李海玲 司文宇 宋 爽 康鐵柱 姚郅璆 葉 菁 李福寶 方富貴

(安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院，合肥 230036)

中樞神經(jīng)是通過(guò)下丘腦-垂體-性腺(Hypothalamo-pituitary-gonadal，HPG) 軸來(lái)調(diào)控性腺，其信息傳遞取決于3個(gè)主要來(lái)源的神經(jīng)和激素信號(hào)之間的動(dòng)態(tài)相互作用：下丘腦前部，促性腺激素釋放激素(Gonadotropin-releasing hormone, GnRH)合成并以脈沖形式分泌；垂體前葉，GnRH脈沖刺激垂體分泌促性腺激素；以及性腺，通過(guò)分泌性類固醇并產(chǎn)生配子響應(yīng)促性腺激素的營(yíng)養(yǎng)作用[1]。神經(jīng)激肽B(Neurokinin B，NKB)是速激肽家族的一員[1]，其主要通過(guò)神經(jīng)激肽-3受體(NK3R)發(fā)揮生物學(xué)作用。NKB神經(jīng)元及其受體主要分布于動(dòng)物的下丘腦中[2-3]，如弓狀核(Arcuate nucleus，ARC)、正中隆起(Median eminence，ME)和視前區(qū)(Preoptic area，POA)等，此外在卵巢、胎盤(pán)、睪丸及前列腺中也均能檢測(cè)到NKB及其受體NK3R分布[4-5]。

Kiss1是開(kāi)啟和控制性成熟的關(guān)鍵基因，Kisspeptin由Kiss1基因編碼表達(dá)，主要與 kiss1 受體結(jié)合發(fā)揮作用，研究表明Kisspeptin/Kiss1R信號(hào)傳導(dǎo)是GnRH和促性腺激素分泌的主要刺激因素[6]。研究發(fā)現(xiàn)NKB調(diào)節(jié)女性的GnRH和促黃體生成素(Luteinizing hormone，LH)分泌[7]，且主要依賴Kisspeptin調(diào)節(jié)雌激素對(duì)LH分泌的反饋來(lái)誘導(dǎo)卵母細(xì)胞成熟，進(jìn)而促進(jìn)卵泡發(fā)育[8]。Navarro等[9]發(fā)現(xiàn)施用于大鼠側(cè)腦室的NKB激動(dòng)劑Senktide顯著增加血清中LH的水平，并且在ARC中表達(dá)c-fos的Kiss1神經(jīng)元數(shù)量增加10倍。同時(shí)NKB和Kisspeptin神經(jīng)元均表達(dá) NK3R，因此NKB可能作用于Kisspeptin神經(jīng)元影響GnRH分泌[10]。NKB自發(fā)現(xiàn)以來(lái)，研究者們發(fā)現(xiàn)其在調(diào)控生殖的中樞機(jī)制中起著關(guān)鍵性的作用，不僅可作用于 GnRH 神經(jīng)元影響 GnRH 的分泌，進(jìn)而影響卵泡刺激素(Follicle stimulating hormone，F(xiàn)SH)和 LH 的分泌[12]，而且還能與 Kisspeptin 相互作用，共同調(diào)節(jié)生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)[7]。有關(guān)NKB 在大鼠、小鼠、山羊和猴子等動(dòng)物生殖軸上分布的報(bào)道多數(shù)僅涉及生殖軸中的某一個(gè)或某幾個(gè)部分的組織、器官，而NKB對(duì)大鼠整個(gè)生殖軸上 NKB、GnRH 和 Kisspeptin 的分布及其表達(dá)量的影響報(bào)道甚少。因此，本研究通過(guò)側(cè)腦室外源注射N(xiāo)KB探討NKB對(duì)雌性大鼠生殖軸GnRH和Kisspeptin表達(dá)的影響，以期為NKB調(diào)節(jié)雌性動(dòng)物生殖功能提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

40只60 d的普通級(jí)Sprague-Dawley(SD)雌性大鼠，購(gòu)自清源實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司。

