王順山，楊文文，王志龍，唐乃鑫，祝希輝，郭鵬，賀亞奇，李玉保*

（1.北京華夏興洋生物科技有限公司北京 102600；2.聊城大學(xué)農(nóng)學(xué)院山東聊城25205）

新城疫（ND）、傳染性支氣管炎（IB）、H9 亞型禽流感（H9 AIV）以及傳染性法氏囊炎（IBD）是肉雞常見的病毒性疾病，疫苗免疫是目前有效預(yù)防方案。滅活苗具有安全性好、穩(wěn)定性高、便于運(yùn)輸和保存等優(yōu)勢，使用不同的佐劑能夠提高滅活苗免疫效果[1,2]。獸用疫苗生產(chǎn)中廣泛使用礦物油佐劑，在免疫應(yīng)答和免疫持續(xù)期方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢，但也存在疫苗黏度大、不易注射、不易吸收、疫苗副反應(yīng)大等問題。北京生泰爾生物科技有限公司申請獲批含有高分子膠和植物提取物的“新型疫苗佐劑”發(fā)明專利[3]，應(yīng)用該發(fā)明專利生產(chǎn)新支流法四聯(lián)滅活疫苗。為客觀評價新型疫苗佐劑新支流法四聯(lián)疫苗在肉雞臨床應(yīng)用效果以及1 日齡防疫新支流法對肉雞后期抗體滴度提升效果，設(shè)計(jì)開展了臨床試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 疫苗

新支流法四聯(lián)新型佐劑疫苗（批號2020012），由北京華夏興洋生物科技有限公司提供；新支流法四聯(lián)礦物油佐劑疫苗，采購于市場流通商品。

1.2 主要試劑

IBD、IB 抗體檢測試劑盒，均購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司；ND、H9 AIV 血凝抑制試驗(yàn)抗原，均購自哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.3 試驗(yàn)動物

1 日齡雛雞62,400 只，平均分為A、B、C、D 共4 棟。A 棟和B棟為新支流法四聯(lián)新佐劑疫苗試驗(yàn)組，1 日齡頸部皮下注射0.2mL/ 只；C 棟和D 棟為新支流法四聯(lián)礦物油佐劑疫苗對照組，1日齡頸部皮下注射0.2mL/ 只。試驗(yàn)組與對照組其余疫苗免疫程序相同，1 日齡新支二聯(lián)弱毒苗噴霧免疫（0.6 羽份/ 只），7 日齡新支二聯(lián)弱毒苗飲水免疫（1.5 羽份/ 只）。

1.4 免疫應(yīng)激

1 日齡注射滅活苗，觀察雛雞進(jìn)入雞舍后，雛雞在養(yǎng)殖籠內(nèi)的分布、飲水、采食情況，記錄數(shù)據(jù)并拍照。

1.5 疫苗吸收

分別在7、14 日齡時，每組剖殺10 只試驗(yàn)雞只，觀察頸部滅活苗注射部位疫苗吸收情況，并拍照。

1.6 免疫器官指數(shù)

分別在7、14、21、35 日齡，各棟隨機(jī)抽取10 只，控飼3h，稱重、剖殺，稱取胸腺、脾臟、法氏囊等免疫器官重量，計(jì)算免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)=免疫器官鮮重（g）÷體重（kg）

1.7 抗體滴度檢測

分別在7、14、21、28 和35 日齡及出欄時，各棟隨機(jī)采血10份，分離血清，利用ELISA 試劑盒、血凝/ 血凝抑制試驗(yàn)檢測IBD、IB、H9 AIV、ND 抗體滴度。

1.8 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 20 軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA），試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

2.1 免疫應(yīng)激

各組雛雞進(jìn)入雞舍后，開始飲水時間、開始吃料時間、早期耗料量以及在養(yǎng)殖籠內(nèi)雛雞分布無明顯差異（圖1）。

2.2 疫苗吸收情況

于7、14 日齡剖殺各棟雛雞，觀察疫苗吸收情況。試驗(yàn)組疫苗吸收稍優(yōu)于對照組（圖2）。

2.3 免疫器官指數(shù)

7 日齡時，試驗(yàn)組A 棟胸腺指數(shù)極顯著高于對照組C 棟和D棟（P≤0.01）；21 日齡時，試驗(yàn)組A 棟和B 棟胸腺指數(shù)顯著高于對照組C 棟和D 棟（P≤0.05）。脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)，試驗(yàn)組與對照組無顯著性差異。

表1 試驗(yàn)雞只免疫器官指數(shù)

2.4 抗體水平

21 日齡時，H9 抗體滴度試驗(yàn)組顯著高于對照組C 棟（P≤0.05）；ND 抗體滴度，各日齡試驗(yàn)組與對照組均無顯著性差異（表2）。IB及IBD 抗體滴度，各日齡試驗(yàn)組與對照組差異均無顯著性差異（未附數(shù)據(jù)）。

3 討論與結(jié)論

新支流法四聯(lián)新型疫苗佐劑疫苗免疫效果具有一定的優(yōu)勢。新型疫苗佐劑含有高分子膠和植物提取物[3]，能夠提高機(jī)體非特異性免疫[4]，在免疫早期能夠促進(jìn)胸腺發(fā)育，提高胸腺指數(shù)；抗體結(jié)果顯示，雖然只有在21 日齡時，試驗(yàn)組H9 AIV 抗體滴度顯著高于對照組，但從數(shù)據(jù)可以看出，在21 日齡前，試驗(yàn)組H9 抗體滴度和ND 抗體滴度平均值皆高于對照組，證明新支流法四聯(lián)新型疫苗佐劑疫苗在肉雞早期具有一定的優(yōu)勢。

圖1 雛雞分布 A.試驗(yàn)組；B.對照組

圖3 7 日齡、14 日齡疫苗吸收情況 A7-D7.各組7 日齡；A14-D14.各組14 日齡

表2 試驗(yàn)雞只ND和H9亞型流感HI抗體水平

1 日齡防疫新支流法疫苗，對肉雞40 日齡前能夠提高較好的保護(hù)。長期以來，新流滅活疫苗或新支流滅活疫苗的防疫，多在養(yǎng)殖場7～9 日齡進(jìn)行。隨著養(yǎng)殖規(guī)模擴(kuò)大，在養(yǎng)殖場進(jìn)行注射免疫存在應(yīng)激大、操作困難、對生物安全構(gòu)成威脅等不足，因此，希望肉雞防疫孵化場完成，但1 日齡進(jìn)行滅活疫苗防疫對后期抗體滴度是否滿足需要存在爭議。目前白羽肉雞出欄時間多在40 日齡左右，通過1 日齡防疫新支流法四聯(lián)疫苗，可以對4 種主要的流行病提供較好的抗體保護(hù)。但抗體數(shù)據(jù)顯示，35 日齡后，各組抗體皆有所降低，且從標(biāo)準(zhǔn)差可以看出，抗體離散度明顯擴(kuò)大。因此，飼養(yǎng)周期超過40 日齡的雞群，建議加強(qiáng)免疫。