吳瓊 熊振豪 吳文龍 李維林 張春紅

摘要：用2 mmol/L NAA和0.1 mmol/L TDZ處理黑莓品種“Chester”青果期果實，比較其對果實成熟進(jìn)程中生長發(fā)育及主要活性成分的影響。結(jié)果表明，果實經(jīng)NAA和TDZ處理21 d后均開始轉(zhuǎn)色成熟，較對照果實延遲3 d，至 24 d 時均完全成熟。與對照果實相比，NAA處理后果實橫徑、縱徑增大，單果質(zhì)量增加，而花色苷、可溶性固形物和總多酚含量均低于對照。TDZ處理果實與對照相比表現(xiàn)為成熟果實橫徑、縱徑減小，單果質(zhì)量降低，花色苷含量降低，總多酚含量變化不顯著。因此，外施NAA和TDZ均可使“Chester”果實成熟延遲，果實花色苷含量下降，而NAA可使成熟果實增大，果實活性成分積累減少;TDZ處理抑制了果實發(fā)育，對果實活性成分積累無明顯影響。

關(guān)鍵詞：黑莓;萘乙酸;噻苯隆;果實生長發(fā)育;果實品質(zhì)

中圖分類號： S663.201文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2021）02-0076-05

收稿日期：2020-05-16

基金項目：國家自然科學(xué)基金（編號：31600553）;江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金[編號：CX（19）2013]。

作者簡介：吳瓊（1996—），女，江蘇南京人，碩士研究生，研究方向為黑莓種質(zhì)資源鑒定。E-mail：wqnj77@163.com。

通信作者：張春紅，博士，副研究員，研究方向為黑莓種質(zhì)資源鑒定利用。E-mail：chzhang@cnbg.net。

黑莓（Rubus spp.）為懸鉤子屬（Rubus）灌木植物的一種優(yōu)良栽培類型，其聚合果果實由多個小核果組成。黑莓果實營養(yǎng)豐富，含有大量黃酮類、花色苷類、多酚類等活性成分使得黑莓果實抗氧化能力極強，近年來備受消費者青睞[1]。在生產(chǎn)上，黑莓成熟果實極軟，采后易腐爛，果實品質(zhì)明顯下降，嚴(yán)重影響了果實的貨架期[2]，積極尋求和探索改良黑莓果實品質(zhì)的有效途徑成為育種者們極其關(guān)注的課題。

萘乙酸（1-naphthylacetic acid，簡稱NAA），別稱α-萘乙酸，是一種植物激素生長素，其具有廣譜型植物生長調(diào)節(jié)劑的特性。對草莓花期進(jìn)行NAA噴施處理，明顯降低了草莓畸形果率，果實橫徑和單果質(zhì)量增加，果實品質(zhì)顯著提高[3]。NAA與鈣混施可以有效降低草莓腐爛指數(shù)和呼吸速率，提高草莓貯藏品質(zhì)[4]。花冠下垂期噴施NAA可提高藍(lán)莓果實的大小和單果質(zhì)量，從而使藍(lán)莓單株產(chǎn)量提高[5]。也有研究認(rèn)為，NAA對提高山葡萄品質(zhì)和花色苷含量可能具有一定的抑制作用[6]。黑莓作為一種不耐貯藏的小漿果，NAA對果實生長和活性成分的影響研究少見報道。

噻苯隆（thidiazuron，簡稱TDZ）是已被廣泛用于植物組織培養(yǎng)形態(tài)發(fā)生的高效生物調(diào)節(jié)劑，具有生長素和細(xì)胞分裂素雙重功能[7]。TDZ具有很強的細(xì)胞分裂素活性，有利于懸鉤子屬樹莓誘導(dǎo)不定芽再生[8]。TDZ能促進(jìn)獼猴桃果實生長和加速成熟進(jìn)程，使得單果質(zhì)量增加，可溶性固定物和可溶性糖含量增加[9]。一定濃度的TDZ處理可以增加芒果單果質(zhì)量和果實產(chǎn)量，推遲芒果果實后熟軟化并延長貯存時間[10]。對葡萄進(jìn)行TDZ處理，可以增大葡萄果粒，提高花色苷含量，但可溶性固形物含量下降[11]。TDZ處理對黑莓生長和活性成分積累的影響效應(yīng)目前少見報道。

基于此，本研究以黑莓品種“Chester”為試材，以自然條件下生長發(fā)育的黑莓果實為對照，用NAA和TDZ處理黑莓青果果實，對其生長性狀和主要活性成分的變化規(guī)律進(jìn)行比較，初步探討NAA和TDZ對黑莓果實性狀的影響，旨在為果實品質(zhì)改良提供線索依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗材料

