史亞飛，張 榮，曹可潤(rùn)，郭麗麗，董釗揚(yáng)

（1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 廣州 510006；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院 廣州 510006；3.河南中醫(yī)藥大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院 鄭州 450000；4.廣州中醫(yī)藥大學(xué)護(hù)理學(xué)院 廣州 510006）

精神情志異常類(lèi)疾病給現(xiàn)代社會(huì)帶來(lái)越來(lái)越沉重的負(fù)擔(dān)，從中醫(yī)肝主疏泄調(diào)暢情志功能入手可以對(duì)此類(lèi)疾病給予很好的防治，并揭示其內(nèi)在的發(fā)病機(jī)制。但隨著研究的不斷深入，各項(xiàng)結(jié)果均顯示其癥狀的嚴(yán)重程度、預(yù)后等，除了跟生物致病因素有關(guān)外，更與眾多社會(huì)因素密切相關(guān)[1]。生命早期應(yīng)激為肝主疏泄調(diào)暢情志功能研究及其對(duì)精神情志異常類(lèi)疾病的防治提供了更全面的視角。情志功能改變不僅是即刻應(yīng)激因素所導(dǎo)致的效應(yīng)，也與早期應(yīng)激負(fù)性因素與事件緊密相關(guān)[2]。這在現(xiàn)代社會(huì) “親子長(zhǎng)期分離、人際缺乏必要交流、長(zhǎng)期負(fù)性壓力” 不良生活方式下所致的青少年認(rèn)知障礙、社交障礙、情志異常等病證中尤為突出。更重要的是，早期應(yīng)激的前期效應(yīng)與成年后應(yīng)激誘導(dǎo)的疊加可能是情志疾病發(fā)作與反復(fù)的重要原因。將兩者結(jié)合研究更加符合其生理病理發(fā)展過(guò)程，有助于進(jìn)一步闡明發(fā)病機(jī)制。

基于 “方-證（模型）-效-功能本質(zhì)” 思路，從正常應(yīng)激下的生理變化和病證狀態(tài)下的病理改變兩條途徑入手，肝調(diào)暢情志中樞功能研究已取得較為一致的初步結(jié)果[3-5]。在此基礎(chǔ)上，本課題組立足早期應(yīng)激這一重要因素，結(jié)合中醫(yī)生命早期 “肝常有余” 生理特性開(kāi)展探索性研究[6]，助力肝調(diào)暢情志功能中樞機(jī)制研究的深入?，F(xiàn)試探討之。

1 新的研究切入點(diǎn)

1.1 聚焦多因素病因

研究重點(diǎn)關(guān)注早期應(yīng)激效應(yīng)及其與成年后應(yīng)激的相互作用。目前對(duì)情志異常病因較為一致的現(xiàn)代認(rèn)識(shí)是遺傳因素、生命早期負(fù)性應(yīng)激及成年后的環(huán)境因素的相互作用[7]。早期應(yīng)激是指在生命早期如母孕期、兒童期、青少期等受到的超出自身承受能力的生理心理創(chuàng)傷[8]。伴隨現(xiàn)代生活方式的轉(zhuǎn)變，早期應(yīng)激已成為情志發(fā)病的重要因素。主要是基于：生命早期是神經(jīng)元生長(zhǎng)及突觸形成的關(guān)鍵階段，廣泛涉及中樞神經(jīng)突觸重塑。除本身的負(fù)性作用外，早期應(yīng)激還會(huì)對(duì)大腦發(fā)育、行為、學(xué)習(xí)記憶形成過(guò)程產(chǎn)生長(zhǎng)期的影響，神經(jīng)生長(zhǎng)重塑改變，進(jìn)而誘導(dǎo)成年后的情志與認(rèn)知障礙[9,10]。從中醫(yī)病機(jī)來(lái)看，生命早期 “神” “形” 同步發(fā)展，是人體臟腑功能與心身發(fā)育的關(guān)鍵時(shí)期，易受外界侵?jǐn)_，并遷延或影響至成年。特別青少期是向成年期過(guò)渡的重要時(shí)期，生理變化大，社會(huì)接觸多，或家長(zhǎng)過(guò)度溺愛(ài)、或缺乏關(guān)愛(ài)，所欲不遂，極易發(fā)生情志改變，并影響至成年[11]。因此，生命早期不良情志改變及其對(duì)成年后的影響應(yīng)該成為肝調(diào)暢情志功能研究的重要內(nèi)容。

