程菊娥 王東偉 成飛雪 朱春暉 王忠勇 史曉斌 鄭立敏 蘇品 劉勇 張德詠

摘要：【目的】篩選對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)具有良好活性的生防菌株，為殺線蟲(chóng)制劑的研制與應(yīng)用提供理論依據(jù)?！痉椒ā坎捎闷桨逑♂尫▽?duì)從抗線蟲(chóng)黃瓜根系附近采集的土壤樣品進(jìn)行芽孢桿菌分離，通過(guò)浸漬法篩選出殺線活性高且穩(wěn)定的菌株，結(jié)合形態(tài)特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析對(duì)活性菌株進(jìn)行分類(lèi)鑒定，并通過(guò)離體、盆栽及田間試驗(yàn)對(duì)分離菌株防治南方根結(jié)線蟲(chóng)的效果進(jìn)行驗(yàn)證。【結(jié)果】篩選出1株具有較高殺線蟲(chóng)活性的芽孢桿菌C1，經(jīng)鑒定菌株C1為長(zhǎng)形賴(lài)氨酸芽孢桿菌（Lysinibacillus macroides）。殺線活性測(cè)定結(jié)果表明，菌株C1發(fā)酵上清液對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)卵孵化的相對(duì)抑制率為74.50%、對(duì)雌蟲(chóng)孵化的相對(duì)抑制率為95.17%、對(duì)2齡幼蟲(chóng)的24和48 h校正死亡率分別為98.83%和100.00%，且殺蟲(chóng)活性穩(wěn)定;盆栽試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，菌株C1發(fā)酵液50倍稀釋液對(duì)番茄南方根結(jié)線蟲(chóng)的防效為73.24%;田間防病試驗(yàn)結(jié)果顯示，菌株C1發(fā)酵液50倍稀釋液對(duì)黃瓜南方根結(jié)線蟲(chóng)病的防效達(dá)82.67%，且產(chǎn)量較清水對(duì)照增產(chǎn)20.0%?！窘Y(jié)論】菌株C1不僅對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)病具有良好的防治效果，且能促進(jìn)作物生長(zhǎng)，可作為生物農(nóng)藥和肥料在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中開(kāi)發(fā)利用。

關(guān)鍵詞： 南方根結(jié)線蟲(chóng);長(zhǎng)形賴(lài)氨酸芽孢桿菌;鑒定;殺線活性;促生效果

中圖分類(lèi)號(hào)： S432.45? ? ? ? ? ?   ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：2095-1191（2021）10-2765-11

Abstract： 【Objective】To screen the biocontrol strains with good activity against Meloidogyne incognita and provide a theoretical basis for the development and application of nematicidal agents.【Method】Bacillus was isolated from soil samples collected near the root of cucumber resistant to M. incognita by plate dilution method. Strains with high and stable nematicidal activity were screened by impregnation method. The active strains were classified and identified based on morphological characteristics， physiology and biochemistry and 16S rDNA identification. In vivo， pot and field experiments were conducted to verify the effect of the isolated strain on the control of M. incognita. 【Result】A Bacillus C1 with high nematicidal activity was screened， and the strain C1 was identified as Lysinibacillus macrolides. The nematicidal activity results showed that the relative inhibition rate of the fermentation supernatant of strain C1 on the egg hatching of M. incognita was 74.50%， the relative inhibition rate on the female hatching was 95.17%， and the 24 and 48 h corrected mortality of the second-stage juvenile were 98.83% and 100.00%， respectively， with stable nematicidal activity. Pot experiment showed that the control effect of 50 times dilution of fermentation broth of strain C1 on tomato M. incognita was 73.24%. The results of field disease control experiment showed that the control effect of 50 times dilution of C1 fermentation broth on cucumber M. incognita was 82.67%， with yield 20.0% higher than that of clear water control.? 【Conclusion】Strain C1 not only shows good control effect on M. incognita， but also promotes crop growth. It can be developed and utilized as biological pesticide and fertilizer in agricultural production.

Key words： Meloidogyne incognita; Lysinibacillus macrolides; identification; nematicidal activity; growth promoting effect

Foundation item：Special Construction Project of China National Modern Agricultural Industrial Technology System （CARS-16-E17）; National Natural Science Foundation of China（31401797， 31871941）

