鄭美佳， 賈 瑞， 魏海梁， 閆曙光， 李京濤

1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院胃腸病教研室，陜西 咸陽 712000；2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院普外科；3.陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院感染科

腸道上皮組織為單層柱狀細(xì)胞，具有吸收、屏障以及內(nèi)分泌的功能，位于隱窩基底部的LGR5+ISC是腸上皮更新的源泉，同時腸道損傷后上皮再生的過程也源于LGR5+ISC。Hippo信號通路是決定LGR5+ISC命運的關(guān)鍵控制開關(guān)之一，其關(guān)鍵激酶YAP在維持腸道穩(wěn)態(tài)、介導(dǎo)損傷后的上皮修復(fù)等方面發(fā)揮重要作用，并且YAP參與調(diào)控LGR5+ISC增殖分化失衡所導(dǎo)致的多種腸道疾病過程，本文就Hippo-YAP調(diào)控LGR5+ISC、LGR5+CSC在腸上皮再生、腫瘤相關(guān)的研究進(jìn)展和前景作一概述。

1 LGR5+腸干細(xì)胞簡介

富含亮氨酸重復(fù)序列G蛋白偶聯(lián)受體5(leucine-richrepeat-containing G protein-coupled receptor 5，LGR5)是一種公認(rèn)的干細(xì)胞標(biāo)志物，同時在癌干細(xì)胞(cancer stem cells，CSC)中也表達(dá)LGR5，并顯示廣泛的干細(xì)胞樣多能和自我更新的特性。2007年其中一類LGR5基因表達(dá)陽性的隱窩基底柱狀細(xì)胞(crypt-base columnar cell，CBC)在隱窩基底部Paneth細(xì)胞之間的+1～+3位置被發(fā)現(xiàn)，這類細(xì)胞具有高增殖和輻射敏感的特性，同時具有高度可塑性和產(chǎn)生多譜系分化的子代細(xì)胞及長期的自我更新的特點，被認(rèn)為是真正的ISC[1-3]。實驗研究表明，從腸道中分離出的單個LGR5+ISC足以形成腸內(nèi)小體，即一個三維培養(yǎng)系統(tǒng)，并且能產(chǎn)生所有上皮細(xì)胞類型，補(bǔ)充腸道整個隱窩—絨毛軸，對整個腸道的穩(wěn)定更新起著非常重要的作用，當(dāng)LGR5+ISC功能失衡可能誘發(fā)炎癥性腸病、腸道腫瘤、息肉、腺瘤、腸癌、短腸綜合征等腸道相關(guān)疾病[4-5]。除此之外在特定情況下，包括Paneth細(xì)胞、腸內(nèi)分泌細(xì)胞等在內(nèi)的一些終末分化細(xì)胞也具有一定程度的可塑性，這些細(xì)胞也可以重新進(jìn)入生態(tài)位，去分化轉(zhuǎn)變成LGR5+ISC補(bǔ)充其數(shù)量，滿足干細(xì)胞增殖要求[6]。

2 Hippo-YAP信號通路調(diào)控LGR5+ISC增殖分化

Hippo-YAP通路又稱河馬通路主要由上游調(diào)節(jié)因子MST1/MST2、核心因子LATS1/LATS2、下游效應(yīng)因子YAP/TAZ這3部分組成，與其他通路不同，這條通路還無特異性受體和相關(guān)配體。Hippo信號通路的核心是一條激酶鏈，受上游G蛋白偶聯(lián)受體信號傳導(dǎo)或酪氨酸激酶活化等信號調(diào)控MST的活性，進(jìn)而磷酸化LATS，導(dǎo)致YAP和TAZ在細(xì)胞質(zhì)中失活降解；當(dāng)MST和LATS去磷酸化后，YAP和TAZ恢復(fù)轉(zhuǎn)錄活性，在細(xì)胞核中積累，并通過與轉(zhuǎn)錄因子如TEAD結(jié)合的方式調(diào)節(jié)促進(jìn)細(xì)胞增殖、細(xì)胞存活的靶基因的表達(dá)。河馬通路的關(guān)鍵激酶—YAP(Yes-associated protein)常作為再生和原癌基因在腸干細(xì)胞穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)的過程中發(fā)揮著重要作用，YAP活性不僅受上游信號因子及其他信號通路串?dāng)_調(diào)控，對鄰近細(xì)胞及ECM的機(jī)械信號也很敏感[7-8]。在穩(wěn)定狀態(tài)下，河馬通路不斷抑制YAP信號以維持隱窩-絨毛的完整性，在內(nèi)源性和外源性損傷情況下，河馬通路可以激活YAP信號傳導(dǎo)并參與LGR5+ISC增殖分化再生腸上皮細(xì)胞修復(fù)腸道損傷的程序[9]。