1.2 強(qiáng)化證候狀態(tài)模擬

生命早期 “肝常有余” 生理特性有助于情志內(nèi)傷肝病證過(guò)程構(gòu)建。從五臟功能而言，小兒多 “肺氣嬌嫩，脾常不足，腎常虛，心常用余、肝常用余” 。特別是青少期， “肝常有余” 指機(jī)體秉少陽(yáng)生發(fā)之氣，如草木初萌，生機(jī)蓬勃，發(fā)育迅速；肝氣升發(fā)則五臟俱榮，肝失升發(fā)則五臟虛衰；病理上 “小兒易怒，肝病最多” ，受外界刺激，肝喜條達(dá)之性被扼，出現(xiàn)郁怒、煩躁、抑郁等表現(xiàn)，生理上的有余轉(zhuǎn)化為病理上的亢盛。因此，肝調(diào)暢情志在青少年心身發(fā)育中發(fā)揮著重要作用[12]。從現(xiàn)代研究來(lái)看，隨著醫(yī)學(xué)模式轉(zhuǎn)變，與軀體性疾病相比，青少期心理情志異常呈大幅上升趨勢(shì)，且青少期情志異常90%以上多是多種心理行為疾病共病[13]，郁怒、煩躁、焦慮、抑郁等交雜出現(xiàn)，提示生命早期（青少期）情志內(nèi)傷病理狀態(tài)是多證候共同存在的狀態(tài)。此狀態(tài)可以更加體現(xiàn)出長(zhǎng)期情志內(nèi)傷所致的肝失疏泄病證過(guò)程中交雜存在的 “肝氣郁結(jié)” “肝火上炎” “肝陽(yáng)上亢” 等多證候狀態(tài)，體現(xiàn)慢性應(yīng)激狀態(tài)下情志內(nèi)傷肝病證的綜合改變過(guò)程，有助于基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究的開(kāi)展?；谏戆l(fā)展和病證改變多個(gè)角度，從生命早期（青少期）慢性應(yīng)激反應(yīng)入手，有助于肝失疏泄證候變化的研究和青少期情志異常證治機(jī)理的闡明。

1.3 重視病證動(dòng)態(tài)觀測(cè)

5-羥色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）系統(tǒng)可作為關(guān)鍵腦區(qū)同一通路的持續(xù)觀測(cè)靶點(diǎn)。動(dòng)態(tài)觀測(cè)變化是科學(xué)評(píng)價(jià)中醫(yī)病證的必由之路徑，也是當(dāng)前腦中樞機(jī)制研究的發(fā)展趨勢(shì)。由于生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的不穩(wěn)定變化，動(dòng)態(tài)觀測(cè)中樞調(diào)控關(guān)鍵腦區(qū)變化，同步開(kāi)展早期應(yīng)激及其與成年后誘導(dǎo)相結(jié)合的累積效應(yīng)分析成為難點(diǎn)，必須尋求一個(gè)穩(wěn)定的作用通路。5-HT系統(tǒng)或可成為這一目標(biāo)的最佳靶點(diǎn)或生物學(xué)標(biāo)記物。其一，在神經(jīng)元生長(zhǎng)及突觸形成的青少期階段，5-HT系統(tǒng)即已達(dá)到成熟且穩(wěn)定維持至成年，可以為青少期及成年后兩個(gè)時(shí)期比較性研究提供同一通路靶點(diǎn)（其他通路仍多處于變化當(dāng)中）[14,15]。其二，5-HT系統(tǒng)一直是調(diào)肝治法方藥干預(yù)情志異常疾病的較為肯定的主要通路之一，結(jié)合現(xiàn)有早期應(yīng)激相關(guān)研究提示：①5-HT系統(tǒng)在早期應(yīng)激作用下可能在青少期即已改變，并影響至成年；②青少期應(yīng)激效應(yīng)及其誘發(fā)的抑郁等主要由5-HT系統(tǒng)介導(dǎo)，調(diào)肝治法方藥（四逆散及其加味）可以有效進(jìn)行調(diào)控[16，17，18]。從青少期和成年期兩階段、多時(shí)間節(jié)點(diǎn)入手，以5-HT及其相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)通路改變?yōu)橹饕^測(cè)指標(biāo)，為動(dòng)態(tài)觀測(cè)肝調(diào)暢情志病證中樞變化提供了新思路。

