季芝娟 曾宇翔 梁燕 楊長登

(中國水稻研究所 水稻生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，杭州 310006；*通信聯(lián)系人，E-mail: yangchangdeng@126.com)

1828年，惡苗病首次在日本被發(fā)現(xiàn)[5]，但是歷經(jīng)近200年，關(guān)于惡苗病抗性研究并無明顯突破。要從根本上解決惡苗病的危害，培育抗惡苗病水稻新品種是最經(jīng)濟(jì)、有效的途徑。本文將從惡苗病抗性鑒定、抗性資源篩選、惡苗病抗性遺傳、分子定位以及抗性基因挖掘等方面，對國內(nèi)外有關(guān)惡苗病抗性的研究進(jìn)行系統(tǒng)綜述，展望在惡苗病抗性方面可進(jìn)一步開展的研究工作，以期為惡苗病抗性研究的深入和抗惡苗病水稻育種提供參考。

1 惡苗病的癥狀、危害和防治現(xiàn)狀

惡苗病又稱徒長病，是種傳病害，主要通過種子帶菌傳播，其次也會(huì)通過土壤、帶病植株等傳播[1]。感染惡苗病的水稻植株田間發(fā)病癥狀主要包括：莖或節(jié)間表現(xiàn)異常伸長，莖節(jié)部位長出不定根，植株變得瘦高細(xì)長，葉色變淡，葉夾角變大，分蘗減少，穗子變小，結(jié)實(shí)率下降甚至死亡(圖 1)。惡苗病可導(dǎo)致播種時(shí)種子發(fā)芽率下降，成熟收獲時(shí)產(chǎn)量減少，減產(chǎn)可達(dá)30%～95%[6-10]；惡苗病菌產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物還會(huì)帶來嚴(yán)重的食品安全問題[11]。

惡苗病是水稻的“癌癥”，發(fā)病后無藥可治，目前主要以播種前化學(xué)藥劑浸種處理來防治。藥劑有效成分有氰烯菌酯、咪鮮胺、多菌靈等 20 種，其中約85%的藥劑有效成分為咪鮮胺、多菌靈或者咯菌腈[12]。收集浙江金華、紹興和嘉興田間294份藤倉鐮孢(F. fujikuroi)小種發(fā)現(xiàn)，其對氰烯菌酯的耐藥性從2017年的18%提高到了2018年的47%[13]。惡苗病菌對多菌靈[14-15]和咪鮮胺[16]也均已產(chǎn)生抗藥性。因此，化學(xué)藥劑防治易引起惡苗病菌的耐藥性，而且藥劑使用還會(huì)引起環(huán)境污染。

圖1 惡苗病田間發(fā)病癥狀Fig. 1. Symptoms of bakanae disease in the field.

圖2 三種惡苗病菌種群形態(tài)特征[19]Fig. 2. Morphological characteristics of three kinds of pathogens of bakanae[19].

2 水稻惡苗病菌分類及其特征

水稻惡苗病致病菌主要是鐮孢菌屬，為Gibberella fujikuroi復(fù)合種，其交配種群主要包括3類[17](圖2)，其無性態(tài)、有性態(tài)和分泌的毒素如表1所示。其中，F(xiàn). fujikuroi只在亞洲來源的種子中被發(fā)現(xiàn)[10]。惡苗病菌產(chǎn)生的的次生代謝產(chǎn)物即分泌的毒素不但能夠影響真菌對宿主的侵染，而且對脊椎動(dòng)物具有毒害作用，如伏馬毒素(又稱煙曲霉毒素)可以引起動(dòng)物發(fā)生癌變，嚴(yán)重的可以產(chǎn)生如馬腦白質(zhì)軟化癥、豬肺水腫或大鼠肝癌等病癥[18]。

