韓勝明,任志明,邱雪妮,楊 華,母昌考,2*,王春琳,2

暫存和運(yùn)輸方式對(duì)野生三疣梭子蟹暫養(yǎng)的影響

韓勝明1,任志明1,邱雪妮1,楊 華1,母昌考1,2*,王春琳1,2

（1.寧波大學(xué) 海洋學(xué)院, 浙江 寧波 315832; 2.浙江海洋高效健康養(yǎng)殖協(xié)同創(chuàng)新中心, 浙江 寧波 315832）

三疣梭子蟹是我國(guó)重要的海產(chǎn)經(jīng)濟(jì)蟹類(lèi), 野生梭子蟹的暫養(yǎng)是一種高效利用梭子蟹自然資源的經(jīng)濟(jì)手段. 為探究適合野生三疣梭子蟹暫養(yǎng)的方法, 研究了野生三疣梭子蟹捕撈后不綁螯堆積式暫存(M1)、綁螯單個(gè)體式暫存(M2)兩種暫存方式以及橡皮筋綁螯堆疊盛放于塑料筐中運(yùn)輸(T1)、不綁螯單個(gè)盛放于單體盒中運(yùn)輸(T2)兩種運(yùn)輸方式分別對(duì)其暫養(yǎng)存活的影響, 并以超氧化物歧化酶(SOD)、總抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、血糖、皮質(zhì)醇、熱休克蛋白(HSP70)幾種生理指標(biāo)了解其生理響應(yīng)特征. 結(jié)果顯示: (1)不同暫存方式對(duì)野生三疣梭子蟹暫養(yǎng)的影響中, M2方式暫存的蟹暫養(yǎng)累積存活率為91.4%, 顯著高于M1 (<0.05), M1組蟹累積存活率為70.0%; 根據(jù)對(duì)M1、M2組蟹血淋巴中幾種生理指標(biāo)的檢測(cè), 引起兩組蟹存活率差異的原因可能是M1暫存方式對(duì)蟹造成不可逆的損傷脅迫, 抗氧化及應(yīng)激能力顯著降低, 生理機(jī)能和免疫防御能力受損. (2)不同運(yùn)輸方式對(duì)野生三疣梭子蟹暫養(yǎng)的影響中, T2方式運(yùn)輸?shù)男窌吼B(yǎng)累積存活率為41.5%, 略高于T1 (>0.05), T1組蟹累積存活率為30.8%; 根據(jù)對(duì)T1、T2組的蟹血淋巴中幾種生理指標(biāo)的檢測(cè), 引起兩組蟹存活率差異的原因可能是以T1方式運(yùn)輸?shù)男肥艿綌D壓脅迫, 抗氧化及應(yīng)激能力略低于T2. 綜上分析, 以綁螯單個(gè)體式的暫存方式和不綁螯單個(gè)盛放于單體盒中的運(yùn)輸方式獲取的野生三疣梭子蟹更適合暫養(yǎng).

野生三疣梭子蟹; 暫存方式; 運(yùn)輸方式; 暫養(yǎng); 存活

三疣梭子蟹(), 隸屬于節(jié)肢動(dòng)門(mén)(Arthropoda)、甲殼綱(Crustacea)、十足目(Decapoda)、梭子蟹科(Portunidae)、梭子蟹屬(), 因頭胸甲呈梭形, 而胃、心區(qū)背面又有三個(gè)顯著的疣突而得名, 是我國(guó)重要的海產(chǎn)經(jīng)濟(jì)蟹類(lèi), 也是我國(guó)沿海重要的捕撈對(duì)象[1-2]. 野生三疣梭子蟹暫養(yǎng), 常發(fā)生在梭子蟹集中上市的季節(jié), 暫養(yǎng)可錯(cuò)開(kāi)上市旺季(9~11月), 也可育肥, 以實(shí)現(xiàn)品質(zhì)提升, 均衡市場(chǎng)供應(yīng), 滿(mǎn)足人們?cè)诓煌竟?jié)對(duì)梭子蟹的需求[3-5]. 因此, 暫養(yǎng)是一種高效利用梭子蟹自然資源的經(jīng)濟(jì)手段[6].

