胡發(fā)文, 王曉龍, 高鳳祥, 李 莉, 菅玉霞, 王 雪, 樊 英, 潘 雷, 郭 文
溫度、鹽度和兩種麻醉劑對大瀧六線魚幼魚耗氧率、排氨率的影響
胡發(fā)文, 王曉龍, 高鳳祥, 李 莉, 菅玉霞, 王 雪, 樊 英, 潘 雷, 郭 文
(山東省海洋生物研究院 山東省海水養(yǎng)殖病害防治重點實驗室, 山東 青島 266104)
采用靜水呼吸室法, 研究了溫度、鹽度和兩種麻醉劑(丁香油、MS-222)對體質(zhì)量為(6.44±0.59) g的大瀧六線魚幼魚耗氧率和排氨率的影響。實驗分別設置了5個溫度梯度(8 ℃、12 ℃、16 ℃、20 ℃、24 ℃), 5個鹽度梯度(15‰、20‰、25‰、30‰、35‰), 6個丁香油濃度梯度(0、8、16、24、32、40 mg/L)和5個MS-222濃度梯度(0、10、20、30、40 mg/L)。結(jié)果顯示, 溫度、鹽度和兩種麻醉劑均對耗氧率和排氨率有顯著性影響。8 ℃時, 耗氧率和排氨率最低, 隨溫度升高先升高后降低, 且均在20 ℃時達到峰值; 鹽度30‰時, 耗氧率和排氨率最低, 鹽度升高或降低都會導致耗氧率和排氨率升高; 丁香油和MS-222均能有效降低大瀧六線魚的耗氧率和排氨率, 其中丁香油的降低效果更為明顯; 丁香油濃度為24 mg/L時或MS-222為20 mg/L時可使大瀧六線魚處于深度鎮(zhèn)定期, 結(jié)合耗氧率及排氨率變化, 認為上述濃度是大瀧六線魚幼魚保活運輸?shù)淖罴褲舛? 本研究所有處理組的O∶N比值范圍均在14.77~24.11之間, 表明適宜溫度和鹽度條件下, 大瀧六線魚幼魚主要由蛋白質(zhì)和脂肪提供能量。研究認為, 適度降溫、自然鹽度和適宜濃度的麻醉劑處理均可顯著降低大瀧六線魚幼魚的呼吸代謝強度, 其中丁香油相比MS-222作用效果更加明顯。本研究結(jié)果為實現(xiàn)大瀧六線魚高質(zhì)量運輸提供了科學參考。
大瀧六線魚; 耗氧率; 排氨率; 丁香油; MS-222
大瀧六線魚()又名歐氏六線魚、六線魚, 隸屬于鲉形目(Scorpaeniformes)、六線魚科(Hexagrammidate)、六線魚屬(), 為冷溫性近海底層巖礁魚類, 在中國主要分布于山東、遼寧和江蘇等地的近海多巖礁海區(qū)[1]。大瀧六線魚肉質(zhì)細嫩、營養(yǎng)豐富, 素有“北方石斑”的美稱, 深受廣大消費者喜愛, 是中國北方網(wǎng)箱養(yǎng)殖、增殖放流和資源修復的理想種類, 具有廣闊的推廣前景。
魚類在運輸過程中極易受到外界的環(huán)境脅迫, 如果運輸方式不合理或操作不當, 很可能會影響魚類健康, 甚至引起魚類死亡。在活魚運輸中經(jīng)常采用降溫、麻醉處理等方法, 以降低魚類呼吸代謝強度, 提高運輸成活率[2]。可用于水產(chǎn)動物的化學麻醉劑種類較多, 其中以丁香油(主要成分為丁香酚)和MS-222(間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽, C10H15NO5S)在養(yǎng)殖生產(chǎn)中應用最為廣泛[3]。耗氧率和排氨率是評價水生動物生理狀況的重要指標, 能夠反映生物個體在所處環(huán)境下的呼吸和代謝水平[4]。通過研究各種因素對耗氧率和排氨率的影響及變化規(guī)律, 可以了解魚體的代謝水平和活動規(guī)律等, 為魚類人工繁育、養(yǎng)殖生產(chǎn)、活魚運輸、增殖放流等提供科學依據(jù)。目前, 雖然已有一些關于環(huán)境因子(溫度、鹽度等)和麻醉劑對部分魚類耗氧率和排氨率影響的研究[5-8], 但在六線魚屬中尚未見相關報道。本研究探討了不同溫度、鹽度和麻醉劑對大瀧六線魚耗氧率和排氨率的影響情況, 以期為大瀧六線魚的安全養(yǎng)殖生產(chǎn)、?;钸\輸和增殖放流等提供科學參考。
實驗用大瀧六線魚幼魚取自山東省海洋生物研究院鰲山衛(wèi)中試基地, 全長(7.9±0.8) cm, 體質(zhì)量(6.44± 0.59) g, 所有個體均體色正常、體質(zhì)健壯、無傷病。實驗開始前暫養(yǎng)7 d, 暫養(yǎng)用水為砂濾自然海水, 水溫為(15±0.5) ℃, 溶氧為(7.0±0.3) mg/L, 鹽度為31‰, pH為(8.0±0.2), 每日適量投喂海水魚專用配合飼料。