3 YAP參與LGR5+ISC調(diào)控腸上皮細(xì)胞更新維持ISC穩(wěn)態(tài)修復(fù)腸道損傷的程序

Liu等[9]已報道，YAP在腸黏膜愈合過程中起著重要作用，并被建議重塑干細(xì)胞。YAP依賴于不同信號通路相互作用，參與LGR5+ISC增殖分化凋亡的過程。其中，YAP可以促進(jìn)細(xì)胞存活并誘導(dǎo)EGFR通路激活，暫時重新編程LGR5+ISC來實現(xiàn)腸道再生程序，并且YAP活化導(dǎo)致LGR5+ISC自我更新潛能的增加[10-11]。在Notch信號通路中，成熟的Paneth細(xì)胞在輻照后會重新進(jìn)入細(xì)胞周期，活躍地分裂，并重新分化為其他細(xì)胞類型，這些受輻照的Paneth細(xì)胞失去了典型的Paneth細(xì)胞標(biāo)記，并獲得了與ISC相關(guān)的基因標(biāo)記，并且從輻照小鼠中分離出的Paneth細(xì)胞可以生成LGR5+ISC，而YAP的核易位先于該過程，這意味著它參與了依賴于Notch信號通路的Paneth細(xì)胞重編程再生LGR5+ISC的過程[12]。除此之外，Ayyaz等在《Nature》雜志2019年5月發(fā)表的一篇文章中又發(fā)現(xiàn)腸道一類特殊的干細(xì)胞—復(fù)活干細(xì)胞(revival stem cell，revSC)，revSC可以產(chǎn)生所有細(xì)胞層次的腸道細(xì)胞，包括LGR5+ISC，這種獨特的干細(xì)胞在穩(wěn)態(tài)條件下非常少見，但在輻射損傷、針對性去除LGR5+ISC或用DSS處理腸道組織后，revSC在腸損傷狀態(tài)下瞬間擴(kuò)增后同時經(jīng)歷一種YAP依賴性的短暫增殖，從而被調(diào)動恢復(fù)靜態(tài)的干細(xì)胞池[1]。

