于潔瓊 彭思遠 凌茜文 黃振輝 褚夫江

摘 要 目的：研究參苓白術(shù)散對伴焦慮腹瀉型腸易激綜合征（IBS-D）模型小鼠的改善作用，并從腸道微生態(tài)角度初步闡明其作用機制。方法：將C57 BL/6小鼠隨機分為空白對照組、模型組、參苓白術(shù)散組（3.6 g/kg），每組8只。除空白對照組外，模型組和參苓白術(shù)散組小鼠以皮下注射皮質(zhì)酮聯(lián)合灌胃番瀉葉水煎液及慢性束縛建立伴焦慮IBS-D模型。造模成功后，空白對照組、模型組小鼠灌胃給予生理鹽水，參苓白術(shù)散組灌胃給予相應(yīng)藥物，連續(xù)給藥4周。末次給藥后，檢測各組小鼠的稀便率、腹瀉指數(shù)、體質(zhì)量、糖水偏好百分比、穿過曠場中心區(qū)域次數(shù)、最小疼痛閾值和海馬組織中內(nèi)源性腦神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）及血清中5-羥色氨（5-HT）的水平;提取各組小鼠盲腸內(nèi)容物進行微生物DNA提取并測序，采用Alpha、Beta多樣性分析法分析腸道微生物豐度及多樣性。結(jié)果：與空白對照組比較，模型組小鼠體質(zhì)量、糖水偏好百分比、穿過曠場中心區(qū)域次數(shù)、最小疼痛閾值、海馬組織中BDNF水平和腸道中厚壁菌門微生物的相對豐度及Lachnospiraceae_NK4A136_group屬微生物的相對豐度均顯著降低（P<0.05）;稀便率、腹瀉指數(shù)、血清中5-HT水平和疣微菌門微生物的相對豐度、艾克曼菌屬微生物的相對豐度均顯著升高（P<0.05）;腸道微生物種類差異較大。與模型組比較，參苓白術(shù)散組小鼠體質(zhì)量、糖水偏好百分比、穿中心區(qū)域次數(shù)、最小疼痛閾值、海馬組織中BDNF水平和腸道中厚壁菌門微生物的相對豐度、Lachnospiraceae_NK4A136_group屬微生物的相對豐度均顯著升高（P<0.05或P<0.01）;稀便率、腹瀉指數(shù)、血清中5-HT水平、疣微菌門微生物的相對豐度、艾克曼菌屬微生物的相對豐度均顯著降低（P<0.05）;腸道微生物種類差異較大。結(jié)論：參苓白術(shù)散可改善伴焦慮IBS-D模型小鼠的腹瀉和焦慮行為，升高其海馬組織中BDNF水平，降低血清中5-HT水平;其作用機制可能與降低腸道微生物疣微菌門、艾克曼菌屬微生物的相對豐度，升高厚壁菌門、Lachnospiraceae_ NK4A136_group屬微生物的相對豐度有關(guān)。

關(guān)鍵詞 參苓白術(shù)散;腹瀉型腸易激綜合征;焦慮;微生物;腸道

中圖分類號 R285.5 文獻標(biāo)志碼 A 文章編號 1001-0408（2021）03-0314-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.03.11

