于種質(zhì)資源、揮發(fā)油含量及提取方法、藥理藥效等[2,3,6,7]，而關(guān)于荊芥與荊芥穗揮發(fā)油成分種類及含量差異還未見報(bào)道。本研究利用GC-MS法分析不同來源荊芥和荊芥穗飲片中揮發(fā)油含量與成分特征，為建立能客觀反映荊芥、荊芥穗藥材質(zhì)量的評(píng)價(jià)體系奠定基礎(chǔ)，為荊芥和荊芥穗的臨床使用提供科學(xué)的理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 荊芥及荊芥穗飲片

實(shí)驗(yàn)樣品購自國內(nèi)中藥飲片公司(見表1)，經(jīng)河南中醫(yī)藥大學(xué)陳隨清教授鑒定為唇形科植物荊芥(SchizonepetatenuifoliaBriq.)的干燥地上部分與干燥花蕾。將荊芥和荊芥穗分別粉碎，過一號(hào)篩[8-10](10目)，編號(hào)，裝袋，置干燥器內(nèi)待用。

表1 荊芥與荊芥穗樣品來源及批號(hào)

1.2 儀器

1號(hào)藥典篩(浙江上虞市五四儀器篩具廠)；YF-111B高速中藥粉碎機(jī)(瑞安市永歷制藥機(jī)械有限公司)；SZ-93型Milli-Q Reference純水機(jī)(上海亞榮生化儀器廠)；ME204E型萬分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；揮發(fā)油提取器(德陽市喬生玻璃制品有限公司)；101-3AB型電熱鼓風(fēng)干燥箱(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)；0410462型加熱套1(鞏義市英峪予儀器廠)；04061005型加熱套2(鞏義市英峪予儀器廠)；7000-7890A型Agilent氣-質(zhì)聯(lián)用儀(美國 Agilent公司)；0.22 μm微孔濾膜(天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。

1.3 試劑

正己烷(色譜純，默克股份兩合公司)；無水硫酸鈉(分析純，天津市凱通化學(xué)試劑有限公司)；蒸餾水(上海亞榮生化儀器廠)；人造沸石(天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 GC-MS條件

依據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[3,11]，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)色譜圖出峰結(jié)果對(duì)分流比、程序升溫等條件進(jìn)行調(diào)整，最終確定色譜條件。色譜柱：DB-5MS(30 m× 0.25 mm，0.10 μm)；進(jìn)樣口溫度：200 ℃；分流比：50∶1；進(jìn)樣量：1 μL；溶劑延遲3 min；程序升溫，柱溫60 ℃，保持8 min，以3 ℃/min升至110 ℃，保持7 min，再以10 ℃·min-1升至220 ℃，保持3 min。

質(zhì)譜：接口溫度：280 ℃；離子源溫度：230 ℃；電離方式：EI；電離能量：70 eV；四極桿溫度：150 ℃；質(zhì)量范圍m/z：45～550；質(zhì)譜檢索庫：NIST11。

2.2 供試品溶液制備

稱取約50.0 g荊芥(荊芥穗)粉末，精密稱定，加入至1 L圓底燒瓶中，加入7倍量蒸餾水(350 mL)，沸石3粒，浸泡0.5 h，提取2.0 h，停止加熱后冷卻，取所得揮發(fā)油加入適量正己烷稀釋，加入適量無水硫酸鈉干燥，至再加入無水硫酸鈉粉末呈疏松狀，靜置10 min，過濾，正己烷定容至5 mL容量瓶，搖勻，過0.22 μm微孔濾膜，即得樣品[8-10]。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 精密度實(shí)驗(yàn)

取S7樣品，按照“2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下的GC-MS條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄胡薄荷酮的保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，計(jì)算保留時(shí)間RSD及相對(duì)峰面積RSD，結(jié)果表明，其保留時(shí)間RSD為0.025%，相對(duì)峰面積RSD為0.68%，符合檢測(cè)要求，儀器的精密度良好。

2.3.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取S7樣品，按照“2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，在制備后0、2、4、6、8、12 h按照“2.1”項(xiàng)下的GC-MS條件分別進(jìn)樣，記錄胡薄荷酮的保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。計(jì)算保留時(shí)間RSD及相對(duì)峰面積RSD，結(jié)果表明，其保留時(shí)間RSD為0.032%，相對(duì)峰面積RSD為1.36%，符合檢測(cè)要求，樣品溶液穩(wěn)定性較好。

