賈海波，嚴(yán)肖嘯，袁明智，武俊麗，楊 婕

腦膠質(zhì)瘤是臨床常見的原發(fā)性顱內(nèi)惡性腫瘤，惡性程度高、治療難度大[1]。目前，外科手術(shù)多無法完全切除腦膠質(zhì)瘤，術(shù)后常需輔助放療、化療清除殘余癌細(xì)胞[2]。替莫唑胺是臨床治療腦膠質(zhì)瘤的一線化療藥物，但由于個(gè)體差異、耐藥性逐漸形成，病人化療敏感性及預(yù)后無法預(yù)判[3]。微小RNA(microRNA，miR)屬于非編碼RNA，通過調(diào)控非編碼區(qū)癌基因或抑癌基因表達(dá)參與腫瘤病程進(jìn)展。有研究發(fā)現(xiàn)，miR-145-5p在胰腺癌、乳腺癌等多種腫瘤組織及血清中低表達(dá)，具有抗腫瘤作用[4-5]。本研究分析血清miR-145-5p對(duì)腦膠質(zhì)瘤病人化療敏感性的影響及與病人預(yù)后的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年4月—2017年3月收治的90例腦膠質(zhì)瘤病人，其中男52例，女38例；年齡45～77(65.28±7.20)歲；Karnofsky活動(dòng)狀態(tài)(KPS)評(píng)分60～89(74.93±7.55)分；世界衛(wèi)生組織(World Health Organization，WHO)分級(jí)[6]：Ⅱ級(jí)29例，Ⅲ級(jí)35例，Ⅳ級(jí)26例；手術(shù)類型：全切除44例，次全切除42例，部分切除4例。所有病人均接受同一醫(yī)療團(tuán)隊(duì)治療，本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)審批。

納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)病理學(xué)檢查確診為腦膠質(zhì)瘤；KPS評(píng)分≥60分；接受外科手術(shù)治療，且術(shù)后1個(gè)月內(nèi)接受化療。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他部位惡性腫瘤；合并嚴(yán)重肝腎功能障礙；合并嚴(yán)重感染性疾病等。

1.2 方法

1.2.1 血清miR-145-5p水平檢測(cè) 采集化療前空腹靜脈血5 mL，Trizol試劑盒(美國Invitrogen公司，貨號(hào)15596-018)提取總RNA，定量后反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA；產(chǎn)物鑒定后采用SYBR Green法進(jìn)行RT-qPCR檢測(cè)，miR-145-5p引物序列，正向引物：5′-ATGTCGTAGTGCTGTACGT-3′，反向引物R：5′-TGTCATGTAGCTGTGATGC-3′；U6引物序列，正向引物：5′-GTAGCTGTAGCTGTGACTC-3′，反向引物：5′-ATGCTGATGCTGAGCTGAC-3′，以U6為管家基因，2-△△CT為miR-145-5p基因的相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度。

1.2.2 治療方法及療效評(píng)定 術(shù)后口服替莫唑胺(江蘇天士力帝益藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字H20060880，規(guī)格：每片100 mg，生產(chǎn)批號(hào)20140105)150 mg/(m2·d)，連續(xù)5 d，以4周為1個(gè)治療周期，病人能耐受情況治療2～6個(gè)周期。療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)[2]：完全緩解：腫瘤病灶完全消失、體征完全消失，連續(xù)觀察4周仍有較好的臨床療效；部分緩解：連續(xù)觀察4周，腫瘤病灶體積縮小≥50%；穩(wěn)定：連續(xù)觀察4周，病情無明顯變化，腫瘤病灶體積縮小>25%或增大<25%；進(jìn)展：原腫瘤病灶體積增大≥25%或發(fā)現(xiàn)新的腫瘤病灶。所有病人評(píng)估時(shí)間一致，若出現(xiàn)進(jìn)展及時(shí)更改化療方案，臨床受益(完全緩解、部分緩解或穩(wěn)定)繼續(xù)化療療程，將完全緩解和部分緩解病人納入有效組，其余納入無效組。

1.2.3 觀察指標(biāo) 收集病人性別、年齡、KPS評(píng)分、WHO分級(jí)、病灶部位、手術(shù)類型、臨床病理資料及血清miR-145-5p水平，將其作為自變量，以化療是否有效(是=0、否=1)作為因變量進(jìn)行Logistic回歸分析。

1.2.4 隨訪 以門診或電話方式進(jìn)行隨訪，所有病人自化療開始均隨訪1年，統(tǒng)計(jì)病人1年總生存率及無進(jìn)展生存率，進(jìn)展生存：復(fù)查增強(qiáng)頭顱MRI，測(cè)量腫瘤體積，腫瘤體積較治療前增加25%及以上，或發(fā)生新的部位轉(zhuǎn)移納入進(jìn)展生存，否則納入無進(jìn)展生存。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 23.0軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)；等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 療效評(píng)價(jià)及隨訪結(jié)果 90例病人總有效率為34.44%(31/90)，其中完全緩解率為15.56%(14/90)，部分緩解率為18.89%(17/90)，穩(wěn)定率為37.78%(34/90)，進(jìn)展率為27.78%(25/90)。隨訪1年，病人總生存率為32.22%(29/90)，其中無進(jìn)展生存率23.33%(21/90)，進(jìn)展生存率8.89%(8/90)。

2.2 有效組和無效組化療前血清miR-145-5p水平比較 有效組血清miR-145-5p相對(duì)表達(dá)量高于無效組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。詳見表1。

