蘇文娟， 孔 偉， 張寶良

(甘肅省家畜繁育改良管理站，甘肅 武威 733000)

牛病毒性腹瀉(BVD)，亦被稱為牛粘膜病，被歸類(lèi)為一種接觸型傳染病，且傳播力強(qiáng)、傳播途徑廣泛。本病主要是由牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)，臨床主要的特征可以表現(xiàn)為體溫升高明顯、萎靡不振、食欲減退甚至拒食、逐漸停止反芻行為、粘膜充血腫脹、產(chǎn)奶量受到嚴(yán)重影響等典型癥狀。本研究通過(guò)對(duì)甘肅武威地區(qū)某牛場(chǎng)中13份樣本進(jìn)行血清學(xué)和基因?qū)用娴臋z測(cè)，了解該養(yǎng)殖場(chǎng)BVD發(fā)病的情況。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 病料來(lái)源 甘肅武威地區(qū)某牛場(chǎng)中腹瀉病牛13只，采集靜脈血2 mL，每只牛糞便20 g。

1.1.2 樣品采集 選擇有明顯腹瀉的病牛，采集靜脈血2 mL，每只牛糞便20 g。

1.1.3 試驗(yàn)材料 愛(ài)德士生產(chǎn)的牛病毒性腹瀉抗原試劑盒，天根RNA提取試劑盒，Takara生產(chǎn)的反轉(zhuǎn)錄試劑盒和擴(kuò)增試劑盒。

1.2 方 法

1.2.1 血清學(xué)檢測(cè) 取病牛血液進(jìn)行3 000 r/min離心5 min，取血清進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)步驟參考愛(ài)德士牛病毒性腹瀉抗原檢測(cè)試劑盒說(shuō)明說(shuō)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)分析判斷陰陽(yáng)性。

1.2.2 PCR鑒定 取糞便5 g進(jìn)行反復(fù)凍融，過(guò)濾后進(jìn)行提取，RNA提取方法參考天根RNA提取試劑盒使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，反轉(zhuǎn)錄以及PCR參考Takara試劑盒使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，引物采用BVDV 5′UTR引物進(jìn)行擴(kuò)增(F：5′-CCTAGCCAT-GCCCTTAGTAGGACT-3′；R：5′-GGAACTCCA-TGTGCCATGTACA-3′)[1]，引物在上海生工進(jìn)行合成。

2 結(jié)果

2.1 血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果

使用愛(ài)德士牛病毒性腹瀉抗原檢測(cè)試劑盒檢測(cè)血清顯示，13份樣本中有8份樣本血清學(xué)檢測(cè)為陽(yáng)性，5份樣本血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果為陰性。本次檢測(cè)的陽(yáng)性率為61.54%。

2.2 PCR鑒定結(jié)果

對(duì)13份菌株進(jìn)行RNA提取，反轉(zhuǎn)率，并使用BVDV 5′UTR引物進(jìn)行擴(kuò)增，結(jié)果顯示其中8份樣本可以擴(kuò)增大小為267 bp的片段，如圖1，本次檢測(cè)的PCR鑒定結(jié)果與血清學(xué)結(jié)果相符。