0 引言

【研究意義】植物根結(jié)線蟲(chóng)是一類(lèi)普遍發(fā)生的專(zhuān)性植物寄生病原線蟲(chóng)，可對(duì)3000多種植物的生長(zhǎng)發(fā)育造成嚴(yán)重危害（劉維志，1998;Jones et al.，2013），每年由根結(jié)線蟲(chóng)等植物寄生線蟲(chóng)造成的經(jīng)濟(jì)損失約1500億美元（Li et al.，2015），被認(rèn)為是最嚴(yán)重的寄生線蟲(chóng)（段玉璽，2011）。近年來(lái)，隨著我國(guó)蔬菜和糧食作物種植面積不斷擴(kuò)大、全球氣候變暖以及規(guī)?；s農(nóng)業(yè)的發(fā)展，根結(jié)線蟲(chóng)病害愈發(fā)嚴(yán)重，對(duì)糧食和蔬菜等作物造成嚴(yán)重影響，受根結(jié)線蟲(chóng)侵染的作物生長(zhǎng)發(fā)育緩慢、產(chǎn)量顯著下降，嚴(yán)重制約了我國(guó)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。由于缺乏抗性品種、復(fù)種指數(shù)高等原因，現(xiàn)階段根結(jié)線蟲(chóng)的治理主要應(yīng)用化學(xué)方式，化學(xué)防治雖然可獲得較突出的效果，但由于化學(xué)藥劑存在諸多缺點(diǎn)，如污染生態(tài)環(huán)境、毒性較高等，導(dǎo)致根結(jié)線蟲(chóng)產(chǎn)生一定的抗藥性。尤其在2009年哥本哈根聯(lián)合國(guó)氣候變化大會(huì)召開(kāi)后，世界各國(guó)均在追求低碳環(huán)保發(fā)展，一些對(duì)生態(tài)環(huán)境污染較嚴(yán)重的高毒藥物被禁用，生物防治由于其生態(tài)友好性而為人們所重視（路雪君等，2010;張楠，2017;Gogoi and sarodee，2019;程萬(wàn)里等，2020）。南方根結(jié)線蟲(chóng)是我國(guó)分布最廣和危害最嚴(yán)重的一類(lèi)植物寄生線蟲(chóng)（葛俊杰等，2016;舒然等，2020），目前化學(xué)防治是其主要防治方法，迫切需要經(jīng)濟(jì)有效且對(duì)環(huán)境友好的防治根結(jié)線蟲(chóng)綠色生物農(nóng)藥。因此，利用微生物及其代謝產(chǎn)物防治南方根結(jié)線蟲(chóng)既能殺滅線蟲(chóng)，又符合生態(tài)友好的發(fā)展趨勢(shì)，但仍需挖掘更多的生防資源并應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】根結(jié)線蟲(chóng)生防資源包括真菌、細(xì)菌、放線菌、植物、病毒和捕食性線蟲(chóng)等，其中根際細(xì)菌是當(dāng)前的熱點(diǎn)和主要研究方向（程菊娥和孔曉婷，2017）。在根際細(xì)菌中，對(duì)線蟲(chóng)有活性的多為促生細(xì)菌，主要包括芽孢桿菌屬和假單胞菌屬（Siddiqui and Mahmood，1999）。Mahgoob和El-Tayeb（2010）利用多粘菌UBF15、巨型芽孢桿菌UBF10和圓球芽孢桿菌UBF20等根際細(xì)菌進(jìn)行殺線蟲(chóng)試驗(yàn)，結(jié)果表明UBF15、UBF10和UBF20菌株混合處理能顯著減少線蟲(chóng)在根和土壤中的繁殖，接種后90 d較未接種的對(duì)照根中根結(jié)、卵塊、幼蟲(chóng)和雌蟲(chóng)數(shù)量分別減少74.8%、79.5%、76.8%和53.3%。丁磊（2017）研究發(fā)現(xiàn)，根際細(xì)菌嗜線蟲(chóng)沙雷氏菌PFMP-5在24 h內(nèi)對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)卵的孵化抑制率可達(dá)93%以上。呂達(dá)（2017）從山東省萊蕪市大姜種植區(qū)土壤中分離出23株細(xì)菌，其中菌株E5、E9和E17發(fā)酵液對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)的防效均在98%以上。趙丹（2018）使用5種高效根際細(xì)菌對(duì)番茄種子處理可高效防治南方根結(jié)線蟲(chóng)病，其中變形斑沙雷氏菌處理番茄種子防治根結(jié)線蟲(chóng)為首次報(bào)道。杜珊珊（2018）從煙臺(tái)棲霞和姜疃鎮(zhèn)西洋參地土壤中分離出136株細(xì)菌，其中11株細(xì)菌對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)2齡幼蟲(chóng)（J2）的校正死亡率均在80%以上。趙惠（2018）從北方線蟲(chóng)研究所分離的1458株細(xì)菌中篩選出2株對(duì)蔬菜根結(jié)線蟲(chóng)有良好防效的菌株Sneb811和Sneb709，其校正死亡率分別為98.17%（48 h）和98.09%（48 h），經(jīng)鑒定Sneb811為莓實(shí)假單胞菌、Sneb709為解淀粉芽胞桿菌。劉廣穎（2020）從線蟲(chóng)發(fā)生地分離到包括短小芽孢桿菌DDWD、耐鹽芽孢桿菌DDWA、芽孢桿菌DDWB、蠟樣芽孢桿菌 DDWWAI、海泥芽孢桿菌DDWC、銅綠假單胞菌JNB、東洋芽孢桿菌DDWNEI和假蕈狀芽孢桿菌JNC等8株具有殺線蟲(chóng)活性的根際細(xì)菌，其中菌株DDWC對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)的防效達(dá)69.96%?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前只有蠟樣芽孢桿菌、堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌和蘇云金芽孢桿菌等極少數(shù)生防菌登記應(yīng)用于根結(jié)線蟲(chóng)防治，難以滿足市場(chǎng)需求?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】采用平板稀釋法對(duì)從抗線蟲(chóng)黃瓜根系附近采集的土壤樣品進(jìn)行芽孢桿菌分離，對(duì)篩選獲得的菌株進(jìn)行形態(tài)特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析，進(jìn)一步通過(guò)離體、盆栽和大田試驗(yàn)評(píng)價(jià)分離菌株對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)的防治效果及對(duì)作物的促生作用，為殺線蟲(chóng)制劑的研制與應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

1. 1. 1 供試土壤樣品 2018年7月在湖南省長(zhǎng)沙縣春華基地黃瓜地塊，用取樣器（長(zhǎng)55 cm，直徑2 cm）在抗線蟲(chóng)黃瓜根系附近選5點(diǎn)取土壤樣品，深度10 cm，經(jīng)篩取后將樣品混合裝袋。

1. 1. 2 供試根結(jié)線蟲(chóng)雌蟲(chóng)、蟲(chóng)卵和2齡幼蟲(chóng)的準(zhǔn)備

參照劉維志（1998）的方法，將南方根結(jié)線蟲(chóng)用感病寄主在室內(nèi)盆栽接種擴(kuò)大培養(yǎng)，在根系有大量雌蟲(chóng)出現(xiàn)時(shí)，將根系用水輕輕沖洗，小心挑取雌蟲(chóng);將雌蟲(chóng)放在0.5%次氯酸鈉溶液中消毒3 min，再用無(wú)菌水沖洗3次，放在盛有少量無(wú)菌水的培養(yǎng)皿內(nèi)，25 ℃培養(yǎng)4 d，每隔24 h收集一次新孵化的根結(jié)線蟲(chóng)2齡幼蟲(chóng)，配制根結(jié)線蟲(chóng)液（1000條/mL），4 ℃保存?zhèn)溆?將被南方根結(jié)線蟲(chóng)侵染的根全部剪碎，并直接放置于三角瓶?jī)?nèi)，然后將100 mL 0.5%次氯酸鈉溶液倒入其中，振蕩2 min，再倒進(jìn)200/500目篩組中，通過(guò)自來(lái)水沖洗，對(duì)500目篩網(wǎng)中包含的卵進(jìn)行收集，最后對(duì)卵進(jìn)行稀釋處理，制備1000粒/mL的卵懸浮液。

1. 1. 3 培養(yǎng)基 牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（NA培養(yǎng)基）：牛肉膏5.0 g，蛋白胨10.0 g，NaCl 5.0 g，瓊脂20.0 g，加水至1000 mL，pH 7.0～7.2，121 ℃條件下滅菌30 min。NA液體培養(yǎng)基：牛肉膏3.0 g，蛋白胨5.0 g，葡萄糖2.5 g，加水至1000 mL，pH 7.0～7.2，121 ℃滅菌30 min。

1. 1. 4 主要試劑 細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒（福際生物技術(shù)有限公司），2×Es Taq Master Mix（康為世紀(jì)生物科技有限公司），細(xì)菌通用引物[生工生物工程（上海）股份有限公司]，其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1. 1. 5 主要儀器 OLYMPUS SZ51顯微鏡;OLYM PUS SX23顯微鏡;Eppendorf 5430R離心機(jī)（南京伊若達(dá)儀器設(shè)備有限公司）;LRH-250恒溫生化培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）;全波長(zhǎng)微孔板分光光度計(jì)（Bio Tek/Eon，美國(guó)）;W-CJ-FD超凈工作臺(tái)（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司）;掃描電子顯微鏡（JEXL-230，日本電子株式會(huì)社），ZD-85振蕩培養(yǎng)箱（江蘇金壇市醫(yī)療器械廠）;凝膠成像儀（UVP凝膠成像系統(tǒng)，美國(guó)UVP公司）;BKQ-B100II全自動(dòng)內(nèi)循環(huán)立式高壓蒸汽滅菌器（濟(jì)南歐萊博科學(xué)儀器有限公司）;Eppendorf 5331 PCR儀（上海實(shí)維實(shí)驗(yàn)儀器技術(shù)有限公司）。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 芽孢桿菌分離 參照張立強(qiáng)等（2014）的平板稀釋法，將土壤配制成10-2～10-6懸浮液，分別取100 μL梯度懸浮液涂布于NA培養(yǎng)基上，30 ℃恒溫條件下培養(yǎng)2～4 d，挑選形態(tài)各異的單菌落，在純化培養(yǎng)基上進(jìn)行劃線處理，得到純培養(yǎng)的單菌落，對(duì)菌株進(jìn)行編號(hào)處理，-80 ℃甘油中保藏。