NKB購(gòu)自Anaspec公司，批號(hào)23026；Trizol試劑和EnergicScript?FirstStrandcDNA合成試劑盒，購(gòu)自上海閃晶分子生物科技有限公司；SYBR?Green Master Mix試劑盒，購(gòu)自南京諾唯贊生物科技有限公司；小鼠源GnRH單克隆抗體(批號(hào)sc-32292)、驢抗小鼠IgG-FITC二抗(批號(hào)sc-2099)、山羊抗兔IgG-R二抗(批號(hào)sc-2780)，購(gòu)自上海優(yōu)寧維生物科技有限公司；兔源Kisspeptin初級(jí)多克隆抗體和4′，6-二脒基-2-苯基吲哚，購(gòu)自Abcam(上海)貿(mào)易有限公司。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

將大鼠隨機(jī)分為試驗(yàn)組(n=20)和對(duì)照組(n=20)。試驗(yàn)組的大鼠側(cè)腦室注射10 μL(600 pmol)[11]溶解于生理鹽水的NKB溶液，對(duì)照組大鼠側(cè)腦室注射等體積的生理鹽水。所有大鼠均在側(cè)腦室后20 min處死。每組10只大鼠斷頸處死，快速分離出完整的下丘腦并凍存于-80 ℃冰箱，用于GnRH和Kiss1mRNA表達(dá)量的檢測(cè)；每組另外10只大鼠從心臟的心尖處插入針頭，用止血鉗固定后剪破右心耳，通過(guò)左心室灌注生理鹽水直至血水變清，然后灌注4%的多聚甲醛直至尾巴變硬，取下丘腦、垂體和卵巢固定于4%的多聚甲醛中，用于GnRH和Kisspeptin蛋白的免疫熒光檢測(cè)。

1.3 側(cè)腦室注射

大鼠麻醉后固定于腦室立體定位儀(BW-SDA903)上，頭顱頂部剪毛消毒后，用手術(shù)刀沿皮膚中線切開(kāi)表皮暴露出前囪的位置。以前囪為中心原點(diǎn)，距前鹵點(diǎn)后方1.5 mm，左側(cè)1.0～1.5 mm的位置進(jìn)行定位，隨后用牙科鉆在定位點(diǎn)鉆孔，將吸有不同藥物的微量進(jìn)樣針固定于定位儀上并沿此孔垂直下針8.6～9.0 mm。藥物注射完畢后停留5～10 s后再緩慢將微量進(jìn)樣針退出。拔針后縫合切口并進(jìn)行消炎處理。術(shù)中注意觀察大鼠生命特征，做好保暖措施。

1.4 下丘腦GnRH和Kiss1 mRNA轉(zhuǎn)錄水平測(cè)定

根據(jù)說(shuō)明書(shū)，使用Trizol試劑提取下丘腦總RNA。NanoDrop分光光度計(jì)在260 nm處定量總RNA。通過(guò)甲醛凝膠電泳評(píng)估總RNA的質(zhì)量，選取質(zhì)量合格的RNA樣品用于逆轉(zhuǎn)錄。使用EnergicScript?FirstStrandcDNA合成試劑盒，根據(jù)說(shuō)明書(shū)的要求用1 μg RNA在20 μl的總反應(yīng)體積中進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。

使用Primer Premier 5.0和AlleleID 6.0軟件，根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中GnRH，Kiss1和β-actin基因的核苷酸序列(GenBank登錄號(hào)分別為：NM_012767.2，NM_181692.1和NM_031144.3)設(shè)計(jì)引物。引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，其信息見(jiàn)表1。

表1 RT-qPCR引物信息Table 1 RT-qPCR primers information

RT-qPCR反應(yīng)體系：2 μL的cDNA模板，10.4 μL 的SYBR?Green Master Mix混合物，0.4 μL的正向引物和0.4 μL的反向引物以及6.8 μL的雙蒸水(ddH2O)。RT-qPCR條件：首先在95 ℃下預(yù)變性5 min，然后在95 ℃ 10 s和60 ℃ 30 s的40個(gè)循環(huán)中進(jìn)行擴(kuò)增，最后在95 ℃下15 s，60 ℃ 1 min 和95 ℃ 15 s來(lái)確定溶解曲線。通過(guò) 2-ΔΔCt法對(duì)基因相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.5 生殖軸中GnRH和Kisspeptin的免疫熒光共定位