2 初步的一些研究結(jié)果

綜上所述，病因上從生命早期慢性應(yīng)激因素入手，病機(jī)病理上充分結(jié)合生命早期（青少期） “肝常有余” 生理特性，以5-HT及其相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)通路改變?yōu)橹饕^測(cè)指標(biāo)，動(dòng)態(tài)觀測(cè)肝調(diào)暢情志中樞調(diào)控關(guān)鍵腦區(qū)變化，分析生命早期應(yīng)激因素及其與成年后環(huán)境應(yīng)激誘導(dǎo)相結(jié)合的協(xié)同與累積效應(yīng)，應(yīng)成為肝調(diào)暢情志功能中樞機(jī)制研究的新領(lǐng)域。開(kāi)展相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究有助于該論點(diǎn)論據(jù)的證實(shí)。

2.1 假說(shuō)的提出

生命早期應(yīng)激是導(dǎo)致肝調(diào)暢情志功能變化的重要病因，情志內(nèi)傷肝失疏泄病證過(guò)程又在生命早期應(yīng)激狀態(tài)下得到更好地體現(xiàn)?；趦烧叩木o密關(guān)聯(lián)性，病證結(jié)合開(kāi)展生命早期應(yīng)激反應(yīng)狀態(tài)下的肝失疏泄情志失調(diào)功能機(jī)制研究是一個(gè)新的較好途徑。針對(duì)生命早期神經(jīng)元生長(zhǎng)及突觸形成特點(diǎn)，結(jié)合5-HT系統(tǒng)早成熟、早穩(wěn)定性，早期（特別是青少期）應(yīng)激狀態(tài)下5-HT系統(tǒng)改變可作為觀測(cè)肝主疏泄調(diào)暢情志功能變化的核心靶點(diǎn)與通路，其所在核團(tuán)中縫背核的功能改變、5-HT突觸可塑性改變、及5-HT的異常釋放可能是肝失疏泄及其病證（抑郁等）中樞改變的重要病理生理基礎(chǔ)。中縫背核突觸前膜5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體（5-hydroxytryptamine transporter，5-HTT）重?cái)z取、5-HT1AR的負(fù)反饋及鈣敏感受體（Calcium-sensing receptor，CaSR）等介導(dǎo)的信號(hào)通路，可作為核心觀測(cè)指標(biāo)和調(diào)肝治法方藥作用機(jī)制研究的關(guān)鍵靶點(diǎn)。同時(shí)，為觀測(cè)生命早期應(yīng)激因素與成年后應(yīng)激的協(xié)同與累積效應(yīng)，動(dòng)態(tài)檢測(cè)應(yīng)激狀態(tài)下不同時(shí)段的5-HT系統(tǒng)變化，亦是必須開(kāi)展的重要研究工作。