1. 2. 2 芽孢桿菌發(fā)酵液及發(fā)酵上清液制備 將通過(guò)活化處理的單菌落接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，30 ℃下180～220 r/min振蕩培養(yǎng)1～2 d，部分備用;另一部分30 ℃下8000～10000 r/min離心，上清液于4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 2. 3 殺線蟲(chóng)活性芽孢桿菌篩選 采用Giannakou等（2005）的浸漬法，將900 μL芽孢桿菌發(fā)酵上清液與100 μL根結(jié)線J2懸浮液分別添加至24孔板的空穴中，4次重復(fù)。25 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24和48 h后，參考孫海等（2020）的方法在體視顯微鏡下觀察并記錄線蟲(chóng)死亡數(shù)，計(jì)算校正死亡率。設(shè)NA液體培養(yǎng)基為對(duì)照。

死亡率（%）=死亡的線蟲(chóng)數(shù)/觀察的線蟲(chóng)總數(shù)×100

校正死亡率（%）=（處理線蟲(chóng)死亡率-對(duì)照線蟲(chóng)死亡率）/（100-對(duì)照線蟲(chóng)死亡率）×100

1. 2. 4 活性菌株穩(wěn)定性測(cè)定 選取活性菌株，將其涂布于NA培養(yǎng)基上，連續(xù)繼代培養(yǎng)5代后對(duì)各菌株的抗根結(jié)線蟲(chóng)活性進(jìn)行測(cè)定，具體操作方式同1.2.3。

1. 2. 5 活性菌株鑒定

1. 2. 5. 1 培養(yǎng)及形態(tài)特征 參照成飛雪等（2011）的方法，30 ℃恒溫條件下培養(yǎng)24～48 h后觀察菌落大小、顏色、質(zhì)地、形狀和濕潤(rùn)度等。另取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的新鮮菌體于1000 r/min下離心8 min，去掉上清液后收集菌體，再經(jīng)2.5%戊二醛固定后用于電鏡觀察（李培京，2008）。

1. 2. 5. 2 生理生化特性測(cè)定 依據(jù)《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》（東秀珠和蔡妙英，2001）進(jìn)行菌株生理生化特性鑒定。

1. 2. 5. 3 分子生物學(xué)鑒定 參考陳麗潔等（2019）的方法，基于菌株測(cè)序結(jié)果利用MEGA 7.0建構(gòu)系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)。

1. 2. 6 活性菌株發(fā)酵上清液對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)卵孵化的抑制效果 將菌株發(fā)酵上清液配制成原液、5倍和10倍稀釋液3個(gè)梯度（依次記為處理1～處理3），于24孔板中分別加入900 μL不同梯度的發(fā)酵液和100 μL蟲(chóng)卵懸浮液，混勻，各處理重復(fù)3次，以NA液體培養(yǎng)基為對(duì)照（處理4，CK）;25 ℃處理5 d后于體式顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)，計(jì)算南方根結(jié)線蟲(chóng)卵孵化率和相對(duì)抑制率。

1. 2. 7 活性菌株發(fā)酵上清液對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)雌蟲(chóng)孵化的抑制效果 試驗(yàn)設(shè)2個(gè)處理，處理1：菌株發(fā)酵上清液處理，挑選大小相似、新鮮飽滿的南方根結(jié)線蟲(chóng)雌蟲(chóng)，先用0.5%次氯酸鈉溶液消毒2 min，再用無(wú)菌水沖洗，將雌蟲(chóng)放置于含有900 μL發(fā)酵上清液的空穴中（2個(gè)/穴），25 ℃條件下進(jìn)行孵化，5 d后統(tǒng)計(jì)孵化的線蟲(chóng)總數(shù)，求出雌蟲(chóng)孵化抑制率;處理2（CK）：用NA液體培養(yǎng)基作為對(duì)照，處理方式同處理1。

1. 2. 8 活性菌株發(fā)酵上清液對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)J2的殺線蟲(chóng)活性 方法同1.2.3。

1. 2. 9 活性菌株發(fā)酵液對(duì)盆栽番茄南方根結(jié)線蟲(chóng)的防控效果 試驗(yàn)于2019年9—12月在湖南省植物保護(hù)研究所溫室內(nèi)進(jìn)行，試驗(yàn)期間平均濕度70%左右，溫度28 ℃。供試番茄品種鉆紅一號(hào)（市售），以1.8%阿維菌素水乳劑為對(duì)照藥劑。采用灌根法處理。在育苗盤(pán)中，用經(jīng)消毒處理的基質(zhì)培育番茄，番茄長(zhǎng)至4片真葉時(shí)，選擇長(zhǎng)勢(shì)優(yōu)良的番茄苗移植于經(jīng)消毒處理的花盆中，恒溫恒濕溫室培養(yǎng)，定期澆水施肥，保持土壤肥力和濕度;移栽7 d供試番茄植株定根后，在番茄根基部接種線蟲(chóng)，1000頭/株。接蟲(chóng)第5～10 d后，分別用活性菌株發(fā)酵液50倍稀釋液（處理1）、1.8%阿維菌素水乳劑500倍稀釋液（處理2）和NA液體培養(yǎng)基（處理3，CK）灌根，每處理20株番茄苗，50 mL處理液/株，每處理重復(fù)3次;15 d后再灌根處理一次，方法同第1次。第2次處理后30 d進(jìn)行調(diào)查，每處理調(diào)查10株番茄，參考成飛雪等（2011）的方法進(jìn)行番茄根結(jié)線蟲(chóng)危害分級(jí)，計(jì)算病情指數(shù)和防治效果;同時(shí)測(cè)定番茄植株的株高和根長(zhǎng)，計(jì)算增長(zhǎng)率、病情指數(shù)和防治效果。

1. 2. 10 活性菌株發(fā)酵液對(duì)大田黃瓜南方根結(jié)線蟲(chóng)病的防治效果 試驗(yàn)于2020年4—8月在湖南省長(zhǎng)沙縣春華鎮(zhèn)蔬菜基地簡(jiǎn)易大棚內(nèi)進(jìn)行，面積約120 m2，土壤為沙壤土，肥力中等，常年種植蔬菜，灌溉條件良好，歷年均有根結(jié)線蟲(chóng)病發(fā)生，發(fā)病程度中等。供試黃瓜品種為鄂黃三號(hào)（根結(jié)線蟲(chóng)感病品種，市售）。

