凌利英 殷小云 張艷艷 蒙海燕 蔣寶華

摘要：目的? 探討暈痛平合劑中所含的揮發(fā)油鎮(zhèn)痛作用，并根據(jù)實驗結果對提取工藝進行優(yōu)化。方法? 暈痛平合劑采用扭體實驗給小鼠分別腹腔注射0.6%醋酸0.2ml/20g體重，觀察小鼠注射醋酸20分鐘內(nèi)出現(xiàn)扭體反應次數(shù);利用正交實驗L9（34）優(yōu)化揮發(fā)油的提取工藝，確定最佳提取方法。結果? 結果表明含揮發(fā)油組的暈痛平合劑鎮(zhèn)痛效果顯著;正交實驗揮發(fā)有最佳提取工藝是A3B2C3，即加10倍量水，浸泡1小時，蒸餾提取6小時。

關鍵詞：暈痛平合劑;揮發(fā)油;鎮(zhèn)痛;工藝優(yōu)化;正交實驗

【中圖分類號】R446 【文獻標識碼】A 【文章編號】1673-9026（2021）15--01

暈痛平合劑是我院院內(nèi)制劑，在臨床已經(jīng)應用多年，藥品的主要成份為桃仁、紅花、枳殼、延胡索、香附、赤芍、天麻、川芎、砂仁、柴胡、半夏、芥子、石菖蒲、桔梗、甘草。桃仁、紅花具有活血祛瘀、通經(jīng)脈作用，與赤芍、川芎配伍，可用于瘀血阻滯、瘀阻為器或血行不暢之證?；颊咭蛲鈧峦?，瘀血阻絡多見。延胡索活血止痛;香附疏肝理氣、調(diào)經(jīng)止痛。上藥配伍，共同發(fā)揮活血祛瘀，理氣通絡止痛之功能。枳殼破氣消痞，芥子利氣散結、通絡止痛。石菖蒲開竅醒神。桔梗祛痰排膿。生甘草緩急止痛。共同發(fā)揮化瘀、通絡止痛、祛痰功能。本方所用之外傷頭痛、頭暈、頭脹等癥，乃由于外傷所致，氣滯血瘀、瘀則不通、不通則痛。血瘀則清竅失常，則頭痛、頭暈、頭脹。腎失和降則息嘔吐。諸藥相和，諸癥好轉(zhuǎn)。

暈痛平合劑現(xiàn)規(guī)格為250ml/瓶，每次服用量為50ml，服用劑量較大，因此準備在合劑的基礎上開發(fā)口服液劑型，對口服液配制工藝及質(zhì)量標準做進一步研究，在此研究基礎上擬對揮發(fā)油的成分予以保留，但揮發(fā)油的保留是否能夠提高暈痛平合劑的臨床療效，需要進一步研究。本次實驗目的是探討工藝中提取揮發(fā)油的必要性，對揮發(fā)油、含揮發(fā)油的藥品及不含揮發(fā)油的藥品的鎮(zhèn)痛作用進行比較，并對揮發(fā)油的提取工藝進行優(yōu)化。

1.鎮(zhèn)痛實驗研究

1.1受試藥物

實驗一組：暈痛平合劑（不含揮發(fā)油） 規(guī)格0.825g/ml（825g生藥，制成1000ml液體）批號：160601，藥物組成：桃仁、紅花、枳殼、延胡索、香附、赤芍、天麻、川芎、砂仁、柴胡、半夏、芥子、石菖蒲、桔梗、甘草，桃仁、紅花，來源：河北省遷安市中醫(yī)醫(yī)院制劑室;實驗二組：揮發(fā)油組（批號：160602）：按照稱取520g的飲片，破碎成粗粉，置密閉回流裝置中提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，備用;實驗三組：暈痛平合劑含揮發(fā)油組（批號：160603）：參照二組的方法提取揮發(fā)油，并將藥物殘渣加水按照暈痛平合劑的提取工藝繼續(xù)提取兩次，配制成1000ml的液體制劑，并加入揮發(fā)油，作為含揮發(fā)油組備用。

