李鳳杰，馮志軍，黃志昂，徐娜，尚艷

（河南大學(xué)第一附屬醫(yī)院肺功能康復(fù)科，河南 開(kāi)封）

0 引言

支氣管哮喘是常見(jiàn)的氣道慢性炎性疾病，支氣管哮喘患者存在多種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子的分泌，參與氣道的重塑，慢性氣道重塑是導(dǎo)致氣道高反應(yīng)性、氣道炎癥加重的重要原因之一。本研究通過(guò)大鼠哮喘模型的建立，觀察哮喘急性發(fā)作時(shí)肺泡灌洗液中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）、IL-4、γ-干擾素（IFN-γ）水平的變化，探討哮喘發(fā)生的可能機(jī)制，更好地指導(dǎo)臨床醫(yī)師應(yīng)用糖皮質(zhì)激素治療哮喘。

1 資料與方法

1.1 對(duì)象

清潔劑雄性SD大鼠36只（由河南大學(xué)第一附屬醫(yī)院肺造血與肺部疾病實(shí)驗(yàn)室提供），5-6周齡，體重210-230g，隨機(jī)分三組，每組12只，分組如下：哮喘組（A組）、地塞米松組（B組）、對(duì)照組（C組）。

1.2 哮喘模型建立

哮喘組與地塞米松組分別在第1d、第8d、第15d腹腔內(nèi)注射100G/L 0VA 1ml（內(nèi)含卵清蛋白100g和氫氧化鋁100g）致敏，對(duì)照組用9g/L的鹽水。同時(shí)地塞米松組在激發(fā)前12h和每次激發(fā)前半小時(shí)腹腔注射地塞米松1mg/kg。哮喘大鼠激發(fā)成功的標(biāo)志：呼吸急促、易激怒、大小便失禁、行走遲緩等癥狀。

1.3 BALF的制備

末次激發(fā)24h后進(jìn)行腹腔注射麻醉，用生理鹽水進(jìn)行支氣管肺泡灌洗，回收BALF液，離心（3000r/min 4℃）10min，取上清液，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定VEGF、IL-4、IFN-γ的水平（按試劑盒說(shuō)明操作）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS21.0軟件進(jìn)行分析，所有數(shù)據(jù)均為計(jì)量資料，服從正態(tài)分析和方差齊性，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)。α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

B組與C組比較，VEGF水平升高(t=3.355,P＜0.001)，IL-4水平升高、IFN-γ水平降低(t值分別為2.744和3.173,均P＜0.001),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；A組與C組比較，VEGF水平升高(t=3.707,P＜0.001)，IL-4水平升高、IFN-γ水平降低(t值分別為2.418和2.423,均P＜0.001),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；B組與A組比較，VEGF水平下降(t=2.963,P＜0.001)，IL-4水平降低,IFN-γ水平升高(t值分別為2.638和2.405,均P＜0.001),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

支氣管哮喘的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前普遍認(rèn)為其與氣道平滑肌細(xì)胞增殖參與的氣道重塑和輔助性T細(xì)胞亞群的失衡有關(guān)。VEGF在肺上皮細(xì)胞中廣泛表達(dá)，研究顯示哮喘患者中VEGF的表達(dá)明顯升高，伴隨氣道平滑肌增生[1]，氣道平滑肌的增生是氣道重塑的重要原因。研究顯示哮喘患者體內(nèi)Th2的增多、Th1細(xì)胞的減少，細(xì)胞分泌的IL-4/IFN-γ失衡，是導(dǎo)致哮喘急性發(fā)作的重要機(jī)制[2]。糖皮質(zhì)激素具有較強(qiáng)的抗炎作用，被廣泛用于治療氣道慢性炎性疾病。國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道中指出地塞米松可以抑制輕度哮喘支氣管肺泡液中相關(guān)細(xì)胞因子mRNA的表達(dá)，這些細(xì)胞因子中就有IL-4、IFN-γ[3]。而吸入糖皮質(zhì)激素通過(guò)調(diào)節(jié)Th1/Th2分泌的平衡，控制急性發(fā)作，是治療哮喘的有效藥物[4]。同時(shí)既往文獻(xiàn)中指出針對(duì)哮喘發(fā)病中相關(guān)因子制劑，也可以很好地緩解支氣管哮喘的急性發(fā)作，比如dupilumab[5]。

本研究通過(guò)大鼠哮喘模型的建立，觀察各組大鼠肺泡灌洗液中VEGF、IL-4、IFN-γ水平的變化。結(jié)果顯示A組與C組比較VEGF水平上調(diào)、IL-4上調(diào)、IFN-γ水平下調(diào)，VEGF水平的上調(diào)可能是氣道重塑的重要原因，IL-4、IFN-γ分別由Th2、Th1細(xì)胞分泌，IL-4上調(diào)和IFN-γ水平下調(diào)可能與哮喘大鼠Th2/Th1免疫應(yīng)答有關(guān)，這與國(guó)內(nèi)學(xué)者金小紅等[6]、陳強(qiáng)等[7]研究相一致；B組與A組相比，VEGF水平與IL-4下調(diào)、IFN-γ水平上調(diào)，表明地塞米松可能抑制Th2/Th1的免疫應(yīng)答，使Th2的分泌受到抑制，而Th1的分泌增多，這與Chengping Hu等[8]學(xué)者的研究相一致，但有學(xué)者指出TNF-α和IFN-γ表達(dá)過(guò)度會(huì)促進(jìn)皮質(zhì)類(lèi)固醇治療兒童哮喘的耐藥[9]，研究中的數(shù)據(jù)顯示IFN-γ增強(qiáng)炎癥通路中TNF-α對(duì)趨化因子的影響，總之IFN-γ與TNF-α介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)相互作用促進(jìn)了皮質(zhì)類(lèi)固醇的耐藥。B組與C組相比，VEGF水平上調(diào)、IL-4上調(diào)、IFN-γ水平下調(diào)，說(shuō)明地塞米松雖然可以調(diào)劑大鼠哮喘細(xì)胞因子的表達(dá)，改善肺功能，但并不能調(diào)節(jié)至正常水平[10]。

總之，糖皮質(zhì)激素通過(guò)調(diào)節(jié)大鼠哮喘細(xì)胞因子VEGF、IL-4、IFN-γ的分泌，減輕氣道的炎癥反應(yīng)，某種程度上延緩氣道平滑肌的重塑[11，12]。大鼠細(xì)胞因子的研究也為糖皮質(zhì)激素耐藥發(fā)生的機(jī)制提供更多的理論依據(jù)。