但這種狀態(tài)并不是一直持續(xù)的。Gregorieff等[11]研究繼續(xù)發(fā)現(xiàn)，在腸道損傷前期，YAP可以短暫激活，但持續(xù)的YAP活性可以清除ISC細(xì)胞，以至于不會出現(xiàn)持續(xù)增殖，從而不會引起腸道異常增生性疾病的發(fā)生發(fā)展。Cheung等[13]也在實驗中發(fā)現(xiàn)，敲除大鼠LAST1/2或激活YAP而誘導(dǎo)的細(xì)胞狀態(tài)可能代表了暫時修復(fù)的細(xì)胞狀態(tài)，他們檢查了YAP形成細(xì)胞類器官的能力，產(chǎn)生了一個結(jié)腸細(xì)胞器，允許誘導(dǎo)表達(dá)YAPS127A，發(fā)現(xiàn)強(qiáng)力霉素誘導(dǎo)48 h YAP表達(dá)會使細(xì)胞器失去單細(xì)胞柱狀組織，阻止它們繼續(xù)生長，4-OHT治療的大鼠LATS1/2cKO結(jié)腸也表現(xiàn)出類似的無法生長或形成三維結(jié)構(gòu)的表型，并且在腹腔注射他莫昔芬和多西環(huán)素誘導(dǎo)的基因敲除小鼠中發(fā)現(xiàn)YAP激活的ISC在10 d內(nèi)被趕出腸隱窩和絨毛，LGR5-CreERT2 Lats1fl/flLats2fl/flRosa26mT/mG小鼠的譜系追蹤同樣顯示在他莫昔芬誘導(dǎo)后2周和1個月，GFP+ISC逐漸丟失，YAP通過TEAD依賴的轉(zhuǎn)錄活性導(dǎo)致干細(xì)胞特性喪失，并且可以在Wnt信號存在的情況下LGR5+抑制Wnt和結(jié)腸干細(xì)胞程序。另外，Li等[14]研究發(fā)現(xiàn)，LATS1/2缺失會導(dǎo)致LGR5+ISC丟失，并且產(chǎn)生嚴(yán)重的腸道生長和分化缺陷，導(dǎo)致大鼠在產(chǎn)后第10天時死亡，LGR5+ISC丟失很可能是由Wnt通路抑制引起的，但單獨去除大鼠LATS1、LATS2在3個月時無明顯的表型，RNAscope分析還顯示，在LATS1/2突變的腸道中，Axin2和LGR5轉(zhuǎn)錄幾乎完全丟失，表明LATS1/2激酶是維持隱窩Wnt通路激活所必需的。一直以來YAP/TAZ均被認(rèn)為充當(dāng)Wnt信號傳導(dǎo)的抑制劑，對Wnt信號傳導(dǎo)的作用似乎是抑制性的。Ayyaz等[1]、Gregorieff等[10]、Yui等[15]利用scRNA-seq闡明了YAP在將結(jié)腸細(xì)胞重新編程為高Klf6表達(dá)的細(xì)胞類型中的作用，該表達(dá)是修復(fù)上皮所特有的，與穩(wěn)態(tài)過程中存在的所有細(xì)胞類型不同，這種狀態(tài)的特征是損傷相關(guān)基因的表達(dá)和低Wnt信號，這證實了早期發(fā)現(xiàn)YAP抑制腸道Wnt信號及LGR5和Axin2表達(dá)的理論[13]。

4 YAP即可作為致癌因子也可作為腫瘤抑制因子參與LGR5+CSC調(diào)控

成人ISC的可塑性和長壽命被認(rèn)為它們更易受到致癌轉(zhuǎn)化的影響，從而成為癌癥的起源，因此已有研究證明，人類LGR5+ISC在生長的癌癥組織中充當(dāng)CSC[16]。CSC的存在一直被認(rèn)為是腫瘤發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移、耐藥的根本原因，而正常組織中的LGR5+ISC已被證明是體內(nèi)致癌突變后腸腺瘤、結(jié)直腸癌(colorectal cancer，CRC)的起源細(xì)胞，并且在CRC腫瘤啟動、進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中，小腫瘤群體LGR5+CSC可以通過促進(jìn)腫瘤生長和轉(zhuǎn)移來驅(qū)動癌癥的啟動和/或進(jìn)展[17-19]。TAZ的mRNA水平常作為大腸癌預(yù)后的指標(biāo)，YAP可以增加體外癌癥干細(xì)胞的數(shù)量，基因敲除YAP/TAZ表達(dá)可以減少癌細(xì)胞遷移、侵襲和腫瘤形成[23]。實驗研究證明，YAPWT小鼠在化學(xué)誘發(fā)的癌細(xì)胞瘤中更易患結(jié)腸炎相關(guān)癌癥(colitis associated carcinoma，CAC)，YAP可以直接與細(xì)胞核中的β-catenin相互作用，并形成YAP/β-catenin/TCF4復(fù)合體，而LGR5和Cyclin D1被確認(rèn)為該復(fù)合物的目標(biāo)基因[20]。