2.3.3 重復(fù)性試驗(yàn)

取S7樣品，按照“2.2”項(xiàng)下制備6份供試品溶液，然后按照“2.1”項(xiàng)下的GC-MS條件分別進(jìn)樣，記錄計(jì)算保留時(shí)間RSD及相對(duì)峰面積RSD，結(jié)果表明，其保留時(shí)間RSD為0.015%，相對(duì)峰面積RSD為3.59%，符合檢測(cè)要求，表明該測(cè)定方法具有較好的重復(fù)性。

2.4 揮發(fā)油含量及各成分相對(duì)含量計(jì)算方法

按照“2.2”項(xiàng)下條件分別提取10批次荊芥和10批次荊芥穗飲片的揮發(fā)油，計(jì)算揮發(fā)油得率(V/M)，每個(gè)樣品重復(fù)3次，取平均值并計(jì)算揮發(fā)油含量。按照“2.1”色譜條件進(jìn)樣，以樣品共有總峰面積為1，各成分峰面積與總峰面積比值為各成分相對(duì)含量，每個(gè)樣品重復(fù)3次，取平均值。

2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

用面積歸一化法計(jì)算荊芥及荊芥穗飲片揮發(fā)油成分的總離子流圖中各組分的相對(duì)含量，各成分的質(zhì)譜圖通過質(zhì)譜譜庫檢索、人工圖譜解析、文獻(xiàn)核對(duì)等多種方法進(jìn)行綜合分析鑒定。利用Agilent Mass Hunter Qualitative Analysis軟件以峰面積比大0.001為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)峰進(jìn)行過濾，以色譜峰谷間連線為基線對(duì)峰進(jìn)行積分，根據(jù)保留時(shí)間將峰進(jìn)行對(duì)齊，采用歸一化處理數(shù)據(jù)。利用SIMCA14.1統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)歸一化后的數(shù)據(jù)進(jìn)行多元統(tǒng)計(jì)分析，首先，進(jìn)行PCA與HCA分析確定荊芥和荊芥穗揮發(fā)油成分特征是否存在差異；其次，利用Pareto標(biāo)度化預(yù)處理對(duì)其進(jìn)行OPLS-DA分析，進(jìn)一步分析模式間的化學(xué)成分差異，并輸出得分圖和置換檢驗(yàn)圖；最后，對(duì)VIP>1的成分進(jìn)行t檢驗(yàn)計(jì)算P值，篩選VIP>1且P<0.05的成分為差異代謝物。

3 結(jié)果與分析

3.1 荊芥及荊芥穗揮發(fā)油總含量測(cè)定結(jié)果

荊芥與荊芥穗飲片揮發(fā)油含量測(cè)定結(jié)果(見圖1)表明，10批荊芥揮發(fā)油含量在0.002 0～0.006 5 mL/g之間，平均含量為0.003 5 mL/g，10批荊芥穗總揮發(fā)油含量在0.005 0～0.015 5 mL/g之間，平均含量為0.011 6 mL/g。10批荊芥中來自江蘇的生產(chǎn)批號(hào)為180615的荊芥揮發(fā)油總含量最高，為0.006 5 mL/g，其中來自河南、安徽、河北，生產(chǎn)批號(hào)分別為180301QF、180601、316190201的三批荊芥飲片中總揮發(fā)油成分均含量低于2015版《中國藥典》規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)[1]。10批荊芥穗中揮發(fā)油總含量均達(dá)到藥典標(biāo)準(zhǔn)，其中來自河北、生產(chǎn)批號(hào)為318181201的荊芥穗揮發(fā)油總含量高達(dá)0.015 5 mL/g，而同樣來自河北、生產(chǎn)批號(hào)為20170804的荊芥穗在10批荊芥穗中揮發(fā)油總含量最低，為0.005 0 mL/g。利用Excel對(duì)荊芥與荊芥穗揮發(fā)油含量進(jìn)行t檢驗(yàn)，P<0.01，表明荊芥與荊芥穗揮發(fā)油總含量差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上達(dá)到極顯著水平，荊芥穗揮發(fā)油含量整體高于荊芥。

