劉春麗 王國杰 鄭朝輝 曹瑞

口腔鱗狀細(xì)胞癌（Oral squamous cell carcino?ma，OSCC）是指發(fā)生于口腔內(nèi)，以鱗狀細(xì)胞為主的惡性腫瘤［1］。目前OSCC 的死亡率仍居高不下，尋求有效的腫瘤標(biāo)志物以提高該病診出率并對預(yù)后進(jìn)行有效評估有重要意義［2］。近年來研究發(fā)現(xiàn)N 端α 位乙?；D(zhuǎn)移酶10 蛋白（N?α?acetyl?transferase 10 protein，Naa10p）在多種惡性腫瘤中高表達(dá)，其分泌與口腔頜面部腫瘤關(guān)系密切［3］。而腫瘤特異性生長因子（Tumor Supplied Group of Factors，TSGF）是數(shù)種國際公認(rèn)的與惡性腫瘤生長相關(guān)的糖類物質(zhì)和代謝物的統(tǒng)稱，人侏儒相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2（Runt?related Transcription Factor 2，RUNx2）作為表觀遺傳學(xué)上驅(qū)動上皮?間葉細(xì)胞轉(zhuǎn)化的異質(zhì)性關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，臨床試驗證明均兩者是腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)、術(shù)后及放、化療、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)的重要指標(biāo)［4］。本研究探討Naa10p、TSGF 及RUNx2 三者聯(lián)合檢測在口腔黏膜癌前病變、OSCC 診斷及鑒別診斷中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年4月至2020年4月本院口腔科收治的65 例OSCC 患者，所有患者均經(jīng)病理學(xué)檢查確診。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者有明確的病理學(xué)診斷依據(jù)，均確診為OSCC［5］；②入組前未接受放療及化療；③臨床資料完整且真實；排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并血液疾病者；②嚴(yán)重精神疾患或癡呆等無法配合本研究者；③存在除OSCC 以外其他原發(fā)性惡性腫瘤者；④合并風(fēng)濕免疫及結(jié)締組織病變者。最終62例滿足納入標(biāo)準(zhǔn)，作為0SCC 組。男性32 例，女性30 例，平均年齡（60.53±5.76）歲。

選取同期收治的50 例診斷為癌前病變（扁平苔蘚、白斑、紅斑、慢性潰瘍長期不愈）者為癌前病變組，所有患者均經(jīng)臨床體征或活檢確診［6］。男性26例，女性24 例，平均年齡（60.47±5.74）歲。同時選取同期體檢的40 例正常者為正常對照組，均經(jīng)口腔檢查確診無牙周粘膜疾病和全身檢查確診無系統(tǒng)性疾病。男性22 例，女18 例，平均年齡（60.39±5.84）歲。3 組資料在性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性（P>0.05）。本研究已獲得本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，所有受試者知情且簽訂相關(guān)協(xié)議。

1.2 觀察指標(biāo)

1.2.1 檢測方法

采集受試者空腹靜脈血8 mL，離心（3 000 r/min，5 min）取血清。檢測Naa10：采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測，將血清標(biāo)本置于酶標(biāo)板標(biāo)準(zhǔn)孔、樣品孔中，封板孵育；每孔加入100 μL 檢測溶液A，封板；每孔加入100 μL 檢測溶液B，封板孵育，洗板5次；每孔加入90 μL 酶標(biāo)試劑，更換封板膜，孵育；每孔加50 μL 終止液，于波長450 nm 讀取光密度（OD）值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算標(biāo)本Naa10p 濃度值。

檢測TSGF：TSGF 試劑盒購自福建新大陸生物技術(shù)有限公司，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。用上海分析儀總廠722 s 分光光度計測定。以＞71 U/mL為陽性［7］。