F. fujikuroi產(chǎn)生毒素的水平受不同小種及其外部環(huán)境的影響。Suga等[20]對93個(gè)來自日本不同寄主源的F. fujikuroi小種用離體培養(yǎng)的方法分析生產(chǎn)伏馬毒素的能力，發(fā)現(xiàn)有50個(gè)小種可產(chǎn)生此毒素，而另外 43個(gè)來自不同寄主源的小種則未檢測到此毒素。Mati?等[21]比較了光源對惡苗病菌產(chǎn)生伏馬毒素的促進(jìn)影響，用白光或藍(lán)光光照/黑暗交替處理，有利于促進(jìn)F. fujikuroi和F. proliferatum的毒素產(chǎn)生；對F. verticillioides來說，黃色和綠色光源較佳。

在侵染水稻后，惡苗病不同菌種產(chǎn)生的主要物質(zhì)各不相同，因此導(dǎo)致水稻發(fā)病癥狀也各不相同。其中，F(xiàn). fujikuroi造成水稻典型的惡苗病徒長癥狀，F(xiàn). verticillioides造成水稻黃化和矮化，而F. proliferatum則發(fā)病癥狀不明顯[21]。在這些菌種中，只有F. fujikuroi能分泌GA3，且毒性最強(qiáng)；但F. verticillioides和F. proliferatum有些菌株也表現(xiàn)出與F. fujikuroi一樣的侵染能力[10]。

Wiemann等[9]報(bào)道了第一份高質(zhì)量的F.fujikuroi基因組序列草圖，并且發(fā)現(xiàn)F. fujikuroi基因組和其他菌種只有很小部分基因簇具有保守性；而PKS19(聚酮合酶)基因和NRPS31(非核糖體肽合成酶)基因的基因簇為F. fujikuroi所特有。而且，雖然很多菌種中存在GA生物合成基因，但GA合成卻只在F. fujikuroi中發(fā)生，暗示該菌種在侵染水稻寄主時(shí)，存在選擇優(yōu)勢。

2.要正確認(rèn)識(shí)海外防恐安全形勢。恐怖主義的主要根源是由宗教沖突、民族矛盾、政局動(dòng)蕩、貧富差距等因素所造成。在集團(tuán)公司的海外各國社會(huì)安全風(fēng)險(xiǎn)等級分級中，馬來西亞屬于中等風(fēng)險(xiǎn)國家，我們對各施工區(qū)域都配備了專職保安人員，發(fā)布了《馬來西亞RAPID 項(xiàng)目涉外突發(fā)事件專項(xiàng)應(yīng)急預(yù)案》，并在各營區(qū)明顯處張貼了緊急求助電話（包括警察局、醫(yī)院、移民局等）。

表1 惡苗病菌三類交配種群Table 1. Three kinds of mating populations for the pathogen of bakanae disease.

3 水稻惡苗病抗源的篩選和鑒定

3.1 水稻惡苗病抗性鑒定方法

水稻惡苗病抗性資源的篩選和挖掘需要一種可靠穩(wěn)定且操作簡便的鑒定方法，惡苗病抗性鑒定主要包括惡苗病菌的培養(yǎng)、病菌的接種處理以及抗病水平的評價(jià)等。

惡苗病抗性的鑒定需培養(yǎng)大量的惡苗病菌。呂彬[22]發(fā)現(xiàn)，用 PSA培養(yǎng)基培養(yǎng)惡苗病菌，產(chǎn)孢量最大；在幾種天然培養(yǎng)基中，以大麥培養(yǎng)基效果較好。Yadav等[23]分析了惡苗病菌培養(yǎng)的最佳條件，發(fā)現(xiàn)溫度在20℃、pH值為5.0時(shí)，最適合惡苗病菌的生長，菌絲和孢子產(chǎn)量最高；并進(jìn)一步分析了不同碳源對病菌培養(yǎng)的影響，發(fā)現(xiàn)用谷殼做碳源，生長速度最快，而用甘蔗渣做碳源，則孢子產(chǎn)量最高。Gupta等[6]則認(rèn)為，惡苗病菌生長最適宜的溫度為27～30 ℃，而病菌侵染植株、發(fā)展病癥的最佳溫度是35 ℃。