1.2實驗動物：昆明種小白鼠，數(shù)量40只，體重18-22g，均為雄性，購自：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院衛(wèi)生環(huán)境醫(yī)學研究所動物實驗中心，合格證號：SCXK-（軍）2009-003。

1.3實驗儀器? 電子天平、500ml燒杯、棉簽、1ml注射器。

1.4試劑 冰醋酸，天津市申泰化學試劑有限公司，分析純，批號：140420。

1.5劑量設計? 暈痛平合劑，規(guī)格：0.825g/ml（825g生藥，制成1000ml液體），將揮發(fā)油、含揮發(fā)油的暈痛平合劑及不含揮發(fā)油的暈痛平合劑均配成0.825g/ml生藥的樣品溶液，依次分為1、2、3組，試驗時用蒸餾水配成0.8g生藥/ml的供試液。

2.試驗方法

2.1各個試驗均將動物隨機分成四組，分別為樣品1、2、3組及對照組。每組10支小鼠，樣品1、2、3組按照22g/kg灌胃不同藥液，對照組灌服等容積的蒸餾水，每日一次，連續(xù)給藥7天。

2.2鎮(zhèn)痛試驗：末次給藥后30分鐘，各組小鼠分別腹腔注射0.6%醋酸0.2ml/20g體重，觀察小鼠注射醋酸15分鐘內(nèi)出現(xiàn)扭體反應次數(shù)。用下列公式計算扭體抑制率[1]。

2.3試驗結果

結果顯示：三組樣品均能不同程度的減少15分鐘內(nèi)腹腔注射0.6%醋酸引起的扭體次數(shù)，試驗表明樣品均有一定的鎮(zhèn)痛作用，但含揮發(fā)油的暈痛平合劑鎮(zhèn)痛作用更加顯著（P<0.01）

以上試驗表明，揮發(fā)油有不同程度的鎮(zhèn)痛作用，含揮發(fā)油的暈痛平合劑較不含揮發(fā)油的暈痛平合劑的效果明顯提升，此試驗提示了提取揮發(fā)油的必要性。

2.揮發(fā)油提取工藝的優(yōu)化

2.1.揮發(fā)油提取工藝的研究? 以揮發(fā)油的收取量為參考指標，采用正交試驗對提取的加水量、浸泡時間及蒸餾時間進行試驗考察。

2.2材料與儀器：

材料：桃仁、紅花、枳殼、延胡索、香附、赤芍、天麻、川芎、砂仁、柴胡、半夏、芥子、石菖蒲、桔梗、甘草，來源：安徽滬春堂中藥飲片有限公司，經(jīng)檢測均為合格產(chǎn)品。揮發(fā)油測定器（唐山器?；邢薰荆嶒炗盟疄檎麴s水，無水硫代硫酸鈉，石油醚。

2.3方法與結果

2.3.1? 通過預實驗發(fā)現(xiàn)加水量、浸泡時間、蒸餾時間是影響揮發(fā)油提取的主要因素。因此，為了探討揮發(fā)油的提取工藝，以揮發(fā)油量為參考指標，采用正交實驗對提取的加水量、浸泡時間、蒸餾時間進行考察，選擇最佳的揮發(fā)油提取工藝參數(shù)，為大生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

2.3.2? 因素水平表? 以加水量（倍）A，浸泡時間（h）B，蒸餾時間（h）C為工藝考察因素，采用L9（34）進行正交試驗，因素水平表如表2。

2.3.3? ?提取工藝篩選 按正交實驗設計進行實驗，按處方的1/10比例分別稱取已粉碎好的藥材，放入揮發(fā)油蒸餾器中，提取收集揮發(fā)油，參照揮發(fā)油測定法乙法《中國藥典2015年版一部附錄2204》測定法實驗，得揮發(fā)油含量（%）。正交實驗表及揮發(fā)油考察結果見表3。