試驗(yàn)設(shè)5個(gè)處理，處理1～處理3：依次為5×109 CFU/mL活性菌株發(fā)酵液50、100和200倍稀釋液;處理4：1.8%阿維菌素乳油800倍液;處理5：清水對(duì)照（CK）。按500 mL處理液/穴灌蔸處理，每處理4次重復(fù)，每小區(qū)10 m2，22株黃瓜/小區(qū)，各處理按完全隨機(jī)區(qū)組排列，其他水肥管理按常規(guī)。于移栽前（4月25日）進(jìn)行噴藥處理土壤，4月27日移植4葉黃瓜苗，5月2日和7日各灌根1次，共施藥3次。

根結(jié)線蟲(chóng)J2數(shù)量、防治效果、黃瓜長(zhǎng)勢(shì)及產(chǎn)量調(diào)查參考成飛雪等（2011）的方法，計(jì)算根結(jié)線蟲(chóng)J2蟲(chóng)口減退率、統(tǒng)計(jì)病情指數(shù)、防效及黃瓜產(chǎn)量和增長(zhǎng)率。

1. 3 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2013進(jìn)行整理，運(yùn)用SPSS 16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)及差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2. 1 芽孢桿菌的分離及篩選結(jié)果

從抗線蟲(chóng)黃瓜根際土壤樣品中共分離出93株菌株，通過(guò)篩選得到4株校正死亡率為85.00%以上的菌株，其中菌株C1發(fā)酵上清液對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)的校正死亡率約為95.96%，5次繼代培養(yǎng)后的殺線蟲(chóng)活性仍在93.01%左右（圖1），表明菌株C1具有較強(qiáng)的抗根結(jié)蟲(chóng)活性及穩(wěn)定性。

2. 2 菌株C1鑒定

2. 2. 1 菌株形態(tài)鑒定 將菌株C1在NA培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)（圖2），其菌落直徑2～4 mm，圓形、偏淡黃色、光滑、不透明、表面平坦且有光澤、邊緣較整齊，細(xì)菌在電子顯微鏡下呈長(zhǎng)桿（圖3）。

2. 2. 2 菌株生理生化測(cè)定 由表1可知，菌株C1的淀粉水解試驗(yàn)、甲基紅試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)、精氨酸雙水解酶試驗(yàn)和菌膜形成試驗(yàn)呈陰性反應(yīng)，H2O2酶試驗(yàn)呈陽(yáng)性反應(yīng)。

2. 2. 3 菌株16S rDNA序列測(cè)定及系統(tǒng)發(fā)育分析

測(cè)序結(jié)果菌株C1的16S rDNA序列長(zhǎng)度為1455 bp，其N(xiāo)CBI登錄號(hào)為MK949359。將所得序列在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，運(yùn)用MEGA 7.0構(gòu)建菌株C1序列與參比菌株序列的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)，結(jié)果（圖4）顯示，菌株C1與Lysinibacillus macroides（登錄號(hào)KX027335）處于同一個(gè)分支，存在一定的親緣關(guān)系，同源性在99.79%左右。綜合菌株C1形態(tài)、生理生化和分子鑒定結(jié)果，菌株C1鑒定為長(zhǎng)形賴(lài)氨酸芽孢桿菌（L. macroides）。

2. 3 菌株C1發(fā)酵上清液對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)卵的抑制效果

由表2可知，以NA液體培養(yǎng)基為對(duì)照，南方根結(jié)線蟲(chóng)卵5 d的孵化率達(dá)92.3%，但經(jīng)過(guò)菌株C1發(fā)酵上清液原液和5倍、10倍稀釋液處理的卵孵化率為24.1%～33.5%，顯著抑制了南方根結(jié)線蟲(chóng)卵的孵化（P<0.05，下同），相對(duì)抑制率可達(dá)64.72%～74.50%，說(shuō)明菌株C1發(fā)酵上清液能有效抑制南方根結(jié)線蟲(chóng)卵的孵化。

2. 4 菌株C1發(fā)酵上清液對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)雌蟲(chóng)孵化的抑制效果

由表3可知，經(jīng)過(guò)菌株C1發(fā)酵上清液處理后，南方根結(jié)線蟲(chóng)雌蟲(chóng)孵化的相對(duì)抑制率達(dá)95.17%，明顯抑制了南方根結(jié)線蟲(chóng)雌蟲(chóng)的孵化，顯示出良好的應(yīng)用前景。

2. 5 菌株C1發(fā)酵上清液對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)J2的殺線蟲(chóng)活性

菌株C1發(fā)酵上清液對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)J2的24和48 h校正死亡率分別為98.83%和100.00%，說(shuō)明菌株C1發(fā)酵上清液對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)具有顯著的毒殺效果（表4）。

2. 6 菌株C1發(fā)酵液對(duì)盆栽番茄南方根結(jié)線蟲(chóng)的防控效果

盆栽試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)菌株C1發(fā)酵液處理的番茄根結(jié)較少，根系相對(duì)發(fā)達(dá)，而對(duì)照根結(jié)成瘤（圖5）。

由表5可知，經(jīng)菌株C1發(fā)酵液處理的病情指數(shù)明顯低于對(duì)照，防效達(dá)73.24%，且比阿維菌素對(duì)照處理的效果（防效為67.79%）更佳;菌株C1發(fā)酵液處理的番茄株高和根長(zhǎng)較阿維菌素和對(duì)照處理均有明顯增加，分別比對(duì)照處理高58.30%和47.17%。

2. 7 菌株C1發(fā)酵液對(duì)大田黃瓜南方根結(jié)線蟲(chóng)病的防治效果

由表6可知，相較于清水對(duì)照（CK），3種不同濃度的菌株C1發(fā)酵稀釋液處理均能降低黃瓜根圍土壤中根結(jié)線蟲(chóng)J2的種群數(shù)量，尤其是50倍液處理30 d后的蟲(chóng)口減退率達(dá)79.07%，與阿維菌素的防效（82.11%）無(wú)顯著差異（P>0.05，下同）。

從表7可看出，各濃度菌株C1發(fā)酵稀釋液處理對(duì)黃瓜根結(jié)線蟲(chóng)病均有一定的防治效果，其中50倍稀釋液的防效可達(dá)82.67%，與對(duì)照藥劑阿維菌素處理的防效（86.22%）無(wú)顯著差異。施用菌劑后，于黃瓜幼苗期和坐果期測(cè)量黃瓜株高，結(jié)果顯示，3種不同濃度的菌株C1發(fā)酵稀釋液處理對(duì)黃瓜生長(zhǎng)均有一定的促進(jìn)作用，其中50倍稀釋液處理的效果最佳，其苗期和坐果期株高分別較CK高3.3和24.6 cm;同時(shí)，各處理黃瓜產(chǎn)量也顯著提升，尤其是50倍稀釋液處理的黃瓜小區(qū)產(chǎn)量較CK增產(chǎn)22.0%，顯著高于阿維菌素處理（增產(chǎn)率為11.3%）。表明菌株C1發(fā)酵液不僅對(duì)蔬菜根結(jié)線蟲(chóng)病有良好的防治效果，且能促進(jìn)蔬菜生長(zhǎng)，提高作物產(chǎn)量，具有良好的應(yīng)用前景。圖6為大田試驗(yàn)各處理黃瓜植株和根部生長(zhǎng)情況。

