曾星星，何 燕，鹿愛娟，馬 寧，王建芬，高曉慧

(1 長沙醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，湖南 長沙 410219；2 新型藥物制劑研發(fā)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，湖南 長沙 410219；3 湖南環(huán)境生物職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南 衡陽 421005)

厚樸為一味傳統(tǒng)中藥，木蘭科植物厚樸(MagnoliaOfficinalisRehd)或凹葉厚樸的干燥干皮、根皮及枝皮，別名川樸、紫油厚樸，具有燥濕消痰、下氣除滿之功效?！吨袊幍洹?015年版姜厚樸為厚樸項(xiàng)下炮制品，加姜制可以加強(qiáng)其溫中下氣的作用，并去除其刺激性，減弱過敏作用，同時(shí)還可以去油治療腹脹[1]。

近年來國內(nèi)對(duì)厚樸炮制的研究較多，包括炮制工藝的影響[2]，炮制方法特別是新型炮制方法[5-6]，以及不同的炮制方法對(duì)主成分的影響[7-8]，炮制前后毒性及刺激性作用研究[9]等。采用的方法大多是傳統(tǒng)的一些方法，如采用指紋圖譜法研究厚樸中揮發(fā)性成分的含量[10-12]，厚樸酚與和厚樸分的提取工藝及這兩種成分在抗炎[13-14]和抗腫瘤活性方面的研究[15-16]，以及測(cè)定主成分的含量并進(jìn)行化學(xué)模式鑒別[17]以及對(duì)飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)行了初步的研究[18-19]，但并未開發(fā)出一種新型快速的方法。本論文是作者在白術(shù)藥材DCBI-MS研究的基礎(chǔ)上何經(jīng)驗(yàn)上[20]，再次考察了DCBI-MS方法[21-22]在厚樸中藥材作為超快速的鑒別方法的可行性，并作為超快速的質(zhì)譜方法用于厚樸藥材中厚樸酚與和厚樸酚裂解機(jī)制的研究。

1 儀器與試藥

Thermo finnigan-LCQ離子阱質(zhì)譜，DCBI離子源及控制器，島津(上海)有限公司；LCQ-tune工作站(菲尼根，美國)，購買了市場(chǎng)上30個(gè)批次的厚樸藥材，經(jīng)由九芝堂股份有限公司藥材檢驗(yàn)員陳湘林鑒定為厚樸藥材。

2 方法與結(jié)果

2.1 檢測(cè)方法與條件

用鑷子夾住切好的一小片白術(shù)(長約1.5 cm，厚約3 mm，寬5 mm)，固定于進(jìn)樣夾板后置DCBI源的薄的紫色的可視電暈束下，DCBI質(zhì)譜條件：解吸附電暈束離子源(DCBI源)，毛細(xì)管溫度250 ℃，分辯率1 Hz，質(zhì)譜正離子模式，氦氣流速1.5 mL/min，加熱溫度120 ℃，電流30 μA，質(zhì)量范圍：m/z 100～1000。

2.2 DCBI-MS結(jié)果分析

正離子模式下，得到厚樸和姜制厚樸的 DCBI-MS譜圖，如圖1所示，為確證m/z=266為厚樸酚與和厚樸酚共有的分子離子峰，選擇m/z=266，267作為母離子，進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜MS2分析。

圖1 厚樸藥材提取液在正離子模式下的DCBI-MS譜圖(T=120 ℃)

圖2 姜厚樸m/z=266, 267 DCBI-MS2圖

MS2裂解后得二級(jí)離子碎片(圖2和圖3)。生厚樸裂解后的離子碎片m/z有197，224，225，237，247，其中碎片m/z=237豐度值最高。姜厚樸裂解后的離子碎片m/z有197，224，225，237，247，250，其中碎片m/z=237豐度值最高。根據(jù)厚樸酚與和厚樸酚的裂解規(guī)律，可以確定m/z=266為厚樸酚與和厚樸酚的準(zhǔn)分子離子峰。

圖3 生厚樸m/z=266, 267的DCBI-MS2圖

2.3 裂解機(jī)制分析

厚樸酚與和厚樸酚的DCBI-MS質(zhì)譜裂解機(jī)制分析，如圖4、圖5所示，其基峰為m/z266，267的[M+]分子離子峰，二級(jí)質(zhì)譜MS2的共有碎片離子峰有m/z224、225、197、237。而厚樸酚的特征碎片離子峰有m/z247，可能是由于兩雙酚結(jié)構(gòu)和連接的苯環(huán)上的羥基通過相鄰的(2,2’位)對(duì)稱連接，有利于形成m/z247的大π共軛體系。因此區(qū)別于厚樸酚與和厚樸酚同分異構(gòu)體的典型特征是m/z247二級(jí)碎片離子峰。

確定m/z266是厚樸酚與和厚樸酚的準(zhǔn)分子離子峰，DCBI-MS譜圖結(jié)果表明，m/z266的相對(duì)豐度值顯著降低，表明厚樸姜制后厚樸酚與和厚樸酚含量降低。

圖4 厚樸酚的主要質(zhì)譜離子碎片裂解機(jī)制圖

圖5 和厚樸酚的主要質(zhì)譜離子碎片裂解機(jī)制圖

3 討 論

為獲得更好的質(zhì)譜響應(yīng)信號(hào)和定性的結(jié)果分析，本論文考察了兩個(gè)非常重要的質(zhì)譜參數(shù)：DCBI源溫度和氦流量。

3.1 DCBI源溫度的考察

分子的解吸附效率受源溫度的直接影響。本論文分別考察了6個(gè)不同的源溫度(80 ℃，100 ℃，120 ℃，140 ℃，160 ℃，200 ℃)并根據(jù)豐度值進(jìn)行比較。結(jié)果表明隨著溫度的升高，響應(yīng)信號(hào)持續(xù)增強(qiáng)，但是源溫度超過120 ℃發(fā)現(xiàn)雜質(zhì)相應(yīng)增多，影響判斷，因此離子源溫度為120 ℃作為最佳選擇。

3.2 氦氣流量的考察

正離子模式下，考察了三個(gè)流速0.6 mL/min、0.9 mL/min、1.5 mL/min、2.0 mL/min，并進(jìn)行質(zhì)譜響應(yīng)信號(hào)比較，流速越快信號(hào)值越高，但是流速太大，超過1.5 mL/min，信號(hào)不好收集，因此氦氣流量為1.5 mL/min作為最佳選擇。

4 結(jié) 論

本論文開發(fā)了一種超快速的質(zhì)譜方法用于厚樸藥材中厚樸酚與和厚樸酚裂解機(jī)制的研究，同時(shí)證實(shí)此方法可作為超快速質(zhì)量控制方法的可行性，為中藥材的質(zhì)量控制提供了超快速(秒級(jí))質(zhì)譜方法。