俞建飛，王麗葉，郭婷婷

（蘇州大學附屬太倉醫(yī)院，江蘇 太倉 215400）

0 引言

新生兒溶血病（HDN）是指因母嬰血型不合引起的胎兒或新生兒免疫性溶血性疾病，主要臨床表現(xiàn)為高膽紅素血癥，嚴重的可導致患兒高膽紅素腦病從而造成智力低下甚至死亡[1]。臨床上發(fā)生HDN主要為母嬰ABO血型不合引起，即母親血型為O型，患兒血型為A型或B型。其次為Rh血型系統(tǒng)，其他血型系統(tǒng)如Kell、Duffy、Kidd等也有發(fā)生，但較為少見[2]。本研究主要針對ABO血型系統(tǒng)發(fā)生的HDN進行闡述與分析。發(fā)生ABO血型不合的HDN其發(fā)病機理為當母親血型為O型而新生兒血型為A、B型時，因胎兒血液可以通過胎盤進入母體，胎兒的紅細胞抗原進入母體時因母親體內(nèi)無相應抗原而發(fā)生免疫反應，從而母體內(nèi)產(chǎn)生相應抗體，該類抗體屬于IgG類抗體，可以通過胎盤進入胎兒體內(nèi)，作用于胎兒紅細胞導致發(fā)生免疫性的溶血反應[3]。多數(shù)的患兒臨床表現(xiàn)為黃疸、貧血，嚴重的可有肝脾腫大甚至死亡。新生兒溶血病篩查包括直接抗人球蛋白試驗、血漿游離試驗、紅細胞抗體釋放試驗三項血清學檢測[4]。本研究回顧性分析本院2018年1月至2019年12月收治的344例O型母親產(chǎn)A、B型新生兒，對新生兒溶血三項血清學結(jié)果和其他影響因素進行分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月至2019年12月送至我科的344例高膽紅素血癥且母親為O型患兒為A、B型的患兒，平均年齡為（3.49±4.37）d，其中男性169例，女性175例，對所有患兒血液進行溶血病三項檢測，標本采取EDTA-K2抗凝靜脈血2 mL。

1.2 儀器與試劑

試劑均采用長春博訊的反定型紅細胞、ABO-Rh血型卡和抗人球蛋白檢測卡、BX-1型樣本釋放劑及配套的FYQ型免疫微柱孵育器和TD-3A型血型血清學離心機。

1.3 試驗方法

本試驗采用酸放散試驗，操作流程按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》和試劑說明書進行。將ABO標準紅細胞與抗體篩選細胞配置成比例為0.8%～1.0%的紅細胞懸液放置待用，對母嬰取EDTA抗凝全血，1kg離心力離心5min，再對母體的血液樣本進行ABO血型與RhD血型的鑒定與抗體的篩選實驗。對于新生兒的血液樣本，將其血漿與壓積紅細胞進行分離，配置成比例為0.8%～1.0%的紅細胞懸液，再把配置剩余的壓積紅細胞洗滌3次，放置待用。將溶血病受檢抗人球蛋白卡的6孔進行標記，依次分別為FAC/BC、FOC、EAC/BC、EOC、AC/BC、OC，其中EAC/BC、EOC為釋放試驗孔，F(xiàn)AC/BC、EAC/BC為添加新生兒同血型標準紅細胞對應的受檢孔，F(xiàn)OC、EOC為添加O血型標準紅細胞的不規(guī)則抗體對照孔，AC/BC、OC為標準紅細胞試劑的對照孔。

1.3.1 游離試驗

將0.8%A/B型標準紅細胞50μL分別加入相應的孔中，并且在FAC/BC、FOC中分別加入新生兒的血漿各50μL。

1.3.2 釋放試驗

將上述放置待用的壓積紅細胞與數(shù)量相等的酸放散液一起混合后輕輕搖勻，放置保溫室保存1～2min，再將1kg離心力離心1min后，迅速將上清液移至另一處干凈的試管里，混入1～2滴中和液，將放散液加入EAC/BC、EOC孔中，分量為50μL，完成后將卡片置入恒溫孵育器中，時長為15min，再放入離心機中離心5min，用直觀肉眼觀測結(jié)果。

1.3.3 新生兒的血型鑒定與直抗實驗

采集新生兒的血型樣本卡片1張，在A-B-AB-Dctl-AHG的每個孔中都分別加入新生兒的紅細胞懸液，比例為0.8%～1.0%，放置于離心機中離心5min，結(jié)果可以直接用肉眼觀測判定。

1.4 結(jié)果判讀

游離試驗、釋放試驗均陰性可排除HDN，釋放試驗陽性即可判定為HDN、三項中有兩項陽性可確診為HDN、僅游離試驗陽性或直接抗人球試驗陽性為不確定。

1.5 統(tǒng)計學方法

用SPSS 20.0軟件對所統(tǒng)計的研究數(shù)據(jù)進行處理和分析，計量資料用均數(shù)±標準差（）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料用率（%）表示，采用χ2檢驗，如果P＜0.05，則說明差異有統(tǒng)計學有意義。