3 討論

植物根結(jié)線蟲(chóng)危害作物種類(lèi)廣、傳播途徑多樣，因其寄生于植物根內(nèi)韌皮部，加之蟲(chóng)體結(jié)構(gòu)的特殊性，病原抗藥性很強(qiáng)，僅有少數(shù)幾種化學(xué)農(nóng)藥對(duì)其具有較好的防治效果，但長(zhǎng)期使用會(huì)提高線蟲(chóng)的抗藥性，使防治用藥量日趨增大。本研究篩選的長(zhǎng)形賴(lài)氨酸芽孢桿菌C1菌株對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)具有較高活性，離體對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)卵、雌蟲(chóng)和J2均有較好的控制作用，大田對(duì)黃瓜根結(jié)線蟲(chóng)病亦有較好的防治效果，且能促進(jìn)蔬菜生長(zhǎng)，提高作物產(chǎn)量，具有抗病促生作用。

對(duì)于植物根結(jié)線蟲(chóng)的預(yù)防和防治，生物手段是目前的主要研究方向。植物根結(jié)線蟲(chóng)生防資源是指其在自然界的所有天敵生物，包括真菌、細(xì)菌、放線菌、植物、病毒和捕食性線蟲(chóng)等（祝明亮等，2004;郝昕等，2021），其中生防細(xì)菌是近年的研究熱點(diǎn)，越來(lái)越多的細(xì)菌被分離，不同的作用方式被報(bào)道。根據(jù)作用方式不同，又分為寄生細(xì)菌、內(nèi)生細(xì)菌和根際細(xì)菌3大類(lèi)。研究人員對(duì)根際生防菌進(jìn)行了深入研究，包括資源篩選、活性物質(zhì)分離鑒定及機(jī)理研究等。就生防資源而言，能有效防治植物寄生線蟲(chóng)的根際芽孢桿菌種類(lèi)很多。因芽孢桿菌在自然界各種生境中普遍存在，且環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng)，能自動(dòng)產(chǎn)生多種可抑制線蟲(chóng)活性的代謝物，同時(shí)可有效促進(jìn)植物生長(zhǎng)發(fā)育等（Abd-Elgawad and Askary，2018;Mhatre et al.，2019），而具有防治土傳病害的優(yōu)勢(shì)，如解淀粉芽孢桿菌（朱麗梅等，2009）、巨大芽孢桿菌（梁建根等，2011）、蘇云金芽孢桿菌（成飛雪等，2011）、枯草芽孢桿菌（Khalil et al.，2012）、簡(jiǎn)單芽胞桿菌（王進(jìn)福等，2016）、阿氏芽孢桿菌（姚思敏，2018）、堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌（劉廣穎，2020）和蠟樣芽胞桿菌（趙勁捷等，2020）等多種芽孢桿菌被應(yīng)用于根結(jié)線蟲(chóng)防治，其中利用最成功的是蘇云金芽孢桿菌，為無(wú)公害生產(chǎn)中首推的生物殺蟲(chóng)劑品種（Wei et al.，2003;徐重新等，2019）。賴(lài)氨酸芽孢桿菌與其他芽孢桿菌一樣廣泛存在于土壤、海洋、植物及動(dòng)物體內(nèi)，但相關(guān)應(yīng)用限于生物表面活性劑（Seo et al.，2013）、重金屬污染治理和控制蚊媒疾病（Vargas and Dussán，2013）、胞外多糖生產(chǎn)（曾承露等，2017）、石油降解（李國(guó)麗等，2018）和抑制真菌（鄭雯等，2019）中，對(duì)于在線蟲(chóng)病害防治方面的研究鮮有報(bào)道。

前期研究已證明根際促生菌對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)的控制效果，芽孢桿菌、假單胞菌的細(xì)菌懸液和濾液對(duì)爪哇根結(jié)線蟲(chóng)（Siddiqui and Shaukat，2003）、南方根結(jié)線蟲(chóng)（Radwan et al.，2012）和埃塞俄比亞根結(jié)線蟲(chóng)（Aballay et al.，2013）幼蟲(chóng)的防效均超過(guò)70%，對(duì)卵孵化也有類(lèi)似的效果;同時(shí)，溫室條件下根際細(xì)菌對(duì)根際寄生蟲(chóng)的防效為80%（Aballay et al.，2013）。但目前對(duì)根際細(xì)菌防治線蟲(chóng)的拮抗機(jī)制研究還不夠透徹，大致分為以下幾個(gè)方面：（1）根際細(xì)菌可改變根際分泌物。Racke和Sikora（1992）研究發(fā)現(xiàn)，根際細(xì)菌致使植物根際分泌物發(fā)生改變，進(jìn)而影響其寄生線蟲(chóng)的發(fā)育。（2）根際細(xì)菌通過(guò)代謝產(chǎn)生如抗生素、次生代謝物、酶、NH3、NO2、H2S和小分子物質(zhì)等影響線蟲(chóng)的行為或殺死線蟲(chóng)（郭榮君等，1996;Siddiqui and Shaukat，2003）。程萬(wàn)里等（2020）從江西省湖口縣有機(jī)復(fù)合污染的毛茛根際土壤中分離得到多粘類(lèi)芽胞桿菌KM2501-1產(chǎn)生的環(huán)二肽類(lèi)物質(zhì)cyclo （Pro-Phe）殺線蟲(chóng)效率達(dá)84.75%。（3）根際細(xì)菌與線蟲(chóng)的營(yíng)養(yǎng)和空間位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)。Zuckerman和Kuhlman（2001）研究發(fā)現(xiàn)，主根表層的凝聚素與根結(jié)線蟲(chóng)體表糖蛋白相互識(shí)別從而致使寄主植物受到侵染。（4）根際細(xì)菌誘導(dǎo)作物系統(tǒng)抗性。巨大芽孢桿菌Sneb 207能誘導(dǎo)大豆植株對(duì)大豆孢囊線蟲(chóng)產(chǎn)生系統(tǒng)抗性，使葉綠素含量提高，光合速率增大，從而達(dá)到防治病害的目的（周園園，2016）。以上報(bào)道表明，根際細(xì)菌對(duì)線蟲(chóng)的抑制活性是一種或幾種因子共同作用的結(jié)果。本研究認(rèn)為，正是根際細(xì)菌對(duì)線蟲(chóng)抑制作用機(jī)制呈多樣性的特點(diǎn)，使根際細(xì)菌成為當(dāng)前線蟲(chóng)生物防治中重要的天敵類(lèi)群而受到研究者的關(guān)注。