收集所有研究對象病理檢查時獲取的口腔粘膜，檢測Runx2：采用免疫組化法進(jìn)行檢測，鼠抗人Runx2 單克隆抗體購自美國Abnova 公司，免疫組化采用鏈霉素抗生物素蛋白一過氧化酶連接法（strept avidin?perosidase，SP），SP 試劑盒購自北京中山生物科技有限公司。用已知陽性的人類胎盤組織做陽性對照；用PBS 代替一抗做陰性對照。染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)［8］：按陽性細(xì)胞數(shù)比例分為0 分、1 分、2 分、3 分、4 分；同時根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度加以評分，無著色計0 分，淺黃色計1分，棕黃色計2 分，棕褐色計3 分。兩種計分的乘積為每例的加權(quán)分?jǐn)?shù)，加權(quán)分?jǐn)?shù)為0 為陰性，其余均為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 18.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以n（%）表示，采用χ2檢驗；計量資料采用（）描述，兩組間采用t檢驗，多組間采用F檢驗；采用ROC 曲線分析Naa10p、TSGF、RUNx2 單項及聯(lián)合檢測水平對OSCC 的預(yù)測價值；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 OSCC 組、癌前病變組及正常對照組Naa10p、TSGF 表達(dá)比較

3 組Naa10p、TSGF 水平及RUNx2 陽性率比較：OSCC 組＞癌前病變組＞正常對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。RUNX2 染色圖見圖1。

表1 3 組Naa10p、TSGF 表達(dá)比較［n（%），（±s）］Table 1 The expression of Naa10p and TSGF in the 3 groups［n（%），（±s）］

表1 3 組Naa10p、TSGF 表達(dá)比較［n（%），（±s）］Table 1 The expression of Naa10p and TSGF in the 3 groups［n（%），（±s）］

注：與OSCC 組比較，aP＜0.05；與癌前病變組比較，bP＜0.05。

組別OSCC 組癌前病變組正常對照組F/χ2值P 值n 62 50 40陽性51（82.26）32（62.00）a 5（12.50）ab--Naa10p（pg/mL）225.43±97.85 98.07±32.51a 68.59±30.14ab 82.534＜0.001 TSGF（U/mL）79.59±5.71 66.16±4.97a 57.81±4.12ab 238.013＜0.001 RUNx2陰性11（17.74）19（38.00）a 35（87.50）ab 49.276＜0.001

圖1 OSCC 患者Runx2 陰、陽性表達(dá)免疫化圖（SP，×400）Figure 1 Runx2 negative and positive expression immunohistostaining image of OSCC patients（SP，×400）

2.2 Naa10p、TSGF 及RUNx2 單獨及聯(lián)合檢測診斷OSCC 的診斷價值

Naa10p、TSGF 及RUNx2 聯(lián)合檢測的敏感性、準(zhǔn)確性均高于任何單一血清檢測，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

2.3 不同臨床分期OSCC 患者Naa10p、TSGF 及RUNx2 表達(dá)比較

Ⅲ、Ⅳ期Naa10p、TSGF 水平及RUNx2 陽性率均高于Ⅰ、Ⅱ期患者，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表2 Naa10p、TSGF、RUNx2 單獨及聯(lián)合檢測診斷OSCC的診斷價值［n（%）］Table 2 Diagnostic value of Naa10p，TSGF and RUNx2 alone and combined in the diagnosis of OSCC［n（%）］

2.4 ROC 曲線分析

Naa10p、TSGF、RUNx2 單項及聯(lián)合檢測曲線下面積分別為0.694、0.677、0.830、0.883，各指標(biāo)曲線下面積以聯(lián)合檢測最大。見表4、圖2。

表3 不同臨床分期OSCC 患者Naa10p、TSGF 表達(dá)比較（±s）Table 3 Comparison of Naa10p and TSGF expressions in OSCC patients with different clinical stages（±s）

表3 不同臨床分期OSCC 患者Naa10p、TSGF 表達(dá)比較（±s）Table 3 Comparison of Naa10p and TSGF expressions in OSCC patients with different clinical stages（±s）

分期Ⅰ+ⅡⅢ+Ⅳt 值P 值n 30 32陽性20 30--Naa10p（pg/mL）201.79±60.84 294.26±65.71 5.739＜0.001 TSGF（U/mL）84.32±2.47 73.57±2.68 16.392＜0.001 RUNx2陰性10 2 7.276 0.007

表4 Naa10p、TSGF、RUNx2 單項及聯(lián)合檢測對TOSCC的預(yù)測價值Table 4 Predictive value of Naa10p，TSGF，RUNx2 single and combined tests to TOSCC