呂彬[22]比較了芽期浸菌接種、立針期噴霧接種、芽期加立針期接種、鋪病節(jié)誘發(fā)、自然誘發(fā)和穗期噴霧接種等幾種惡苗病菌接種方法，認(rèn)為芽期浸菌接種法致病效果最佳。Wulff等[10]則采用室溫下將表面滅菌的水稻種子直接浸在10 mL濃度為1×105個(gè)/mL的菌液中處理18 h，隨后播種于育秧盤，27℃下保濕培養(yǎng)；統(tǒng)計(jì)種子發(fā)芽率，分別于接種后15 d和30 d調(diào)查發(fā)病率。季芝娟等[24]將種子消毒浸種48 h、催芽24 h后，挑選芽長為一粒谷長的芽谷，在玻璃瓶內(nèi)接種惡苗病菌，5 d后即可鑒定出惡苗病的抗性水平；該方法在恒溫、恒濕、恒定菌液濃度下處理，不易受環(huán)境影響，快速簡便。Ma等[25]在季芝娟等[24]的接種方法基礎(chǔ)上，結(jié)合室外鑒定，將處理后的種子播種于田間，2周后統(tǒng)計(jì)成苗率，每月記載發(fā)病植株數(shù)量。

在惡苗病抗性水平的評價(jià)上，出現(xiàn)各種衡量指標(biāo)。有通過發(fā)病癥狀將抗性水平定級[22,26-27]，或基于發(fā)病癥狀統(tǒng)計(jì)發(fā)病率、健康植株率來衡量抗性水平[11,28]，或分析幼苗徒長比率對不同的抗感水平定級[24]，還有通過調(diào)查死苗率來衡量抗感程度[29,30]。季芝娟[31]在惡苗病抗性QTL定位研究中，除了用徒長性狀外，試著用苗重的變化來衡量惡苗病的抗性水平，并且發(fā)現(xiàn)徒長比率和苗重比率兩個(gè)性狀存在相關(guān)性。然而，Ji等[32]發(fā)現(xiàn)抗惡苗病材料也會(huì)有幼苗徒長的癥狀，但是四周后抗、感材料的致死率卻存在明顯差異。Saremi等[33]則通過田間產(chǎn)量變化來評價(jià)惡苗病的抗性水平。Chen等[34]通過離體培養(yǎng)感染惡苗病后的植株基部莖稈，發(fā)現(xiàn)感病品種再分離出惡苗病菌的頻率比抗病品種高，即利用病菌再分離定殖率(colonization rate)作為惡苗病抗性衡量指標(biāo)。

根據(jù)惡苗病菌處理時(shí)期和處理部位的不同，本文匯總了7種惡苗病抗性鑒定方法(表2)，主要集中在芽期浸菌接種和干種子直接浸菌接種這兩種方法。但由于惡苗病發(fā)病癥狀的多樣性和復(fù)雜性，即使同一種方法在接種處理的細(xì)節(jié)和抗性衡量指標(biāo)上也各不相同。Chen等[35]認(rèn)為，雖然惡苗病菌在感染植株過程中會(huì)分泌出 GA3、鐮菌素、赤霉酸、鐮刀菌酸等次生代謝物質(zhì)，造成徒長、黃化、死亡等癥狀，但除了這些直觀的發(fā)病癥狀外，植株對惡苗病菌的敏感度的不同會(huì)造成惡苗病菌在植株中的繁殖擴(kuò)張速度的不同。因此，進(jìn)行病菌的再分離或通過qPCR技術(shù)衡量病菌的定殖水平，是對傳統(tǒng)抗性鑒定方法的補(bǔ)充和完善。

表2 惡苗病抗性鑒定方法Table 2. Methods for evaluation of rice bakanae disease resistance.