將4%多聚甲醛中固定的下丘腦、垂體和卵巢取出放于質(zhì)量濃度300 g/L蔗糖的磷酸鹽緩沖鹽水(phosphate-buffered saline，PBS)中脫水。次日取出組織用濾紙吸取多余的水分后，將OTC包埋劑(Tissue OCT-Freeze Medium，OTC)包埋組織，隨后放入冰凍切片機(jī)內(nèi)加速凍凝。調(diào)整下丘腦切片厚度為7 μm，垂體和卵巢切片厚度為5 μm，收集完整的切片于防凍溶液中并儲(chǔ)存在-20 ℃直至用于免疫熒光。

將下丘腦切片與小鼠源GnRH單克隆抗體(1∶500 稀釋)和兔抗大鼠Kisspeptin多克隆抗體(1∶500 稀釋)在4 ℃下孵育過(guò)夜，垂體和卵巢切片僅與兔抗大鼠Kisspeptin初級(jí)多克隆抗體(1∶500稀釋)在4 ℃下孵育過(guò)夜。次日，切片在室溫下用PBS洗3次(10 min/次)后用驢抗小鼠IgG-FITC(1∶ 200稀釋)和山羊抗兔IgG-R(1∶200稀釋)一起孵育2 h。然后室溫下用PBS洗3次(10 min/次)并加入4′，6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI;藍(lán)色核染色)，溫育10 min。最后用50%甘油封片固定。為驗(yàn)證本次試驗(yàn)沒(méi)有非特異性染色，將切片同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照，陰性對(duì)照用PBS代替鼠GnRH單克隆抗體或兔抗大鼠Kisspeptin初級(jí)多克隆抗體。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

分別取試驗(yàn)組和對(duì)照組封片后的組織切片，在熒光顯微鏡下選用綠光(FITC)、紅光(R)、藍(lán)光(DAPI)等熒光通道進(jìn)行觀察、拍照，然后用Image-Pro Plus 6.0軟件對(duì)熒光分布圖片進(jìn)行半定量熒光強(qiáng)度分析，得到其平均熒光強(qiáng)度值。用 Image J軟件統(tǒng)計(jì)下丘腦不同核團(tuán)上單位面積GnRH和Kisspeptin陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量。

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用配對(duì)樣本T檢驗(yàn)進(jìn)行分析，所有數(shù)值表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SEM)，運(yùn)用SPSS Statistics軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理和相關(guān)性分析。P<0.05表示顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 NKB對(duì)大鼠下丘腦GnRH和Kiss1 mRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響

由圖1可以看出，與對(duì)照組相比，側(cè)腦室注射N(xiāo)KB組的GnRH的mRNA表達(dá)水平顯著升高(P<0.05)，Kiss1mRNA水平顯著降低(P<0.05)。

*表示顯著差異(P<0.05)。下同。* indicate significant differences (P<0.05). The same as below.圖1 NKB對(duì)大鼠下丘腦GnRH和Kiss1 mRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響Fig.1 Effect of NKB on GnRH and Kiss1 mRNA transcription level in rat hypothalamus