當(dāng)前用于暫養(yǎng)的三疣梭子蟹大部分來(lái)源于自然捕撈, 存在的主要問(wèn)題是存活率低[7], 其暫養(yǎng)存活率與蟹的來(lái)源海區(qū)、捕撈方式、蟹起捕之后的暫存方式、運(yùn)輸方式以及暫養(yǎng)過(guò)程中的病害問(wèn)題等諸多因素相關(guān)[8]. 目前已有對(duì)暫養(yǎng)過(guò)程中的病害及預(yù)防的相關(guān)研究[9-11], 而尚未見(jiàn)野生三疣梭子蟹捕撈后的暫存和運(yùn)輸?shù)茸鳂I(yè)方式對(duì)暫養(yǎng)影響的相關(guān)報(bào)道. 野生三疣梭子蟹起捕后, 在儲(chǔ)入活水船艙前需進(jìn)行一個(gè)暫存的中間環(huán)節(jié). 此中間環(huán)節(jié)是影響野生三疣梭子蟹質(zhì)量的重要環(huán)節(jié), 也對(duì)野生蟹后期的暫養(yǎng)起到關(guān)鍵作用. 在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中, 暫存方式的不同會(huì)對(duì)蟹造成不同程度的損傷. 傳統(tǒng)作業(yè)方式是將蟹不綁螯堆疊盛放暫存, 很容易造成蟹的堆疊、打架傷殘, 嚴(yán)重影響梭子蟹質(zhì)量. 同樣, 野生三疣梭子蟹在暫養(yǎng)前需經(jīng)歷長(zhǎng)時(shí)間的運(yùn)輸, 作為野生蟹捕獲的重要活動(dòng)環(huán)節(jié)之一, 在生產(chǎn)中常采用橡皮筋綁螯、堆疊式盛放的方式易造成擠壓等環(huán)境脅迫, 此間多脅迫因子協(xié)同作用, 可能會(huì)打破蟹體內(nèi)的生理穩(wěn)態(tài), 導(dǎo)致其體質(zhì)下降.

鑒于此, 本實(shí)驗(yàn)研究了野生三疣梭子蟹捕撈后兩種暫存和運(yùn)輸方式分別對(duì)其暫養(yǎng)存活的影響, 并以血淋巴中超氧化物歧化酶(SOD)、總抗氧化能力(T- AOC)、丙二醛(MDA)、血糖、皮質(zhì)醇和熱休克蛋白(HSP70)等生理指標(biāo)的變化探究其生理響應(yīng)特征, 以期獲得在暫存和運(yùn)輸過(guò)程中對(duì)蟹更優(yōu)的處置方式來(lái)提高暫養(yǎng)存活率.

1 材料與方法

1.1 蟹的來(lái)源及操作

本實(shí)驗(yàn)于浙江省舟山市嵊泗縣藍(lán)海洋生態(tài)發(fā)展有限公司試驗(yàn)場(chǎng)進(jìn)行, 野生三疣梭子蟹均捕自嵊山漁場(chǎng)附近海域, 采用拖網(wǎng)捕撈, 本實(shí)驗(yàn)跟隨捕撈船進(jìn)行.

野生蟹起捕后暫存方式設(shè)置為兩種, 一種為不綁螯堆積式暫存, 記為M1, 此方法將蟹不綁螯足堆積盛放在聚乙烯材料的塑料托盤(pán)中(60cm× 40cm×10cm); 另一種為綁螯單個(gè)體式暫存, 記為M2, 此方法將蟹綁螯足單個(gè)平鋪盛放在同樣托盤(pán)中, 不發(fā)生堆積. 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)如下: 野生蟹起捕后, 挑選附肢完整、活力好、規(guī)格相近(平均體質(zhì)量(174.3±28.4)g)的三疣梭子蟹, 隨機(jī)均分為兩組, 每組各41只, 分別以上述M1、M2兩種方式暫存, 兩種方式暫存時(shí)間均為10min. 暫存結(jié)束后立即取樣, 每組隨機(jī)取樣6只, 同時(shí)剔除各組暫存過(guò)程中損傷的蟹: M1組余30只, M2組35只. 隨后儲(chǔ)入活水船艙運(yùn)輸至試驗(yàn)場(chǎng), 其他條件均保持一致. 至試驗(yàn)場(chǎng)后, 消毒處理, 暫養(yǎng)于多層立體養(yǎng)殖系統(tǒng)(34.0cm×22.5 cm×14.5cm)中. 實(shí)驗(yàn)期間自然光照, 不投喂餌料, 水溫13~16℃, pH值7.0左右, 溶解氧質(zhì)量濃度大于0.7mg·L-1, 氨氮質(zhì)量濃度小于0.5mg·L-1, 亞硝酸鹽質(zhì)量濃度小于0.1mg·L-1, 每隔3~5d清洗排換新鮮海水一次, 暫養(yǎng)周期為30d.