3.2 抗惡苗病種質(zhì)資源的挖掘

控制惡苗病危害最經(jīng)濟(jì)且環(huán)境友好的方式就是培育抗惡苗病的水稻品種。目前水稻惡苗病抗性研究未有較大突破，惡苗病抗性鑒定方法不夠完善是一方面，還有一個(gè)原因在于很難篩選到高抗或抗惡苗病的水稻品種或材料。

黎定軍等[37]對 411個(gè)水稻品種及品系三次篩選后，發(fā)現(xiàn)高抗的只有Te70，抗病的有IR9等12個(gè)品種，其余398個(gè)為感病品種，占參測品種的96.8%。鄭鎬燮等[26]在204份水稻材料中，只篩選出 7份抗或中抗材料，無高抗材料。其他學(xué)者也鑒定了部分水稻惡苗病抗源，發(fā)現(xiàn)抗惡苗病的材料很少[38-39]。季芝娟等[40]分析了34個(gè)常規(guī)水稻品種惡苗病抗性水平，發(fā)現(xiàn)高感品種有21個(gè)，占所有品種的61.76%；浙103、浙鑒21和甬粳18表現(xiàn)為中抗，未發(fā)現(xiàn)抗或高抗品種。Ma等[25]利用32份不同矮生基因材料，通過芽期人工接種惡苗病菌和GA3處理，比較了矮生基因型對惡苗病菌和GA3的反應(yīng)，尋找可能的惡苗病抗源；發(fā)現(xiàn)攜帶sd-1的材料對外源GA3和惡苗病菌均表現(xiàn)敏感；而攜帶d-1基因型的材料表現(xiàn)為對GA3不敏感，但感惡苗??；所有d-29，sd-6和sd-q(t)基因型材料則對惡苗病菌表現(xiàn)出一定的抗性。Kim等[11]在研究大規(guī)模惡苗病抗性篩選方法時(shí)，發(fā)現(xiàn) 10個(gè)品種中有 4個(gè)抗惡苗病，其中 Wonseadaesoo不僅抗惡苗病，對GA3也表現(xiàn)為不敏感。

不同類型的水稻品種感染惡苗病的程度不盡相同。優(yōu)質(zhì)米水稻比普通米質(zhì)的水稻更易感染惡苗病菌，但普通米質(zhì)的水稻仍有 19%左右的發(fā)病率[41]。香米品種則比無香味的水稻品種更易感染惡苗病[42]。季芝娟[31]認(rèn)為，秈稻比粳稻在生物逆境下更能抵御病蟲害的侵入。Chen等[35]通過研究也發(fā)現(xiàn)，在231份來自70多個(gè)國家和地區(qū)的水稻種質(zhì)資源中，秈稻比粳稻更抗惡苗病。

圖3 惡苗病抗性相關(guān)QTLs的染色體位置Fig. 3. Chromosome position of the bakanae-disease-resistance-related QTLs.