本研究篩選獲得的長(zhǎng)形賴(lài)氨酸芽孢桿菌C1，前期試驗(yàn)表明其不僅對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)具有毒殺效果，同時(shí)對(duì)花生根結(jié)線蟲(chóng)、爪哇根結(jié)線蟲(chóng)、北方根結(jié)線蟲(chóng)、擬禾本科根結(jié)線蟲(chóng)和模式線蟲(chóng)——秀麗小桿線蟲(chóng)等也具有較高的活性（程菊娥，2020），說(shuō)明該菌株對(duì)線蟲(chóng)具有廣譜抗性。無(wú)論是離體測(cè)試的發(fā)酵上清液還是田間試驗(yàn)發(fā)酵液，菌株C1對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)均具有明顯防效，說(shuō)明該菌株的代謝產(chǎn)物具有殺線蟲(chóng)活性，具有較高的研究?jī)r(jià)值。長(zhǎng)形賴(lài)氨酸芽孢桿菌作為一類(lèi)藥肥兩用的根際微生物在植物線蟲(chóng)病害生物防治方面具有較大的開(kāi)發(fā)潛力，其發(fā)酵液次級(jí)代謝產(chǎn)物的活性物質(zhì)鑒定及其對(duì)線蟲(chóng)的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步探究。

4 結(jié)論

篩選獲得的長(zhǎng)形賴(lài)氨酸芽孢桿菌菌株C1不僅對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)病具有良好的防治效果，且具有促進(jìn)作物生長(zhǎng)的作用，可作為生物農(nóng)藥和肥料在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中開(kāi)發(fā)利用。

參考文獻(xiàn)：

陳麗潔，蘇品，張卓，翟忠英，孔小婷，杜曉華，程菊娥，唐雯，張德詠，劉勇. 2019. 一株耐鹽類(lèi)球紅細(xì)菌的分離鑒定及其對(duì)不同作物的促生作用[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，50（5）：964-973. [Chen L J，Su P，Zhang Z，Zhai Z Y，Kong X T，Du X H，Cheng J E，Tang W，Zhang D Y，Liu Y. 2019. Isolation and identification of one salt-tolerant strain of Rhodobacter sphaeorides and its growth promoting effect on different crops[J]. Journal of Southern Agriculture，50（5）：964-973.] doi：10.3969/j.issn.2095-1191.2019. 05.07.

成飛雪，王忠勇，劉勇，張德詠，程菊娥. 2011. 殺線蟲(chóng)蘇云金芽胞桿菌菌株YC-10的分離鑒定及活性測(cè)定[J]. 中國(guó)生物防治學(xué)報(bào)，27（4）：540-546. [Cheng F X，Wang Z Y，Liu Y，Zhang D Y，Cheng J E. 2011. Identification and nematicidal activities of Bacillus thuringiensis strain YC-10[J]. Chinese Journal of Biological Control，27（4）：540-546.] doi：10.16409/j.cnki.2095-039x.2011.04.020.

程菊娥. 2020. 長(zhǎng)形賴(lài)氨酸芽孢桿菌、微生物菌劑、生防藥劑及其制備方法和應(yīng)用：202010728635.9[P]. 2020-10-13.[Cheng J E. 2020. Lysinibacillus macrolides，microbial agents，biocontrol agents and their preparation methods and applications：202010728635.9[P]. 2020-10-13.]

程菊娥，孔小婷. 2017. 湖南辣椒根結(jié)線蟲(chóng)病生防資源研究概述[J]. 辣椒雜志，15（3）：1-7. [Cheng J E，Kong X T. 2017. Review of biological control species against hot pepper root-knot nematodes in Hunan[J]. Journal of China Capsicum，15（3）：1-7.] doi：10.16847/j.cnki.issn.1672-4542. 2017.03.001.

程萬(wàn)里，陳珍，楊雪，黃典，張吉斌. 2020. 多粘類(lèi)芽胞桿菌KM2501-1殺南方根結(jié)線蟲(chóng)活性產(chǎn)物研究[J]. 微生物學(xué)報(bào)，60（8）：1629-1637. [Cheng W L，Chen Z，Yang X，Huang D，Zhang J B. 2020. Inhibition of Meloidogyne incognita by active compound from Panebacillus polymyxa KM2501-1[J]. Acta Microbiologica Sinica，60（8）：1629-1637.] doi：10.13343/j.cnki.wsxb.20190489.

丁磊. 2017. 生防細(xì)菌PFMP-5對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)的生防機(jī)制及其應(yīng)用研究[D]. 晉中：山西農(nóng)業(yè)大學(xué). [Ding L. 2017. Apprisal and biocontrol mechanism of biocontrol bacteria PFMP-5 against root-knot nematodes[D]. Jinzhong：Shanxi Agriculture University.]

東秀珠，蔡妙英. 2001. 常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)[M]. 北京：科學(xué)出版社：364-398. [Dong X Z，Cai M Y. 2001. Manual for systematic identification of common bacteria[M]. Beijing：Science Press：364-398.]

杜珊珊. 2018. 南方根結(jié)線蟲(chóng)生防菌的篩選及其對(duì)植物系統(tǒng)抗性的影響[D]. 泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué). [Du S S. 2018. Screening of biocontrol bateria agaist Meloidogyne incognita and the effects on plant system resistance[D]. Tai’an：Shandong Agriculture University.]

段玉璽. 2011. 植物線蟲(chóng)學(xué)[M]. 北京：科學(xué)出版社. [Duan Y X. 2011. Plant nematology[M]. Beijing：Science Press.]

葛俊杰，王延紅，劉長(zhǎng)仲. 2016. 南方根結(jié)線蟲(chóng)初始接種量對(duì)番茄生長(zhǎng)的影響及防治指標(biāo)研究[J]. 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，51（5）：57-61. [Ge J J，Wang Y H，Liu C Z. 2016. Effect of initial inoculation amount of meloidogyne incongnita on tomato growth and its control index research[J]. Journal of Gansu Agricultural University，51（5）：57-61.]

郭榮君，劉杏忠，楊懷文. 1996. 應(yīng)用根際細(xì)菌防治植物寄生線蟲(chóng)的研究[J]. 中國(guó)生物防治，12（3）：134-137. [Guo R J，Liu X Z，Yang H W. 1996. Study on the biocontrol of plant-parasitic new atodes by rhizobacteria[J]. Chines Jounal of Biological Control，12（3）：134-137.]

郝昕，王博文，陳潔，李洋，馬玲. 2021. 食線蟲(chóng)真菌防治植物寄生線蟲(chóng)研究進(jìn)展[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，50（1）：1-9. [Hao X，Wang B W，Chen J，Li Y，Ma L. 2021. Research progress of nematophagous fungi against plant parasitic nematodes[J]. Journal of Henan Agricultural Sciences，50（1）：1-9.] doi：10.15933/j.cnki.1004-3268.2021.01.001.

李國(guó)麗，曾小英，翟立翔，冷艷，劉夢(mèng)圓，李師翁，陳拓. 2018. 一株石油降解菌Lysinibacillus fusiformis 23-1的篩選鑒定及原油降解特性[J]. 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，30（7）：1229-1236. [Li G L，Zeng X Y，Zhai L X，Leng Y，Liu M Y，Li S W，Chen T. 2018. Screening，identification and charac-teristics of Lysinibacillus fusiformis 23-1 for petroleum degradation[J]. Acta Agriculturae Zhejiangensis，30（7）：1229-1236.] doi：10.3969/j.issn.1004-1524.2018.07.17.