實驗用麻醉劑丁香油和MS-222購自武漢普洛斯試劑有限公司。丁香油中丁香酚含量為85%, 將其按質(zhì)量比為1∶5的比例溶于酒精后再溶于水配制成母液; MS-222呈白色粉末狀, 將其與NaHCO3按質(zhì)量比為1∶1混合后溶于水配制成MS-222母液。實驗時按所需濃度將二者稀釋并攪拌均勻。
1.2.1 實驗設計與分組
采用靜水呼吸室法, 實驗裝置為自制的密封靜止水式呼吸測定儀, 根據(jù)魚體大小選用2.5 L錐形瓶作為實驗瓶, 實驗時注滿海水, 用保鮮膜密封口, 保證無氣泡, 恒溫水浴控溫, 溫度誤差在±0.5 ℃內(nèi)。幼魚停食1 d后開始實驗, 各實驗組使用4個實驗瓶, 包含3個代謝瓶(作為平行)和1個空白瓶, 每個代謝瓶中各隨機投放5尾幼魚, 空白瓶中不放魚, 條件與代謝瓶相同。實驗在暗光條件下進行, 實驗時長1 h, 結(jié)束后顛倒搖晃3~5次, 以保證水體內(nèi)溶解氧和氨氮均勻, 利用虹吸法將導管插入瓶底部采集水樣, 立即用Winkler氏碘量法和奈氏試劑法測定各代謝瓶和空白瓶中的溶解氧和氨氮濃度。用濾紙吸干幼魚體表水分, 在電子天平上稱量濕重(精確到0.01 g)。
實驗分組情況為: 溫度實驗設置5個梯度, 分別為8 ℃、12 ℃、16 ℃、20 ℃、24 ℃, 各梯度水體鹽度均為31‰; 鹽度實驗設置5個梯度, 分別為15‰、20‰、25‰、30‰、35‰, 各梯度水溫均為(15±0.5) ℃; 麻醉劑實驗, 其中丁香油設置6個濃度梯度, 分別為0、8、16、24、32、40 mg/L, MS-222設置5個濃度梯度, 分別為0、10、20、30、40 mg/L, 各處理組水溫(15±0.5) ℃, 鹽度31‰。
1.2.2 耗氧率和排氨率的測定
耗氧率、排氨率、氧氮比(O∶N)的計算公式分別為:
O=(O1O2)×/(×),
A=(A2A1)×/(×)。
O∶N=O/A
式中:O為耗氧率[mg/(g·h)];A為排氨率[μg/(g·h)];O1、O2分別為實驗結(jié)束時空白瓶和代謝瓶中溶解氧濃度(mg/L);A1、A2分別為實驗結(jié)束時空白瓶和代謝瓶中氨氮濃度(μg/L);為實驗瓶體積(L);為代謝瓶中幼魚的總體質(zhì)量(g);為實驗持續(xù)時間(h)。
實驗結(jié)果均采用平均值±標準差(mean±S.D.)表示, 用Excel 2010與SPSS 22.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析, 利用單因素方差分析(one-way ANOVA)結(jié)合Duncan多重比較, 顯著性水平設為0.05。
不同溫度對大瀧六線魚幼魚的耗氧率、排氨率及氧氮比的影響結(jié)果如表1所示。幼魚的耗氧率隨水溫的升高先升高后降低, 在8 ℃時耗氧率最低, 與12 ℃時差異不顯著(>0.05), 顯著低于16 ℃、20 ℃和24 ℃時的耗氧率(<0.05)。20 ℃時耗氧率達到最高, 但與16 ℃和20 ℃時差異不顯著(>0.05)。
表1 不同溫度對大瀧六線魚幼魚的耗氧率和排氨率及氧氮比(O∶N)的影響
注: 同一列中, 上標字母相同者表示無顯著差異(>0.05), 反之, 則有顯著差異(<0.05), 下同。
幼魚排氨率隨溫度的升高先升高后降低, 8 ℃時排氨率僅為(9.20±0.56) μg/(g·h), 顯著低于其他溫度梯度(<0.05), 20 ℃時排氨率達到(21.60±0.71) μg/(g·h), 顯著高于其他溫度梯度(<0.05)。
水溫8~24 ℃時, 大瀧六線魚的氧氮比為16.65~24.11, 呈先上升后下降趨勢。8 ℃時O∶N比值最高, 為24.11, 20 ℃時O∶N比值最低, 為16.65。
不同鹽度對大瀧六線魚幼魚的耗氧率、排氨率及氧氮比的影響結(jié)果如表2所示。鹽度30‰時幼魚的耗氧率最低, 鹽度升高或者降低均導致耗氧率升高。其中, 鹽度15‰時顯著低于鹽度30‰時的耗氧率(<0.05), 而鹽度20‰、25‰和35‰時與鹽度30‰時的耗氧率差異不明顯(>0.05)。