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To study the improvement effect of Shenling baizhu powder on irritable bowel syndrome with diarrhea （IBS-D） model mice with anxiety， and to elucidate its mechanism from the point of view of intestinal microecology. METHODS： C57 BL/6 mice were randomly divided into blank control group， model group， Shenling baizhu powder group （3.6? ?g/kg）， with 8 mice in each group. Except for blank control group， IBS-D model with anxiety was established in model group and Shenling baizhu powder group by giving corticosterone subcutaneously combined with intragastric administration of Folium Sennae decoction and chronic restraint treatment. After modeling， blank control group and model group were given intragastric administration of normal saline， and Shenling baizhu powder group was given relevant medicine intragastrically， for consecutive 4 weeks. After last medication， loose stools rate， diarrhea index， body weight， sugar water preference percentage， the times of crosssing open field center area and minimum pain threshold as well as the levels of BDNF in hippocampal tissue and 5-HT in serum were detected in each group. The cecal contents of mice in each group were extracted for microbial DNA extraction and sequencing; the abundance and diversity of intestinal microorganisms were analyzed by Alpha and Beta diversity analysis. RESULTS： Compared with blank control group， body weight， sugar water preference percentage， the times of crossing open field center area and minimum pain threshold as well as the levels of BDNF in hippocampal tissue， relative abundance of Firmicutes phylum microorganism in intestine， relative abundance of Lachnospiraceae_NK4A136_group genus microorganism were decreased significantly （P<0.05）; loose stools rate， diarrhea index， serum level of 5-HT， relative abundance of Verrucomicrobia phylum microorganism and relative abundance of Ackermann phylum microorganism were increased significantly （P<0.05）， and there were great differences in the types of intestinal microorganisms. Compared with model group， body weight， sugar water preference percentage， the times of crossing open field center area， minimum pain threshold， BDNF level of hippocampus， relative abundance of Firmicutes phylum microorganism， relative abundance of Lachnospiraceae_NK4A136_group genus microorganism were increased significantly （P<0.05 or P<0.01）; loose stools rate， diarrhea index， serum level of 5-HT， relative abundance of Verrucomicrobia phylum microorganism and relative abundance of Ackermann phylum microorganism were decreased significantly （P<0.05）， and and there were great differences in the types of intestinal microorganisms. CONCLUSION： Shenling baizhu powder can improve the diarrhea and anxiety behavior of IBS-D model mice with anxiety， increase the level of BDNF in hippocampus and decrease serum level of 5-HT. Its mechanism may be related to decreasing relative abundance of Verrucomicrobia phylum microorganism and Ackermann phylum microorganism， increasing the relative abundance of Firmicutes phylum and Lachnospiraceae_NK4A136_group genus microorganism.

KEYWORDS? ?Shenling baizhu powder; Irritable bowel syndrome with diarrhea; Anxiety; Microorganism; Intestine

腹瀉型腸易激綜合征（Irritable bowel syndrome with diarrhea，IBS-D）屬于中醫(yī)學(xué)“泄瀉”“腹痛”的范疇[1]，具有病情復(fù)雜、遷延難愈的特點[2]。IBS-D患者由于病情反復(fù)，常伴有焦慮、抑郁等精神癥狀，其中IBS-D患者焦慮的共病率高達80%，且存在焦慮的患者也更容易發(fā)生IBS-D[3]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，IBS-D的發(fā)病與腦腸互動功能紊亂密切相關(guān)，而腸道微生態(tài)是腦腸互動的關(guān)鍵紐帶;一旦腸道微生態(tài)失調(diào)可引發(fā)腸內(nèi)敏感性增加，促使腦腸互動異常并最終誘發(fā)IBS-D[4-5]。臨床研究表明，IBS-D患者血清中5-羥色胺（5-HT）及海馬組織中內(nèi)源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）水平的異常增高與內(nèi)臟敏感性具有密切關(guān)系[6-9]，其中BDNF水平升高還可造成慢性疼痛、誘導(dǎo)焦慮和抑郁[10-11]。

參苓白術(shù)散來源于《太平惠民和劑局方》，由人參、茯苓、白術(shù)、白扁豆、山藥、蓮子、砂仁、薏苡仁、桔梗和炙甘草等組成[12]，臨床上常用于治療慢性腹瀉、消化性潰瘍、IBS-D、功能性消化不良、小兒厭食癥等消化系統(tǒng)疾病[13]，具有提高免疫力、調(diào)節(jié)腸道菌群、影響胃腸道分泌及吸收、修復(fù)黏膜等功能[14]。有研究表明，單用參苓白術(shù)散對IBS-D患者的腹瀉情況具有明顯的改善作用，且作用優(yōu)于單用蒙脫石散[15]。另有研究者將參苓白術(shù)散與雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊聯(lián)用以治療IBS-D，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩者聯(lián)合可更好地改善IBS-D的臨床表現(xiàn)，并推測雙歧桿菌對腸道菌群的調(diào)節(jié)作用可能是增強參苓白術(shù)散改善IBS-D作用的原因之一[16-17]。目前，針對參苓白術(shù)散改善IBS-D患者焦慮癥狀的研究較少，僅在個別臨床病例觀察中發(fā)現(xiàn)其具有改善IBS患者焦慮和抑郁的現(xiàn)象[18]，因此其具體作用及相關(guān)機制尚不明確。