圖1 荊芥、荊芥穗飲片揮發(fā)油含量Fig.1 Volatile oil content of Schizonepetae Herba and Schizonepetae Spica samples

3.2 荊芥及荊芥穗飲片揮發(fā)油成分鑒定及含量分析

利用“2.1”和“2.2”項(xiàng)下的方法分別對(duì)10批荊芥和10批荊芥穗揮發(fā)油成分進(jìn)行GC-MS分析，記錄其揮發(fā)油總離子流色譜圖(見圖2)?？傠x子流圖經(jīng)NIST11系統(tǒng)檢索結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)[3,11-13]得10批荊芥共有成分及10批荊芥穗共有成分(見表2、表3)。按照揮發(fā)油的構(gòu)成可將其分為萜類化合物、芳香族化合物、脂肪族化合等。由表可知10批荊芥飲片的揮發(fā)油共鑒定27種成分，其中萜類化合物21種，平均相對(duì)含量占99.2%，脂肪族化合物5種、芳香族化合物1種；10批荊芥穗飲片的揮發(fā)油共鑒定24種成分，其中萜類化合物20種，平均相對(duì)含量為99.5%，脂肪族化合物4種、芳香族化合物1種。荊芥與荊芥穗飲片的揮發(fā)油中具有各自的特有成分，其中荊芥飲片的特有成分為脂肪族類化合物1-辛烯-3-酮、環(huán)己酮，萜類化合物左薄荷腦、薄荷醇、L-α-松油醇、葎草烯，而荊芥穗飲片的特有成分為脂肪族化合物水楊酸己酯，萜類化合物(1S)-香芹醇、瓜菊醇酮。

荊芥與荊芥穗飲片揮發(fā)油的共有成分為21種，分別為脂肪族化合物1-辛烯-3-醇、3-辛酮、乙酸辛烯酯，芳香族化合物4-異丙烯基甲苯，其余均為萜類化合物，主要有薄荷酮、胡薄荷酮、檸檬烯等。為了探討兩種飲片揮發(fā)油中共有成分的分布特征，我們對(duì)兩種飲片共有成分中相對(duì)含量大于1%的胡薄荷酮、薄荷酮、異胡薄荷酮、檸檬烯、馬鞭草烯酮、香芹酮、順-p-2,8-薄荷二烯酮7個(gè)成分進(jìn)行分析(見圖3)。分析發(fā)現(xiàn)兩種飲片揮發(fā)油成分中的胡薄荷酮與薄荷酮含量較高，雖然不同來源相同飲片中兩種成分的含量差異較大，但各樣本中胡薄荷酮與薄荷酮相對(duì)含量之和比較穩(wěn)定，除S4外均高于80%；兩種飲片揮發(fā)油中胡薄荷酮與薄荷酮兩種成分的含量整體上存在差異，其中荊芥飲片揮發(fā)油中胡薄荷酮相對(duì)含量整體低于荊芥穗，而薄荷酮的相對(duì)含量則明顯高于荊芥穗。此外，荊芥飲片中異胡薄荷酮的相對(duì)含量明顯高于荊芥穗，而檸檬烯相對(duì)含量則明顯低于荊芥穗。

圖2 荊芥J9(A)與荊芥穗樣品S7(B)的總離子流圖Fig.2 Total ion current diagram of Schizonepetae Herba J9 samples (A) and Schizonepetae Spica S7 samples (B)

表2 10批荊芥飲片揮發(fā)油共有成分

表3 荊芥穗飲片揮發(fā)油共有成分

續(xù)表3

圖3 荊芥、荊芥穗主要共有成分含量Fig.3 The content of main components of Schizonepetae Herba and Schizonepetae Spica