表2 不同鹽度對大瀧六線魚幼魚的耗氧率、排氨率及氧氮比(O∶N)的影響
鹽度30‰時幼魚的排氨率顯著低于其他鹽度梯度(<0.05), 隨鹽度的升高和降低, 排氨率均有上升的趨勢。鹽度15‰時排氨率顯著高于其他鹽度梯度(<0.05)。
鹽度為15‰~35‰時, 大瀧六線魚幼魚O∶N比值變化范圍在14.77~17.79, 呈先上升后下降趨勢。其中, 鹽度15‰時O∶N比值最低, 為14.77, 鹽度30‰時O∶N比值最高, 為17.79。
不同濃度的丁香油、MS-222對大瀧六線魚幼魚的耗氧率、排氨率及氧氮比的影響結(jié)果如表3所示。幼魚耗氧率隨丁香油濃度的升高而降低, 且高濃度丁香油處理組(濃度為24、32、40 mg/L)顯著低于低濃度丁香油處理組(濃度為8、16 mg/L)(<0.05), 其中以40 mg/L處理組最低, 相比0 mg/L時下降了46.37%。加入不同濃度的MS-222后, 幼魚耗氧率呈現(xiàn)不同程度的下降, 其中濃度為40 mg/L的處理組顯著低于0 mg/L的處理組(<0.05), 下降了17.62%, 其他處理之間無顯著差異(>0.05)。
幼魚排氨率隨丁香油濃度的升高而降低, 丁香油濃度為40 mg/L時排氨率最低, 相比0 mg/L的處理組下降了28.66%, 且顯著低于濃度為8、16 mg/L的處理組(<0.05), 但與濃度為24、32 mg/L的處理差異不顯著(>0.05)。幼魚排氨率隨MS-222濃度的升高而降低, 其中以40 mg/L處理組最低, 顯著低于0、10 mg/L的處理組(<0.05), 下降了11.73%, 但與20、30 mg/L濃度時差異不顯著(>0.05)。
表3 不同濃度的丁香油、MS-222對大瀧六線魚幼魚的耗氧率、排氨率及氧氮比(O∶N)的影響
經(jīng)過丁香油和MS-222麻醉后, 幼魚O∶N比值均有所下降。其中丁香油濃度為40 mg/L時O∶N比值最低, 麻醉前后由20.53下降至15.67; MS-222濃度為10 mg/L時O∶N比值最低, 麻醉前后由20.53下降至19.18。
溫度是影響魚類呼吸和排泄等代謝活動的最重要環(huán)境因子[9]。適溫條件下, 溫度越高, 魚類體內(nèi)酶活力就越高, 消化、循環(huán)、運動等各系統(tǒng)的生理機能也更加旺盛, 呼吸代謝對氧氣消耗也隨之增加[10]。本研究表明, 在8~20 ℃范圍內(nèi), 隨溫度上升, 大瀧六線魚的耗氧率顯著增加, 說明大瀧六線魚符合適溫范圍內(nèi)耗氧率隨溫度升高而增加的一般規(guī)律。宋蘇祥等[11]認為, 當溫度升高至適溫范圍以外時, 魚體的生理機能發(fā)生改變, 一些機能性代謝甚至因為溫度超過魚體的適應范圍而停止活動。大瀧六線魚幼魚適溫范圍為14~23 ℃[12], 本研究中24 ℃超出了其適宜范圍, 耗氧率呈現(xiàn)一定程度的降低, 說明溫度對大瀧六線魚呼吸代謝的影響符合上述規(guī)律。此結(jié)論與珍珠龍膽石斑魚(♀×♂)[7]、硬頭鱒()[13]上的研究結(jié)果一致。
孫麗華等[14]對軍曹魚()的研究認為, 在一定溫度范圍內(nèi), 隨溫度升高, 魚體內(nèi)參與催化脫氨反應的酶活性增強, 致使排氨率升高; 而當溫度超出適應范圍后, 相應的酶會失去部分活性, 催化脫氨反應變緩, 結(jié)果表現(xiàn)為排氨率下降。本研究結(jié)果表明大瀧六線魚幼魚的排氨率隨溫度的變化規(guī)律與之相似, 即在8~20 ℃溫度范圍內(nèi), 排氨率隨溫度升高呈現(xiàn)上升趨勢, 而升至24 ℃后, 又呈現(xiàn)一定程度的下降。然而, Savitz等[15]和Jobling等[16]分別對藍鰓太陽魚()和歐洲鰈()的研究結(jié)果顯示排氨率與溫度呈正相關關系, 高溫條件下的排氨率并未表現(xiàn)出下降趨勢, 這可能與實驗對象的物種差異有關。