相同來(lái)源的野生三疣梭子蟹, 挑選附肢完整、活力好、規(guī)格相近(平均體質(zhì)量(207.0±30.5)g)的進(jìn)行運(yùn)輸實(shí)驗(yàn). 運(yùn)輸方式設(shè)置為兩種, 一種是以常規(guī)的圓柱形(半徑25cm, 高20cm)聚乙烯塑料筐為運(yùn)輸工具, 橡皮筋綁螯堆疊盛放于塑料筐中運(yùn)輸, 記為T(mén)1; 另一種以聚乙烯材料的長(zhǎng)方體(22cm× 15cm×5cm)單體盒為運(yùn)輸工具, 不綁螯單個(gè)盛放于單體盒中運(yùn)輸, 記為T(mén)2. 每組蟹51只, T1組野生蟹逐只橡皮筋綁螯堆疊(5層)盛放在塑料筐中, T2組蟹不綁螯單個(gè)盛放在單體盒中, 以橡皮筋固定好. 兩組蟹均存放在捕撈船活水艙內(nèi), 其他條件亦保持一致, 運(yùn)輸?shù)皆囼?yàn)場(chǎng), 運(yùn)輸時(shí)長(zhǎng)2h. 至試驗(yàn)場(chǎng)后立即取樣, 每組隨機(jī)取樣6只, 同時(shí)剔除每組損傷的蟹: T1組余39只, T2組41只. 消毒處理后進(jìn)行暫養(yǎng), 方法同上, 周期為30d.

1.2 生存分析

生存曲線又稱(chēng)Kaplan-Meier曲線, 是一種將事件結(jié)果(終點(diǎn)事件)和出現(xiàn)這一結(jié)果所經(jīng)歷時(shí)間相結(jié)合分析的統(tǒng)計(jì)分析方法, 可以考慮到整個(gè)事件周期, 在某些任意觀測(cè)點(diǎn)進(jìn)行比較, 更好地描述終點(diǎn)事件的發(fā)生規(guī)律[12]. 目前對(duì)生存分析的假設(shè)檢驗(yàn)一般采用log rank檢驗(yàn), 它是檢驗(yàn)樣本組之間差異顯著性的方法, 檢驗(yàn)可以是兩組比較也可以是多組比較[13]. Kaplan-Meier法Log rank (Mantel-cox)檢驗(yàn)結(jié)果會(huì)提供中位生存時(shí)間、平均生存時(shí)間以及相應(yīng)的置信區(qū)間, 如果是三組及以上比較可以不顯示中位生存時(shí)間. 生存分析在醫(yī)學(xué)科學(xué)領(lǐng)域已有廣泛應(yīng)用, 例如在臨床醫(yī)學(xué)上用于分析病人預(yù)后治療情況[14-16].

依據(jù)口張開(kāi)、觸碰四肢無(wú)反應(yīng)為梭子蟹死亡標(biāo)志來(lái)判斷其是否存活. 觀察并記錄結(jié)果, 計(jì)算存活率, 公式如下: 累積存活率=終末梭子蟹數(shù)量/初始梭子蟹數(shù)量×100%.