動(dòng)物模型復(fù)制上，采用母嬰（子）分離模型（Maternal separation，MS）和慢性不可預(yù)知（計(jì)）性心理應(yīng)激模型（Chronic unpredictable mild stress，CUMS）模擬生命早期應(yīng)激負(fù)性事件對(duì)青少期及成年后情志異常發(fā)病的影響。CUMS是主要模擬慢性抑郁狀態(tài)的經(jīng)典模型，通過(guò)傾斜籠具、潮濕墊料、合籠、熱水游泳等溫和刺激因子造模。母嬰（子）分離模型是探討早期負(fù)性應(yīng)激事件相關(guān)的子代及其成年后精神障礙與心身疾病發(fā)病機(jī)制的經(jīng)典模型，通過(guò)剝奪模擬新生子代動(dòng)物的早期生活環(huán)境來(lái)觀察其行為及神經(jīng)發(fā)生發(fā)育改變[19]。

2.2 初步的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)

2.2.1 模型復(fù)制與評(píng)價(jià)

青少年期在人類(lèi)生命周期中為13歲-18歲，對(duì)于大鼠來(lái)講大致為出生后28天-60天[20]。單純采用CUMS制作青少期（32天-60天）應(yīng)激動(dòng)物模型，結(jié)果表明60天青少期大鼠應(yīng)激造模后體重增長(zhǎng)緩慢，糖水偏愛(ài)指數(shù)顯著降低，促腎上腺皮質(zhì)激素（Adrenocortico-tropic-hormone，ACTH）和皮質(zhì)酮（Corticosterone，CORT）含量顯著升高，對(duì)照CUMS行為學(xué)及激素水平等指標(biāo)的基本變化，提示青少年期應(yīng)激模型制備成功。曠場(chǎng)測(cè)試是檢測(cè)大鼠抑郁焦慮行為的經(jīng)典指標(biāo)之一。結(jié)果顯示模型大鼠中央?yún)^(qū)活動(dòng)時(shí)間有所延長(zhǎng)，提示應(yīng)激后模型大鼠對(duì)新環(huán)境的認(rèn)知能力相對(duì)較差[18]。

本課題組對(duì)首次運(yùn)用的母嬰分離應(yīng)激模型大鼠行為學(xué)等進(jìn)行了系統(tǒng)觀察。實(shí)驗(yàn)采用1日齡SD大鼠，隨機(jī)設(shè)置母嬰分離（MS）組和空白組，雌雄各半。分別于56天、58天、60天、67天、74天進(jìn)行曠場(chǎng)、糖水偏愛(ài)、高架Zero迷宮、強(qiáng)迫游泳等行為學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。結(jié)果顯示，經(jīng)歷哺乳期（1天-21天）MS應(yīng)激雄性大鼠22天-52天的體重增長(zhǎng)量顯著低于正常飼養(yǎng)的大鼠，雌性組有增長(zhǎng)變緩趨勢(shì)但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在行為學(xué)的評(píng)估中，研究采取較為經(jīng)典的快感缺失和行為絕望評(píng)價(jià)指標(biāo)。結(jié)果顯示，雌雄模型大鼠的糖水偏愛(ài)度均顯著降低。強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中，雄性MS大鼠的漂浮不動(dòng)時(shí)間高于正常大鼠。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在雌性大鼠中不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而雄性MS大鼠的活躍度顯著低于正常大鼠。高架Zero迷宮檢測(cè)中，雄性模型大鼠進(jìn)入開(kāi)臂的次數(shù)百分比明顯低于空白組，雌性模型大鼠百分比均明顯低于空白組。各項(xiàng)數(shù)據(jù)顯示：經(jīng)歷21天母嬰分離應(yīng)激的雌雄大鼠，在青少期均出現(xiàn)了抑郁樣行為，并伴隨一定程度的焦慮樣行為[21]。