鹽度也是影響海水魚類生理水平的重要環(huán)境因子, 鹽度改變會引起魚類耗氧率和排氨率產(chǎn)生相應變化[17]。本研究表明, 大瀧六線魚幼魚在鹽度30‰時, 耗氧率和排氨率均處最低水平, 鹽度升高或降低均會導致耗氧率和排氨率的升高。大瀧六線魚呼吸和代謝隨鹽度變化規(guī)律可能與其生活習性有關, 作為底棲巖礁性魚類, 其生存環(huán)境的鹽度比較穩(wěn)定, 對生態(tài)環(huán)境的長期適應使其在自然海水中耗氧率和代謝率較低, 而偏離正常鹽度后外界環(huán)境脅迫壓力增加, 導致耗氧率和排氨率升高。與本研究觀點類似, 李加兒等[8]、Norman等[18]和姚學良等[19]對鯔()、平鯛()和豹紋鰓棘鱸()的研究均表明長期棲息環(huán)境下的耗氧率和排氨率較低。也有學者[10, 20]認為, 代謝率的變化受滲透壓調(diào)節(jié)耗能的變化影響, 根據(jù)滲透壓調(diào)節(jié)原理, 魚類在等滲點時滲透壓力最小, 其代謝率也最小, 因此對于一些廣鹽性海水魚類, 適當降低鹽度后生長速度提高。本研究中大瀧六線魚幼魚的耗氧率和排氨率隨鹽度降低未呈現(xiàn)下降的趨勢, 而且其適宜鹽度為15‰~40‰, 超出適宜鹽度后呈現(xiàn)負增長, 死亡率升高[12], 這說明大瀧六線魚適鹽范圍較窄, 不宜采用降低鹽度的方法降低代謝率, 提高生長速度。
活魚運輸過程中使用麻醉劑一方面可以降低呼吸和代謝, 降低溶氧消耗, 減少氨氮等排泄物累積, 維持良好水質(zhì), 減輕環(huán)境脅迫壓力[21]; 另一方面又可以使魚類保持鎮(zhèn)定, 降低活動能力, 避免因環(huán)境驟變、驚嚇等引起的魚體機械損傷[22]。本研究結(jié)果表明, 添加丁香油或者MS-222后, 大瀧六線魚幼魚的耗氧率和排氨率均有所下降, 說明兩種麻醉劑均可有效降低呼吸和代謝強度; 同時, 經(jīng)行為學觀察, 使用上述兩種麻醉劑后, 魚的行動均變得遲緩, 對外界的應激反應減弱, 這必然會降低運輸過程中魚體受機械損傷的風險。
麻醉劑通過鰓絲或體表進入魚體內(nèi)后, 首先抑制腦的皮質(zhì), 再作用于基底神經(jīng)節(jié)和小腦, 最后作用于脊髓, 而如果劑量過大或作用時間過長會深及髓質(zhì), 麻痹呼吸和血液循環(huán)中樞[23]。隨著麻醉劑對神經(jīng)系統(tǒng)不同部位先后產(chǎn)生作用, 魚類依次表現(xiàn)出不同的行為特征, 魏鎖成[24]根據(jù)這些行為表現(xiàn)將麻醉程度分為6個時期(見表4), 其中, 第2期(深度鎮(zhèn)定期)被認為是活魚運輸?shù)淖罴褧r期。而魚類到達的最終時期與麻醉劑濃度直接相關, 本研究中通過行為觀察, 發(fā)現(xiàn)大瀧六線魚幼魚在丁香油濃度24 mg/L或MS-222濃度20 mg/L時大瀧六線魚幼魚處于深度鎮(zhèn)定期(第2期)。從耗氧率和排氨率結(jié)果來看, 上述兩種麻醉劑的濃度時大瀧六線魚幼魚耗氧率和排氨率均顯著低于低濃度處理組, 而與高濃度處理組差異不顯著。綜上, 本研究認為在水溫(15±0.5) ℃, 鹽度31‰條件下, 24 mg/L、20 mg/L分別是丁香油和MS-222用于大瀧六線魚幼魚活魚運輸?shù)淖钸m濃度。大瀧六線魚在麻醉劑作用下對外界應激反應較小, 因此本研究在靜水條件下進行, 未考慮實際運輸過程中顛簸、震蕩等因素對呼吸和代謝的影響, 進一步研究可以根據(jù)實際情況, 模擬真實運輸環(huán)境進行相關實驗。
不同麻醉劑對魚類的麻醉效果存在差異。胡發(fā)文等[25]研究表明, 隨丁香油濃度升高, 大瀧六線魚呼吸頻率呈下降趨勢, 而MS-222在濃度≤40 mg/L時呼吸頻率下降不明顯。本研究表明, 丁香油濃度由0升至40 mg/L后, 其耗氧率和排氨率分別下降了46.37%和28.66%, 相比之下, 同濃度的MS-222則僅下降了17.62%和11.73%。上述發(fā)現(xiàn)均說明相比MS-222, 丁香油對大瀧六線魚幼魚呼吸和代謝的降低效果更為明顯, 這與章龍珍等[6]、王文豪等[26]和郝長杰等[27]分別在長鰭籃子魚()、大口黑鱸()和暗紋東方鲀()上的研究結(jié)果一致。