1.3 抗氧化和應(yīng)激指標(biāo)的測(cè)定

用吸水紙吸干蟹體表面水分, 根據(jù)吳丹華等[17]的方法, 以1mL一次性注射器自游泳足基部抽取各組三疣梭子蟹的血淋巴, 轉(zhuǎn)移到1.5mL離心管中, 4℃凝固過(guò)夜后搗碎, 3000r·mim-14℃離心10min, 取上清, 每200μL分裝于凍存管, 迅速放入-80℃液氮罐, 然后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱保存待測(cè).

SOD、T-AOC、MDA的測(cè)定均采用購(gòu)自南京建成生物工程研究所(南京)生產(chǎn)的試劑盒. 其中, SOD活力采用WST法測(cè)定, 在反應(yīng)體系中, SOD抑制率達(dá)50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的酶量定義為一個(gè)SOD活力單位(U·mL-1) ; T-AOC采用ABTS法測(cè)定, 單位為mmol·L-1; MDA采用硫代巴比妥(TBA)法測(cè)定, 單位為nmol·mL-1, 具體測(cè)定方法按試劑盒的說(shuō)明進(jìn)行.

血糖、皮質(zhì)醇、HSP70的測(cè)定: 血糖采用購(gòu)自南京建成生物工程研究所(南京)生產(chǎn)的試劑盒, 單位均為mmol·L-1; 皮質(zhì)醇、HSP70均采用購(gòu)自上海橋杜生物科技有限公司(上海)的定量檢測(cè)試劑盒(ELISA), 皮質(zhì)醇單位為ng·mL-1, HSP70單位為pg·mL-1. 具體測(cè)定方法按試劑盒的說(shuō)明進(jìn)行.

1.4 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示, 采用SPSS 24.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析. 以Kaplan-Meier乘積極限法和Log rank總體檢驗(yàn)進(jìn)行生存數(shù)據(jù)分析, 兩組間各指標(biāo)比較采用獨(dú)立樣本檢驗(yàn), 取<0.05為差異顯著,<0.01為差異極顯著. 采用Sigmaplot 12.5和GraphPad Prism 5軟件繪圖.

2 結(jié)果

2.1 暫存和運(yùn)輸方式對(duì)野生三疣梭子蟹暫養(yǎng)存活的影響

圖1為兩種暫存方式的野生三疣梭子蟹暫養(yǎng)生存曲線. 由圖1可知, 隨著暫養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng), 第5天開(kāi)始兩組的梭子蟹出現(xiàn)死亡, M1組存活率為93.3%, M2組存活率高達(dá)97.1%, 在隨后的暫養(yǎng)過(guò)程, M1組的蟹死亡率在任何一個(gè)時(shí)間點(diǎn)均明顯高于M2組; 5~25d內(nèi), M2組的蟹未發(fā)生死亡, 而M1組在5~15d出現(xiàn)短暫的穩(wěn)定期后死亡增加; 在暫養(yǎng)的30d內(nèi), M1組的蟹累積存活率為70.0%, M2組累積存活率為91.4%. 由圖1與表1分析可知, M2組累積存活率、平均生存時(shí)間大于M1組, Log rank檢驗(yàn)提示M2組的蟹暫養(yǎng)累積存活率顯著高于M1組(<0.05)(表1).

圖1 兩種暫存方式的野生三疣梭子蟹暫養(yǎng)生存曲線

表1 不同處理方式的野生三疣梭子蟹暫養(yǎng)生存差異分析

圖2為兩種運(yùn)輸方式的野生三疣梭子蟹暫養(yǎng)生存曲線. 由圖可知, 暫養(yǎng)3d, 兩組均出現(xiàn)死亡, 且生存曲線幾乎吻合, 說(shuō)明兩組存活率相差不大; 此后至?xí)吼B(yǎng)30d, 兩條曲線間距由大變小, 說(shuō)明存活率差別逐漸趨緩, T1組累積存活率為30.8%, T2組為41.5%. 由圖2與表1可知, T2組累積存活率、平均生存時(shí)間大于T1組, Log rank檢驗(yàn)結(jié)果表明兩組野生蟹暫養(yǎng)累積存活率無(wú)顯著差異(>0.05).