盡管YAP在許多組織中被認(rèn)為是致癌的，但YAP在CRC中的作用仍然具有爭議性，Cheung等[13]研究結(jié)果確立了YAP在成年結(jié)腸中作為腫瘤抑制因子的作用，他們在NSG小鼠的結(jié)腸中注射AKP細(xì)胞器，并在注射后2周在小鼠飲用水中加入多西環(huán)素誘導(dǎo)YAP5SA表達(dá)，組織學(xué)分析表明，腫瘤細(xì)胞在多環(huán)素4 d后呈現(xiàn)不同的形態(tài)，細(xì)胞質(zhì)增大，柱狀形狀丟失，并且LGR5的表達(dá)完全喪失，而這些表達(dá)YAP的細(xì)胞也不是增殖的。不僅如此，YAP5SA表達(dá)會導(dǎo)致患者衍生的CRC有機(jī)蛋白線的生長減少，并伴隨著YAP靶點表達(dá)的增加及ISC和Wnt標(biāo)志物L(fēng)GR5和Axin2的強(qiáng)烈下調(diào)。Cheung等[13]又觀察了腫瘤啟動能力和轉(zhuǎn)移潛力，在6周腫瘤生長的小鼠中用強(qiáng)力霉素誘導(dǎo)YAP表達(dá)2 d，并通過FACS分離EpCAM+細(xì)胞，2 d后實驗結(jié)果表明細(xì)胞核的YAP及其靶點AmotL2增加，ISC和Wnt標(biāo)記LGR5和Axin2減少，并且YAP的激活對已建立的轉(zhuǎn)移性腫瘤的形態(tài)有顯著影響，并伴有明顯且大面積的壞死，另外，家族性腺瘤性息肉(FAP)和結(jié)腸腫瘤生長均需要YAP，在Apcfl/fl和Apcfl/flYapfl/flTazfl/fl小鼠結(jié)腸黏膜中注射表達(dá)CRE重組酶的腺病毒，盡管注射后8周的所有小鼠均出現(xiàn)腫瘤，但這些小鼠的腫瘤負(fù)荷均有所增加，最后他們實驗證實了YAP/TAZ在APC突變結(jié)腸腫瘤中是一種真正的腫瘤抑制因子，而且在這種細(xì)胞背景下，YAP激活作為一種可行的治療策略。Moya等[21]也發(fā)現(xiàn)YAP/TAZ的抑癌作用，他們發(fā)現(xiàn)野生型肝臟中生長的腫瘤細(xì)胞需要YAP和TAZ才能生存，而那些被YAP和TAZ缺乏的肝細(xì)胞包圍的腫瘤細(xì)胞并不依賴于YAP和TAZ，他們發(fā)現(xiàn)YAP和TAZ是通過細(xì)胞競爭機(jī)制來消除腫瘤細(xì)胞，通過將CRE表達(dá)的腺相關(guān)病毒8(AAV-Cre)注射到Y(jié)apfl/fl；Tazfl/fl小鼠中獲得N-Akt腫瘤，腫瘤負(fù)擔(dān)的增加是由于腫瘤細(xì)胞增殖的增加，從Ki67陽性腫瘤細(xì)胞數(shù)量的增加就可以證明，這些數(shù)據(jù)突出了YAP/TAZ在瘤周肝細(xì)胞中的一種意想不到的活性，這種活性非自發(fā)地抑制了腫瘤的生長，并且腫瘤周圍肝細(xì)胞的異位YAP激活足以誘導(dǎo)腫瘤消退，可能是由于觸發(fā)腫瘤細(xì)胞的非凋亡程序性細(xì)胞死亡，這是由BCL2過表達(dá)所導(dǎo)致的。除此之外，在另外一項實驗研究中，乳腺癌細(xì)胞中同樣基因敲除YAP基因能夠抑制細(xì)胞凋亡和遷移，提高細(xì)胞的侵襲能力、促進(jìn)腫瘤生長[22]。這些實驗結(jié)果證明了YAP既可以作為腫瘤啟動子存在，又可以作為腫瘤抑制因子存在而發(fā)揮雙重作用，出現(xiàn)這種結(jié)果的原因，一方面YAP在存在多重致癌突變的情況下拮抗僵硬并抑制Wnt，使小鼠與原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性CRC模型的LGR5+CBC不增殖并誘導(dǎo)腫瘤回歸；另一方面，某些CRC細(xì)胞的生長需要YAP，這一結(jié)論支持YAP作為結(jié)腸內(nèi)癌基因的觀點，然而，YAP的依賴性可能是體外培養(yǎng)的一個特征，并不反映體內(nèi)的生理要求。如YAP的缺失對正常腸道而言未影響體內(nèi)穩(wěn)態(tài)，腸道器官的體外生長依賴于YAP，這些結(jié)果可能反映YAP在有絲分裂重組中的作用，而不是腫瘤生長本身的作用。此外，這些實驗是在發(fā)育性YAP缺失的背景下進(jìn)行的，并且可能不能說明在成人突變中將會發(fā)生的事情。因此，使用急性、成人和結(jié)腸特異性的YAP操作，代表了研究YAP在腺瘤生長中作用的最相關(guān)模型。此外，Cheung等[13]通過實驗發(fā)現(xiàn)，誘變劑的作用出現(xiàn)散發(fā)性結(jié)腸腫瘤不需要YAP，排除了YAP在腫瘤起始中的作用。