3.3 荊芥及荊芥穗揮發(fā)油化學(xué)成分特征分析

3.3.1 荊芥及荊芥穗揮發(fā)油化學(xué)成分的PCA及HCA分析

為了分析荊芥和荊芥穗揮發(fā)油化學(xué)成分特征的差異，我們以荊芥和荊芥穗所含揮發(fā)油共有成分種類和相對(duì)含量為對(duì)象，利用SIMCA14.1對(duì)荊芥和荊芥穗飲片揮發(fā)油成分特征進(jìn)行PCA-X和HCA分析(見圖4)，由PCA得分結(jié)果可知，10批荊芥和10批荊芥穗飲片揮發(fā)油成分特征存在差異，各自聚為一類，荊芥樣本分布比較集中，而荊芥穗各樣本間差異較大，但均未表現(xiàn)出來源差異。HCA分析是基于ward算法的一種判別分析法，橫坐標(biāo)為樣品編號(hào)、縱坐標(biāo)為樣品點(diǎn)間距離，HCA結(jié)果顯示樣品距離在120時(shí)荊芥和荊芥穗飲片各自聚為一類。

圖4 荊芥、荊芥穗飲片揮發(fā)油共有成分PCA得分圖(A)和HCA分析圖(B)Fig.4 PCA score chart (A) and HCA analysis chart (B) of the volatile oil common constituents of Schizonepetae Herba and Schizonepetae Spica

PCA與HCA分析結(jié)果的一致性表明荊芥與荊芥穗揮發(fā)油化學(xué)成分特征存在差異，而且相同飲片不同批次之間也存在一定的差異。為了探討兩種飲片各批次樣本揮發(fā)油成分特征相似性的程度，我們利用指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件，分別以表2、表3中共有成分進(jìn)行多點(diǎn)校正，得到兩味飲片的對(duì)照?qǐng)D譜，如圖5，計(jì)算10批荊芥和10批荊芥穗飲片中揮發(fā)油總離子流色譜圖間的相似度。結(jié)果表明，10批荊芥飲片與對(duì)照?qǐng)D譜相似度均大于0.900，除J6、J9外，其余樣品相似度均大于0.990；10批荊芥穗飲片與對(duì)照?qǐng)D譜相似度均大于0.930，除S1、S4外，其余樣品的相似度均大于0.990，與PCA、HCA結(jié)果基本一致。

3.3.2 荊芥與荊芥穗飲片揮發(fā)油化學(xué)成分的OPLS-DA分析及差異成分篩選

為排除相同飲片不同批號(hào)間樣本差異對(duì)兩種飲片揮發(fā)油成分特征的干擾，我們對(duì)荊芥和荊芥穗兩種飲片的GC-MS成分特征進(jìn)行OPLS-DA分析(見圖6)，以確定兩種飲片質(zhì)量差異的可靠性。由得分圖可知，兩種飲片差異明顯，各自分布在兩個(gè)不同的象限。為避免建立的OPLS-DA模型出現(xiàn)過度擬合而影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性，我們利用200次Permutations test分別進(jìn)行置換檢驗(yàn)，結(jié)果顯示置換后的R2、Q2值均高于原始的R2、Q2值，表明所建模型可靠，未出現(xiàn)過度擬合現(xiàn)象。

荊芥與荊芥穗的PCA、HCA、OPLS-DA分析結(jié)果一致表明荊芥與荊芥穗飲片的揮發(fā)油化學(xué)成分存在顯著差異，為了確定引起兩種飲片差異的主要化學(xué)成分，我們利用所建立的OPLS-DA模型篩選荊芥與荊芥穗中揮發(fā)油化學(xué)成分VIP(variable importance in projection)>1的成分(見圖7)，并進(jìn)行t-test計(jì)算其P值，篩選VIP>1且P<0.05的物質(zhì)為潛在的差異成分(見表4)。分析及篩選結(jié)果表明，荊芥與荊芥穗飲片揮發(fā)油化學(xué)成分中存在10個(gè)VIP>1且P<0.05的成分，其中荊芥中薄荷酮、異胡薄荷酮、β-石竹烯、1-辛烯-3醇含量顯著高于荊芥穗，而荊芥中的檸檬烯、β-蒎烯、胡薄荷酮、香芹醇、順-p-2，8-薄荷二烯醇、4-異丙烯基甲苯的含量較荊芥穗低。