圖2 兩種運(yùn)輸方式的野生三疣梭子蟹暫養(yǎng)生存曲線

2.2 暫存和運(yùn)輸方式對(duì)SOD、T-AOC、MDA的影響

兩種暫存方式對(duì)野生三疣梭子蟹血淋巴中SOD、T-AOC、MDA的影響如圖3所示. 由圖可知, M1組梭子蟹血淋巴中SOD活力(85.93±3.90) U·mL-1顯著高于M2 (62.33±1.66)U·mL-1(<0.01) (圖3(a)); M1組T-AOC水平(2.46±0.23)mmol·L-1顯著高于M2 (2.10±0.10)mmol·L-1(<0.05)(圖3(b)); M1組MDA濃度(2.84±0.38)nmol·mL-1顯著高于M2 (1.83±0.16)nmol·mL-1(<0.01)(圖3(c)).

兩種運(yùn)輸方式對(duì)野生三疣梭子蟹血淋巴中SOD、T-AOC、MDA的影響如圖4所示. 由圖知, T1組梭子蟹血淋巴中SOD活力(95.93±12.37) U·mL-1顯著高于T2 (66.67±2.68)U·mL-1(<0.05) (圖4(a)); T1組T-AOC水平略低, 與T2組無(wú)顯著差異(> 0.05) (圖4(b)); T1組MDA濃度(3.29±0.08)nmol·L-1顯著高于T2 (2.78±0.28)nmol·L-1(<0.05) (圖4(c)).

注: *表示組間差異顯著(P<0.05); **表示差異極顯著(P<0.01). 下圖同.

圖4 運(yùn)輸方式對(duì)血淋巴中SOD、T-AOC、MDA的影響

2.3 暫存和運(yùn)輸方式對(duì)血糖、皮質(zhì)醇、HSP70的影響

兩種暫存方式對(duì)野生三疣梭子蟹血淋巴中血糖、皮質(zhì)醇和HSP70的影響如圖5所示. 由圖可見(jiàn), M1組梭子蟹的血糖濃度(5.62±0.35)mmol·L-1顯著高于M2組(4.90±0.37)mmol·L-1(<0.05) (圖5(a)); M1組皮質(zhì)醇質(zhì)量濃度(1.41±0.03)ng·mL-1顯著高于M2組(1.31±0.04)ng·mL-1(<0.05) (圖5(b)); M1組HSP70表達(dá)量(4.31±0.10)pg·mL-1顯著低于M2組(4.78±0.25)pg·mL-1(<0.01) (圖5(c));

圖5 暫存對(duì)血淋巴中血糖、皮質(zhì)醇和HSP70的影響

兩種運(yùn)輸方式對(duì)野生三疣梭子蟹血淋巴中血糖、皮質(zhì)醇和HSP70的影響如圖6所示. 由圖可見(jiàn), T1組血糖濃度略高于T2組, 差異不顯著(>0.05) (圖6(a)); 相比T2組, T1組皮質(zhì)醇質(zhì)量濃度略高, 兩組無(wú)顯著差異(>0.05) (圖6(b)); T1組HSP70表達(dá)量高于T2組, 無(wú)顯著差異(>0.05) (圖6(c)).

圖6 運(yùn)輸方式對(duì)血淋巴中血糖、皮質(zhì)醇和HSP70的影響

3 討論

野生三疣梭子蟹在自然捕獲至?xí)吼B(yǎng)場(chǎng)地暫養(yǎng)的眾多環(huán)節(jié)中易受各種環(huán)境因子脅迫和人為損傷, 嚴(yán)重影響其暫養(yǎng)存活率. 本實(shí)驗(yàn)從暫養(yǎng)蟹海捕后的實(shí)際作業(yè)方式出發(fā), 研究了不同暫存和運(yùn)輸方式對(duì)野生蟹暫養(yǎng)存活的影響, 并以血淋巴中生理指標(biāo)的變化了解幾種方式下蟹體的生理響應(yīng)特征.