LGR5+CSC具有高度可塑性和表型異質(zhì)性的特點[16]。一直以來，LGR5+CSC均被認(rèn)為是腫瘤轉(zhuǎn)移性疾病的種子，但最近的研究表明，大多數(shù)的CRC轉(zhuǎn)移灶為LGR5-癌細(xì)胞。Fumagalli等選擇白喉毒素(DT)對LGR5+CSC進(jìn)行選擇性消融，他從原發(fā)性腫瘤1 000多個遷移細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)其中大多數(shù)是LGR5-癌細(xì)胞，也就是說CRC轉(zhuǎn)移灶大多數(shù)是由LGR5-細(xì)胞開始傳播的[24]。有研究[12, 25-26]也證明，消融小鼠CRC中LGR5+CSC可抑制原發(fā)性腫瘤的生長但不會消退，消融CRC中LGR5+CSC會引起其他已分化腫瘤細(xì)胞的代償增殖，去分化恢復(fù)干細(xì)胞表型，此時腫瘤是由LGR5-細(xì)胞來維持，而這一切可能與LGR5-癌細(xì)胞的可塑性及YAP促進(jìn)細(xì)胞去分化調(diào)節(jié)作用有關(guān)，而且這種可塑性可以通過HGF和FGF等微環(huán)境因素進(jìn)一步增強(qiáng)，并為驅(qū)動癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移做好準(zhǔn)備。YAP/TAZ除了具有促進(jìn)癌細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞去分化的作用，在基因組穩(wěn)定性、代謝重編程、腫瘤免疫等方面還發(fā)揮著重要作用。在腫瘤形成機(jī)制中，研究發(fā)現(xiàn)，YAP可以促進(jìn)細(xì)胞對葡萄糖等營養(yǎng)物質(zhì)吸收、分解、代謝，從而滿足癌細(xì)胞快速生長和增殖對于ATP等能量的需求，并且YAP激活可以促進(jìn)基因組不穩(wěn)定性從而推動腫瘤發(fā)生發(fā)展[26-27]。除此之外，慢性炎癥的反復(fù)刺激易引起YAP過度激活，YAP活化誘發(fā)骨髓源抑制細(xì)胞(MDSCs)和腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)的兩極分化和募集及炎癥因子的分泌在腫瘤起始和發(fā)展中的機(jī)制也非常重要[28-29]。Zhou等[30]通過特異性敲除YAP的實驗發(fā)現(xiàn)，YAP可以通過調(diào)控巨噬細(xì)胞極化，抑制M2型巨噬細(xì)胞極化，促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M1型極化及產(chǎn)生促炎炎癥因子IL-6，YAP cKO小鼠也能促進(jìn)腸道部位抗菌肽的產(chǎn)生進(jìn)而導(dǎo)致腸道菌群穩(wěn)態(tài)失衡，加重炎癥性腸病。這與前面的研究有所不同，表明YAP在不同類型細(xì)胞中的多種功能是值得注意的。另外，由于YAP活性的精確調(diào)控存在難度，評價YAP/TAZ能否以安全的方式得到利用一直是科學(xué)家目前想要解決的難題，而相應(yīng)的就要發(fā)揮YAP在腸道再生與腫瘤之間的藥物調(diào)控潛力[10]。

