韓曼曼，于慶生，彭 輝，張 琦，劉舉達

(1浙江省溫州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院普外科·浙江 溫州 325000；2安徽中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院普外科·安徽 合肥 230031)

急性軟組織感染屬于皮膚及軟組織感染(skin and soft tissue infection，SSTI)范疇，紅、腫、熱、痛為其主要臨床表現(xiàn)，發(fā)病率及流行病學較難統(tǒng)計[1]，研究表明：SSTI發(fā)病率較高，約占成年人0.1%，且每年有上漲趨勢[2]。中醫(yī)外治療法在治療軟組織感染方面具有明顯優(yōu)勢[3]。芙蓉膏是安徽中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院已故著名老中醫(yī)湯琢成主任醫(yī)師傾畢生精力研制的外用膏劑，由木芙蓉葉、冰片、天南星等中藥按一定比例經(jīng)特殊工藝制造而成，前期臨床實驗證實芙蓉膏具有抗炎鎮(zhèn)痛作用[4-6]；動物實驗表明，芙蓉膏能顯著抑制二甲苯導致的小鼠耳廓腫脹[7]。芙蓉膏外敷治療SSTI有較好療效，其具有較強的抗炎鎮(zhèn)痛作用[4-7]，然而未曾深入探討其作用機制，故筆者進行了此項研究。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 50只清潔級新西蘭大白兔，毛色純白，雌雄各半，月齡3個月，體質(zhì)量(2.0±0.5)kg，由安徽長臨河醫(yī)藥科技有限公司提供，動物合格證號：SCXK(皖)2016-0008。

1.2 菌株和藥物 金黃色葡萄球菌菌株：由安徽中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院檢驗科微生物室提供。芙蓉膏：由安徽中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院制劑中心生產(chǎn)，批號：皖藥制字Z20050068；莫匹羅星軟膏(百多邦)：中美天津史克制藥有限公司，規(guī)格：每支10 g。

1.3 主要試劑和儀器 兔TNF-α、IL-6及TGF-β1試劑盒：上海源葉生物技術(shù)有限公司，批號：CK-E80109R，CK-E80171R，CK-E80108R。Olympus CX31光學顯微鏡：日本Olympus公司生產(chǎn)；XN-9000全自動血球儀：Sysmex公司生產(chǎn)；RT-6000酶標儀：雷杜公司生命科學有限公司生產(chǎn)。

2 實驗方法

2.1 動物分組、造模及給藥處理 將50只新西蘭大白兔隨機分為5組，分別為正常組、模型組、百多邦組、芙蓉膏高劑量組、芙蓉膏低劑量組，每組10 只。兔后背剪毛，6%的硫化鈉脫去后背部區(qū)域(取直徑5 cm的近似圓形)毛發(fā)。24 h后，除正常組外，其余組兔均用20%烏拉坦4 mL/kg耳緣靜脈麻醉，脫毛區(qū)域皮下注射金葡菌0.5 mL(1.5×108CFU/mL)，敷料固定，造模后12 h兔背部出現(xiàn)紅腫熱痛為造模成功[8]。 正常組：生理鹽水外涂脫毛區(qū)，每次涂擦5 mL；模型組：生理鹽水外涂病損區(qū)，每次涂擦5 mL；百多邦組：百多邦外涂，3.0 g/kg；芙蓉膏低劑量組：芙蓉膏外敷，1.5 g/kg；芙蓉膏高劑量組：芙蓉膏外敷，3.0 g/kg；1次/d，共干預7 d。

2.2 觀察指標及測定

2.2.1 組織病理學觀察 于干預第7天20%烏拉坦靜脈麻醉，生理鹽水清洗背部病變部位，組織剪將兔背部病變組織取下4 cm×4 cm大小，制片，HE染色，光學顯微鏡下觀察病變組織膿腫大小、炎細胞浸潤、纖維組織及新生毛細血管情況。

2.2.2 全血WBC和NE數(shù)量 于干預第2、4、7天給藥后8 h兔耳緣靜脈采血，抽取1.5 mL靜脈血放入專業(yè)真空采血管，用全自動血球儀檢測全血WBC和NE數(shù)量。