SOD是一種誘導(dǎo)性酶, 在抗氧化防御體系中能夠最先清除活性氧自由基(ROS), 維持體內(nèi)自由基動(dòng)態(tài)平衡[18-20], 適量的ROS可以激活SOD活性, 二者的含量密切相關(guān)[21]. 本研究發(fā)現(xiàn), 兩種暫存方式中, M1組的蟹SOD酶活力顯著升高, 說(shuō)明M1的暫存方式引起其蟹體自由基的增多并誘導(dǎo)SOD的產(chǎn)生. 推測(cè)這可能是因?yàn)镸1暫存方式對(duì)蟹造成氧化損傷, 導(dǎo)致機(jī)體ROS增多, 進(jìn)而觸發(fā)SOD活力顯著升高. 同樣, T1運(yùn)輸方式也可能對(duì)梭子蟹造成了氧化損傷, 從而導(dǎo)致該組SOD活性顯著高于T2組, 這一結(jié)果與蘇志星等[6]研究的擠壓脅迫對(duì)三疣梭子蟹抗氧化系統(tǒng)影響的結(jié)果具有一致性. T-AOC代表機(jī)體內(nèi)總抗氧化水平, 主要包括抗氧化酶體系和抗氧化物質(zhì)體系[22-23], 可清除活性氧自由基, 在一定程度上反映機(jī)體所處環(huán)境及非特異性免疫力的變化[24]. 本研究中, M1組蟹T-AOC水平顯著高于M2組, 可能是此暫存方式對(duì)蟹體的脅迫使其氧自由基增高, 在機(jī)體的代償應(yīng)激下, T-AOC水平升高. 結(jié)合M1方式下機(jī)體SOD酶活力變化, SOD活力和T-AOC水平變化一致, 說(shuō)明M1方式暫存的蟹主要是通過(guò)調(diào)節(jié)抗氧化酶活力來(lái)維持機(jī)體ROS的平衡. 兩種運(yùn)輸方式中, T1組蟹T-AOC水平略低于T2組, 主要的抗氧化酶系統(tǒng)成員SOD顯著升高, 推測(cè)可能蟹在長(zhǎng)時(shí)間的擠壓脅迫下體內(nèi)自由基顯著增多, SOD酶不足以有效消除ROS, 機(jī)體需要不斷消耗抗氧化物質(zhì)來(lái)減少損害, 說(shuō)明T1組蟹在擠壓脅迫過(guò)程中由抗氧化物質(zhì)體系和抗氧化酶體系共同清除ROS. T-AOC活力水平在暫存和運(yùn)輸中表現(xiàn)出變化趨勢(shì)的差異, 可能是暫存發(fā)生在短時(shí)間內(nèi), 機(jī)體主要依靠氧化酶來(lái)應(yīng)對(duì)自由基. 而長(zhǎng)途運(yùn)輸時(shí), 機(jī)體需要消耗抗氧化物質(zhì)來(lái)維持機(jī)體功能. MDA是自由基引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化作用的最終分解產(chǎn)物[25], 其含量的高低反映了細(xì)胞膜氧化損傷的程度, 也被廣泛地用作細(xì)胞氧化損傷的評(píng)價(jià)指標(biāo)之一[26-27]. 對(duì)MDA指標(biāo)分析發(fā)現(xiàn), M1、T1組蟹MDA含量均顯著升高, 說(shuō)明蟹體細(xì)胞氧化損傷加劇, 可能是外部環(huán)境因子變化劇烈, 引起機(jī)體免疫防御系統(tǒng)受損與代謝異常. 從以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出, 采用M1、T1方式的野生蟹暫養(yǎng)存活率低的原因可能是這兩種方式對(duì)蟹體造成了氧化損傷, 機(jī)體正常生理機(jī)能和免疫功能受損.