5 臨床價值與治療前景

目前正在探索幾個創(chuàng)新方案，以治療性地針對CSC，包括抗體-藥物結(jié)合，針對靜默的CSC，并抑制CSC相關(guān)的途徑。然而正如前面總結(jié)的，不同的機(jī)制可能導(dǎo)致治療阻力，因此，在這方面可能需要聯(lián)合療法。Hippo-YAP信號通路已成為靶向、化療和潛在免疫治療耐藥性的關(guān)鍵，YAP和TAZ也被認(rèn)為是癌癥治療的有吸引力的靶點。研究者們已進(jìn)行了多種嘗試來評估Hippo-YAP調(diào)節(jié)藥物在這些情況下的治療潛力，如以小分子靶向Hippo途徑刺激YAP的核積累來促進(jìn)腸道修復(fù)，Huang等[39]發(fā)現(xiàn)，靶向內(nèi)皮細(xì)胞Gasdermin D誘導(dǎo)線粒體DNA(mtDNA)釋放到內(nèi)皮細(xì)胞胞漿中，通過DNA傳感器cGAS識別mtDNA，生成第二信使cGAMP激活的cGAS-YAP信號通路可作為炎癥損傷后內(nèi)皮功能恢復(fù)的潛在策略。亦或是尋找一種夠?qū)AP和TAZ封存在細(xì)胞質(zhì)中的化合物如他汀類藥物，他汀類藥物能夠?qū)AP和TAZ封存在細(xì)胞質(zhì)中，并且效果最顯著，大量證據(jù)表明他汀類藥物具有腫瘤抑制作用，但臨床研究表明這類藥物不適合作為抑制劑使用[31, 40]。Chen等[32]實驗研究發(fā)現(xiàn)，miR-375在各種癌癥中充當(dāng)腫瘤抑制劑，YAP是miR-375的功能目標(biāo)基因，而miR-375又作為METTL14的下游目標(biāo)，并且兩者呈正相關(guān)，MELLT14在CRC細(xì)胞核組織中表達(dá)量低，在正常細(xì)胞組織中表達(dá)量高，敲低MELLT14后m6A的水平明顯降低，提示兩者也呈正相關(guān)，上調(diào)MELLT14后可抑制CCK-8和EdU檢測中CRC細(xì)胞增殖，在遷移和侵襲實驗中進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)上調(diào)的METTL14抑制了CRC細(xì)胞遷移、侵襲，并且以依賴m6A的方式通過miR-375/YAP1和miR-375/SP1通路抑制了CRC細(xì)胞生長。Mohamed等[29]研究發(fā)現(xiàn)，miR-363通過直接針對LATS2 mRNA產(chǎn)生抗藥性，進(jìn)而激活YAP。然而由于越來越多的文獻(xiàn)涉及YAP/TAZ激活對靶向療法、化療、放療及潛在的免疫療法的抵抗力，升高的YAP/TAZ水平有助于抵抗化療及對靶向治療的獲得性耐藥性，而抑制YAP/TEAD和針對這些途徑的靶向治療的組合方案將可能克服內(nèi)在和后天的耐藥性。VGLL就是一種廣為人知的YAP/TEAD相互作用抑制劑，VGLL可以抑制胃癌細(xì)胞系的癌干細(xì)胞相關(guān)特性，并抑制異種移植模型中的腫瘤生長[33]。Verteporfin(VP)是黃斑變性影射治療中的臨床光敏劑，它也可以消除YAP/TEAD的相互作用。Vigneswaran等[34]研究發(fā)現(xiàn)，YAP/TAZ-TEAD可以直接調(diào)節(jié)SOX2、C-MYC和EGFR本身的轉(zhuǎn)錄，以創(chuàng)建一個向前反饋循環(huán)并推動人類膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM)細(xì)胞的生存和增殖，而VP是YAP/TAZ-TEAD介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄的干擾劑，可以誘導(dǎo)EGFR放大/突變GBM細(xì)胞的凋亡，抑制YAP誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄靶點EGFR表達(dá)。最近還有研究發(fā)現(xiàn)，BET抑制劑作為臨床抗癌治療的潛力，據(jù)報道BET可以阻止YAP/TAZ介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄，并且可以克服YAP/TAZ引起的耐藥性[31, 35]。另外，Kurppa等[38]最近開發(fā)出一種新型的共價TEAD抑制劑MYF-01-37、MYF-01-37未表現(xiàn)出單劑毒性的特點，并且使得因EGFR/MEK抑制劑處理進(jìn)入休眠的細(xì)胞重新凋亡，他們發(fā)現(xiàn)通過提高靶向療法的初始療效最終可能延長癌癥患者的治療反應(yīng)。