2.2 NKB對(duì)大鼠下丘腦GnRH和Kisspeptin分布的影響

試驗(yàn)組中，GnRH在ARC、POA、ME和室旁核(Paraventricular nucleus，PVN)存在不同強(qiáng)度的免疫熒光表達(dá)，其中在ARC處呈現(xiàn)密集的廣泛分布的強(qiáng)熒光表達(dá)，而在POA、ME和PVN處為分散的點(diǎn)狀較弱熒光；Kisspeptin在ARC、POA、ME和前腹側(cè)室旁核(Anterior ventral paraventricular nucleus，AVPV)有不同強(qiáng)度的免疫熒光表達(dá)，其中在ARC、ME和AVPV處為廣泛而密集的強(qiáng)熒光表達(dá)，而在POA處為稀疏的較弱熒光(圖2(a))；對(duì)照組中，GnRH僅在ARC和ME中存在廣泛分布的強(qiáng)熒光表達(dá)，Kisspeptin在ARC和AVPV中存在免疫熒光表達(dá)(圖2(b))。對(duì)下丘腦不同核團(tuán)中的GnRH和Kisspeptin陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)(圖3和圖4)，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組中GnRH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量在ARC，POA和ME中增加，但僅在POA核團(tuán)中呈現(xiàn)顯著增加(P<0.05)(圖3)。但試驗(yàn)組的Kisspeptin陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在ARC、PVN、AVPV和POA中均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)(圖4)。

ARC：弓狀核； POA：視前區(qū)； ME：正中隆起；PVN：室旁核；AVPV：前腹側(cè)室旁核；陰性對(duì)照：用PBS代替鼠GnRH單克隆抗體或兔抗大鼠Kisspeptin初級(jí)多克隆抗體；3V：第三腦室。ARC：Arcuate nucleus; POA： Preoptic area; ME： Median eminence; PVN： Paraventricular nucleus; AVPV： Anterior ventral paraventricular nucleus; Negative control; PBS instead of GnRH MAb； 3V： The third ventricle。圖2 NKB對(duì)試驗(yàn)組(a)和對(duì)照組(b)大鼠下丘腦GnRH和Kisspeptin分布的影響Fig.2 Effects of NKB on the distribution of GnRH and Kisspeptin in rat hypothalamus for experimental and control group

圖3 NKB 對(duì)大鼠下丘腦弓狀核(ARC)，視前區(qū)(POA)和正中隆起(ME)GnRH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的影響Fig.3 The effect of NKB on the number of GnRH-positive cells in the arcuate nucleus (ARC)， preoptic area (POA) and median eminence (ME) of hypothalamus in rats

圖4 NKB對(duì)大鼠下丘腦弓狀核(ARC)，室旁核(PVN)，前腹側(cè)室旁核(AVPV)和視前區(qū)(POA)Kisspeptin陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的影響Fig.4 The effect of NKB on the number of Kisspeptin-positive cells in the arcuate nucleus (ARC),paraventricular nucleus (PVN), anterior ventral paraventricular nucleus (AVPV) and preoptic area (POA) of hypothalamus in rats

2.3 NKB對(duì)大鼠垂體和卵巢Kisspeptin分布的影響

Kisspeptin主要分布在成年雌性大鼠的腺垂體(圖5)，且試驗(yàn)組Kisspeptin平均熒光強(qiáng)度顯著低于對(duì)照組(P<0.05)(表2)；在成年大鼠的卵巢上也存在有Kisspeptin的熒光表達(dá)(圖6)，主要分布于卵巢間質(zhì)和卵泡膜細(xì)胞上，但2組之間沒(méi)有顯著性的差異(P>0.05)。

圖5 NKB對(duì)大鼠腺垂體Kisspeptin分布的影響Fig.5 Effect of NKB on Kisspeptin distribution in rat adenohypophysis

圖6 NKB對(duì)大鼠卵巢Kisspeptin分布的影響Fig.6 Effect of NKB on the distribution of Kisspeptin in rat ovary

表2 NKB對(duì)大鼠垂體和卵巢上Kisspeptin表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度的影響Table 2 The effect of NKB on the mean fluorescence intensity of Kisspeptin in the pituitary and ovary of rats