供試材料為黑莓品種“Chester”三年生樹，種植于江蘇省中國科學(xué)院植物研究所溧水白馬科學(xué)基地，本試驗于2019年在江蘇省中國科學(xué)院植物研究所溧水白馬科學(xué)基地進(jìn)行。

1.2試驗方法

在黑莓品種“Chester”果實青果轉(zhuǎn)色時，用 2 mmol/L NAA溶液和0.1 mmol/L TDZ溶液浸泡30 s，掛牌標(biāo)注日期，之后每隔3 d定期取樣，直至果實完全成熟。采后選擇大小均勻、色澤一致、無病蟲和無損傷的果實進(jìn)行生長發(fā)育指標(biāo)和活性成分測定。

1.3項目測定

1.3.1果實生長發(fā)育指標(biāo)測定采果當(dāng)天，選取外觀形狀一致及著色程度接近的30粒果實，用感量0.1 g托盤天平稱量單果質(zhì)量，用數(shù)顯游標(biāo)卡尺測量果實橫徑和縱徑。

1.3.2果實主要活性成分指標(biāo)測定花色苷多酚提取及測定參照趙慧芳等的方法[12]。取2 g黑莓果實組織用研缽充分勻漿，加入10 mL 70%乙醇溶液并搖勻，數(shù)控超聲波清洗機超聲40 min，5 000 r/min 離心5 min，收集上清測花色苷和多酚含量，使用酶標(biāo)儀在510 nm波長下用示差法計算溶液中總花色苷含量。樣品液稀釋適當(dāng)?shù)谋稊?shù)，吸取 1.0 mL 待測液至10 mL試管中，加入5.0 mL 0.2 mmol/L 的Folin-Ciocalteus試劑，充分混勻，加入4 mL 7.5% （質(zhì)量濃度）飽和碳酸鈉溶液，25 ℃ 條件下放置2 h后用酶標(biāo)儀在765 nm下測定吸光度，根據(jù)回歸方程計算總多酚含量[13]。用固形物含量檢測儀（型號為愛拓PAL-5）測定可溶性固形物含量。

1.4數(shù)據(jù)分析

用Excel 2013軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和制圖分析，采用Duncans多重比較法檢測數(shù)據(jù)差異顯著性。

2結(jié)果與分析

2.1NAA和TDZ對“Chester”果實成熟進(jìn)程生長發(fā)育指標(biāo)的影響

在自然條件下，“Chester”果實在青果轉(zhuǎn)色后 18 d 開始轉(zhuǎn)成熟色，果實從第1次轉(zhuǎn)色至完全成熟歷時24 d。噴施NAA和TDZ的“Chester”果實均在青果轉(zhuǎn)色后21 d轉(zhuǎn)成熟色，24 d完全成熟。由圖1-A～圖1-C可見，青果期轉(zhuǎn)色處理后0～12 d，2 mmol/L NAA處理的“Chester”果實橫徑、縱徑及果質(zhì)量呈低于對照果實的趨勢。之后至24 d成熟時，NAA處理果實各生長指標(biāo)，尤其是單果質(zhì)量明顯高于對照。相比之下（圖1-D～圖1-F），0.1 mmol/L TDZ處理的“Chester”果實生長指標(biāo)整體上均低于未處理果實，尤其是成熟時期單果質(zhì)量極顯著低于對照果實。

2.2NAA和TDZ對“Chester”果實成熟進(jìn)程主要活性成分指標(biāo)的影響

2.2.1可溶性固形物含量果實轉(zhuǎn)色成熟進(jìn)程中可溶性固形物含量總體呈S型變化趨勢，在青果轉(zhuǎn)色后15、24 d達(dá)到峰值，這2個時期可溶性固形物含量分別為8.35%、11.95%。2 mmol/L NAA處理的“Chester”果實（圖2-A）僅在青果轉(zhuǎn)色后9、21 d可溶性固形物含量高于未處理果實，其他天數(shù)均低于對照，尤其是完全成熟期顯著低于對照。0.1 mmol/L TDZ處理的“Chester”果實（圖2-B）轉(zhuǎn)色后6～9 d、18～21 d可溶性固形物含量均高于未處理果實，其余時期基本低于未處理果實，且在青果轉(zhuǎn)色后15、18、24 d時差異顯著。

2.2.2花色苷含量由圖3可知，“Chester”果實青果轉(zhuǎn)色成熟進(jìn)程中花色苷含量呈緩慢上升趨勢，在完全成熟時達(dá)到峰值，花色苷含量為135.21 mg/g。2 mmol/L NAA處理后，果實花色苷含量在轉(zhuǎn)色初期（0～9 d）表現(xiàn)為緩慢上升，繼而小幅下降后又快速上升，但花色苷含量總體上低于對照果實（圖3-A）。相比較而言，0.1 mmol/L TDZ處理后，同對照組類似，果實花色苷含量自轉(zhuǎn)色后直至21 d時基本呈緩慢上升趨勢，果實成熟時顯著低于對照（圖3-B）。