4 討論

荊芥與荊芥穗飲片是荊芥植株不同部位加工后的產(chǎn)物，由于荊芥是多年生植物，在全國分布較廣，因此兩種飲片中揮發(fā)油的種類及含量受多種因素的影響。Cao等[14]對(duì)3個(gè)荊芥品系與2個(gè)對(duì)照進(jìn)行比較試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)種質(zhì)資源對(duì)荊芥穗與荊芥飲片中總揮發(fā)油含量及成分具有決定作用；另外，荊芥的生長(zhǎng)環(huán)境[3,15,16]及采收期[17]等也對(duì)荊芥及荊芥穗中揮發(fā)油含量及成分產(chǎn)生一定影響，而且不同采收期的荊芥中莖、葉、穗比例存在差異[7]，而荊芥中各部位揮發(fā)油成分含量為穗>葉>莖[8,11]。為了比較荊芥和荊芥穗兩種飲片揮發(fā)油成分質(zhì)量特征的差異，本研究以不同來源的兩種飲片為研究對(duì)象，依據(jù)2015版《中國藥典》中揮發(fā)油照測(cè)定法(通則2204)，結(jié)合文獻(xiàn)對(duì)浸泡方式、加水量、提取時(shí)間及粉碎程度等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，確定了荊芥和荊芥穗飲片中揮發(fā)油提取的最佳工藝。通過對(duì)兩種飲片中總揮發(fā)油含量及成分分析發(fā)現(xiàn)，荊芥和荊芥穗兩種飲片揮發(fā)油成分特征存在差異。為了分析引起荊芥和荊芥穗飲片揮發(fā)油總量差異的原因，我們觀察比較了兩種飲片及不同批次飲片的外觀形狀，發(fā)現(xiàn)市場(chǎng)上的荊芥飲片約90%為荊芥的莖，而荊芥穗則基本上90%為荊芥的穗，而荊芥穗中種子較多。而且，我們?cè)谔幚順悠愤^程中也發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地和批次的荊芥與荊芥穗飲片的顏色也存在一定的差異，胡薄荷酮相對(duì)含量最低的J3荊芥飲片顏色與另外9個(gè)樣品有較大差異，J3粉末顏色偏綠，其余9種偏棕褐色；揮發(fā)油含量明顯偏低的S2荊芥穗飲片顏色明顯比其它幾個(gè)褐色的荊芥穗淺，而荊芥中葉片與莖的組成比例及飲片的顏色取決于荊芥品種、采收期及加工方法等多種因素，因此，荊芥和荊芥穗飲片質(zhì)量的差異性及不穩(wěn)定性和藥材的采收、品種、產(chǎn)地環(huán)境、加工方法、儲(chǔ)藏環(huán)境等多種因素有關(guān)，而這種差異的多樣性和不可控性可能影響荊芥和荊芥穗飲片質(zhì)量的穩(wěn)定性和臨床療效。因此，對(duì)于荊芥這類影響其質(zhì)量因素較多的中藥，應(yīng)以“藥材來源-化學(xué)質(zhì)量-藥學(xué)性質(zhì)-臨床療效”相結(jié)合的一致性評(píng)價(jià)方法，建立其藥材產(chǎn)地溯源的鑒別體系，進(jìn)而為臨床合理使用荊芥及荊芥穗飲片提供依據(jù)。另外，為了保證荊芥及荊芥穗飲片質(zhì)量的穩(wěn)定性，我們可通過轉(zhuǎn)錄組學(xué)、代謝組學(xué)等技術(shù)進(jìn)一步研究相關(guān)因子對(duì)荊芥及荊芥穗揮發(fā)油成分的影響機(jī)理，為荊芥優(yōu)良種質(zhì)選擇、飲片質(zhì)量控制及藥效成分的合成生物學(xué)提供依據(jù)。

圖5 荊芥、荊芥穗揮發(fā)油GC-MS疊加指紋圖譜及共有模式參照?qǐng)D譜Fig.5 The GC-MS superimposed fingerprints and reference fingerprints of Schizonepetae Herba volatile oil and Schizonepetae Spica volatile oil注：A、B為荊芥揮發(fā)油疊加指紋圖譜及對(duì)照?qǐng)D譜；C、D為10批荊芥穗揮發(fā)油指紋圖譜及對(duì)照?qǐng)D譜。Note:A and B are the superimposed fingerprints and reference fingerprints of Schizonepetae Herba volatile oil;C and D are the superimposed fingerprints and reference fingerprints of Schizonepetae Spica volatile oil.