基于此，本課題組擬以皮下注射皮質(zhì)酮聯(lián)合灌胃番瀉葉水煎液及慢性束縛建立小鼠伴焦慮IBS-D模型，通過檢測小鼠糖水偏好百分比、曠場行為學(xué)、最小疼痛閾值、海馬組織中BDNF和血清中5-HT水平，并基于腸道微生態(tài)角度研究參苓白術(shù)散對伴焦慮IBS-D模型小鼠的改善作用及機制，以期為臨床用藥提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用的主要儀器有：5452型離心機（德國Eppendorf公司）、BSA123S-CW型電子分析天平（德國Sartorius公司）、JC-1型超凈工作臺（蘇州凈化設(shè)備有限公司）、DHG-9055A型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）、MDF-U52V型超低溫冰箱（日本SANYO公司）、DW-26L252型冰箱（青島海爾股份有限公司）、FD50A型高壓蒸汽滅菌鍋（廈門致微儀器有限公司）、Model680型酶標(biāo)儀（美國Bio-Rad公司）、ZH-ZFT型曠場儀（安徽正華生物科技有限公司）。

1.2 主要藥品與試劑

本研究所用的主要藥品與試劑有：番瀉葉[北京同仁堂（毫州）飲片有限責(zé)任公司，批號20160274]，參苓白術(shù)散（北京同仁堂制藥有限公司，批號Z11020564，規(guī)格6 g×10袋），皮質(zhì)酮粉劑（上海邁瑞爾化學(xué)技術(shù)有限公司，批號68787107，規(guī)格500 mg），5-HT、BDNF酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司，批號20191204A、20191504A），磷酸鹽緩沖液（美國Boster公司，批號11D16B30）;水為純凈水。

1.3 動物

本研究所用的動物為SPF級雄性C57 BL/6小鼠，體質(zhì)量為19～21 g，購于廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心，動物生產(chǎn)許可證號為SCXK（滬）2017-0005。所有小鼠飼養(yǎng)于廣東藥科大學(xué)實驗動物中心，均自由攝食、飲水，實驗過程遵守《廣東藥科大學(xué)實驗動物管理條例》，實驗方案經(jīng)廣東藥科大學(xué)動物保護和使用委員會批準(zhǔn)。小鼠均適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后進行后續(xù)實驗。

2 方法

2.1 分組、造模與給藥

參考文獻[19]，取100 g番瀉葉，加沸水400 mL浸泡0.5 h后，煮沸3 min，待溶液冷卻后，用紗布過濾，取濾液于75 ℃水浴中蒸發(fā)濃縮，制成質(zhì)量濃度為1 g/mL的番瀉葉水煎濃縮液（以生藥量計，下同），并于4 ℃保存?zhèn)溆?，臨用時將其用水稀釋至0.3 g/mL。

將小鼠分為空白對照組（生理鹽水）、模型組（生理鹽水）、參苓白術(shù)散組（3.6 g/kg，劑量參考本課題組前期預(yù)實驗結(jié)果設(shè)置），每組8只。除空白對照組外，模型組和參苓白術(shù)散組小鼠參考文獻[20]造模。具體操作如下：小鼠每天皮下注射皮質(zhì)酮（20 mg/kg），連續(xù)4周，于第2周起，每天禁食不禁水12 h后，灌胃給予番瀉葉水煎液，然后使用膠帶束縛其四肢、胸部及肩部1 h;每天皮下注射、灌胃及束縛各1次，持續(xù)操作3周。當(dāng)小鼠出現(xiàn)明顯精神不振、喜臥惡動并伴有腹瀉的情況時，則表明造模成功。造模成功后，各組小鼠灌胃給予相應(yīng)藥物或生理鹽水，連續(xù)給藥4周。

2.2 腹瀉情況和體質(zhì)量測定

末次給藥后，采用濾紙印跡法[21]測定并記錄各組小鼠6 h內(nèi)排便的總數(shù)以及稀便數(shù)（根據(jù)濾紙上有無污跡判斷），并計算稀便率（稀便率=稀便數(shù)/糞便總數(shù)×100%）。根據(jù)濾紙上糞便污跡直徑對稀便進行分級（1級為污跡直徑<1 cm;2級為污跡直徑1～<2 cm;3級為污跡直徑2～<3 cm;4級為污跡直徑3～<4 cm;5 級為污跡直徑4～<5 cm）并計算腹瀉指數(shù)（腹瀉指數(shù)=稀便率×稀便分級）[21]。同時，測量各組小鼠的體質(zhì)量。