暫存和運(yùn)輸方式的不同不僅對(duì)梭子蟹產(chǎn)生氧化損傷, 而且也誘發(fā)梭子蟹的應(yīng)激反應(yīng). 糖類(lèi)是生物體受到脅迫時(shí)首要和迅速響應(yīng)的物質(zhì), 糖原被降解成單糖進(jìn)入血淋巴, 導(dǎo)致血糖濃度升高[28]. 高血糖癥是甲殼動(dòng)物的典型應(yīng)激反應(yīng), 有關(guān)甲殼動(dòng)物在應(yīng)對(duì)急性脅迫時(shí)血糖濃度的變化已有諸多報(bào)道, 如Racotta等[29-30]的研究表明重復(fù)取樣和氨氮脅迫均可導(dǎo)致南美白對(duì)蝦()血糖升高. 本研究中, M1、T1方式均導(dǎo)致蟹的血糖含量升高, 且M1暫存方式的蟹血糖含量顯著升高, 兩種運(yùn)輸方式血糖含量變化無(wú)明顯差異. 皮質(zhì)醇激素分泌量的增加, 常出現(xiàn)于捕撈、裝載、運(yùn)輸?shù)犬a(chǎn)生急性脅迫的過(guò)程中[31]. 水生生物中皮質(zhì)醇是應(yīng)激反應(yīng)的指示指標(biāo)之一[32-33]. 本研究發(fā)現(xiàn), M1組的蟹血淋巴皮質(zhì)醇含量顯著升高, 表明此暫存方式引起蟹的強(qiáng)烈應(yīng)激. T1組的蟹皮質(zhì)醇含量略高, 可能是T1運(yùn)輸方式對(duì)蟹造成擠壓脅迫引起應(yīng)激反應(yīng), 這與彭世明等[34]的研究發(fā)現(xiàn)較高的運(yùn)輸密度會(huì)引起銀鯧()血漿皮質(zhì)醇含量升高具有一定的相似性. 郭明凱等[35]的研究表明, 應(yīng)激與水產(chǎn)動(dòng)物疾病的發(fā)生和發(fā)展關(guān)系密切, 較高的皮質(zhì)醇含量會(huì)使中華絨螯蟹()抗病能力下降, 本實(shí)驗(yàn)中M1、T1組的皮質(zhì)醇含量升高, 可能導(dǎo)致蟹體抗病能力下降. 此外, 皮質(zhì)醇可促進(jìn)葡萄糖異生, 急性應(yīng)激作用下, 血糖濃度隨著皮質(zhì)醇含量的升高而升高, 本研究中M1、T1組蟹血糖含量的升高得此印證. HSP70作為生物體內(nèi)靈敏的應(yīng)激蛋白, 在細(xì)胞保護(hù)、抗凋亡以及免疫治療等方面有獨(dú)特的生物學(xué)功能, 被認(rèn)為對(duì)生物體適應(yīng)環(huán)境變化具有重要作用[36-38], 其表達(dá)量變化直接反映出環(huán)境因子對(duì)生物機(jī)體的影響[39]. 本研究中M1組的蟹HSP70表達(dá)含量顯著降低, 推測(cè)可能是M1暫存方式下蟹體所處環(huán)境因子驟變, 迅速導(dǎo)致耐受應(yīng)激能力下降和機(jī)體代謝紊亂, 使HSP70未得到正常表達(dá). 姜娜等[24]研究的干露脅迫對(duì)梭子蟹肝胰腺中HSP70表達(dá)的影響規(guī)律與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有相似性. T1方式運(yùn)輸?shù)男稨SP70表達(dá)含量略高, 結(jié)合抗氧化指標(biāo)的變化, 推測(cè)可能是此運(yùn)輸方式對(duì)蟹體造成擠壓, 機(jī)體氧化受損, HSP70為修復(fù)細(xì)胞損傷并維持細(xì)胞內(nèi)平衡而大量表達(dá). 由此得知, M1、T1方式使野生梭子蟹處于應(yīng)激狀態(tài), 對(duì)蟹造成“應(yīng)激損傷”, 使蟹體對(duì)環(huán)境因子的適應(yīng)性、抗病能力下降, 這也可能是兩種方式下野生蟹暫養(yǎng)存活率低的原因.