李培京. 2008. 掃描電鏡生物樣品制備與觀察[J]. 現(xiàn)代科學(xué)儀器，（3）：124-125. [Li P J. 2008. Preparation and observation of biological samples by SEM[J]. Modern Scientific Instruments，（3）：124-125.]

梁建根，鄭經(jīng)武，郝中娜，王連平，陶榮祥，張昕. 2011. 生防菌K-8對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)的防治及其鑒定[J]. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，27（21）：282-286. [Liang J G，Zheng J W，Hao Z N，Wang L P，Tao R X，Zhang X. 2011. The identification of biocontrol bacterium k-8 and its biological control against Meloidogyne incognita[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin，27（21）：282-286.]

劉廣穎. 2020. 防治南方根結(jié)線蟲(chóng)生防細(xì)菌及其活性揮發(fā)物的篩選、鑒定和初步應(yīng)用[D]. 泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué). [Liu G Y. 2020. Screening，identification and primary application of biocontrol bacteria and their volatile organic compounds against Meloidogyne incognita[D]. Tai’an：Shandong Agriculture University.]

劉維志. 1998. 植物病原線蟲(chóng)學(xué)[M]. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社. [Liu W Z. 1998. Plant pathogenic nematology[M]. Beijing：China Agricultural Press.]

路雪君，廖曉蘭，成飛雪，劉勇. 2010. 根結(jié)線蟲(chóng)的生物防治研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào)，12（4）：44-48. [Lu X J，Liao X L，Cheng F X，Liu Y. 2010. Research progressin biocontrol of meloidogyne[J]. Journal of Agricultural Science and Technology，12（4）：44-48.] doi：10.3969/j.issn. 1008-0864.2010.04.09.

呂達(dá). 2017. 南方根結(jié)線蟲(chóng)生防菌的篩選、鑒定以及防治效果研究[D]. 泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué). [Lü D. 2017. Screening and identification of biocontrol bacteria and their effects on Meloidogyne incognita[D]. Tai’an：Shandong Agriculture University.]

舒然，李磊，龍友華，顧桂飛，張竹竹，尹顯慧. 2020. 獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)形態(tài)觀察與病原鑒定[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，51（12）：2971-2977. [Shu R，Li L，Long Y H，Gu G F，Zhang Z Z，Yin X H. 2020. Morphological observation and pathogen identification of kiwifruit root-knot nematodes[J]. Journal of Southern Agriculture，51（12）：2971-2977.] doi：10.3969/j.issn.2095-1191.2020.12. 013.

孫海，馮鵬，王俊俠，李云龍，李錦，胡彬，王胤，曹金娟，鄭建秋. 2020. 20%辣根素水乳劑對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)的室內(nèi)毒力[J]. 蔬菜，（12）：48-50. [Sun H，F(xiàn)eng P，Wang J X，Li Y L，Li J，Hu B，Wang Y，Cao J J，Zheng J Q. 2020. The indoor toxicity of 20% allyl isothiocyanate water emulsion to Meloidogyne incognita[J]. Vegetables，（12）：48-50.]

王進(jìn)福，文才藝，劉偉成，董丹，裘季燕，劉霆. 2016. 根結(jié)線蟲(chóng)生防細(xì)菌的篩選及鑒定[J]. 北方園藝，（9）：121-124. [Wang J F，Wen C Y，Liu W C，Dong D，Qiu J Y，Liu T. 2016. Screening and identification of bocontrol bacterial against root-knot nematode[J]. Northern Horticulture，（9）：121-124.] doi：10.11937/bfyy.201609032.

徐重新，劉敏，張霄，劉媛，張存政，劉賢金. 2019. 農(nóng)藥危害風(fēng)險(xiǎn)及其殘留檢測(cè)用廣譜特異性抗體研究進(jìn)展[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，35（2）：489-496. [Xu C X，Liu M，Zhang X，Liu Y，Zhang C Z，Liu X J. 2019. Advances in the develop-ment of broad-specificity antibodies for pesticide residue determination[J]. Jiangsu Journal of Agricultural Scien-ces，35（2）：489-496.] doi：10.3969/j.issn.1000-4440.2019. 02.033.

姚思敏. 2018. 具殺植物線蟲(chóng)活性的芽孢桿菌篩選[D]. 長(zhǎng)沙：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué). [Yao S M. 2018. Screening Bacillus strains against plant-parasitic nematodes[D]. Changsha：Hunan Agriculture University.]

曾承露，李鋒，黃德娜. 2017. 紡錘形賴(lài)氨酸芽孢桿菌P-3產(chǎn)胞外多糖發(fā)酵工藝參數(shù)優(yōu)化[J]. 中國(guó)釀造，36（6）：111-115. [Zeng C L，Li F，Huang D N. 2017. Optimization of fermentation technical parameters of Lysinibacillus fusiformis P-3 for exopolysaccharides production[J]. China Brewing，36（6）：111-115.] doi：10.11882/j.issn.0254-5071. 2017.06.023.

張立強(qiáng)，黃惠琴，崔瑩，鄒瀟瀟，劉敏，鮑時(shí)翔. 2014. 一株抗根結(jié)線蟲(chóng)芽孢桿菌的分離篩選及鑒定[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào)，35（9）：1825-1829. [Zhang L Q，Huang H Q，Cui Y，Zou X X，Liu M，Bao S X. 2014. Separation，screening and identification of Bacillus sp. antagonistic to root-knot nematodes[J]. Chinese Journal of Tropical Crops，35（9）：1825-1829.] doi：10.3969/j.issn.1000-2561.2014.09.027.

張楠. 2017. 我國(guó)殺線蟲(chóng)劑登記現(xiàn)狀及問(wèn)題分析[J]. 農(nóng)藥科學(xué)與管理，38（7）：23-30. [Zhang N. 2017. Status and ana-lysis of nematicides registered in China[J]. Pesticide Scien-ce and Administration，38（7）：23-30.] doi：10.3969/j.issn. 1002-5480.2017.07.004.

趙丹. 2018. 假單胞菌誘導(dǎo)番茄抗根結(jié)線蟲(chóng)的機(jī)理研究[D]. 沈陽(yáng)：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué). [Zhao D. 2018. Mechanism of Pseudomonas induced tomato resistance to root knot nematode[D]. Shenyang：Shenyang Agriculture University.]

趙惠. 2018. 殺線蟲(chóng)活性生防細(xì)菌篩選鑒定及脂肽的初步分離[D]. 沈陽(yáng)：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué). [Zhao H. 2018. Screening and identification of nematicidal bacteria and preliminary separation of lipopeptide[D].Shenyang：Shenyang Agriculture University.]

趙勁捷，王帥，范海燕，趙迪，劉曉宇，朱曉峰，王媛媛，段玉璽，陳立杰. 2020. 防治南方根結(jié)線蟲(chóng)的根瘤內(nèi)生細(xì)菌的篩選及鑒定[J]. 中國(guó)生物防治學(xué)報(bào)，36（5）：811-820. [Zhao J J，Wang S，F(xiàn)an H Y，Zhao D，Liu X Y，Zhu X F，Wang Y Y，Duan Y X，Chen L J. 2020. Screening and identification of endophytic bacteria isolated from root nodules for control of Meloidogyne incognita[J]. Chinese Journal of Biological Control，36（5）：811-820.] doi：10.16409/j.cnki.2095-039x.2020.05.023.