圖6 荊芥與荊芥穗飲片揮發(fā)油成分的OPLS-DA得分圖(A)和置換檢驗(yàn)圖(B)Fig.6 OPLS-DA score map (A) and displacement test chart (B) of the essential oil components of Schizonepetae Herba and Schizonepetae Spica

圖7 荊芥與荊芥穗飲片中共有化學(xué)成分VIP值Fig.7 VIP of chemical constituents in Schizonepetae Herba and Schizonepetae Spica注：橫坐標(biāo)為各成分色譜峰保留時(shí)間。Note:The abscissa is the retention time of each component chromatographic peak.

表4 荊芥與荊芥穗飲片揮發(fā)油差異成分篩選與比較

藥效成分是決定中藥產(chǎn)生臨床功效的物質(zhì)基礎(chǔ)，荊芥與荊芥穗同為發(fā)汗解表藥，二者均為多種復(fù)方中藥的組成藥物，但荊芥穗較荊芥發(fā)散力強(qiáng)，祛風(fēng)解表之功更甚，為了進(jìn)一步探討引起兩種飲片臨床療效差異的藥效物質(zhì)特征，本研究利用GC-MS對(duì)不同批次的荊芥及荊芥穗飲片中揮發(fā)油成分特征進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)雖然兩種飲片揮發(fā)油中含有許多相同的化學(xué)成分，但共有成分的含量特征卻存在明顯差異，OPLS-DA分析從兩種飲片揮發(fā)油共有成分進(jìn)行篩選到10個(gè)差異成分，其中8個(gè)成分的差異達(dá)極顯著水平，這些成分涉及到薄荷酮、胡薄荷酮及檸檬烯等，其中胡薄荷酮是《中國藥典》2015年版中控制荊芥和荊芥穗飲片質(zhì)量的評(píng)價(jià)指標(biāo)。本研究結(jié)果表明荊芥穗中胡薄荷酮和薄荷酮含量占總揮發(fā)油量的80%～90%，荊芥中胡薄荷酮和薄荷酮含量占總揮發(fā)油量的83%～90%，雖然荊芥和荊芥穗胡薄荷酮和薄荷酮的相對(duì)總含量差異不大，但是兩種飲片中胡薄荷酮與薄荷酮的比例差異較大，荊芥穗飲片中胡薄荷酮平均約占75%，薄荷酮約占10%，比例約為7.5∶1，荊芥中胡薄荷酮約占55%，薄荷酮約占32%，比例約為5∶3，因此，從胡薄荷酮和薄荷酮兩種成分的相對(duì)比例來看，荊芥穗飲片更偏向于胡薄荷酮型。萜類成分作為為荊芥揮發(fā)油中最主要的化學(xué)成分，是抗炎、抗病毒等重要藥理活性的物質(zhì)基礎(chǔ)，文獻(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)胡薄荷酮型薄荷揮發(fā)油炎癥抑制活性高于薄荷酮型薄荷揮發(fā)油[18]，也有研究表明胡薄荷酮具有高炎癥抑制活性的同時(shí)毒性也有所增加[19,20]。此外，檸檬烯在荊芥與荊芥穗中相對(duì)含量差異極其顯著，有研究顯示檸檬烯對(duì)大鼠酒精性肝損傷具有拮抗作用[21]，因此，荊芥穗與荊芥飲片臨床功效差異可能與這些成分的分布特征有關(guān)。另外，關(guān)于荊芥和荊芥穗兩種飲片揮發(fā)油中各自特有成分與相應(yīng)飲片臨床功效的相關(guān)性也未見報(bào)道。

由于荊芥產(chǎn)地較多，本研究?jī)H收集到部分產(chǎn)地的荊芥和荊芥穗飲片，而且對(duì)于飲片的藥材來源、產(chǎn)地環(huán)境及采收期并不清楚，研究結(jié)果也僅能說明兩種飲片揮發(fā)油成分的初步特征及差異，后期還需要收集足夠多代表性的飲片，通過對(duì)大量樣本揮發(fā)油成分特征的統(tǒng)計(jì)分析，科學(xué)準(zhǔn)確闡釋荊芥與荊芥穗兩種飲片揮發(fā)油成分的特異性及及其與臨床療效的關(guān)系，為建立兩種飲片科學(xué)的質(zhì)量控制評(píng)價(jià)體系及臨床合理用藥提供依據(jù)。