圖2 Naa10p、TSGF、RUNx2單項及聯(lián)合檢測ROC曲線分析Figure 2 ROC curve analysis for Naa10p，TSGF，RUNx2 single test and combined test

3 討論

口腔頜面部惡性腫瘤包括OSCC、腺性上皮癌、基底細(xì)胞癌等，其中以O(shè)SCC 最為常見［9?10］。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)腫瘤標(biāo)志物的成分改變與局部組織細(xì)胞代謝密切相關(guān)，檢測腫瘤附近體液中的腫瘤標(biāo)志物較檢測外周血的陽性率高，這為進(jìn)一步探討OSCC 發(fā)病機(jī)制并優(yōu)化診療方案提供了新的思路［11］。

Naa10p 是N?乙?；D(zhuǎn)移酶家族成員之一，其在多種腫瘤組織中高表達(dá)［12］。Rosenberger 等［13］報道Naa10p 可能具有DNA 修復(fù)的功能，在DNA 雙鏈損傷修復(fù)過程中發(fā)揮重要的作用。Naa10p 主要通過對NF?B 通路的激活作用來抑制凋亡，但其介導(dǎo)的蛋白質(zhì)N 端氨基酸乙酰化又是凋亡過程所需要的重要步驟，因此Naa10p 在腫瘤細(xì)胞的凋亡過程中起雙重作用。本研究結(jié)果表明Naa10p 參與了OSCC 的發(fā)生發(fā)展過程。

TSGF 是由腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的一種多肽類物質(zhì)，其隨著腫瘤細(xì)胞的形成與增長，并逐漸釋放到外周血液中。臨床研究發(fā)現(xiàn)，TSGF 對于腫瘤相關(guān)的代謝狀態(tài)具有直觀的反應(yīng)作用；同時本類指標(biāo)在腫瘤發(fā)生之初即在血液中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，因此其也作為臨床研究中與惡性腫瘤密切相關(guān)的一類重要指標(biāo)。Gao 等［14］研究表明，血清TSGF 對一些惡性腫瘤的早期診斷具有廣譜、靈敏的特點。本次研究結(jié)果提示示血清TSGF 的檢測對OSCC 的診斷具有一定的價值。

RunX2 是Runx 轉(zhuǎn)錄因子家族成員的重要組成部分，由于Runx2 作為重要的成骨細(xì)胞分化轉(zhuǎn)錄因子，參與調(diào)控成骨細(xì)胞分化過程中的鈣化過程，因此其對成骨細(xì)胞的成熟和穩(wěn)定起了重要的調(diào)節(jié)作用。Mette 等［15］研究發(fā)現(xiàn)，Runx2 在人類乳腺癌組織中的表達(dá)與其在乳腺癌微鈣化形成關(guān)系密切。近年來相關(guān)學(xué)者亦指出，分析RunX2 的表達(dá)及其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系對早期評估腫瘤生物學(xué)行為具有一定參考價值［16］。本研究結(jié)果提示通過檢測該指標(biāo)表達(dá)變化，可為臨床早期診斷OSCC 提供有效參考價值，這也為臨床研究OSCC的發(fā)病機(jī)制提供了新思路、新方法。

臨床用于腫瘤檢測的血清腫瘤標(biāo)志物較多，但在眾多的腫瘤標(biāo)志物中，往往因敏感度和特異度不夠理想，從而在腫瘤的篩查和輔助診斷中存在一定局限性，導(dǎo)致陽性率降低。本研究利用ROC 曲線分析了Naa10p、TSGF、RUNx2 單項及聯(lián)合檢測OSCC 的預(yù)測價值，結(jié)果顯示各指標(biāo)曲線下面積以聯(lián)合檢測最大，這表明聯(lián)合檢測可顯著提高OSCC患者診斷的陽性率，有利于口腔鱗癌的早期診斷。

綜上，Naa10p、TSGF 及RUNx2 表達(dá)在OSCC患者顯著升高，且與患者臨床分期密切相關(guān)，聯(lián)合三者檢測可作為預(yù)測OSCC 發(fā)生的有效手段，臨床上應(yīng)重視三者水平的檢測，進(jìn)而改善患者預(yù)后。