劉松鴿，王軍凱，李曉娜

（河南科技大學(xué)附屬許昌市中心醫(yī)院病理科，河南 許昌461000）

流行病學(xué)研究表明, 結(jié)腸癌的發(fā)病率可超過896/10 萬人左右[1],在合并有相關(guān)消化道惡性腫瘤家族史的群體中，結(jié)腸癌的發(fā)病率可持續(xù)上升。結(jié)腸癌的發(fā)生,能夠?qū)е禄颊呓谏钯|(zhì)量及高腫瘤負(fù)荷的出現(xiàn),并增加了結(jié)腸癌患者遠(yuǎn)期病死的風(fēng)險(xiǎn)[2]。在研究結(jié)腸癌患者臨床病理特征進(jìn)展的相關(guān)因素過程中，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞因子的改變，能夠通過影響到癌細(xì)胞的生物學(xué)特征,干預(yù)到消化道上皮粘膜細(xì)胞的浸潤(rùn)能力。增殖相關(guān)蛋白（IPO-38）的表達(dá)上升，能夠通過誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子的激活, 增加癌細(xì)胞核DN A 的異常分裂風(fēng)險(xiǎn)，加劇癌細(xì)胞的異常擴(kuò)增和復(fù)制過程[3]；NIK 和 IKKβ 結(jié)合蛋白（NIBP2）是細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)因子, 其能夠通過誘導(dǎo)癌細(xì)胞G1/S 期細(xì)胞比例的改變，最終促進(jìn)癌細(xì)胞的凋亡抑制，促進(jìn)癌細(xì)胞的異常分化[4]。為了揭示 IPO-38、NIBP2 的表達(dá)與結(jié)腸癌患者的病情關(guān)系,從而為臨床上結(jié)腸癌患者的診療提供參考,本次研究選取我院收集的88 例結(jié)腸癌組織標(biāo)本,探討了 IPO-38、NIBP2 的表達(dá)及其與結(jié)腸癌患者的病情關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取 2014 年 1 月至 2017 年 7 月我院收集的88 例結(jié)腸癌組織標(biāo)本、44 例經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)為正常腸粘膜組織（正常組）。

結(jié)腸癌組,年齡 47～75 歲,平均 60.3±9.1 歲,性別構(gòu)成：男 50 例、女 38 例；病灶直徑＞5cm 41 例、≤5cm 47 例；TNM 分期：Ⅰ期 22 例、Ⅱ期 34 例、Ⅲ期 29 例、Ⅳ期 3 例；浸潤(rùn)深度：T1～T2 26 例、T3～T4 62 例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性38 例；其中左半結(jié)腸38 例、右半結(jié)腸 50 例。正常組,年齡 42～75 歲,平均 59.0±8.8 歲；性別構(gòu)成：男 27 例、女 17 例。兩組患者的年齡、性別比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

診斷及入選標(biāo)準(zhǔn)：⑴結(jié)腸癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的標(biāo)準(zhǔn)[5]；⑵納入對(duì)象的年齡≤75歲；⑶經(jīng)手術(shù)后病理學(xué)或經(jīng)腸鏡取活組織進(jìn)行病理學(xué)檢查證實(shí)；⑷正常組為實(shí)施結(jié)腸鏡檢查且為正常的患者；⑸本研究符合《赫爾透辛基宣言》相關(guān)倫理及保密原則。

排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌；⑵在獲取標(biāo)本前具有放化療史、免疫學(xué)治療病史；⑶伴有其他系統(tǒng)的重大疾病；⑷免疫疾病或長(zhǎng)期使用糖皮質(zhì)激素治療的患者。

1.2 免疫組化染色方法及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 石蠟切片采用二甲苯進(jìn)行脫臘至水，5%的雙氧水常溫在孵育10min，采用磷酸鹽緩沖液孵育5min，蒸餾水沖洗3 次,每次5min，5%的山羊血清抗體封閉10min，不沖洗，滴加一抗（購自abcum 公司 批號(hào)：20119304濃度：1：500），4℃冰箱孵育過夜，蒸餾水沖洗 3 次，每次5min，滴加生物素標(biāo)記好的二抗（購自北京康泰生物批號(hào)：20104856 濃度：1：1000），37℃孵育30min，蒸餾水沖洗3 次，每次5min，滴加第二代辣根酶標(biāo)記的工作液體,37℃孵育10min，蒸餾水沖洗3 次,每次5min，顯色之后采用酒精脫水、二甲苯透明、樹膠封片，鏡下觀察。