在早期應(yīng)激及其與成年后應(yīng)激誘導(dǎo)相互作用的復(fù)合模型實(shí)驗(yàn)中采取了多種方式。一是兒童期青少期內(nèi)復(fù)合應(yīng)激，如在兒童期（1天-21天）母子分離后再進(jìn)行青少期（24天-51天）CUMS造模，觀察51天青少期應(yīng)激大鼠狀態(tài)[22]；二是青少期與成年期應(yīng)激的聯(lián)合采用，如在青少期（21天-44天）與成年期（57天-78天）分段運(yùn)用CUMS制備方式，并選擇44天、56天、78天三個(gè)時(shí)間點(diǎn)作為青少年期、成年期、成年后三個(gè)年齡階段的觀察點(diǎn)[23]；或在兒童期（1天-21天）母子分離后再進(jìn)行成年期（60天-100天）CUMS造模，觀察100天成年期應(yīng)激大鼠狀態(tài)，來(lái)模擬不同情況下的青少期和成年期復(fù)合應(yīng)激抑郁大鼠狀態(tài)[24]。以上模型在體重增長(zhǎng)、糖水偏愛(ài)指數(shù)、行為學(xué)等方面亦顯示出相似結(jié)果。

2.2.2 調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)（Hypothalamuspituitary-adrenal，HPA）軸

HPA軸改變是慢性心理應(yīng)激反應(yīng)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的基本改變。60天時(shí)青少期應(yīng)激模型大鼠血漿ACTH和CORT含量均明顯上升，表明慢性應(yīng)激狀態(tài)下的青少期大鼠HPA軸處于亢進(jìn)狀態(tài)；經(jīng)過(guò)治療后的模型大鼠血漿ACTH和血清CORT含量均明顯下降，提示調(diào)肝經(jīng)典方藥（四逆散及其加味）可以顯著改善模型大鼠的應(yīng)激狀態(tài)[18]。在母子分離（1天-21天）和CUMS（24天-51天）青少期復(fù)合應(yīng)激抑郁大鼠模型中，顯示出相似結(jié)果[22]。

2.2.3 對(duì)中樞單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的影響

海馬和前額葉皮質(zhì)是調(diào)節(jié)情緒的重要腦區(qū)。研究顯示，56天應(yīng)激大鼠海馬及前額葉皮質(zhì)中單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素（Norepinephrine，NE）、多巴胺（Dopamine，DA）、5-HT含量均顯著下降，提示CUMS青少期應(yīng)激大鼠抑郁樣行為與相關(guān)腦區(qū)的單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)降低有關(guān)[16]。在母嬰分離（21天-28天）和CUMS（29天-56天）復(fù)合應(yīng)激模型中，大鼠腦中樞海馬及前額葉皮質(zhì)部位5-HT及5-羥吲哚乙酸含量均較母嬰分離模型大鼠進(jìn)一步降低，雌性大鼠和雄性大鼠之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示經(jīng)母嬰分離后，再次受到青少期慢性二次應(yīng)激會(huì)加重中樞海馬及前額葉部位的神經(jīng)元功能損傷，從而加重抑郁樣行為；未發(fā)現(xiàn)性別之間有差異。加味四逆散組大鼠可提高大鼠海馬和前額葉皮質(zhì)中單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的表達(dá)[25]。

2.2.4 對(duì)中樞5-HT通路的影響及不同階段的動(dòng)態(tài)觀察

采取CUMS模型，青少期（21天-44天）與成年期（57天-78天）造模及給藥，選擇44天、56天、78天3個(gè)時(shí)間點(diǎn)作為青少年期、成年期、成年后三個(gè)年齡階段的動(dòng)態(tài)觀察點(diǎn)。結(jié)果顯示：青少期模型大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞排列松散，鏡下較多神經(jīng)元萎縮；成年期與成年后組鏡下則可見(jiàn)較多神經(jīng)元萎縮，局部區(qū)域神經(jīng)元缺失且小膠質(zhì)細(xì)胞增生，提示CUMS應(yīng)激可引起中樞海馬的結(jié)構(gòu)及功能呈進(jìn)行性損傷。與同階段模型組相比，加味四逆散治療組神經(jīng)元萎縮與深染減少，提示調(diào)肝方藥有一定干預(yù)作用[23]。