表4 各麻醉分期的魚類行為特征
注: “+”表示正常, “-”表示喪失, “±”表示部分喪失。
氧氮比(O∶N)是評估動物代謝底物來源的重要參數(shù), 其數(shù)值大小反映蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物在動物能量供應中占的比率[28]。動物完全由蛋白質(zhì)供能時O∶N比值為7~10, 如果由蛋白質(zhì)和脂肪氧化供能, O∶N比值為24, 如果完全以脂肪和碳水化合物供能, O∶N比值則會變?yōu)闊o窮大[29]。Widdows[30]認為, O∶N比值與環(huán)境對有機體的壓力緊密相關, 可作為有機體適應環(huán)境壓力的一項指標。水溫8~24 ℃時, 大瀧六線魚的O∶N比值變化范圍為16.65~24.11, 且隨溫度升高而降低, 說明適宜溫度時大瀧六線魚以蛋白質(zhì)和脂肪供能, 隨溫度升高蛋白質(zhì)利用比例高。鹽度為15‰~35‰時, 大瀧六線魚幼魚O∶N比值變化范圍為14.77~17.79, 超出適宜鹽度范圍后, O∶N比值下降, 蛋白質(zhì)利用比例升高。使用丁香油和MS-222兩種麻醉劑也可使O∶N比值下降, 蛋白質(zhì)利用比例升高。
在大瀧六線魚幼魚?;钸\輸時,可采取適度降溫、維持自然鹽度以及添加適宜濃度麻醉劑等方式降低其呼吸代謝強度,提高運輸成活率。本研究條件下,丁香油、MS-222用于大瀧六線魚幼魚保活運輸?shù)淖钸m濃度分別為24 mg/L、20 mg/L,兩種麻醉劑相比,丁香油對呼吸代謝強度的降低效果更好。適宜溫度和鹽度條件下,大瀧六線魚幼魚主要由蛋白質(zhì)和脂肪提供能量。
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Influence of temperature, salinity, and anesthetics on the oxygen consumption and ammonia excretion rates in fat greenling () juveniles
HU Fa-wen, WANG Xiao-long, GAO Feng-xiang, LI Li, JIAN Yu-xia, WANG Xue, FAN Ying, PAN Lei, GUO Wen
(Shandong Key Laboratory of Disease Control in Mariculture, Marine Biology Institute of Shandong Province, Qingdao 266104, China)
The effects of temperature, salinity, and anesthetics (clove oil and MS-222) on the oxygen consumption and ammonia excretion rates of fat greenling () juveniles, with a body weight of 6.44 ± 0.59 g, was evaluated using the standing water respiratory chamber method. Temperature (8℃, 12℃, 16℃, 20℃, and 24℃), salinity (15‰, 20‰, 25‰, 30‰, and 35‰), clove oil (0, 8, 16, 24, 32, and 40 mg/L), and MS-222 treatments (0, 10, 20, 30, 40 mg/L) were evaluated. The results showed that temperature, salinity, and anesthetics have significant effects on the oxygen consumption and ammonia excretion rates. At 8℃, the oxygen consumption