張炎達 施少華 潘慧青 楊榮平 趙 齊

(1.福建貝迪藥業(yè)有限公司市級企業(yè)技術(shù)中心 福建寧德 355300；2.福建省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所 福州 350013)

H9N2 亞型禽流感病毒（AIV）起源于野鳥與水禽，自1966 年首次分離后便開啟全球化的蔓延與暴發(fā)[1]，禽流感屬禽類接觸性傳染病，隨著現(xiàn)代養(yǎng)禽集約化與規(guī)?；耐七M，H9N2 亞型AIV 已成制約養(yǎng)禽業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展的重要因素之一。 目前，H9N2亞型AIV 在國內(nèi)家禽中分布廣泛，且在新型禽流感的演化中角色重要[2]，而當前疫苗接種是公認的控制AI 流行的最有效方法。

隨著國內(nèi)養(yǎng)殖業(yè)“減抗”、“無抗”模式的推行，中草藥及其提取物已引起行業(yè)專家和學者的足夠重視。于潼等[3]研究發(fā)現(xiàn)黃芪多糖與滅活H9N2 亞型禽流感病毒混合時具有協(xié)同作用， 可提高小鼠外周血B 淋巴細胞和CD3+、CD4+T 淋巴細胞亞群比例，并對小鼠外周血T 淋巴細胞亞群有調(diào)節(jié)作用； 黃勁等[4]研究發(fā)現(xiàn)野菊花、穿心蓮、柴胡等10 味中藥提取的中藥制劑對H9N2 亞型AIV 攻毒雞具有有效抵抗效力，減少發(fā)病率和死率；同時，我們前期研究發(fā)現(xiàn)太子參制劑對禽1 型副黏病毒滅活疫苗免疫具有增強作用； 然而， 經(jīng)文獻檢索仍未發(fā)現(xiàn)太子參須在H9N2 亞型AIV 方面的研究報道， 為此本試驗嘗試性探究太子參須提取物對鴨H9N2 流感病毒體外生長的影響作用， 以期為未來探究太子參須提取物在控制AI 上的應(yīng)用提供一定的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 材料 太子參須提取物干粉由福建貝迪藥業(yè)有限公司采用水提提取制備并提供； 黃芪多糖干粉購自北京生泰爾科技股份有限公司， 以葡萄糖為標準品， 通過苯酚-濃硫酸法測得太子參須提取物干粉低劑量、高劑量和黃芪多糖含量分別為25%、75%和50%；H9N2 亞型AIV 和MDCK 細胞 （犬腎傳代細胞）均保存于福建省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所。

1.2 試驗方法 H9N2 亞型AIV 的擴增與MDCK細胞的培養(yǎng)均參考文獻[5]；H9N2 亞型禽流感病毒毒力檢測方法采用TCID50試驗法[5]；試驗分為太子參須提取物高劑量組（75%）、低劑量組（25%）、黃芪多糖陽性對照組和空白對照組， 不同組別條件下使得103TCID50H9N2 亞型AIV 感染MDCK 細胞， 具體用藥劑量如下： A、 太子參須提取物低劑量組每孔0.25 g/3 mL；B、 太子參須提取物高劑量組每孔0.25 g/3 mL；C、黃芪多糖組每孔0.1 g/3 mL；D、空白對照組采用生理鹽水。 每組3 個復孔，48 h 后測定感染孔TCID50值，結(jié)果用平均值±標準差值（M±S）表示， 數(shù)據(jù)均采用SPSS 統(tǒng)計處理軟件進行單因素方差分析。 上述試驗均在福建省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所實驗室完成。

2 試驗結(jié)果

由表1 可知，與空白對照組比較，太子參須提取物對鴨H9N2 亞型流感病毒在MDCK 細胞上的體外增殖具有一定抑制作用， 且太子參須提取物高劑量組（75%）的抑制作用最優(yōu)，統(tǒng)計學差異極顯著（P＜0.01），體外抑制效果高低再依次為太子參須提取物低劑量組（25%）和黃芪多糖組；同時，對比太子參須提取物高低劑量組的H9N2 亞型禽流感病毒log10TCID50值可知， 太子參須提取物對鴨H9N2 亞型流感病毒體外生長的抑制作用呈一定的劑量關(guān)系，具體劑量關(guān)系仍需后續(xù)試驗驗證。

表1 不同藥物對鴨H9N2 亞型病毒體外生長的抑制作用

3 結(jié)論與討論

本試驗觀察發(fā)現(xiàn)， 太子參須提取物對鴨H9N2亞型流感病毒在MDCK 細胞上的體外增殖具有一定抑制作用， 且呈相應(yīng)的劑量關(guān)系。 試驗中采用TCID50試驗法，TCID50可檢測病毒毒力大小，比較空白對照組和三種藥物處理組的TCID50值可直觀判斷鴨H9N2 亞型流感病毒在MDCK 細胞上的體外增殖情況和藥物抑制效果， 但基于試驗操作限制仍不能推測太子參須提取物是進入細胞內(nèi)抑制病毒復制增殖還是滅活游離病毒粒子等。另外，本文所涉及的太子參須提取物僅以水提取物干粉作為試驗材料， 對于是太子參須提取物內(nèi)哪一種或多種組分起到關(guān)鍵作用仍不清楚， 未來還需在病毒增殖抑制機理和精確組分等方面進行深入研究， 以期為未來探究太子參須有效組分在控制AI 上的應(yīng)用和疫苗佐劑的開發(fā)提供一定的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。