4 惡苗病抗性遺傳和分子定位

至今，有關(guān)水稻惡苗病抗性的遺傳和基因定位研究方面已有一些報(bào)道。比如，鄭鎬燮等[26]對部分水稻惡苗病抗感組合的F2進(jìn)行了抗感分離比觀察，發(fā)現(xiàn)抗/感組合的F2以抗病株數(shù)較多，但未對F1的抗病進(jìn)行觀察，也未對F2的抗感進(jìn)行系統(tǒng)的總結(jié)。楊長登等[43]利用來自春江 06和 TN1的雙單倍體(DH)群體共檢測到2個(gè)惡苗病抗性相關(guān)QTL，分別位于第1和第10染色體上；這是國內(nèi)外首次對惡苗病抗性進(jìn)行 QTL定位研究的報(bào)道。十年之后，第二篇關(guān)于惡苗病抗性QTL定位的報(bào)道是Hur等[44]利用近等基因系(NIL)定位的一個(gè)主效 QTLqBK1，該QTL位于第1染色體上，解釋65%的表現(xiàn)變異。隨后，季芝娟[31]利用徒長和苗重表型進(jìn)行惡苗病抗性QTL定位，共定位到7個(gè)QTL，分別為通過徒長表型鑒定的 4個(gè) QTL(qBE1.1，qBE9，qBE1.2和qBE3)，以及通過苗重表型鑒定的 3個(gè)QTL(qBW1，qBW3和qBW6)。Fiyaz等[45]利用Pusa 1342和Pusa Basmati 1121的RIL群體，定位了3個(gè)惡苗病抗性相關(guān)QTL：qBK1.1,qBK1.2和qBK1.3，分別解釋4.76%, 24.74%和6.49%的表型變異，其中qBK1.1和 Hur等[44]定位的qBK1為同一個(gè)QTL。Lee等[46]進(jìn)一步精細(xì)定位了qBK1，將QTL區(qū)間縮小至23.64－23.67Mb；該區(qū)間有4個(gè)候選基因，分別 是LOC_Os01g41770，LOC_Os01g41780，LOC_Os01g41790和LOC_Os01g41800； 其 中LOC_Os01g41770和LOC_Os01g41780可能正向或負(fù)向調(diào)控惡苗病抗性；而LOC_Os01g41790在抗感惡苗病品種中都有表達(dá)，但表達(dá)水平和模式不同；LOC_Os01g41780編碼一個(gè)細(xì)胞色素 P450單加氧酶，是惡苗病抗性的正向調(diào)控因子。Volante等[47]利用GWAS技術(shù)發(fā)現(xiàn)2個(gè)與惡苗病感染應(yīng)激高度相關(guān)的基因組片段，分別位于第 1染色體短臂(qBK1_628091)和第4染色體長臂(qBK4_31750955)。Lee等[48]利用抗、感惡苗病的韓國粳稻品種Wonseadaesoo和Junam的RIL群體定位到qBK1WD。隨后，Ji等[32]對抗、感惡苗病的韓國粳稻品種Nampyeong和DongjinAD重測序，進(jìn)一步分析F2的基因型和對應(yīng)F3后代病菌感染后的表型，在第1染色體上定位到一個(gè)主效 QTLqFfR1，LOD值為22.7；利用類似的方法，Kang等[49]在第 9染色體7.24－7.56 Mbp區(qū)間定位到主效QTLqFfR9，LOD值達(dá)60.3，該區(qū)間共有8個(gè)候選基因。Chen等[35]利用GWAS技術(shù)對231個(gè)水稻種質(zhì)資源定位出包含206個(gè)候選基因的14個(gè)QTL，其中4個(gè)QTL在第1染色體，比例最高；而qBK1.7則與已報(bào)道的qBK1和qFfR1共定位；進(jìn)一步用IR64/日本晴的RIL群體驗(yàn)證了qBK1.7，比較分析qBK1和qBK1.7的物理區(qū)間及區(qū)間內(nèi)候選基因，認(rèn)為Os01g0601625和Os01g0601675和惡苗病抗性相關(guān)。

根據(jù)以上惡苗病抗性 QTL定位結(jié)果，我們繪制出相關(guān)QTL區(qū)間位置的示意圖(圖3)，比較它們的物理距離發(fā)現(xiàn)，共有4個(gè)區(qū)域出現(xiàn)多個(gè)QTL共定位的情況。例如，第1染色體上，qFfR1定位區(qū)間包含qBK1.7、qBK1和qBK1.1；qBE1.2定位區(qū)間包含qBK1.4、qBW1、qBK1_628091、qBK1.5和qBK1.2。第6染色體上，qBW6定位區(qū)間包含qBK6.3。第9染色體上，qBE9定位區(qū)間包含qFfR9。

總之，已有研究通過不同的定位群體，在第1、3、4、6、8、9、10和11染色體上都有定位出 QTL，累計(jì)達(dá)33個(gè)QTL(表3)；其中在第1染色體有15個(gè) QTL，其次分別是在第 3、6、10染色體的各 4個(gè)QTL(圖3)。然而如此眾多的QTL能否真正在育種中利用？