2.2.3 血清TNF-α、IL-6及TGF-β1測定 嚴格按ELISA試劑盒說明書進行。

3 結(jié)果

3.1 各組兔背部感染組織病理觀察結(jié)果 正常組組織內(nèi)未見炎癥反應，無炎細胞浸潤；模型組組織內(nèi)可見炎癥反應顯著，大量炎細胞浸潤；百多邦組見組織內(nèi)炎癥減輕，少量炎細胞浸潤；芙蓉膏高、低劑量組組織內(nèi)炎癥及炎細胞浸潤均明顯減輕，以高劑量組減輕明顯，亦可見纖維組織增生及少量新生毛細血管，以高劑量組增生明顯。見圖1。

圖1 各組兔背部組織HE染色結(jié)果(×400)

3.2 各組兔第2、4、7 天全血WBC和NE數(shù)量比較 見表1。

表1 各組兔全血WBC、NE數(shù)量比較

3.3 各組兔第2、4、7 天血清TNF-α、IL-6水平比較 見表2。

表2 各組兔血清TNF-α、IL-6水平比較

3.4 各組兔第2、4、7 天血清TGF-β1水平比較 見表3。

表3 各組兔血清TGF-β1水平比較

4 討論

芙蓉膏是安徽中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院已故著名老中醫(yī)湯琢成主任醫(yī)師傾畢生精力研制的外用膏劑，由木芙蓉葉、冰片、天南星、藤黃、薄荷油等中藥按一定比例經(jīng)特殊工藝制造而成，方中木芙蓉葉味辛平，歸肺、肝經(jīng)，具有涼血、解毒、消腫等功效，藤黃為藤黃科植物藤黃樹分泌的干燥樹脂，酸澀，有毒，歸脾經(jīng)，具破血散結(jié)、解毒之功，二藥共為君藥。天南星味苦辛，性溫，有毒，歸肺肝脾經(jīng)，具有散結(jié)消腫作用，獨為臣藥。冰片味辛苦，性微寒，歸心脾經(jīng)，辛涼開散具清熱解毒止痛之功，與薄荷油共為佐使。諸藥合用有清熱解毒、消腫散結(jié)、涼血止痛的功效。芙蓉膏組方精當具有科學性，前期臨床實驗證實芙蓉膏具有抗炎鎮(zhèn)痛作用[4-7]。本實驗顯示，芙蓉膏高、低劑量組可明顯減輕急性軟組織感染模型兔背部炎癥反應，芙蓉膏高劑量組可減少急性軟組織感染模型兔背部炎細胞浸潤，亦可促進其病變組織纖維組織增生及毛細血管再生。

炎癥因子TNF-α和IL-6主要來源于單核巨噬細胞，可介導炎癥反應。TNF-α可直接作用于細胞、微血管等，造成組織損傷[9]。IL-6作為炎性細胞主要調(diào)節(jié)因子，可促進淋巴細胞的分化和炎性激活，使炎癥反應進一步加強[10]。本實驗研究顯示芙蓉膏高劑量可降低模型兔血清TNF-α、IL-6表達(P<0.01)，提示芙蓉膏高劑量可減輕急性軟組織感染模型兔的炎癥反應。

TGF-β1屬于大分子復合物，廣泛存在于全身組織，具有調(diào)節(jié)細胞生長和分化的作用，炎癥刺激可激活TGF-β1，可使成纖維細胞表型發(fā)生改變，促使成纖維細胞對膠原基質(zhì)的收縮作用，可以加速創(chuàng)面的愈合[11]。本實驗結(jié)果顯示芙蓉膏高、低劑量可降低模型家兔全血WBC、NE數(shù)量，增加血清TGF-β1表達(P<0.01)；該結(jié)果表明芙蓉膏高、低劑量可促進急性軟組織感染模型兔的創(chuàng)面修復。

本研究表明，芙蓉膏可減輕急性軟組織感染模型兔背部病變組織的炎癥反應，促進創(chuàng)面修復，高劑量優(yōu)于低劑量；其機制可能與減少全血WBC及NE數(shù)量，調(diào)節(jié)促炎因子TNF-α、IL-6與多功能生長因子TGF-β1之間動態(tài)平衡有關(guān)。該實驗亦為其更廣泛應用于臨床提供實驗依據(jù)。