2.3 糖水偏好百分比的測定

末次給藥后，將各組小鼠禁水不禁食24 h，然后單籠放置進行糖水偏好實驗。每籠小鼠同時供應(yīng)2%蔗糖水溶液和水，喂養(yǎng)24 h后，測定此時糖水偏好百分比[糖水偏好百分比=蔗糖水溶液消耗量/（蔗糖水溶液消耗量+水消耗量）×100%]。

2.4 曠場行為學(xué)實驗

參考文獻[22]，于糖水偏好實驗后，將各組小鼠在實驗環(huán)境中放置10 min，然后放置在曠場儀的中間，記錄小鼠5 min內(nèi)穿過曠場中心區(qū)域次數(shù)。

2.5 最小疼痛閾值的檢測

曠場行為學(xué)實驗后，各組小鼠禁食、禁水24 h，然后采用乙醚麻醉，再將涂有石蠟油且?guī)饽业? F導(dǎo)尿管（導(dǎo)尿管連接1 mL注射器用于向氣囊內(nèi)注水）經(jīng)肛門插入，使氣囊末端距離肛門1 cm，并將其固定在小鼠的尾根部。然后將小鼠放入自制的透明塑料桶籠內(nèi)（20 cm×6 cm×6 cm），以限制小鼠只能前后運動不能轉(zhuǎn)身。待小鼠完全蘇醒后先適應(yīng)環(huán)境15 min，再記錄引起小鼠疼痛的最小注水量，即最小疼痛閾值（以小鼠腹背部肌肉出現(xiàn)強烈收縮或腹部抬離地面作為其最小疼痛閾值表現(xiàn)[23]），以評價其內(nèi)臟敏感性（最小疼痛閾值越大，敏感性越強）。各組小鼠重復(fù)測定3次，每次持續(xù)30 s，間隔5 min。

2.6 海馬組織中BDNF和血清中5-HT水平的檢測

最小疼痛閾值檢測后，對各組小鼠吸入過量乙醚處死，收集其海馬組織及腹主動脈血。將各組小鼠腹主動脈血以3 000 r/min離心15 min后，取上清液作為待測血清樣本;稱取各組小鼠海馬組織10 mg，于冰上充分研磨后，以3 000 r/min離心15 min，取上清液作為海馬組織待測樣本。按照ELISA試劑盒說明書方法操作，采用酶標(biāo)儀于450 nm波長處檢測海馬組織中BDNF和血清中5-HT的水平。

2.7 腸道微生物DNA的提取、測序及豐度和多樣性分析

各組小鼠收集海馬組織后，分別取3只置于無菌條件下，提取其盲腸內(nèi)容物樣品，委托北京百邁客生物科技有限公司進行DNA提取及16S rDNA高通量測序，并統(tǒng)計數(shù)據(jù)處理各階段樣品序列條目;分析各組小鼠腸道微生物豐度和多樣性的差異，使用USEARCH 10.0軟件在相似性97%（默認）的水平上對序列進行聚類[24]，默認以測序所有序列數(shù)的0.005%作為閾值過濾OTUs。利用Alpha多樣性分析法[25]分析各組小鼠盲腸內(nèi)容物的稀釋曲線（測序條數(shù)作為橫坐標(biāo)，并基于此測序條數(shù)經(jīng)OTU聚類后得到OTU數(shù)量作為縱坐標(biāo)）、Shannon指數(shù)曲線（測序條數(shù)作為橫坐標(biāo)，Shannon指數(shù)作為縱坐標(biāo)）、等級豐度曲線（OTU數(shù)量作為橫坐標(biāo)，相對豐度作為縱坐標(biāo);若曲線越平滑下降則表明樣本的多樣性高，曲線越陡然下降則表明樣本的多樣性低）?；赒IIME 22020.6軟件，利用Beta多樣性分析法[25]分析各組小鼠盲腸內(nèi)容物中腸道微生物多樣性是否存在差異;在每組小鼠盲腸內(nèi)容物樣品經(jīng)OTU聚類后的每個OTU中選取代表序列與微生物參考數(shù)據(jù)庫[26-30]進行比對，得到每個OTU對應(yīng)的物種分類信息，并找出各組樣品中的共有微生物，進而在門（Phylum）、屬（Genus）水平上統(tǒng)計各樣品微生物群落組成。利用QIIME 22020.6軟件生成不同水平上的物種豐度表，進行物種多樣性分析（為使效果更好，筆者只選取相對豐度水平排前10位的物種，并將其它物種合并為“others”進行展示）。