鄭雯，楊興變，康冀川，李洪慶. 2019. 賴(lài)氨酸芽孢桿菌He14發(fā)酵產(chǎn)物抗真菌活性的初步研究[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè)，45（18）：22-26. [Zheng W，Yang X B，Kang J C，Li H Q. 2019. Antifungal activity of fermentation broth of Lysinibacillus fusiformis He14[J]. Food and Fermentation Industries，45（18）：22-26.] doi：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.020905.

周園園. 2016. 巨大芽孢桿菌Sneb207誘導(dǎo)大豆抗胞囊線蟲(chóng)機(jī)理研究[D]. 沈陽(yáng)：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué). [Zhou Y Y.? 2016.? Biocontrol control mechanism of Bacillus megaterium Sneb207 against soybean cyst nematode[D]. Shenyang：Shenyang Agriculture University.]

朱麗梅，吳小芹，陳江天，徐旭凌. 2009. 一株毒殺松材線蟲(chóng)的解淀粉芽孢桿菌活性物質(zhì)的基本性質(zhì)[J]. 中國(guó)生物防治，25（4）：359-363. [Zhu L M，Wu X Q，Chen J T，Xu X L. 2009. Elementary properties of the nematicidal crude toxin produced by Bacillus amyloliquefaciens JK-JS3[J]. Chinese Journal of Biological Control，25（4）：359-363.] doi：10.16409/j.cnki.2095-039x.2009.04.018.

祝明亮，李天飛，張克勤，夏振遠(yuǎn). 2004. 根結(jié)線蟲(chóng)生防資源概況及進(jìn)展[J]. 微生物學(xué)通報(bào)，31（1）：100-104. [Zhu M L，Li T F，Zhang K Q，Xia Z Y. 2004. Overview and progress of resources for biological control of root-knot nematodes[J]. Microbiology China，31（1）：100-104.] doi： 10.13344/j.microbiol.china.2004.01.024.

Aballay E，Ordenes P，M?rtensson A，Persson P. 2013. Effect of rhizobacteria on parasitism by Meloidogyne ethiopica on grapevines[J]. European Journal of Plant Pathology，135：137-145. doi： 10.1007/s10658-012-0073-7.

Abd-Elgawad M M M，Askary T H. 2018. Fungal and bacterial nematicides in integrated nematode management strategies[J]. Egyptian Journal of Biological Pest Control，28（1）：74. doi： 10.1186/s41938-018-0080-x.

Giannakou I O，Karpouzas D G，Anastasiades I，Tsiropoulos N G ，Georgiadou A. 2005. Factors affecting the efficacy of non-fumigant nematicides for controlling root-knot nematodes[J]. Pest Management Science，61（10）：961-972.? doi：10.1002/ps.1081.

Gogoi B B，Sarodee B. 2019. Bio-management of root knot nematode in long pipper[J]. Annals of Plant Protection Sciences，27（1）：159-160. doi： 10.5958/0974-0163.2019. 00031.4.

Jones J T，Haegeman A，Danchin E G J，Gaur H S，Helder J，Jones M G K，Kikuchi T，Manzanilla-López R，Palomares-Rius J，Weseael W M L，Perry R N. 2013. Top 10 plant-parasitic nematodes in molecular plant pathology[J]. Molecular Plant Pathology，14（9）：946-961. doi： 10.1111/ mpp.12057.

Khalil M S E H，Allam A F G，Barakat A S T. 2012. Nematicidal activity of some biopesticide agents and microorganisms against root-knot nematode on tomato plants under greenhouse conditions[J]. Journal of Plant Protection Research，52（1）：47-52. doi：10.2478/v10045-012-0008-5.

Li J，Zou C G，Xu J P，Ji X L，Niu? M，Yang J K，Huang X W，Zhang K Q. 2015. Molecular mechanisms of nematode-nematophagous microbe interactions：Basis for biological control of plant-parasitic nematodes[J]. Annual Review of Phytopathology，53（1）：67-95. doi：10.1146/annurev-phyto-080614-120336.

Mahgoob A，El-Tayeb T. 2010. Biological control of the root-knot nematode，Meloidogyne incognita on tomato using plant growth promoting bateria[J]. Egyptian Journal of Biological Pest Control，20（2）：95-103.

Mhatre P H，Karthik C，Kadirvelu K，Divya K L，Venkatasalam E P，Srinivasan S，Ramkumar G，Saranya C，Shanmuganathan R. 2019. Plant growth promoting rhizobacteria（PGPR）：A potential alternative tool for nematodes bio-control[J]. Biocatalysis and Agricultural Biotechnolog，17：119-128. doi： 10.1016/j.bcab.2018.11.009.

Radwan M A，F(xiàn)arrag S A A，Abu-Elamayem M M，Ahmed N S. 2012. Biological control of the root-knot nematode，Meloidogyne incognita on tomato using bioproducts of microbial origin[J]. Applied Soil Ecology，56：58-62. doi：10.1016/j.apsoil.2012.02.008.

Racke J，Sikora R A. 1992. Isolation，formulation and antagonistic activity of rhizobacteria toward the potato cyst nematode Globodera pallida[J]. Soil Biology and Biochemistry，24（6）：521-526. doi：10.1016/0038-0717（92）90075-9.

Seo M H，Kim K R，Oh D K. 2013. Production of a novel compound，10，12-dihydr-oxystearic acid from ricinoleic acid by an oleate hydratase from Lysinibacillus fusiformis[J]. Applied Microbiology and Biotechnology，97（20）：8987-8995. doi： 10.1007/s00253-013-4728-x.

Siddiqui I A，Shaukat S S. 2003. Suppression of root-knot disea-se by Pseudomonas fluorescens CHA0 in tomato：Importance of bacterial secondary metabolite，2，4-diacetyl-pholoroglucinol[J]. Soil Biology and Biochemistry，35：1615-1623. doi： 10.1016/j.soilbio.2003.08.006.

Siddiqui Z A，Mahmood I. 1999. Role of bacteria in the mana-gement of plant parasitic nematodes：A review[J]. Bioresource Technology，69（2）：167-179. doi：10.1016/S0960- 8524（98）00122-9.

Vargas J E，Dussán J. 2016. Adsorption of toxic metals and control of mosquitos-borne disease by Lysinibacillus sphaericus：Dual benefits for health and environment[J]. Biomedical and Environmental Sciences，29（3）：187-196. doi： 10.3967/bes2016.023.

Wei J Z，Hale K，Carta L，Platzer E，Wrong C，F(xiàn)ang S C，Ra-ffi V A. 2003. Bacillus thuringiensis crystal proteins that target nematodes[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，100（5）：2760-2765. doi：10.1073/pnas.0538072100.

Zuckerman M，Kuhlman D M. 2001. Personality and risk-taking：Common bisocial factors[J]. Journal of Personality，68（6）：999-1029.

（責(zé)任編輯 麻小燕）