綜上, M1暫存方式對(duì)蟹體造成氧化損傷, 抗氧化能力顯著下降, 同時(shí)使蟹處于劇烈環(huán)境變化的強(qiáng)應(yīng)激狀態(tài), 因此嚴(yán)重影響野生蟹暫養(yǎng)存活率. 不同運(yùn)輸方式的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, T1運(yùn)輸方式的蟹受擠壓脅迫引起蟹體氧化、應(yīng)激損傷, 免疫機(jī)能降低, 但氧化、應(yīng)激指標(biāo)整體與T2無(wú)顯著差異, 因此T1組蟹存活率略低, 這可能是因?yàn)檫\(yùn)輸方式中條件緩和, 并未對(duì)蟹體造成不可逆的劇烈損傷, 加之機(jī)體本身具有適應(yīng)調(diào)節(jié)機(jī)制.

4 結(jié)語(yǔ)

本研究表明, 在野生三疣梭子蟹暫養(yǎng)過(guò)程中, 可采用綁螯單個(gè)體式的暫存方式來(lái)降低蟹體損傷, 保證蟹的質(zhì)量; 運(yùn)輸過(guò)程應(yīng)用單體盒, 將蟹不綁螯單個(gè)盛放于單體盒中運(yùn)輸是可行的. 本研究結(jié)果可為合理開(kāi)發(fā)利用野生三疣梭子蟹優(yōu)質(zhì)資源, 提高野生蟹暫養(yǎng)存活率提供參考.

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Effects of different temporary storage methods and transportation systems on temporary rearing of wild

HAN Shengming1, REN Zhiming1,QIU Xueni1,YANG Hua1, MU Changkao1,2*,WANG Chunlin1,2

( 1.School of Marine Science, Ningbo University, Ningbo 315832, China; 2.Collaborative Innovation Center for Zhejiang Marine High-efficiency and Healthy Aquaculture, Ningbo 315832, China )

is an important marine economic crab in China. The temporary rearing of wildis an economical method to efficiently use natural resources of crab. The study was aimed to explore the method suitable for the temporary rearing of wild. Two modes of the temporary storage were compared, including a group with stacked bodies and with the chela not being tied (M1) and a group with single body and with the chela being tied (M2). Two modes of transportation were also compared, including the group with rubber band tying the chela and stacked in the plastic basket (T1) and the group without rubber band tying the chela and contained in individual box (T2). The effects on their survival rate after rearing for a short period were investigated. And their physiological response characteristics were identified by using several physiological indicators including SOD, T-AOC, MDA, hemolymph glucose, cortisol, and HSP70. The results showed that: (a) In the impact of different temporary storage methods of wild crabs, the cumulative survival rate of crabs in M2 was 91.4%, significantly higher than that of M1 (<0.05), and the survival rate in M1 was 70.0%. According to the detection of the several physiological indexes in crab hemolymph of M1 and M2 groups, the reason for the difference in survival rate between the two groups of crabs may be that the M1 produced damage stress to the crab. The antioxidant and stress capabilities were significantly reduced and the physiological functions and immune defense capabilities are impaired. (b) In the effect of different transportation systems of wild crab, the cumulative survival rate of crabs in T2 was 41.5% which was slightly higher than that in T1 group (>0.05). The survival rate in T1 was 30.8%. According to the detection of the several physiological indexes in crab hemolymph of T1 and T2, the reason for the difference in the survival rate of the two groups of crabs may be that the crabs transported by T1 were subjected to crushing stress. The antioxidant and stress resistance were slightly lower than T2. In conclusion, the wildobtained by the temporary storage method of single body with the chela being tied and the transportation method of not tying the chela and contained in individual boxes is more suitable for rearing.

wild; temporary storage methods; transportation systems; temporary rearing; survival

S968.25

A

1001-5132（2021）01-0008-07

2020?02?08.

寧波大學(xué)學(xué)報(bào)（理工版）網(wǎng)址: http://journallg.nbu.edu.cn/

寧波市農(nóng)業(yè)重大項(xiàng)目（2017C110007）.

韓勝明（1994－）, 男, 山東德州人, 在讀碩士研究生, 主要研究方向: 蝦蟹類(lèi)繁育及人工養(yǎng)殖. E-mail: 2997441048@qq.com

母昌考（1976－）, 男, 云南曲靖人, 教授, 主要研究方向: 蝦蟹類(lèi)繁育及人工養(yǎng)殖. E-mail: muchangkao@nbu.edu.cn

（責(zé)任編輯 韓 超）