2.8 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以x±s表示;組間兩兩比較，采用單因素方差分析。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 參苓白術(shù)散對伴焦慮IBS-D模型小鼠腹瀉情況和體質(zhì)量的影響

與空白對照組比較，模型組小鼠體質(zhì)量顯著降低（P<0.05），稀便率及腹瀉指數(shù)顯著升高（P<0.05）;與模型組比較，參苓白術(shù)散組小鼠體質(zhì)量顯著升高（P<0.05），稀便率及腹瀉指數(shù)均顯著下降（P<0.05），詳見表1。

3.2 參苓白術(shù)散對伴焦慮IBS-D模型小鼠糖水偏好百分比、穿過曠場中心區(qū)域次數(shù)和最小疼痛閾值的影響

與空白對照組比較，模型組小鼠糖水偏好百分比、穿過曠場中心區(qū)域次數(shù)和最小疼痛閾值均顯著降低（P<0.05）;與模型組比較，參苓白術(shù)散組小鼠上述指標(biāo)均顯著升高（P<0.05或P<0.01），詳見表2。

3.3 參苓白術(shù)散對伴焦慮IBS-D模型小鼠海馬組織中BDNF和血清中5-HT水平的影響

與空白對照組比較，模型組小鼠海馬組織中BDNF水平顯著降低（P<0.05），血清中5-HT水平顯著升高（P<0.05）;與模型組比較，參苓白術(shù)散組小鼠海馬組織中BDNF水平顯著升高（P<0.05），血清中5-HT水平顯著降低（P<0.05），詳見表3。

3.4 參苓白術(shù)散對伴焦慮IBS-D模型小鼠腸道微生物豐度和多樣性的影響

3.4.1 Alpha多樣性分析結(jié)果 空白對照組、模型組、參苓白術(shù)散組腸道微生物稀釋曲線在測序條數(shù)20 000～40 000區(qū)間逐漸進入平臺期，表明測序數(shù)據(jù)量可以反映樣品中的物種多樣性，并能間接反映樣品中物種的豐富程度;Shannon指數(shù)曲線在測序條數(shù)10 000～40 000區(qū)間完全進入平臺期，且參苓白術(shù)散組Shannon指數(shù)大于模型組，表明各組樣品測序數(shù)據(jù)量足夠大，且參苓白術(shù)散組小鼠腸道微生物的物種豐度高于模型組;參苓白術(shù)散組等級豐度曲線橫坐標(biāo)的OTU數(shù)量明顯高于模型組，且整體曲線下降平緩，表明參苓白術(shù)散組小鼠腸道微生物的物種相對豐度及多樣性高于模型組樣品，詳見圖1。

3.4.2 Beta多樣性分析結(jié)果 空白對照組與模型組小鼠盲腸內(nèi)容物所含的腸道微生物種類差異較大，模型組與參苓白術(shù)散組小鼠腸道微生物種類差異較大，而參苓白術(shù)散組與空白對照組小鼠腸道微生物種類差異性較小，表明參苓白術(shù)散能夠有效調(diào)節(jié)腸道微生物，詳見圖2（注：圖中方塊顏色越深，兩組間差異越大）。

3.4.3 物種多樣性分析 在門水平上，與空白對照組比較，模型組小鼠腸道中厚壁菌門微生物的相對豐度顯著降低，疣微菌門微生物的相對豐度顯著升高（P<0.05）;與模型組比較，參苓白術(shù)散組小鼠腸道中厚壁菌門微生物的相對豐度顯著升高，疣微菌門微生物的相對豐度顯著降低（P<0.05）。在屬水平上，與空白對照組比較，模型組小鼠腸道中艾克曼菌屬微生物的相對豐度顯著升高，Lachnospiraceae_NK4A136_group屬微生物的相對豐度顯著降低（P<0.05）;與模型組比較，參苓白術(shù)散組小鼠腸道微生物艾克曼菌屬微生物的相對豐度顯著降低，Lachnospiraceae_NK4A136_group屬微生物的相對豐度顯著升高（P<0.05），詳見表4。