從表4的方差分析表可以看出，極差最大的是C（蒸餾時間），其次是浸泡時間及提取的次數(shù)，但A、B的結果均不具有顯著性;從表3的最佳數(shù)據(jù)直觀分析可知，A3B1C3的結果較為理想。結合表3及表4數(shù)據(jù)，同時考慮生產(chǎn)的成本，根據(jù)正交實驗結果，確定提取揮發(fā)油的最佳工藝組合是A3B2C3，即加10倍量水，浸泡1小時，蒸餾提6小時。

2.3.4最佳工藝驗證

為了驗證上述結論的準確性，按照最佳工藝條件A3B2C3，稱取處方量的10分之一，按照最佳工藝條件A3B2C3進行了3次試驗，結果見表5。

從表中5次實驗結果可以看出，揮發(fā)油的收率均處于最高，說明工藝可行，可以在大生產(chǎn)中應用。

3 討論

由于腹膜有廣泛的感覺神經(jīng)分布，某些化學物質(zhì)（如冰醋酸等）注入小鼠腹腔內(nèi)可刺激臟層和壁層腹膜，引起深部、大面積且持久的疼痛，致使小鼠產(chǎn)生扭體反應，表現(xiàn)為腹部兩側(cè)內(nèi)凹、軀體扭曲、后肢伸展和臀部高起等行為反應，統(tǒng)稱為扭體反應。該反應在注射15min內(nèi)出現(xiàn)頻率最高，故注射后15min內(nèi)發(fā)生的扭體次數(shù)作為疼痛的定量指標。如醋酸引起的疼痛刺激通過感覺神經(jīng)纖維傳送到脊髓，然后到達大腦皮質(zhì)產(chǎn)生疼痛感覺。中央和外周鎮(zhèn)痛劑舒緩疼痛通過感覺中樞的一體化和抑制或減少疼痛感覺的進入，因此中樞的止痛很容易通過動物實驗證實效果。

暈痛平合劑處方中的川芎含有藁本內(nèi)酯，藁本內(nèi)酯有很強的解痙、平喘、鎮(zhèn)靜作用，能改善微循環(huán)，松弛平滑肌[2];香附中含有的揮發(fā)油主要是a-香附酮及a-香附烯，其中a-香附酮被認定為較強的前列腺素生物合成抑制劑，被認為是鎮(zhèn)痛作用的有效成分之一[3];砂仁揮發(fā)油的主要成分為乙酸龍腦酯，具有保胎、殺蟲、抗炎、抗腫瘤、止痛、止瀉、改善記憶力等作用[4];石菖蒲中含有揮發(fā)油，主要為β-細辛醚，α-細辛醚，兩者均有鎮(zhèn)靜作用和抗驚厥作用[5];枳殼中揮發(fā)油的主要成分是檸檬烯與芳樟醇，檸檬烯有鎮(zhèn)咳、祛痰、抗菌作用，芳樟醇有防腐、抗病毒、鎮(zhèn)靜作用[6];柴胡揮發(fā)油中含有較多的亞油酸，有一定的抗驚厥作用[5];以上飲片的揮發(fā)油的保留可提高暈痛平合劑的臨床鎮(zhèn)痛的治療作用，而且動物實驗也驗證了提取揮發(fā)油對鎮(zhèn)痛作用顯著。

因此對暈痛平合劑原有工藝進行改進，提取川芎、香附、砂仁、石菖蒲、枳殼、柴胡六味飲片的揮發(fā)油，殘渣與其他剩余的幾味飲片合并水提，可有效的提升暈痛平合劑的臨床治療效果。

參考文獻：

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[5]高學敏.中藥學.北京：中國中醫(yī)藥出版社，2002.

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