and ammonia excretion rates were lowest, increased with an increase of temperature, peaked at 20℃, and decreased at 24℃. At 30‰ salinity, the oxygen consumption and ammonia excretion rates were lowest and increased with an increase or decrease in salinity. Both oxygen consumption and ammonia excretion rates were reduced effectively by clove oil or MS-222 and clove oil was more effective. The optimal concentrations for clove oil and MS-222 for thejuveniles to survive transportation were 24 mg/L and 20 mg/L, respectively, at which the fish were in deep sedation and oxygen consumption and ammonia excretion rates were lowThe O︰N ratio was in the range of 14.77~24.11, indicating that the juvenile fish obtained energy mainly from protein and fat under suitable conditions of temperature and salinity. According to this study, the respiratory and metabolic activity of thejuvenile was low under moderate temperatures, natural salinity, or optimal concentrations of anesthetics—of which clove oil was more effective than MS-222. The results provide theoretical support for the transportation of high quality.
; oxygen consumption rate; ammonia excretion rate; clove oil; MS-222
May 22, 2020
S981.9
A
1000-3096(2021)01-0054-08
10.11759/hykx20200522001
2020-05-22;
2020-06-15
山東省農(nóng)業(yè)重大應用技術(shù)創(chuàng)新項目(SD2019YY007); 山東省重點研發(fā)計劃項目(2019GHY112062, 2019GHY112071)
[Major Agricultural Application Technology Innovation Projects in Shandong Province, No. SD2019YY007; Key Project of Research and Development Plan of Shandong Province, No. 2019GHY112062, No. 2019GHY112071]
胡發(fā)文(1982-), 男, 山東臨沂人, 副研究員, 碩士, 主要從事海水魚類增養(yǎng)殖研究, 電話: 0532-82679419; Email: fwhu88@ 163.com; 郭文(1963-),通信作者, 男, 研究員, 研究方向: 海洋生物繁育與增養(yǎng)殖, 電話: 0532-82680687, Email: guowen1963@126.com.
(本文編輯: 楊 悅)