5-HTT、5-HT1A受 體（Serotonin 1A receptor，5-HT1AR）是反映5-HT能神經(jīng)元功能活動(dòng)的重要指標(biāo)。結(jié)果表明，按照生命成長(zhǎng)時(shí)間順序，青少年期、成年期、成年后各組空白組大鼠中樞海馬CA1區(qū)5-HTT平均光密度值呈上升趨勢(shì)，而造模后成年期、成年后顯著降低；與模型組對(duì)比，加味四逆散組結(jié)果有升高趨勢(shì)。各組大鼠海馬CA1區(qū)5-HT1AR平均光密度值組內(nèi)比較，青少期與成年后組模型組有顯著降低；加味四逆散組有上升趨勢(shì)。提示，CUMS導(dǎo)致青少期大鼠產(chǎn)生抑郁樣行為，在成年后階段繼續(xù)施加負(fù)性不可預(yù)計(jì)性刺激會(huì)將會(huì)進(jìn)一步加重抑郁狀態(tài)，海馬內(nèi)5-HTT、5-HT1AR改變可能是重要通路。復(fù)合模型中于幼年期組（28天）、青少期組（42天）、成年期組（56天）取材，免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)原位5-HT1AR表達(dá)，檢測(cè)各組大鼠中樞海馬的5-HT1AR、環(huán)磷腺苷效應(yīng)元件結(jié)合蛋白（Cyclic adenosine effector element-binding protein，CREB）、磷酸化cAMP依賴蛋白激酶（Phosphorylated protein kinase A，p-PKA）底物蛋白和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（Brain-derived neurotrophic factor，BDNF）蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示早期經(jīng)歷母嬰分離應(yīng)激的大鼠海馬內(nèi)5-HT1AR/CREB/BDNF信號(hào)通路蛋白分別在幼年期、青少期和成年期表現(xiàn)出不同程度的下調(diào)[26]。

2.2.5 四逆散及其加味的干預(yù)作用

以方測(cè)證，回歸經(jīng)典，采用臨床上用于情志疾病治療的常用基礎(chǔ)方——四逆散（柴胡、芍藥、枳實(shí)、甘草）以及加味方。其中，柴胡疏肝解郁，順應(yīng)肝升發(fā)條達(dá)之性；枳實(shí)助柴胡疏肝行氣理脾；白芍清熱滋陰養(yǎng)血柔肝，兼防肝郁化火；甘草，調(diào)和諸藥。整個(gè)方劑組成根據(jù)青少期應(yīng)激反應(yīng)過(guò)程的實(shí)際病理變化， “解郁” 為主，疏肝、柔肝、平肝及清肝有機(jī)并用。在上述系列實(shí)驗(yàn)中，以四逆散及其加味為代表方劑的調(diào)肝治法方藥可以有效干預(yù)MS、CUMS及其復(fù)合應(yīng)激大鼠模型的抑郁樣行為與癥狀。作用通路與上調(diào)5-HT1AR/CREB/BDNF信號(hào)等多個(gè)通路有關(guān)。而且對(duì)復(fù)方辨證治療抑郁癥的高頻中藥數(shù)據(jù)研究表明，柴胡、白芍、甘草均是治療抑郁癥的高頻藥物[27]。

2.3 一些初步的結(jié)論

2.3.1 成功模擬生命早期應(yīng)激及復(fù)合應(yīng)激下的肝失疏泄情志內(nèi)傷狀態(tài)

生命早期應(yīng)激是導(dǎo)致青少期情志異常的重要因素，并對(duì)成年后情志異常的發(fā)生與反復(fù)產(chǎn)生重要影響。早期應(yīng)激狀態(tài)下情志內(nèi)傷肝失疏泄病證得到更好體現(xiàn)。 “四逆散-生命早期應(yīng)激（母子分離）模型-5-HT能系統(tǒng)-中縫背核腦區(qū)-肝調(diào)暢情志功能” 這一方-證（模型）-效-功能本質(zhì)研究思路得到確立。