Wonseadaesoo和 YR24982-9-1分別是qBKWD和qBK1的供體親本，Lee等[48]評估了這兩個(gè)供體親本雜交 F4代株系的抗病情況，發(fā)現(xiàn)聚合純合qBKWD和qBK1的F4代株系的未發(fā)病植株比例最高，為80.2%；其次為攜帶單個(gè)純合qBKWD或qBK1QTL的株系，未攜帶qBKWD和qBK1的株系的未發(fā)病植株比例為35.3%。但是，在育種中若要真正發(fā)揮QTL的作用，則需要將 QTL導(dǎo)入到別的主導(dǎo)品種，才能更好地評估QTL的育種利用價(jià)值。

表3 惡苗病抗性相關(guān)QTLTable 3. QTLs related to rice bakanae disease resistance.

5 從組學(xué)大數(shù)據(jù)挖掘惡苗病抗性基因

隨著后基因組時(shí)代的到來，對水稻相關(guān)病害的研究也提升到了功能基因組學(xué)水平，從組學(xué)角度挖掘和解析惡苗病抗性相關(guān)基因是一個(gè)大通量且快速的途徑，然而關(guān)于這方面的報(bào)道還很少，目前只有2篇轉(zhuǎn)錄組水平的和1篇蛋白質(zhì)組水平的惡苗病抗性研究結(jié)果。

Mati?等[36]利用 RNA-Seq技術(shù)，比較了抗感惡苗病的水稻品種 Selenio和 Dorella在接種F.fujikuroi前后的轉(zhuǎn)錄組水平的變化，發(fā)現(xiàn)在抗惡苗病品種 Selenio中，PR1(Pathogenesis-related protein 1)、類萌發(fā)素蛋白、糖苷水解酶、促分裂原激活蛋白激酶、WRKY轉(zhuǎn)錄因子等上調(diào)表達(dá)。Ji等[50]利用RNA-Seq技術(shù)分析了抗感惡苗病品種93-11和日本晴的轉(zhuǎn)錄組表達(dá)差異，發(fā)現(xiàn)WRKYs，WAK和MAP3Ks基因在轉(zhuǎn)錄水平的上調(diào)與93-11的惡苗病抗性相關(guān)，而且分布在第 1、3、10染色體上的差異表達(dá)基因比例最大，這與 QTL定位結(jié)果染色體分布高度吻合。另外，Ji等[51]首次報(bào)道了水稻惡苗病抗性在蛋白質(zhì)組學(xué)水平上的變化，通過TMT(Tandem Mass Tags)技術(shù)鑒定了93-11和日本晴中的214個(gè)差異表達(dá)蛋白，其中只有11個(gè)差異表達(dá)蛋白為兩個(gè)品種共有；水通道蛋白在93-11中極顯著上調(diào)，上調(diào)倍數(shù)達(dá)100以上，而在日本晴中未見變化，推測該蛋白是抗惡苗病的關(guān)鍵蛋白。

6 展望

6.1 夯實(shí)抗性鑒定體系，挖掘高抗惡苗病的種質(zhì)資源

水稻抗病相關(guān)研究最重要、最基礎(chǔ)的一個(gè)方面就是穩(wěn)定的抗性鑒定體系，或者說穩(wěn)定的高抗種質(zhì)資源。有研究[35]認(rèn)為，惡苗病發(fā)病癥狀不一定完全反映出水稻的抗性水平。因此，在惡苗病抗性鑒定方面，還需要做更多更細(xì)的研究，來獲得一個(gè)穩(wěn)定可靠的抗性評價(jià)體系，最終篩選獲得高抗惡苗病的水稻種質(zhì)資源，在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步進(jìn)行抗性基因的挖掘和育種利用。

6.2 結(jié)合分子標(biāo)記輔助選擇技術(shù)，開展惡苗病抗性遺傳育種改良

通過遺傳育種方法獲得抗或高抗品種是水稻惡苗病抗性育種的根本目標(biāo)。雖然目前未發(fā)現(xiàn)對惡苗病完全免疫的水稻材料或可以育種利用的抗惡苗病水稻資源，但中抗惡苗病的材料也可以成為基礎(chǔ)研究的樣本；而且不同的水稻品種在田間的惡苗病發(fā)病情況還是存在差異的[52]，在育種中有目的地選擇不易發(fā)病的品種作為骨干親本，在后代選擇中有意識(shí)地淘汰易發(fā)惡苗病的株系，也能選育出相對抗惡苗病的水稻新品系。