4 討論

參苓白術(shù)散來自《太平惠民和劑局方》，可用于治療脾胃虛弱、飲食不進、多困少力、中滿痞噎、心忪氣喘、嘔吐泄瀉及傷寒咳噫[12-13]。IBS-D屬“泄瀉”“腹痛”范疇，其主要由外邪、飲食所傷、情志不暢等導(dǎo)致脾胃虛弱所引起[1]。在臨床使用中發(fā)現(xiàn)，參苓白術(shù)散單用時可改善IBS-D患者的癥狀與體征[9]。本研究結(jié)果也證實，參苓白術(shù)散能夠有效地改善IBS-D小鼠的腹瀉情況，降低小鼠的稀便率、腹瀉指數(shù)，同時增加其體質(zhì)量。

焦慮、抑郁等精神心理因素與IBS-D的發(fā)生存在直接關(guān)系，肝氣郁結(jié)、脾失運化成為伴焦慮IBS-D的主要病因病機[31]。參苓白術(shù)散由人參、茯苓和白術(shù)組成君藥，起益氣滲濕健脾的作用[12]，其中的人參在單用及組方使用時均具有明確的抗焦慮作用[32]。本研究結(jié)果表明，參苓白術(shù)散可升高伴焦慮IBS-D模型小鼠的糖水偏好百分比、穿過曠場中心區(qū)域次數(shù)和最小疼痛閾值，有效地改善了其焦慮行為。

BDNF是腦內(nèi)促神經(jīng)生長的活性蛋白質(zhì)，在焦慮狀態(tài)下，BDNF的表達水平會明顯升高[10-11]。5-HT是一種重要的腦腸肽，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，5-HT信號系統(tǒng)與IBS-D關(guān)系密切，且IBS-D患者的焦慮、抑郁評分與5-HT含量呈正相關(guān)[6-9]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，參苓白術(shù)散能夠顯著升高小鼠海馬組織中BDNF水平，顯著降低血清中5-HT水平，這與高春波等[33]研究結(jié)果一致。

IBS-D的發(fā)生與腦-腸軸功能紊亂密切相關(guān)，即中樞神經(jīng)系統(tǒng)與外周可雙向調(diào)控胃腸道功能，導(dǎo)致內(nèi)臟高敏，從而引起患者出現(xiàn)腹痛腹瀉等臨床癥狀[4]。其中，腸道微生物在腦-腸軸調(diào)節(jié)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，會對宿主的應(yīng)激反應(yīng)、焦慮、抑郁和認知功能產(chǎn)生重要影響[4-5]。本研究發(fā)現(xiàn)，模型組與參苓白術(shù)散組小鼠腸道微生物種類差異較大，參苓白術(shù)散組與空白對照組小鼠腸道微生物種類差異較小，表明參苓白術(shù)散能調(diào)節(jié)小鼠腸道微生物的豐度與多樣性，在門水平上，其可顯著升高小鼠腸道微生物厚壁菌門微生物的相對豐度，顯著降低疣微菌門微生物的相對豐度;在屬水平上，可顯著升高Lachnosiracea_NK4A136_group屬微生物，顯著降低艾克曼菌屬微生物的相對豐度。

綜上所述，參苓白術(shù)散可有效改善伴焦慮IBS-D模型小鼠的腹瀉、焦慮行為，并升高其海馬組織中BDNF水平，降低血清中5-HT水平;其作用機制可能與降低腸道中疣微菌門、艾克曼菌屬微生物的相對豐度，升高厚壁菌門、Lachnospiracea_NK4A136_group屬微生物的相對豐度有關(guān)。后續(xù)本課題組擬結(jié)合微生物基因組學(xué)和代謝組學(xué)分析聯(lián)合應(yīng)用等技術(shù)，進一步闡明參苓白術(shù)散改善伴焦慮IBS-D的作用機制。

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（收稿日期：2020-09-18 修回日期：2020-12-18）

（編輯：唐曉蓮）