目前LGR5靶向療法仍大多處于起步階段，Cao等[36]在體外器官啟動和活體腫瘤形成的實驗中發(fā)現(xiàn)，LGR5消融與5-FU化療的結(jié)合效果較比與sorafenib效果有所提高，但LGR5消融與5-FU化療結(jié)合也會導(dǎo)致小鼠器官抗肝癌活性增強(qiáng)，然而，LGR5消融與sorafenib的結(jié)合并未產(chǎn)生增強(qiáng)的抗腫瘤活性，這可能與sorafenib在觸發(fā)LGR5+CSC池中的溫和效果有關(guān)。另外，LGR5細(xì)胞在腫瘤中的存在可能是動態(tài)的，觀察到不同原發(fā)性肝腫瘤的百分比差異很大，而同位素腫瘤通常含有少于1%的LGR5細(xì)胞，而在CRC的晚期與早期相比，LGR5細(xì)胞較少，一個推測性的解釋可能是腫瘤來自LGR5陽性干細(xì)胞，但這些細(xì)胞在腫瘤進(jìn)展過程中被抑制[38]。另外，Hippo和Wnt信號通路之間的串?dāng)_也可以作為一種潛在的治療窗口，用于開發(fā)CRC的治療，將細(xì)胞重新編程到再生狀態(tài)也可以作為一種新的治療方法加以利用。由于提高的再生能力和致癌潛力均與YAP激活相關(guān)，維持其中的穩(wěn)態(tài)平衡就顯得尤為重要，因此，在臨床應(yīng)用Hippo/YAP調(diào)節(jié)劑之前應(yīng)仔細(xì)評估藥理作用的持續(xù)時間和可逆性。

6 結(jié)語與展望

盡管LGR5作為Wnt/β-catenin信號通路靶基因在干細(xì)胞中的作用達(dá)成了普遍共識，但具體機(jī)制仍然具有爭議性。越來越多的研究證明，YAP依賴其他信號通路參與LGR5+ISC重編程再生腸上皮的程序，YAP活性的調(diào)控在其中發(fā)揮著重要作用，由于其活性并不是持續(xù)保持的，并且持續(xù)的高活性YAP可以清除ISC以維持腸道正常穩(wěn)態(tài)，這對于整個腸道健康而言具有重要意義。雖然目前關(guān)于這方面的研究并不多，許多關(guān)于YAP與Wnt信號通路之間的報道也是互相矛盾的，本文僅從其中一方面闡述其中機(jī)制，并不能完全闡明腸上皮再生的機(jī)制，但不可否認(rèn)其在調(diào)控腸上皮再生中的作用。許多研究證明，YAP與LGR5兩者表達(dá)與腫瘤較差的預(yù)后高度相關(guān)，YAP在腸道腫瘤生長中的雙向調(diào)控作用一直受到廣泛關(guān)注，但關(guān)于YAP在腫瘤起始、發(fā)展中的作用仍然有待商榷。本文從干細(xì)胞的角度闡述可能原因，這種雙向調(diào)控的具體作用機(jī)制和作用方式與細(xì)胞組織和腫瘤類型相關(guān)，YAP的亞細(xì)胞定位及調(diào)控下游不同靶基因也可能決定了其作用及功能，以及現(xiàn)在動物實驗方案可能并不能達(dá)到與在體實驗同樣的效果這些因素造成實驗結(jié)果有所差別。細(xì)胞可塑性為腸上皮再生提供潛在治療可能，但人類癌細(xì)胞功能可塑性為CRC和其他癌癥的治療帶來挑戰(zhàn)，由于這些研究大多數(shù)是在體外進(jìn)行的，對生長中的腸組織和癌癥組織可塑性的功能探索也因為缺乏追蹤系統(tǒng)而受到阻礙，單一的LGR5+CSC靶向治療是否足以根除癌癥仍然存在爭議，因此，抑制YAP/TEAD和靶向治療的組合方案如今受到越來越多的關(guān)注。基因特異性方法表明靶向LGR5是暫時有效的，但以LGR5為靶點的基因療法仍然很可能成為治療CRC的有效手段，已經(jīng)有研究[16]顯示LGR5可能與腫瘤細(xì)胞侵襲和耐藥有關(guān)，未來研究YAP與LGR5+ISC、LGR5+CSC在腸道再生與腫瘤中的機(jī)制及治療前景具有非常重要的價值。