3 討 論

中樞神經(jīng)通過(guò)下丘腦-垂體-性腺軸實(shí)現(xiàn)對(duì)性腺的調(diào)控，生殖軸的信息傳遞路線即GnRH神經(jīng)元接受其上游機(jī)制的調(diào)控后，脈沖性釋放GnRH，其作用于垂體，調(diào)節(jié)促性腺激素的釋放，促性腺激素又作用于性腺，調(diào)節(jié)生殖功能及性激素的分泌[10]。下丘腦是動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的重要器官，可以維持正常代謝并調(diào)控動(dòng)物的生殖活動(dòng)。下丘腦GnRH的脈沖式分泌是HPG軸功能正常啟動(dòng)和維持的關(guān)鍵[9]。近年來(lái)，研究者對(duì)NKB、Kisspeptin及其受體在人、獼猴、豬、大小鼠等多種動(dòng)物下丘腦定位分布已做了大量的研究。目前大多數(shù)研究者認(rèn)為 NKB 和 Kisspeptin 主要共表達(dá)于弓狀核[12]。本研究免疫熒光結(jié)果顯示，Kisspeptin在ARC、PVN、AVPV和POA中均有不同強(qiáng)度的熒光表達(dá)，且與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組ARC、PVN、AVPV及POA中Kisspeptin陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著降低。這與不同生理時(shí)期大鼠體內(nèi)下丘腦Kisspeptin免疫熒光分布表達(dá)結(jié)果相似[13]。前期研究表明，給雄鼠同時(shí)注射N(xiāo)KB和Kisspeptin，其LH分泌量高于單獨(dú)注射Kisspeptin[14]，另外研究者在動(dòng)物和人類中均發(fā)現(xiàn)，NKB 神經(jīng)元同時(shí)表達(dá)Kisspeptin和強(qiáng)啡肽(Dynorphin，Dyn)神經(jīng)元，而弓狀核的 Kiss-1、Tac2能夠增加 LH 的分泌，表明NKB可以增強(qiáng)Kisspeptin在生殖發(fā)育的促進(jìn)作用。小鼠[15]和山羊[16]側(cè)腦室注射N(xiāo)KB激動(dòng)劑后Kiss1mRNA表達(dá)量和LH脈沖釋放增加，提示TAC3可能為Kiss1的上游基因，通過(guò)直接或間接作用調(diào)控Kisspeptin神經(jīng)元從而調(diào)控生殖功能。本研究中，試驗(yàn)組大鼠下丘腦的Kiss1 mRNA表達(dá)量與對(duì)照組相比顯著降低，該結(jié)果與小鼠[15]和山羊[16]側(cè)腦室內(nèi)注射N(xiāo)KB激動(dòng)劑后Kiss1mRNA表達(dá)量增加不一致，表明不同物種可能會(huì)對(duì)NKB對(duì)Kiss1的表達(dá)產(chǎn)生影響。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組GnRHmRNA的轉(zhuǎn)錄水平增加，Kiss1mRNA轉(zhuǎn)錄水平卻顯著降低，該結(jié)果與注射Kisspeptin促進(jìn)GnRH的結(jié)論[17]相反。對(duì)于這種差異，可能的原因：一是可能與樣品來(lái)源有關(guān)，因?yàn)镚nRH與Kisspeptin在下丘腦不同核團(tuán)分布不同，本試驗(yàn)中樣品為整個(gè)下丘腦，并非下丘腦某個(gè)核團(tuán)，導(dǎo)致GnRH與Kisspeptin的表達(dá)不一致；二是因?yàn)镵isspeptin是GnRH上游調(diào)控因子[18]，其基因轉(zhuǎn)錄水平未必同時(shí)增加，可能Kisspeptin增加在GnRH之前；三是NKB還可能直接或者間接通過(guò)其他通路如Dyn等影響GnRH釋放，ARC中的單個(gè)細(xì)胞群(在綿羊中)產(chǎn)生3種神經(jīng)肽:Kisspeptin，Dyn和NKB，并且這3 種神經(jīng)肽都與GnRH分泌相關(guān)[19]。因此，NKB調(diào)節(jié)Kisspeptin和GnRH的確切機(jī)制仍需進(jìn)一步探究。