免疫組化結(jié)果判定：IPO-38 蛋白陽性著色表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)、NIBP2 蛋白的陽性著色表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核，呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá)，⑴根據(jù)著色強(qiáng)度：0 分為無色、1 分為淡黃色、2 分為棕黃色、3分為褐色、黑色；⑵根據(jù)陽性細(xì)胞比例：陽性細(xì)胞數(shù)目所占比例≤10%為1 分、 陽性細(xì)胞所占比例11%～50%為 2 分、 陽性細(xì)胞數(shù) 51%～75%為 3 分、陽性細(xì)胞數(shù)所占比例＞75%為4 分， 兩種積分相乘總分＜3 分為陰性、≧3 分為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用美國IBM SPSS 公司的統(tǒng)計(jì)軟件包SPSS21.0 版本對(duì)本研究的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理， 采用表示符合正態(tài)分布的計(jì)量資料，兩組間分析采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料組間分析采用χ2檢驗(yàn)；P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)腸癌組織與正常組中的IPO-38 蛋白、NIBP2 蛋白陽性率比較 結(jié)腸癌組織中IPO-38 蛋白、NIBP2 蛋白陽性表達(dá)率 70.45%、64.77%， 正常組的IPO-38 蛋白、NIBP2 蛋白陽性表達(dá)率 38.64%、27.27%,兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；見表 1、圖 1、圖 2。

表1 結(jié)腸癌組織與正常組中的IPO-38蛋白、NIBP2 蛋白陽性率比較[n（%）]

圖1 NIBP2 蛋白免疫組化結(jié)果，A 為結(jié)腸癌組織、B 正常結(jié)腸組織，（×200 倍）

圖2 IPO-38 蛋白免疫組化結(jié)果，A 為結(jié)腸癌組織、B 正常結(jié)腸組織，（×200 倍）

2.2 結(jié)腸癌組織與正常組中的IPO-38 蛋白、NIBP2 蛋白陽性率比較 TNM 分期 （Ⅲ期+Ⅳ期）、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度（T3～T4）的結(jié)腸癌組織中IPO-38 蛋白、NIBP2 蛋白陽性表達(dá)率顯著的高于TNM 分期（Ⅰ期+Ⅱ期）、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度（T1～T2），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；見表 2、表 3。

表2 結(jié)腸癌組織與正常組中的IPO-38 蛋白陽性率比較

表3 結(jié)腸癌組織與正常組中的NIBP2 蛋白陽性率比較

3 討論

消化道惡性腫瘤家族史或者攜帶有相關(guān)遺傳易感基因，均能夠促進(jìn)結(jié)腸癌的發(fā)生，特別是在長(zhǎng)期高蛋白飲食或者低纖維素飲食的群體中,結(jié)腸癌的發(fā)病率可進(jìn)一步的上升[6]。長(zhǎng)期的臨床隨訪觀察研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸癌患者的5 年生存率不足45%，其中位生存時(shí)間不足34 個(gè)月[7,8]?，F(xiàn)階段缺乏對(duì)于結(jié)腸癌患者病情評(píng)估的腫瘤標(biāo)志物, 雖然CA199 或者CEA 等腫瘤指標(biāo)能夠在結(jié)腸癌的臨床病理特征評(píng)估過程中發(fā)揮作用。但部分研究發(fā)現(xiàn),采用CA1 99 或者CEA 評(píng)估結(jié)腸癌患者病情的靈敏度較低，其對(duì)于結(jié)腸癌患者病情評(píng)估的一致性率或者可參考性較低[9]。本次研究通過對(duì)于結(jié)腸癌患者病灶組織中IPO-38、NIBP2 的表達(dá)分析研究，能夠在部分揭示結(jié)腸癌臨床病理特征進(jìn)展機(jī)制的同時(shí),為臨床上結(jié)腸癌患者的診療提供理論方面的參考。