2.2.3總多酚含量在“Chester”果實轉(zhuǎn)色成熟進(jìn)程中，0～15 d時果實總多酚含量變化較小，整體上呈下降趨勢，2 mmol/L NAA處理的“Chester”果實總多酚含量基本均低于未處理果實（圖4-A）。01 mmol/L TDZ處理的“Chester”果實，除在轉(zhuǎn)色后9～12、18～21 d總多酚含量高于未處理果實外，其他時期均低于未處理果實（圖4-B）。

3結(jié)論與討論

小漿果泛指果實較小、多汁的一類果樹，主要包括越橘、樹莓等[14]。小漿果果實不耐貯藏，鮮果貨架期短，對產(chǎn)業(yè)持續(xù)發(fā)展造成了一定沖擊[15]。小漿果果實品質(zhì)改良的方法研究至關(guān)重要。基于此，本研究對NAA和TDZ處理對黑莓果實轉(zhuǎn)色后生長發(fā)育和主要活性成分指標(biāo)進(jìn)行分析，旨在為黑莓果實品質(zhì)改良提供一定的理論依據(jù)。

在自然條件下，黑莓“Chester”品種果實青果著色18 d后開始轉(zhuǎn)成熟色，而NAA和TDZ處理的果實均在青果著色21 d后開始轉(zhuǎn)成熟色，均在24 d后完全成熟。由此可見， NAA和TDZ對黑莓“Chester”

品種果實著色成熟均有一定的延遲作用。在發(fā)育成熟進(jìn)程中，NAA處理的“Chester”果實青果著色后前期橫徑、縱徑和單果質(zhì)量均低于未處理果實，而后期這些指標(biāo)均迅速增加且高于對照果實。已有研究表明，NAA可以促進(jìn)芒果果實增大，較高濃度的NAA會抑制果實花青素的合成，對果實品質(zhì)影響不大[16]。NAA噴施可以使不同品種的荔枝果實增大，推測這可能與其增加果實調(diào)運養(yǎng)分的能力有關(guān)[17]。TDZ處理后不僅表現(xiàn)為黑莓果實成熟延遲，且果實在整個轉(zhuǎn)色成熟進(jìn)程中橫徑、縱徑和單果質(zhì)量均表現(xiàn)為下降趨勢（圖1）。已有研究指出，TDZ具有延遲柿果實成熟的效應(yīng)，表現(xiàn)為延遲葉綠素的降解和糖分積累的降低[18]。

可溶性固形物指果蔬中能溶于水的維生素、糖、酸等物質(zhì)，主要指葡萄糖、果糖、蔗糖等可溶性糖類物質(zhì)[19]。在“Chester”果實成熟進(jìn)程中，可溶性固形物含量整體呈S型動態(tài)變化上升趨勢。經(jīng)NAA和TDZ處理后，黑莓“Chester”果實的可溶性固形物含量在完全成熟時均顯著降低，推測由于內(nèi)在成熟進(jìn)程延遲使得果實可溶性固形物含量下降?；ㄉ帐且环N天然食用色素，同時還具有抗氧化等多種保健功能，適于活性成分提取和功能食品加工[20]。在黑莓“Chester”品種果實轉(zhuǎn)色成熟進(jìn)程中，花色苷在前期積累緩慢，接近成熟時快速積累。NAA處理后的“Chester”果實各個時期花色苷積累較未處理果實更為緩慢，且完全成熟時處理后的果實花色苷含量明顯低于對照果實。相比而言，TDZ處理的果實花色苷積累也比較緩慢，完全成熟時也顯著低于未處理果實，但TDZ處理果實花色苷積累在各個階段均高于NAA處理后果實。因此，NAA和TDZ均對黑莓果實花色苷積累有一定的抑制作用，NAA的抑制效應(yīng)更加明顯。多酚類化合物是植物中普遍存在的次級代謝產(chǎn)物，是果蔬感官品質(zhì)和營養(yǎng)品質(zhì)的主要決定因素[21]。多酚類物質(zhì)與其他小分子物質(zhì)具有協(xié)同抗氧化性作用。在黑莓“Chester”果實轉(zhuǎn)色成熟進(jìn)程中，總多酚含量呈動態(tài)變化趨勢。NAA處理的果實在轉(zhuǎn)色成熟進(jìn)程中總多酚含量較對照均有一定程度的下降，而TDZ處理的果實總多酚含量呈動態(tài)變化趨勢，作用可能比較復(fù)雜。