注：M為DL-2 000 Marker；1～13號(hào)為樣本。

3 討 論

在1980年以后我國(guó)首次發(fā)現(xiàn)牛病毒性腹瀉病，在隨后的幾十年里，多省也陸續(xù)有該病的報(bào)道[2]。2016年曲萍等對(duì)我國(guó)西北5個(gè)省，自治區(qū)進(jìn)行了BVD流行情況的調(diào)查，結(jié)果顯示不同的養(yǎng)殖方式?；疾「腥镜目贵w陽(yáng)性率在31%～100%不等，散養(yǎng)的牛感染情況明顯高于舍飼或者半舍飼的[3]。2018年閆曉玲等對(duì)張掖地區(qū)的BVD感染情況進(jìn)行調(diào)查結(jié)果顯示檢測(cè)到的樣本感染陽(yáng)性率為36.5%[4]。2018年Bettina等人對(duì)世界BVD的流行情況進(jìn)行調(diào)查，調(diào)查的結(jié)果顯示我國(guó)畜群水平的BVD抗體的陽(yáng)性情況為20%～40%[5]。2017—2020年王衡等對(duì)武威地區(qū)的牛糞便進(jìn)行了BVD的PCR檢測(cè)，鑒定結(jié)果為12.5%～19.7%[6]。本次檢測(cè)的抗原陽(yáng)性率高達(dá)61.54%，陽(yáng)性率相對(duì)較高，一方面可能由于本養(yǎng)殖場(chǎng)正處在BVD的急性發(fā)病期，且采集的樣本均為有腹瀉癥狀的病牛，所以檢測(cè)到的陽(yáng)性率較高，另一方面本次檢測(cè)的樣本量相對(duì)較少。后續(xù)筆者還會(huì)對(duì)武威地區(qū)該養(yǎng)殖場(chǎng)以及其他養(yǎng)殖場(chǎng)、散戶的牛病毒性腹瀉流行情況進(jìn)行進(jìn)一步研究，擴(kuò)大數(shù)據(jù)量，更好地為牛病的防控情況做參考。

隨著B(niǎo)VD在我國(guó)的流行越來(lái)越廣泛，該病嚴(yán)重困擾著廣大養(yǎng)殖戶，當(dāng)代的養(yǎng)殖業(yè)養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)該采取科學(xué)的手段，有效避免該病的發(fā)生。首先要加強(qiáng)對(duì)本養(yǎng)殖場(chǎng)牛的飼養(yǎng)管理，堅(jiān)持自繁自養(yǎng)的模式，不從疫區(qū)引進(jìn)牛只，新購(gòu)買(mǎi)的牛必須要按照相關(guān)的規(guī)定做好隔離工作。第二，淘汰患病的牛，淘汰PI感染的牛，降低種群的陽(yáng)性率，降低發(fā)病情況，減少傳染源。第三，避免病毒的傳播，對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)做好消毒工作，運(yùn)輸用具、水盆、食槽、圈舍進(jìn)行徹底的消毒。第四，按照相關(guān)的規(guī)定，定期接種疫苗，使群體具有較強(qiáng)的抵抗力，且在平時(shí)的飼養(yǎng)中注重動(dòng)物日糧搭配，增加動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)情況。

養(yǎng)殖業(yè)良好的發(fā)展在于我們每一個(gè)從業(yè)人員的不斷努力，在過(guò)去的幾十年我們?cè)谛竽翗I(yè)，養(yǎng)牛業(yè)取得了很大的成績(jī)，在量增長(zhǎng)的同時(shí)，發(fā)生疾病的可能也就同時(shí)增多了，如何能夠更好地讓養(yǎng)殖業(yè)能夠良性的發(fā)是我們每一個(gè)從業(yè)人員值得重視的問(wèn)題。為了更好的解決養(yǎng)殖業(yè)疾病的困擾我們要對(duì)目前的一些常見(jiàn)病，如消化系統(tǒng)疾病，營(yíng)養(yǎng)代謝疾病，呼吸系統(tǒng)疾病都應(yīng)該進(jìn)行更加深刻地了解，本研究針對(duì)牛病毒性腹瀉病，一種十分常見(jiàn)的消化系統(tǒng)疾病就行了調(diào)查，調(diào)查結(jié)果顯示被檢測(cè)的13份樣本有8份樣本血清學(xué)檢測(cè)和PCR鑒定檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性，陽(yáng)性率高達(dá)61.54%，這也提示了該養(yǎng)殖場(chǎng)牛病毒性腹瀉的發(fā)病率非常高，需要進(jìn)行一些適當(dāng)?shù)拇胧﹣?lái)對(duì)牛群進(jìn)行凈化和治療，降低自身的經(jīng)濟(jì)損失。同時(shí)本研究的調(diào)查結(jié)果也可以作為一手?jǐn)?shù)據(jù)來(lái)為甘肅武威地區(qū)牛病毒性腹瀉的流行情況以及疾病綜合防控情況進(jìn)行參考。