垂體包括神經(jīng)垂體和腺垂體，其中腺垂體是內(nèi)分泌系統(tǒng)的重要調(diào)控樞紐，受下丘腦釋放激素和靶腺激素的雙重調(diào)節(jié)[20]。本研究表明，外源性給予NKB可使腺垂體中Kisspeptin高表達(dá)。這與在雌性恒河猴垂體上Kisspeptin的定位研究結(jié)果一致，即Kisspeptin主要存在于雌性恒河猴的垂體前葉及中葉[7]。本研究中側(cè)腦室注射N(xiāo)KB導(dǎo)致腺垂體Kisspeptin表達(dá)的變化，可能是通過(guò)影響下丘腦GnRH和Kisspeptin的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。有研究表明下丘腦ARC上的NKB通過(guò)傳出神經(jīng)元進(jìn)入垂體門(mén)脈循環(huán)影響垂體前葉LH和FSH釋放[21-22]。Billings等[23]在母羊上發(fā)現(xiàn)NKB受體激動(dòng)劑可以促進(jìn)LH分泌，且Navarro等[11]研究發(fā)現(xiàn)NKB受體激動(dòng)劑對(duì)雌性大鼠LH分泌有持續(xù)性的興奮作用。也有研究表明NKB通過(guò)腦垂體的GH3細(xì)胞系促進(jìn)催乳素的分泌[24]。提示NKB可以通過(guò)腺垂體參與生殖軸的調(diào)控作用，也可以直接作用于腦垂體，影響促性腺激素的分泌，進(jìn)而調(diào)控生殖。

雌性動(dòng)物卵巢的功能受下丘腦腺垂體系統(tǒng)的調(diào)節(jié)。本試驗(yàn)側(cè)腦室注射N(xiāo)KB，不僅影響了大鼠下丘腦和垂體Kisspeptin的表達(dá)，還發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組卵巢的卵泡膜、顆粒細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞Kisspeptin的熒光強(qiáng)度高于對(duì)照組。該結(jié)果與性腺切除小鼠側(cè)腦室注射N(xiāo)KB激動(dòng)劑后Kiss1mRNA表達(dá)增加相似[25-26]，即NKB增加Kiss1的含量進(jìn)而促進(jìn)Kisspeptin的表達(dá)。已有的研究表明雌性大鼠卵巢上具有Kisspeptin分布，并且在排卵前Kiss1 mRNA的表達(dá)增加，表明Kisspeptin可能參與卵泡形成、黃體生成和排卵的過(guò)程[27]。Patterson等[28]發(fā)現(xiàn)先天性促性腺激素缺乏癥(Isolated hypogonatropic hypogoadism，IHH)患者都存在GPR54 基因的突變，發(fā)現(xiàn)給GPR54基因缺陷的動(dòng)物模型注射GnRH后可以緩解停滯的性成熟癥狀，由此認(rèn)為啟動(dòng)初情期的關(guān)鍵因子之一是GPR54，Kisspeptin-GPR54 系統(tǒng)在青春期發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。Seminara等[29]發(fā)現(xiàn)，在未成熟雌性小鼠腦室內(nèi)長(zhǎng)期注入 Kisspeptin 可引起生殖軸的提前發(fā)育，如陰門(mén)的提前開(kāi)放、卵巢和子宮重量增加，這可能是由于它的內(nèi)源性受體GPR54信號(hào)與GnRH所釋放的激活信號(hào)偶聯(lián)的緣故，而Kisspeptin很有可能是通過(guò)激活GnRH來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)生殖軸的調(diào)節(jié)作用。本試驗(yàn)中也可能是NKB直接調(diào)節(jié)下丘腦GnRH和Kisspeptin，進(jìn)而影響垂體的分泌來(lái)調(diào)控卵巢的功能。已知雄激素由卵泡膜細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞合成，并通過(guò)卵泡細(xì)胞或顆粒細(xì)胞最終轉(zhuǎn)化為雌激素，與此同時(shí)顆粒細(xì)胞還可以產(chǎn)生孕酮[30]，提示NKB可能通過(guò)顆粒細(xì)胞、卵泡膜細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞調(diào)控性激素分泌，從而對(duì)生殖軸產(chǎn)生作用，調(diào)控雌性大鼠的生殖活動(dòng)。