在當(dāng)前缺少優(yōu)異抗惡苗病水稻材料的情況下，一方面除了需不斷篩選、創(chuàng)制抗病水稻新種質(zhì)，加強(qiáng)惡苗病抗性的遺傳機(jī)理、基因定位和克隆以及功能解析等基礎(chǔ)研究；另一方面還應(yīng)充分發(fā)掘野生稻或其他近緣屬植物中存在的抗病基因資源。對于已經(jīng)定位出的效應(yīng)值較大的QTL，可以從分子設(shè)計(jì)育種的角度，開發(fā)緊密連鎖的分子標(biāo)記，導(dǎo)入到水稻主推品種，進(jìn)行基因聚合育種，評估其在生產(chǎn)上的應(yīng)用價(jià)值，加快基礎(chǔ)研究的應(yīng)用轉(zhuǎn)化速度。

6.3 研究延緩化學(xué)藥劑耐藥性產(chǎn)生的策略

鑒于目前未有對惡苗病完全免疫的水稻品種，對帶菌種子進(jìn)行殺菌劑處理仍是防治水稻惡苗病最有效的措施。目前，國內(nèi)有130多個(gè)藥劑制劑(包括單劑和復(fù)配劑)登記用于水稻惡苗病防治，約85%的制劑有效成分為咪鮮胺、多菌靈或者咯菌腈，并且制劑多為咪鮮胺或咯菌腈的單劑[12]。多個(gè)藥劑都已有不同程度的耐藥性，農(nóng)戶不得不在水稻浸種時(shí)加大藥劑的處理濃度，這一定程度上又助長了藥劑耐藥性的進(jìn)一步惡化，同時(shí)加重了對環(huán)境的污染。

研究認(rèn)為[13,53]，兩種或多種藥劑混合使用，在防治惡苗病上的效果比單一藥劑效果更好；而且可以避免或延緩抗藥性的發(fā)生與蔓延。因此，在加快惡苗病抗性水稻品種選育的同時(shí)，通過不同藥劑混配浸種，來防治惡苗病，可以延緩藥劑耐藥性的產(chǎn)生。

6.4 研發(fā)綠色環(huán)保、安全的綜合防治技術(shù)

在水稻抗病防治方面，在缺乏抗病品種時(shí)，只能通過化學(xué)藥劑來防控，但又會(huì)面臨農(nóng)藥殘留、環(huán)境污染和病原菌抗藥性等問題，而生物防治可以避免這些問題[54]。因此，在惡苗病防控上，還需加強(qiáng)綠色環(huán)保、安全的綜合防治技術(shù)的研究，可以嘗試開發(fā)微生物農(nóng)藥、生物化學(xué)農(nóng)藥、植物源農(nóng)藥等生物農(nóng)藥。李玉洋等[55]從水稻根際篩選到多粘類芽孢桿菌SH15，能影響惡苗病菌菌絲生長。田潔萍[56]應(yīng)用解淀粉芽孢桿菌 TF28發(fā)酵稀釋液浸種處理，對惡苗病的田間防效達(dá)到了87%以上。Siciliano等[57]研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn). fujikuroi誘導(dǎo)赤霉素和脫落酸的增加，抑制茉莉酸的產(chǎn)生，且只有很低水平的抗毒素含量。因此，如果在抗惡苗病水稻品種中誘導(dǎo)產(chǎn)生抗毒素并從中提取的活性成分分離純化，是否能拮抗惡苗病菌的入侵和擴(kuò)繁呢？將提取的純化物質(zhì)作用于感病品種，會(huì)不會(huì)誘導(dǎo)其產(chǎn)生惡苗病的抗性呢？這些也是未來很有意義的探索課題。