綜上所述，NAA和TDZ處理對“Chester”果實發(fā)育成熟進(jìn)程均有一定影響，二者均可以延遲果實成熟進(jìn)程，果實花色苷積累明顯受到抑制，且NAA效應(yīng)更明顯。NAA處理使得“Chester”成熟期果實增大，并對可溶性固形物和總多酚含量積累均有一定的抑制作用。TDZ處理下成熟果實變小，轉(zhuǎn)色成熟期果實可溶性固形物含量變化趨于平穩(wěn)，對總多酚含量積累作用比較復(fù)雜。

參考文獻(xiàn)：

[1]Sellappan S，Akoh C C，Krewer G. Phenolic compounds and antioxidant capacity of Georgia-grown blueberries and blackberries[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，2002，50（8）：2432-2438.

[2]Junqueira-Goncalves M P，Alarcón E，Niranjan K. The efficacy of potassium sorbate-coated packaging to control postharvest gray mold in raspberries，blackberries and blueberries[J]. Postharvest Biology and Technology，2016，111：205-208.

[3]肖艷，黃建昌，李宏彬. 萘乙酸和硼對草莓果實生長發(fā)育的影響[J]. 中國南方果樹，1998（4）：35-36.

[4]肖艷，黃建昌，李宏彬. 采前噴鈣和萘乙酸對草莓耐貯性的影響[J]. 中國果樹，1998（2）：24，28，25.

[5]Milic' B，Tarlanovic' J，Keserovic' Z，et al. Bioregulators can improve fruit size，yield and plant growth of northern highbush blueberry （Vaccinium corymbosum L.）[J]. Scientia Horticulturae，2018，235：214-220.

[6]趙權(quán)，高靜. NAA和6-BA對山葡萄果實著色及相關(guān)品質(zhì)的影響[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（30）：18443-18445.

[7]徐曉峰，黃學(xué)林. TDZ：一種有效的植物生長調(diào)節(jié)劑[J]. 植物學(xué)通報，2003，20（2）：227-237.

[8]張宗勤，董麗芬，張波，等. TDZ對樹莓微繁殖的影響[J]. 經(jīng)濟(jì)林研究，2004，22（4）：50-52.

[9]Famiani F，Battistelli A，Moscatello S，et al. Thidiazuron affects fruit growth，ripening and quality of Actinidia deliciosa[J]. The Journal of Horticultural Science and Biotechnology，1999，74（3）：375-380.

[10]高兆銀，朱敏，李敏，等. 噴施噻苯隆（TDZ）對杧果果實產(chǎn)量、品質(zhì)和采后貯藏特性的影響[J]. 果樹學(xué)報，2018，35（4）：481-490.

[11]謝周，程媛媛，李小紅，等. TDZ對夏黑葡萄果實生長與品質(zhì)的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37（3）：188-190.

[12]趙慧芳，王小敏，閭連飛，等. 黑莓果實中花色苷的提取和測定方法研究[J]. 食品工業(yè)科技，2008（5）：176-179.

[13]趙慧芳，吳文龍，馬麗，等. 基于抗氧化活性分析的藍(lán)莓多酚提取工藝[J]. 食品工業(yè)科技，2015，36（5）：251-254，266.

[14]陳斕. 小漿果將成為新的經(jīng)濟(jì)增長點[J]. 云南農(nóng)業(yè)，2003（4）：37.

[15]郝瑞，曲路平，夏景岐. 丹麥及聯(lián)邦德國小漿果栽培考察報告[J]. 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，1998，10（3）：37-40.

[16]朱敏，鄧穗生，何書強，等. NAA和愛多收對海南貴妃芒產(chǎn)量和果實品質(zhì)的影響[J].中國農(nóng)學(xué)通報，2015，31（1）：116-121.

[17]李建國，黃旭明，黃輝白. NAA增大荔枝果實及原因分析[J]. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2004，25（2）：10-12.

[18]Itai A，Tanabe K，Tamura F，et al. Synthetic cytokinins control persimmon fruit shape，size and quality[J]. Horticultural Science，1995，70（6）：867-873.

[19]馬瑋，史玉滋，段穎，等. 南瓜果實淀粉和可溶性固形物研究進(jìn)展[J]. 中國瓜菜，2018，31（11）：1-5.

[20]熊喜紅，徐曉云，張強，等. 湖北和云南地區(qū)藍(lán)莓果實加工特性研究[J]. 北方園藝，2020（2）：23-31.

[21]Lapornik B，Prosek M，Wondra A G. Comparison of extracts prepared from plant by-products using different solvents and extraction time[J]. Journal of Food Engineering，2005，71（2）：214-222.