2 結(jié)果

2.1 新生兒溶血三項血清學結(jié)果

HDN患兒檢出陽性244例，檢出率為70.9%，見表1。

表1 新生兒溶血三項血清學結(jié)果（n,%）

2.2 新生兒HDN 不同血型的檢出率

O-A陽性率為74.1%，O-B陽性率為67.8%，見表2。

表2 新生兒HDN 不同血型的檢出率（n,%）

2.3 HDN患兒與其他高膽紅素患兒膽紅素結(jié)果分析

將HDN患兒與其他高膽紅素患兒膽紅素結(jié)果分析，HDN患兒的總膽紅素與直接膽紅素均高于非HDN高膽紅素患兒，見表3。

表3 HDN 患兒與其他高膽紅素患兒膽紅素結(jié)果分析（±s,μmol/L）

表3 HDN 患兒與其他高膽紅素患兒膽紅素結(jié)果分析（±s,μmol/L）

3 討論

新生兒溶血病患病的主要原因就是母嬰之間的Rh血型與ABO血型的不適合，新生兒的血型是由父母血型決定的，如果新生兒父親所擁有的血型抗體是母親所沒有的，那么其抗體通過遺傳至新生兒身上的話，就會引起新生兒與母親之間產(chǎn)生相對應的抗體，這些遺傳的抗體再經(jīng)由胎盤進入到新生兒身體內(nèi)，會造成免疫反應的降低，從而發(fā)生溶血現(xiàn)象[5]。新生兒Rh溶血病是由于母親血液中對于新生兒體內(nèi)的紅細胞免疫抗體IgG由胎盤進入到新生兒的血液循環(huán)中，使免疫抗體發(fā)生一系列不良反應，導致引起溶血性疾病，會對新生兒的紅細胞造成破壞[6]。ABO溶血病則是母親與新生兒產(chǎn)生溶血病中最常見的一種，主要原因是母親血型為O型，而新生兒血型為A型或B型，其發(fā)病原因主要是因為新生兒通過胎盤接受了母體的同族免疫抗體而發(fā)病，導致發(fā)病的條件也有母體曾有異種抗原刺激的過往病史，從而產(chǎn)生了相對應的免疫抗體，而其抗體通過胎盤進入到胎兒的體內(nèi)，使胎兒對其抗體產(chǎn)生免疫敏感性而得病[7]。

新生兒溶血的具體臨床表現(xiàn)為：①黃疸：患有黃疸的新生兒如果是Rh血型不合的話，在出生后的24h內(nèi)皮膚會呈現(xiàn)明顯的黃染，并且情況會隨之加重，如果是ABO血型不合的新生兒，部分會在出生后的24h內(nèi)呈現(xiàn)出來，但是也有部分會在出生后的48h內(nèi)才呈現(xiàn)出來，在新生兒黃疸癥狀展現(xiàn)的同時，新生兒體內(nèi)的血清膽紅素水平指標也會在短時間內(nèi)迅速上升[8]；②貧血：新生兒發(fā)生黃疸癥狀與黃疸消退后都有很大的可能會出現(xiàn)貧血，其主要原因是由于當新生兒產(chǎn)生溶血時，體內(nèi)大量的紅細胞會被破壞，Rh溶血患者會發(fā)生較為嚴重的貧血現(xiàn)象，并且會出現(xiàn)肝脾大或者心力衰竭等嚴重的并發(fā)癥，而ABO溶血患者則有一半的概率會出現(xiàn)貧血狀態(tài)[9]；③核黃疸：主要形成原因是新生兒患有嚴重的高膽紅素血癥從而致使急性膽紅素腦病的發(fā)生，其臨床表現(xiàn)為聽力障礙、智力及運動發(fā)育障礙、手足徐動和牙釉質(zhì)發(fā)育不良等[10]。新生兒與新生兒紅細胞均會被母體的lgG抗體所影響，并會在新生兒的單核-巨噬細胞系統(tǒng)內(nèi)受到免疫性的破壞，引發(fā)不同程度的病情，病情嚴重的胎兒會出現(xiàn)宮內(nèi)死亡的現(xiàn)象，對新生兒溶血病患者實行血清學檢測可以有效提高診斷率，使其盡早接受治療，降低新生兒后遺癥與并發(fā)癥的發(fā)生。對于新生兒溶血病的血清學檢測主要包含三項實驗，分別是游離抗體實驗、抗球蛋白實驗與紅細胞抗體釋放試驗，其中游離抗體試驗主要是檢測新生兒血清中所含的血型抗體，當檢測出相關(guān)抗體和新生兒體內(nèi)的紅細胞產(chǎn)生反應時，游離抗體試驗結(jié)果為陽性，反之則為陰性，此項檢查項目有利于對新生兒溶血病情的發(fā)展趨勢進行觀察監(jiān)督[11]?？骨虻鞍自囼炛饕菣z測新生兒體內(nèi)的紅細胞是否有免疫抗體的存在，但是由于新生兒血型抗體的密度相比于成年人來說較低，所以能夠相互結(jié)合的抗體也比較少，有部分ABO溶血病新生兒的直抗會呈現(xiàn)為弱陽性，甚至還會呈現(xiàn)為陰性。紅細胞抗體釋放試驗是先采用特定的方法將新生兒體內(nèi)紅細胞的抗體進行釋放，對釋放液中的抗體進行檢測，當在釋放液中檢測出相應的抗體，并且又能在紅細胞上檢測到相應的抗體時，結(jié)果就是陽性[12]。根據(jù)本次研究報告可以看出，對新生兒溶血病進行血清學檢測是發(fā)現(xiàn)與診斷新生兒患病最直接有效的方法，在目前所擁有的醫(yī)學治療方法下，新生兒溶血病有很大概率可以盡早發(fā)現(xiàn)與治療，關(guān)鍵在于能否及時對新生兒溶血病的早期進行識別與干預，血清學檢查對于新生兒溶血病的診斷具有很大的臨床意義，對于新生兒溶血病患兒來說，應該盡早接受血清學檢查，盡早確診病情與嚴重程度，可以及時實施治療，對新生兒的身體健康有積極意義。

綜上所述，新生兒溶血病篩查三項血清學檢查結(jié)果對于溶血病的早期診斷與治療具有重要的積極意義，可以作為診斷的重要依據(jù)，值得推廣與應用于臨床診斷中。