2.3.2 初步闡明早期應(yīng)激狀態(tài)下情志內(nèi)傷肝失疏泄病證改變，豐富并完善四逆散抗抑郁藥效研究。

早期應(yīng)激下肝調(diào)暢情志功能中樞改變與各部位（中縫背核、海馬和前額葉皮質(zhì)）單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)相關(guān)，尤以5-HT、5-HT1AR含量改變密切。不同劑量四逆散及其加味對(duì)模型大鼠產(chǎn)生作用，顯示調(diào)肝方藥可以顯著改善生命早期（青少期）應(yīng)激大鼠的抑郁樣表現(xiàn)，可能通過(guò)上調(diào)海馬5-HT1AR-CREB-BDNF信號(hào)通路發(fā)揮抗抑郁作用，并與中縫背核5-HT1AR、5-HTT、CaSR、BDNF等蛋白表達(dá)有關(guān)。

3 未來(lái)研究的思考

3.1 病因與病理階段的拓展

生命早期包括母孕期、兒童期、青少期等各階段，事實(shí)上各階段之間存在著密切的聯(lián)系與影響。近年來(lái)許多中醫(yī)藥學(xué)者開(kāi)展的研究均涉及到以上各個(gè)階段[28，29，30]。特別是魏盛等提出 “七情伏邪學(xué)說(shuō)” 是在理論上對(duì)青少期負(fù)性事件對(duì)后期情志異常發(fā)病機(jī)制影響的一個(gè)創(chuàng)新[30]。結(jié)果證實(shí)，母孕期刺激后，父代與子代之間的影響，子代中兒童期、青少期以及對(duì)成年期之間的影響，都是非常有價(jià)值的研究命題。應(yīng)當(dāng)繼續(xù)研究下去。

3.2 進(jìn)一步推進(jìn)青少期與成年期抑郁之間的比較性研究

兩者在神經(jīng)內(nèi)分泌免疫系統(tǒng)改變和藥物干預(yù)效果等方面既存在不同，但也有重要的聯(lián)系與協(xié)同作用。生命早期應(yīng)激病因方式可成為不同年齡階段之間的重要研究通道。必須關(guān)注生命早期應(yīng)激因素在精神障礙類(lèi)或情志異常疾病機(jī)制研究中的重要作用，并運(yùn)用其作為動(dòng)態(tài)觀察肝失疏泄情志失調(diào)病證變化的載體。中縫背核5-HT能系統(tǒng)可成為兩者比較性研究的效能觀測(cè)指標(biāo)。

3.3 嘗試推動(dòng)肝失疏泄情志失調(diào)病證變化的動(dòng)態(tài)觀測(cè)

整體審察、病證結(jié)合、辯證論治是中醫(yī)診治的核心內(nèi)容，因此開(kāi)展證候研究必然要進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀測(cè)變化。肝失疏泄情志失調(diào)病因病機(jī)具有明顯的持續(xù)性與累積性，結(jié)合心理變化過(guò)程，必然使肝失疏泄病證是一個(gè)長(zhǎng)期形成、動(dòng)態(tài)變化與的過(guò)程。在前期大量的成年期情失內(nèi)傷肝失疏泄病證變化研究結(jié)果上，將生命早期包括母孕期、兒童期、青少期等各階段納入，開(kāi)展全過(guò)程研究，將使肝調(diào)暢情志功能與病證規(guī)律研究邁上新臺(tái)階。結(jié)合當(dāng)前腦核團(tuán)功能神經(jīng)影像學(xué)研究的不斷深入，肝調(diào)暢情志功能中樞改變亦會(huì)越來(lái)越明晰[31]。