IPO-38 是增殖相關(guān)因子, 其通過對(duì)于癌細(xì)胞膜上轉(zhuǎn)錄結(jié)合因子的結(jié)合,能夠提高癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄上游啟動(dòng)子的激活程度, 提高癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄激活水平。基礎(chǔ)方面的研究認(rèn)為，IPO-38 能夠通過誘導(dǎo)癌細(xì)胞內(nèi)MAPK 或者AKT 信號(hào)通路，進(jìn)而加劇癌細(xì)胞的異常分化過程，導(dǎo)致癌細(xì)胞浸潤(rùn)能力的上升；NIBP2 作為細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)因子，其不僅能夠影響到處于靜止期癌細(xì)胞的比例,同時(shí)其還能夠增加癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)換的風(fēng)險(xiǎn)，促進(jìn)癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。NIBP2 對(duì)于腫瘤微環(huán)境的影響，能夠進(jìn)一步加劇癌細(xì)胞生物學(xué)特征的惡化,影響到癌細(xì)胞的早期異常分裂過程。部分研究者探討了NIBP2 的表達(dá)與結(jié)腸惡性腫瘤的關(guān)系,認(rèn)為在結(jié)腸惡性腫瘤患者中，NIBP2 蛋白的表達(dá)濃度明顯上升[10]，但對(duì)于IPO 的分析研究較少。

本次研究通過免疫組化探討了IPO-38、NIB P2 的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)在結(jié)腸癌患者中，病灶組織中的IPO-38、NIBP2 表達(dá)陽性率明顯的上升，高于良性對(duì)照組結(jié)腸組織，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著，提示了IPO-38、NIBP2 的高表達(dá)均能夠影響到結(jié)腸癌患者的病情進(jìn)展。這主要由于IPO-38、NIBP2 的表達(dá)上升，能夠通過影響到結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞的自我增值失調(diào)，加劇癌細(xì)胞突破基底膜組織的能力，最終促進(jìn)結(jié)腸癌的發(fā)生和中晚期病情進(jìn)展過程。王愛軍等[11]研究者也發(fā)現(xiàn)，在結(jié)腸癌患者病灶組織中，增殖相關(guān)蛋白的表達(dá)陽性率可平均上升35%～65%, 同時(shí)在合并有明顯的腸道外轉(zhuǎn)移或者腹水的患者中，病灶組織中增殖相關(guān)蛋白的表達(dá)陽性率可進(jìn)一步的上升。免疫組化染色分析可見，在病灶組織中，IPO-38、NIBP2 蛋白主要定位于癌細(xì)胞膜周邊或者細(xì)胞質(zhì)內(nèi)側(cè),同時(shí)在癌細(xì)胞異型性較為明顯的區(qū)域,IPO-38、NIBP2 的染色強(qiáng)度可明顯上升。在探討IPO-38、NIBP2 的表達(dá)與結(jié)腸癌患者臨床病理特征關(guān)系的過程中，發(fā)現(xiàn)在臨床分期較晚、浸潤(rùn)深度較深或者發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，IPO-38、NI BP2 蛋白的表達(dá)陽性率較高, 提示IPO-38、NIBP2的表達(dá)可明顯的上升。這可以從下列幾個(gè)方面進(jìn)行理解[12-15]：⑴IPO-38 的上升，能夠提高結(jié)腸腺體上皮細(xì)胞的變形能力,促進(jìn)癌細(xì)胞浸潤(rùn)范圍和浸潤(rùn)深度的增加，提高了臨床分期的進(jìn)展；⑵NIBP2 的上升能夠影響到癌細(xì)胞分泌淋巴結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子的能力，導(dǎo)致淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生。

綜上所述,在結(jié)腸癌患者病灶組織中，IPO-38、NIBP2 蛋白的表達(dá)陽性率均明顯上升, 同時(shí)IPO-38、NIBP2 的表達(dá)與結(jié)腸癌患者的臨床分期、 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或者浸潤(rùn)深度密切相關(guān)。