表1 有效組和無效組化療前血清miR-145-5p水平比較(x±s)

2.3 有效組和無效組臨床資料比較 有效組年齡、KPS評(píng)分及WHO分級(jí)與無效組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見表2。

表2 有效組和無效組臨床資料比較

2.4 Logistic回歸分析影響化療敏感性的因素 Logistic回歸分析結(jié)果顯示，年齡、KPS評(píng)分、WHO分級(jí)、血清miR-145-5p水平均是影響化療敏感性的因素(P<0.05)。詳見表3、表4。

表3 影響因素賦值表

表4 Logistic回歸分析影響化療敏感性的因素

2.5 血清miR-145-5p預(yù)測(cè)腦膠質(zhì)瘤病人預(yù)后的效能分析 血清miR-145-5p相對(duì)表達(dá)量對(duì)腦膠質(zhì)瘤病人1年死亡預(yù)測(cè)最佳截?cái)帱c(diǎn)為6.02，預(yù)測(cè)靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度及AUC分別為75.86%、88.52%、84.44%、0.780。詳見圖1。

圖1 血清miR-145-5p預(yù)測(cè)腦膠質(zhì)瘤病人預(yù)后的ROC曲線圖

3 討 論

腦膠質(zhì)瘤屬于高度惡性腫瘤，發(fā)病原因多樣，包括家族遺傳、接觸環(huán)境致癌物等[7-8]。替莫唑胺屬于烷化劑類藥物，臨床應(yīng)用廣泛，其缺點(diǎn)是耐藥性普遍，療效個(gè)體差異較大[9]。烷化劑耐藥的基本機(jī)制是癌細(xì)胞中存在多種修復(fù)細(xì)胞損傷因子，如泛素系統(tǒng)酶、甲基鳥嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶等，可降低細(xì)胞對(duì)烷化劑的敏感性[10-11]。因此，尋找可調(diào)節(jié)修復(fù)因子活性標(biāo)志物對(duì)評(píng)估化療敏感性及預(yù)后至關(guān)重要。

小分子miRNA通過與靶基因miRNA 3′端非編碼區(qū)結(jié)合，從而調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄或翻譯過程[12-13]。miR-145在多種惡性腫瘤中表達(dá)具有特異性，且可調(diào)控腫瘤細(xì)胞化療敏感性，參與腫瘤發(fā)生及進(jìn)展[14-15]。Zhuang等[16]研究發(fā)現(xiàn)，通過抑制miR145基因表達(dá)，膀胱癌細(xì)胞干性隨之增強(qiáng)，繼而導(dǎo)致耐藥性增強(qiáng)。癌細(xì)胞存在的損傷修復(fù)因子是耐藥的重要機(jī)制。Chen等[17]研究發(fā)現(xiàn)，miR-145-5p可作用于DNA損傷關(guān)鍵容忍蛋白R(shí)AD18基因，從而抑制RAD18表達(dá)，而RAD18已證實(shí)具有降低D組范可尼貧血偶聯(lián)因子、抑制細(xì)胞凋亡作用，RAD18表達(dá)降低則化療敏感性增加。本研究結(jié)果證實(shí)，血清miR-145-5p相對(duì)表達(dá)量是影響化療敏感性的因素，提示miR-145-5p與腦膠質(zhì)瘤化療敏感性關(guān)系密切，高水平miR-145-5p可增強(qiáng)化療敏感性，分析可能機(jī)制是調(diào)控癌細(xì)胞損傷修復(fù)因子表達(dá)而增強(qiáng)化療敏感性。

癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致疾病復(fù)發(fā)及預(yù)后不良的主要原因。Zhang等[18]發(fā)現(xiàn)，胃癌組織miR-145-5p表達(dá)水平低于癌旁組織，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分期關(guān)系密切，miR-145-5p高表達(dá)的病人預(yù)后總生存時(shí)間長(zhǎng)于低表達(dá)的病人，與本研究結(jié)果相似。Liu等[19]通過分析50例結(jié)直腸癌病人血清miR-145表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)，血清低表達(dá)水平與結(jié)直腸癌分化程度、臨床分期、轉(zhuǎn)移等關(guān)系密切，可作為預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌預(yù)后預(yù)測(cè)的參考指標(biāo)，與劉妍[20]的研究結(jié)果一致。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，血清miR-145-5p相對(duì)表達(dá)量預(yù)測(cè)腦膠質(zhì)瘤病人1年死亡靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度及AUC均較高，提示血清miR-145-5p與腦膠質(zhì)瘤預(yù)后關(guān)系密切，進(jìn)一步提示血清miR-145-5p水平可作為預(yù)測(cè)化療預(yù)后的可靠指標(biāo)。本研究不足之處在于納入的研究對(duì)象均為本院病人，且樣本量有限，可能導(dǎo)致結(jié)果產(chǎn)生一定偏倚，今后需進(jìn)一步擴(kuò)樣本量，開展多中心研究，以證實(shí)研究結(jié)果的準(zhǔn)確性。

綜上所述，血清miR-145-5p與腦膠質(zhì)瘤病人化療敏感性及預(yù)后關(guān)系密切，高水平miR-145-5p可增強(qiáng)化療敏感性，并作為預(yù)測(cè)化療預(yù)后的可靠指標(biāo)，為提高腦膠質(zhì)瘤術(shù)后化療療效及預(yù)測(cè)預(yù)后提供參考，并及時(shí)調(diào)整治療策略，為病人爭(zhēng)取更多生存機(jī)會(huì)。